食品微生物检测方法
食品科学中常见微生物检测方法介绍
食品科学中常见微生物检测方法介绍微生物污染是食品安全的重要问题之一，对人体健康造成潜在的威胁。
因此，食品科学中进行微生物检测是非常重要的工作。
本文将介绍几种常见的微生物检测方法，包括传统培养法、分子生物学方法和生物传感技术。
传统培养法是一种常见且广泛应用的微生物检测方法。
其基本原理是将食品样品接种在含有合适培养基的培养皿中，利用高温、适宜温度和湿度等条件，培养并观察细菌、霉菌和酵母等微生物的生长情况。
通过观察菌落形态、生长速度以及相互作用等特征，可以初步鉴定微生物的种类和数量。
传统培养法的优点是简单易行，且可获得可培养微生物的信息。
然而，该方法需要较长时间进行培养和判定，通常需要3-7天，且只能检测可培养的微生物，对于一些难以培养的微生物不适用。
分子生物学方法通过检测微生物的核酸序列，能够快速、准确地鉴定食品样品中的微生物污染。
其中常见的方法包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）和基因测序等。
PCR是一种通过扩增特定基因片段来检测微生物的方法。
它利用两个特异性引物，将目标基因的DNA序列扩增为大量可检测量，进而进行鉴定。
qPCR是PCR的一种改进方法，能够实时监测扩增过程，准确测量目标基因的数量。
基因测序则是通过测定目标基因的完整序列来进行鉴定。
分子生物学方法的优点是高灵敏度、高特异性和较快的检测时间。
然而，这些方法需要特定的实验条件和设备，并对操作者的技术要求较高。
生物传感技术是一种创新的微生物检测方法。
它利用生物传感器的特性，将微生物的识别与信号转换相结合，实现对微生物的快速和准确检测。
生物传感器是一种具有生物识别和信号转化功能的微型传感装置，可以通过测量微生物的代谢产物、生物分子相互作用等方式来检测微生物。
常见的生物传感技术包括光学生物传感、电化学生物传感和表面增强拉曼光谱等。
这些技术具有实时监测、便携式操作和极高的灵敏度等优势，适用于快速检测和现场应用。
然而，生物传感技术的发展还面临一些挑战，如传感器的稳定性、选择性和实用性等问题，需要进一步的研究和改进。
食品中的微生物检测技术
食品中的微生物检测技术食品安全一直备受人们的关注，而微生物污染是造成食品安全问题的重要原因之一。
所以，对于食品中的微生物检测技术的研究和应用显得十分必要。
本文将探讨食品中的微生物检测技术及其在食品安全领域中的应用。
一、背景介绍食品中的微生物指的是在食品中生长和繁殖的微生物，包括细菌、真菌和病毒等。
在食品生产和加工过程中，微生物可能通过各种途径进入食品中，引发食物中毒甚至传播疾病。
因此，监测食品中的微生物污染是确保食品质量和食品安全的关键环节。
二、食品中的微生物检测技术及原理1. 传统培养法传统培养法是最常用的微生物检测方法之一。
它通过将食品样品放入富含营养物质的培养基中，利用食品中的微生物在适宜条件下生长并形成可见的微生物集落，从而实现对微生物的检测。
这种方法简单易行，能够检测多种微生物，但是存在检测时间长、有可能遗漏无法培养的微生物等缺点。
2. 分子生物学方法分子生物学方法是近年来食品中微生物检测技术的新兴领域。
通过检测微生物的DNA或RNA序列，可以准确快速地确定食品中的微生物种类和数量。
其中，PCR技术和测序技术是最常用的方法之一。
PCR技术可以放大微生物的DNA片段，并通过比对特定序列来识别微生物。
测序技术则可以进一步对PCR扩增的片段进行测序，从而得到更加详细的信息。
这些分子生物学方法具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优势，但是在样品处理和设备要求方面相对较高。
三、食品中的微生物检测技术的应用1. 工业生产在食品工业中，微生物检测技术被广泛应用于食品原料的筛选和检验、发酵及酿造工艺的控制、食品添加剂的质量监测等方面。
通过及时检测微生物污染，可以避免微生物对生产过程的干扰，保证产品质量和安全。
2.食品检测机构食品检测机构必须依靠微生物检测技术来评估食品质量和安全。
通过对食品样品进行微生物检测并给出合理的检测结论，有助于保护消费者的权益，维护食品市场秩序。
3. 公共卫生监管监管部门应用微生物检测技术对市场上的食品进行检测和监控，并采取相应的措施来控制和预防微生物污染。
食品中的微生物检验技术
食品中的微生物检验技术食品安全是人们日常生活中非常重要的一环，而微生物检验技术在保障食品安全方面起着关键作用。
微生物污染可能导致食品中的疾病和食物中毒事件发生。
因此，对于食品中微生物的检验至关重要，以确保食品的质量和安全。
本文将探讨食品中常用的微生物检验技术，以及其在食品行业中的应用。
一、菌落计数法菌落计数法是一种常用的微生物检验技术，用于测量食品中微生物的数量和增长情况。
通常，该方法要求将食品样品制成适当的稀释液，并将其平均均匀地涂布在富营养培养基上，然后在适当的温度下培养一段时间。
随后，通过观察和计数不同菌落的数量来评估食品样品中微生物的数量和种类。
菌落计数法的优点在于操作简单、成本低廉且能获得准确的结果。
然而，它只能提供关于微生物总数的信息，而无法检测特定的病原微生物。
因此，在食品行业中该方法通常用于检测食品中的常见的微生物。
二、PCR技术PCR（聚合酶链式反应）技术在食品微生物检验中得到了广泛应用。
PCR可通过扩增和检测食品中微生物的DNA，从而确认食物是否受到微生物的污染。
此外，PCR还能帮助鉴定特定微生物的存在，包括常见的食源性病原体。
PCR技术的优点在于其高灵敏度、高特异性和快速检测结果。
然而，该方法也存在一些局限性，如对设备要求较高，同时需要针对目标微生物设计和合成特异性引物。
此外，PCR技术还需要进行核酸提取和预处理等繁琐的操作步骤。
三、快速检测方法为了满足食品生产厂商和监管机构对食品微生物检验结果的快速反馈需求，快速检测方法在食品行业中得到了广泛应用。
这些方法通常基于免疫学技术，如ELISA（酶联免疫吸附试验）和免疫层析技术。
快速检测方法的优点在于操作简单、结果快速，并且能够在实验室以外的场所进行。
此外，它们还具有较高的灵敏度和特异性。
然而，这些方法可能对微生物种类有一定的限制，且可能不如传统的培养方法准确。
四、基因测序技术基因测序技术在食品微生物检验中的应用越来越广泛。
通过对食品样品中微生物基因组的测序分析，可以更准确地鉴定微生物的种类和数量，以及评估其对人体健康的潜在威胁。
食品微生物检验和检测技术
食品微生物检验和检测技术食品微生物检验和检测技术是指对食品样品进行微生物检验和检测的技术方法。
微生物的污染对食品的质量与安全具有重要影响，因此必须对食品中的微生物进行检验和检测，确保食品的卫生安全。
1. 菌落计数法：菌落计数法是一种常用的食品微生物检验方法，通过将食品样品接种在适当的培养基上，培养一定时间后，根据菌落的形状、颜色、大小等特征进行计数。
菌落计数法可以测定食品中的总菌落数、霉菌数、大肠菌群数等指标，对于评估食品的卫生质量具有重要意义。
2. PCR法：PCR法是一种利用聚合酶链反应技术对食品中微生物进行检测的方法。
该方法通过寻找并扩增微生物DNA片段，利用特定的引物和聚合酶，在经过多次扩增反应后，可以检测到微生物DNA的存在与数量。
PCR法具有高灵敏度、高特异性和高效性的优点，能够快速准确地检测食品样品中的微生物。
3. ELISA法：ELISA法是一种常用的免疫学分析方法，可以通过检测食品样品中微生物所产生的抗原或抗体来确定微生物的存在与数量。
ELISA法具有灵敏度高、选择性好、简便快速等优点，广泛应用于食品微生物检测中。
4. 快速检测技术：快速检测技术是指通过分子生物学、免疫学等方法，结合微生物的快速培养和检测手段，能够在较短时间内对食品样品中的微生物进行快速检测的技术。
这些技术包括Butterfield法、PETRIfilm法、ATP生物发光法等，具有操作简便、敏感性高、准确性强等特点，可以大大缩短食品微生物检测的时间。
1. 食品卫生监督：食品微生物检验和检测技术能够对食品加工过程中的微生物污染进行监督与控制，保证食品的卫生质量，确保食品安全。
3. 疾病防控：食品微生物检验和检测技术可以对食品中的病原微生物进行及时检测，发现病原微生物污染的食品，采取相应的措施进行隔离与处理，防止疾病的传播与流行。
食品微生物检验和检测技术是保证食品安全、质量稳定以及疾病防控的重要手段和方法，对于保障广大人民群众的身体健康具有重要意义。
食品微生物检测技术
食品微生物检测技术食品微生物检测技术是指利用先进的科学手段对食品样品中的微生物进行检测的方法。
近年来，随着人们对食品安全越来越关注，食品微生物检测技术成为了食品安全保障的一项重要措施。
一、食品微生物检测技术的意义食品微生物检测技术的主要作用是检验食品样品中是否存在病原微生物，如沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等，这些病原微生物会对人体造成不同程度的健康威胁。
此外，食品微生物检测技术还能检测食品样品是否存在有害微生物，如霉菌、酵母菌等，这些微生物虽然不致病，但会影响食品的质量和口味。
二、常见的微生物检测技术1.培养法培养法是食品微生物检测的一种常见方法。
此方法将食品样品在不同温度、氧气、湿度等环境条件下分别培养，以便于检测芽孢、大肠杆菌和霉菌等微生物。
这种方法的缺点是需要较长的时间，有时需要一周或更长时间才能得到结果。
2.快速检测法快速检测法是在研究了微生物的生长特征、代谢特性等基础上发展而来的新型检测技术。
这种方法通常不需要预处理，能够在较短的时间内进行检测，如蛋白芯片技术、荧光定量PCR 等。
这种方法的优点是速度快、效率高，但成本较高。
3.基因序列分析法基因序列分析法是通过测定微生物的特定基因序列，对食品样品中的微生物进行鉴定。
这种方法具有高度的特异性和准确性，但需要高度的技术水平和设备支持。
三、检测技术的选择针对不同微生物，不同检测目的和不同检测场景，需要选择合适的检测技术。
传统培养法可以检测多种微生物，但速度较慢，不适用于针对特定微生物的快速检测。
快速检测法速度快，但适用范围相对较窄，仅适用于某些特定种类的微生物或某些特定的检测要求。
基因序列分析法适用范围更广，但操作复杂，检测设备曾显得较为昂贵。
四、检测技术在食品安全中的应用食品微生物检测技术在食品安全保障中发挥了重要的作用。
它能够有效地检测食品中的病原微生物和有害微生物，保障了人民群众的口腹安全。
同时，也使得食品业者更加明确了食品安全的责任，强化了其对自身产品的质量管理，维护了企业的声誉和品牌形象。
食品中的微生物检测方法
食品中的微生物检测方法食品安全一直备受人们关注，食品中的微生物检测方法是确保食品质量和安全的关键。
微生物检测是指通过检测食品中的微生物存在和数量来评估食品是否安全。
本文将介绍几种常见的食品中的微生物检测方法。
一、传统培养方法传统培养方法是最为常见的微生物检测方法之一，它可以直接检测食品中的细菌和真菌等微生物。
这种方法的原理是将食品样品接种于适当的培养基上，通过培养后的菌落形态和数量来判断微生物的存在和数量。
传统培养方法简单易行，但耗时较长，需要数天甚至数周才能得到结果。
二、荧光定量PCR法荧光定量PCR法是一种基于聚合酶链式反应（PCR）原理的微生物检测方法。
它可以快速准确地检测食品中的微生物，例如大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌。
该方法通过扩增微生物特定基因的DNA，然后使用荧光染料标记，最后通过荧光信号的强度来定量微生物的存在和数量。
荧光定量PCR法具有高效、高灵敏度和高特异性的优点，适用于快速检测大批量样品。
三、基因芯片技术基因芯片技术是一种高通量的微生物检测方法，它可以同时检测多种微生物种类和数量。
该技术利用芯片上的探针与目标微生物的核酸序列发生特异性反应，然后通过荧光标记来检测微生物的存在和数量。
基因芯片技术具有快速、高通量和高灵敏度的特点，可以在较短时间内检测多个微生物。
四、质谱法质谱法是一种高效的微生物检测方法，它可以通过检测微生物代谢产物或特定标记物来判断微生物的存在和数量。
该方法广泛应用于食品中的致病菌检测，如耐药菌的检测和鉴定。
质谱法具有高灵敏度、高选择性和准确性的优势，可以在非常短的时间内完成微生物检测。
五、免疫层析法免疫层析法是一种简便快速的微生物检测方法，它通过检测微生物的抗原或抗体来判断其存在和数量。
该方法常用于食品中常见的细菌检测，如金黄色葡萄球菌和沙门氏菌等。
免疫层析法操作简单、迅速，不需要复杂的设备，适用于野外和实验室环境。
综上所述，食品中的微生物检测方法多种多样，每种方法都有其特点和适用范围。
食品微生物检验技术检测项目
食品微生物检验技术检测项目一、总大肠菌群检测总大肠菌群是指能在大肠杆菌培养基上生长的菌群，一般来说，总大肠菌群的检测可以作为食品卫生质量的指标。
常见的检测方法有膜过滤法、浸泡法和曲线法等。
其中，膜过滤法是将食品样品过滤后，将膜过滤片移植到含有大肠杆菌培养基的琼脂平板上，经过培养后计数。
这种方法具有操作简便、结果准确可靠的特点。
二、致病菌检测致病菌是指能够引起人体感染和食物中毒的微生物，如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7等。
常用的方法有培养法、快速检测法和分子生物学方法等。
培养法是将食品样品接种在相应的培养基上，经过一段时间的培养后，观察菌落的形态、颜色和数量来判断是否存在致病菌。
快速检测法是利用特定的试剂盒或仪器，通过检测菌落形成单位（CFU）或特定的生物标志物来快速识别致病菌。
分子生物学方法则是利用PCR扩增技术或基因芯片等技术，对致病菌的DNA进行检测和鉴定。
三、腐败菌检测腐败菌是引起食品变质和腐败的微生物，常见的有霉菌、酵母菌等。
腐败菌的检测方法主要有培养法和快速检测法。
培养法是将食品样品接种在适当的培养基上，经过一段时间的培养后，观察菌落的形态、颜色和数量来判断是否存在腐败菌。
快速检测法则是利用特定的试剂盒或仪器，通过检测腐败菌特定的生物标志物或代谢产物来快速识别腐败菌。
四、真菌毒素检测真菌毒素是由某些真菌产生的具有毒性的化合物，如黄曲霉素、赭曲霉素等。
真菌毒素的检测方法主要有免疫学法、生化法和色谱法等。
免疫学法是利用特异性抗体与真菌毒素结合，形成免疫复合物后，通过比色、荧光或放射性等方法进行检测。
生化法是通过检测真菌毒素的生物活性或代谢产物来进行检测。
色谱法则是利用色谱柱对真菌毒素进行分离和检测。
五、抗生素残留检测抗生素残留是指食品中残留的抗生素含量超过国家规定的限量标准。
抗生素残留的检测方法主要有免疫学法、生物学法和物理化学法等。
免疫学法是利用特异性抗体与抗生素结合，形成免疫复合物后，通过比色、荧光或放射性等方法进行检测。
微生物在食品安全中的检测方法
微生物在食品安全中的检测方法食品安全一直是人们关注的重要问题之一，而微生物检测是确保食品安全的重要环节之一。
微生物在食品中的存在可能导致食物中毒、食品腐败等问题，因此了解食品中的微生物情况，采取相应的控制措施是至关重要的。
本文将介绍常见的微生物检测方法。
一、传统培养方法传统培养方法是最常用的微生物检测方法之一。
这种方法通常基于微生物在特定培养基中生长的能力，并根据微生物的特征形态来进行鉴定。
具体操作包括样品取样、制备培养基、接种、培养、观察等步骤。
传统培养方法可以检测常见的食源性病原菌如沙门氏菌、大肠杆菌等，但是需要较长的培养时间，同时对于某些难以培养的微生物可能存在局限性。
二、PCR方法PCR（聚合酶链式反应）是一种通过复制和扩增目标DNA段的方法。
在微生物检测中，PCR可以通过引物与目标细菌或病毒DNA的特异性结合，通过酶的作用进行不断复制和扩增，最终形成可检测的DNA片段。
PCR方法具有高度灵敏度和特异性，可以检测微生物中极少量的目标核酸，同时具有较短的反应时间。
PCR方法可以用于检测食源性致病菌、真菌和病毒等微生物，被广泛应用于食品安全领域。
三、免疫学方法免疫学方法是利用抗原与抗体的特异性结合来进行微生物检测的方法。
这种方法可以通过特异性抗体与目标微生物相互作用，并通过标记物的检测来确定微生物的存在。
常见的免疫学方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）、免疫荧光法、免疫印迹法等。
免疫学方法具有高度的特异性和敏感性，可以检测微生物的种类和数量，广泛应用于食品中病原微生物的检测。
四、质谱分析方法质谱分析方法是一种通过检测微生物中特定代谢产物或特异性质谱图来进行微生物检测的方法。
这种方法可以通过检测微生物产生的挥发性有机物、气体成分或特定代谢产物来鉴定微生物的存在。
常见的质谱分析方法包括气相色谱质谱联用（GC-MS）、液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
质谱分析方法具有高灵敏度和高分辨率的优点，可以检测微生物的种类和数量。
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食品微生物检测方法范围本标准规定了食品微生物检测方法1 菌落总数1.1 培养基和试剂⑴、营养琼脂培养基：按GB/T4789.28-2003中4.7规定成分: 蛋白胨10克、牛肉膏3克、氯化钠5克、琼脂15～20克、蒸馏水1000ml制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水中，加入15%氢氧化钠溶液2ml校正PH至7.2-7.4.加入琼脂,加热煮沸,使用权琼脂溶化.分装烧讧,121℃高压灭菌15分钟.注:此培养基可供一般细菌培养之用,注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为 1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%.⑵磷酸盐缓冲液:按GB/T4789.28-2003中3.22规定.成分：磷酸二氢钾34克、1mol/l氢氧化钠溶液175ml、蒸馏水825ml 、PH7.2制法: 先将磷酸盐溶解于500ml蒸馏水中,用1mol/l氢氧化钠溶液校正PH后,再用蒸馏水稀释至1000 ml.稀释液: 取储存液1.25 ml ,用蒸馏水稀释至1000 ml,或每管10ml,121℃高压灭菌15分钟.⑶明胶磷酸盐缓冲液成分:明胶2克、磷酸氢二钠4克、蒸馏水1000ml、PH6.2制法:加热溶解,校正PH,121℃高压灭菌15分钟.⑷0.85%灭菌生理盐水⑸75%乙醇1.2 设备和材料⑴冰箱：0~4℃⑵恒温培养箱36℃±1℃⑶恒温水浴锅46±1℃⑷均质器或灭菌乳钵⑸架盘药物天平：0~500克，精确至0.5克.⑹菌落计数器.⑺大镜4×⑻灭菌吸管:1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)⑼灭菌锥形瓶:500ml⑽灭菌玻璃珠:直径约5mm⑾灭菌培养皿直径约90mm⑿灭菌试管16mm×160mm⒀灭菌刀、剪子、镊子等。
1.3 检验程序（菌落总数的检验程序见图1）1.4 操作步骤⑴检样稀释及培养a. 以无菌操作将检样25克(ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min,做成1：10的均匀稀释液。
b. 用1ml的灭菌吸管吸取1：10的稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。
c. 另取1ml灭菌吸管，按上条操作方法，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml吸管。
d. 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。
e. 吸稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置46±1℃水浴锅保温）注入培养皿约15ml 并转动培养皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液灭菌培养皿内作空白对照。
f. 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48h±2h.⑵菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平板的菌数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
⑶菌落计数的报告a. 平板菌落数的选择选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
平板内如有链状菌落生长时（菌落间无明显界线），若仅有一条链。
可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。
b. 稀释度的选择1. 应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乖以稀释倍数报告之（见表1中例1）。
2. 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30-300之间，则视两者之比如何来决定。
若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2，则报告其中较小的数字，（见表1中例2及例3）。
3. 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以箕释倍数报告之（见表1中例4）。
4. 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释找最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例5）。
5. 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之（见表1中例6）。
6. 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例7）。
c. 菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。
为了缩短数字后在的零数，也可用10的指数来表示（见表1）。
表1稀释度选择及菌落数报告方式2 大肠菌群的检测2.1 大肠菌群的测定2.1.1 设备和材料⑴恒温培养箱：36±1℃。
⑵冰箱：0～4℃。
⑶恒温水浴锅：44.5±0.5℃。
⑷架盘药物天平:0～500g,精确至0.5g。
⑸显微镜10×～100×。
⑹均质器或乳钵。
⑺平皿：直径为90mm。
⑻试管16mm× 160mm。
⑼吸管1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)。
⑽广口瓶或三角烧瓶：容量为500mL。
⑾玻璃珠：直径约5mm。
⑿载玻片。
⒀酒精灯。
⒁试管架。
⒂灭菌刀、剪子、镊子2.1.2 培养基和试剂⑴乳糖胆盐发酵管：成分：蛋白胨：20g猪胆盐（或牛、羊胆盐）：5g乳糖：10g0.04%溴甲酚紫水溶液：25ml蒸馏水：1000mlPH：7.4制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水，校正PH，加入指示剂，分装每管10ml，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min.注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
⑵伊红美蓝琼脂平板成分：蛋白胨：10g乳糖：10g磷酸氢二钾：2g琼脂：17g2%伊红Y溶液：20 ml0.65%美蓝溶液：10 ml蒸馏水：1000mlPH：7.1制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正ph，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。
临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷却至50～55℃,加入伊红和闰蓝溶液，摇匀，倾注平板。
⑶乳糖发酵管成分：蛋白胨：20g乳糖：10g0.04%溴甲酚紫水溶液：25ml蒸馏水：1000ml]Ph：7.4制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正ph，加入指示剂，按检验要求分装30ml、10ml、或3ml ,并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注1：双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
注2：30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
⑷EC肉汤成分：胰蛋白胨：20g3号胆盐（或混合胆盐）：1.5g乳糖：5g磷酸氢二钾：4g磷酸二氢钾：1.5g氯化钠：5g蒸馏水：1000ml制法：将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121℃高压灭菌15min，最终ph为6.9±0.2.⑸磷酸盐缓冲液成分：磷酸二氢钾：34g1mol/l氢氧化钠溶液：175 ml蒸馏水：825mlPH：7.2制法：先将磷酸溶解于500ml蒸馏水中，用1mol/l氢氧化钠溶液校正PH后，再用蒸馏水稀释至1000ml.稀释液取储存液1.25ml，用蒸馏水稀释至1000ml,分装每瓶100ml或每管10ml，121℃；高压灭菌15min。
0.85%灭菌生理盐水⑹革兰氏染色液成分：结晶紫：1g95%乙醇：20ml1%草酸铵水溶液：80ml将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液法混合革兰氏碘液成分：碘：1g碘化钾：2g蒸馏水：300ml将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300ml沙黄复染液成分：沙黄：0.25g95%乙醇;10ml蒸馏水：90ml将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
染色法：a 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水先。
b 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
c 滴加95%乙醇脱色，约30S；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾无能为力，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s.d 水洗，滴加复染液，复染1min。
水洗，待干，镜检。
结果：革兰氏阳性菌呈紫色。
革兰氏阴性菌呈红色。
注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间公需10s.2.1.3 操作步骤2.1.3.1 检样稀释a以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器，以8 000～10000r/min的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。
b用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1∶100的稀释液。
c另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。
d根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。
2.1.3.2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。
每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。
2.1.3.3 分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。
2.1.3.4证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
2.1.3.5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN 值。
见附录A。
2.1.4 粪大肠菌群(faecal coliform)2.1.4.1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见7.2条)转种于EC肉汤管内，置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面)，培养24±2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养18～24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。