3M 微生物检测方法介绍
3M微生物测试法在HACCP体系中的应用
二、3M微生物测试法的原理及优势
目前上海局卫监处购入的3M微生物快速测试片很好地解决了这个问题，它可以彻底有效地做到食品安全卫生工作中的顺向控制，逆向验证。3M微生物测试片针对不同的菌种，预先配制好特定的选择性培养基系统，或加入特定的指示剂来鉴别培养不同的菌种。已有研究表明这种快速测试片与传统方法在检测结果方面差异无显著性，而且测试片的体积较小，携带方便，操作简单，培养时间短，非常适合各方审核人员对人员或环境卫生清洁效果的验证，也特别适用于试验条件简陋的实验室及野外操作。
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图10 图11
速冻方便食品生产企业的抽样点分布在产品的生区和熟区，而以上结果中几乎所有的无
法计数、高读数值或者阳性的结果都来自于生制加工区域或卫生条件较难控制的生产工艺过程的食品接触表面，而清洁区域（内包装区、熟制加工区）的检查结果较能令人满意。另外21个环境李斯特菌检测主要集中在6家含肉类的速冻方便食品企业，只有一个阳性样品的结果也说明了这些企业在控制环境李斯特菌方面是有效的。
速冻方便食品
本次共检测出口速冻方便食品生产企业10家，细菌总数样本67份，未检出的24份，
无法计数的6份，可计数检出的37份；大肠菌群样本51份，未检出的42份，无法计数的1份，可计数检出的8份；金黄色葡萄球菌样本50份，阴性38份，阳性12份；李斯特菌样本21份，阴性20份，阳性1份，详见下表：
项目 样品份数 未检出（份） 可计数检出（份） 无法计数（份） 阴性（份） 阳性（份） 细菌总数(图1) 286 83
（29.02%） 153（53.5%） 50
（17.48%） / / 大肠菌群（图2） 207 178
3M大肠菌群的测定
实验目的
学习并掌握国标GB/T 4789.38—2008标准中 规定食品中大肠菌群的测定方法。
大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气。需氧 和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源 于人畜粪便，故此作为粪便污染指标来评价食品的卫 生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否 被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌 污染的可能性。
计数菌落数大于150个的测试片时，可计数一 个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成 单个方格内的菌落数后乘以20即为测试片上估算的 菌落数（圆形生长面积为20 cm2）。食品中最终菌 落浓度的单位以“cfu/g (mL)”表示，表面上菌落数以 “cfu/cm2”表示。
3M PetrifilmTM 大肠菌群测试片
• 含有改良的VRB培养基 • 目标菌落为红色带气泡 • 35±1°C, 24 ±2 h培 养 • AOAC Offical Method 991.14
3M PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片
样品制备
样品制备
接种
接种
接种
培养
解释
3. 接种 将PetrifilmTM大肠菌群测试片或PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开 上层膜，用吸管吸取1 mL样液垂直滴加在测试片的 中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜 直接落下，把压板（平面底朝下）放置在上层膜中 央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面 积上。拿起压板，静置至少1 min以使培养基凝固。
在PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片上， 蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌。蓝色有气泡 和红色有气泡的菌落数之和为大肠菌群数。培养 圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不做计数。出 现大量气泡形成、不明显的小菌落，培养区呈蓝 色或暗红时，进一步稀释样品可获得准确的读数。
3M环境监测
3M Microbiolgy
固体表面监测
直接接触法
提起已水化好的PetrifilmTM 测试片上层膜，使胶体部分 置于目的表面。 用手指摩擦上层膜外侧，保 证膜与表面充分接触。 使上层膜与目的表面分离， 然后将其与培养基合上。 将测试片置于培养箱培养。
3M Microbiolgy
Copyright© 2007, 3M. All Rights Reserved.
10. 按包装内说明培养测试 片
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3M Microbiolgy
e • Swab 涂抹棒
性能简介
10 mLBPW(Buffered Peptone Water) 尼龙涂抹头 两侧有刻度 和多数Petrifilm测试片一起使用, 包括PAC, PCC, PEC, STX, PEB, PEL 不要与RCC和HSCC一起使用 室温保存12 个月
3M Microbiolgy
3MTM快速涂抹 棒（Quick Swab)
湿式取样 – 当待测表面干燥时
7. 在实验室里, 充分振荡涂 抹棒至少10分钟, 使菌与涂 抹棒分离
8. 在管壁上挤拧出涂抹棒头 上的内容物, 按通常工业用 标准方法处置弃去涂抹棒
9. 小心地倾注管中的全部内 容物到3M PetrifilmTM测试 片上
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3M Microbiolgy关于测试片的水化水化多久可以使用？测试片类型
细菌总数(PAC) 大肠菌群(PCC) 大肠杆菌(PEC) 肠杆菌科(PEB) 金黄色葡萄球菌 (STX)
监测目标
空气监测 固体表面监测
3M大肠菌群大肠杆菌测试片作业指导书
3M Petrifilm 大肠菌群/大肠杆菌测试片作业指导书
●稀释液的使用
*使用适宜的无菌稀释液：0.1%蛋白胨水，蛋白胨盐稀释液，缓冲蛋白胨水，生理盐水(0.85-0.90%)，不含硫酸氢盐的letheen肉汤或蒸馏水。
*请勿将包含柠檬酸盐、硫酸氢盐或硫代硫酸盐的稀释液与3Mpetrifilm金黄色葡萄球菌测试片配合使用；它们可抑制生长。
●估算
*测试片菌落生长的圆形区域面积约为20平方厘米。
网格线在背光条件下清晰可见，可辅助估读计数。
*计数2个或者多个方格内的菌落数量，得到每方格内的平均菌落数，然后乘以20计算出测试片上的菌落数量。
3M微生物检测方法
3M微生物检测方法3M是一家全球知名的科技公司，它在微生物检测领域有着丰富的经验和创新的解决方案。
本文将详细介绍一些3M微生物检测方法。
一、3M Petrifilm微生物计数板3M Petrifilm微生物计数板是一种方便、快速和可靠的微生物检测方法。
它采用薄膜技术，将培养基和生长辅助物质包裹在一层薄膜中，用于菌落的形成和计数。
使用者可直接在其表面上涂布样品，然后通过孔隙的氧气和水分透过薄膜，为微生物提供生长所需的环境。
随着微生物的繁殖，产生的菌落可被直接计数。
3M Petrifilm微生物计数板以其快速、易于操作和结果可读性受到广泛使用。
二、3M Petrifilm E.coli/Coliform计数板3M Petrifilm E.coli/Coliform计数板是一种专门用于大肠杆菌和埃希氏菌的检测的微生物计数板。
通过使用这种计数板，用户可以在24小时内确定食品、饮料和水样中E.coli和总大肠菌群的存在。
它采用了改进的培养基和目标域维持剂，能够在孔隙中维持更大的氧气浓度，提供最适宜微生物生长的环境。
这种计数板的优势在于它能够准确、快速和可靠地检测食品和水样中的致病性细菌。
三、3M Molecular Detection系统3M Molecular Detection系统是一种基于聚合酶链反应（PCR）技术的微生物检测方法。
它结合了使用特定试剂盒和3M的电子检测仪器，能够在短时间内对食品、饮料和水样中的致病性细菌进行快速检测。
该系统具有高度特异性和灵敏度，能够准确鉴定微生物的存在并区别致病性和非致病性菌株。
与传统培养方法相比，3M Molecular Detection系统具有更快的反应速度和较低的人为误差。
四、3M光谱分支检测仪3M光谱分支检测仪是一种创新的微生物检测工具，它利用以色列光谱学技术能够快速检测和识别食品和饮料样品中的微生物。
通过将样品置于检测仪上，仪器会发射出特定波长的光，并通过光谱分析确定微生物的存在和类型。
3M微生物检测方法介绍
3M微生物检测方法介绍3M是一家全球知名的科技公司，其微生物检测方法在食品安全和饮用水处理等领域具有广泛的应用。
以下是对3M微生物检测方法的介绍，以及其在食品安全和饮用水处理等领域的应用。
3M的微生物检测方法基于现有的国际标准和法规，并结合了先进的仪器设备和检测试剂盒，可以快速、准确地检测并分析样品中的微生物。
首先，3M的微生物检测方法采用了先进的胶基生长培养基和试剂盒，在短时间内可以培养和检测多种微生物，包括细菌、真菌和酵母等。
这种方法不仅可以提供清晰的结果，还可以帮助用户更好地了解微生物数量和种类等信息。
其次，3M的微生物检测方法采用了快速的检测技术，可以在短时间内完成检测，并提供准确的结果。
这对于食品加工厂和饮用水处理厂等需要快速检测的行业非常重要，可以帮助他们更好地控制产品质量和维护公共安全。
此外，3M的微生物检测方法还具有操作简便、结果可靠等优点。
其检测仪器设备使用方便，只需要按照说明书进行操作即可，不需要复杂的培养条件和专业的实验操作。
同时，检测结果准确可靠，可以满足行业监管和质量控制的需求。
在食品安全领域，3M的微生物检测方法被广泛应用于食品加工厂和餐饮行业等。
它可以用于检测食品中的微生物污染，包括大肠菌群、沙门氏菌和霉菌等。
这对于保护消费者的健康和确保食品质量非常重要，可以帮助食品行业及时发现和解决食品安全问题，减少食品中毒事件的发生。
在饮用水处理领域，3M的微生物检测方法可以用于检测水源、水处理过程和水系统中的微生物污染。
它可以检测大肠菌群、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌等有害微生物，帮助饮用水处理厂及时发现和解决水质问题，保障公众的饮用水安全。
除了食品安全和饮用水处理，3M的微生物检测方法还可以在医药、环境和工业等领域得到应用。
它可以用于检测医院环境、医疗设备和制药厂的微生物污染，防止交叉感染和药品污染。
同时，它也可以用于监测环境中的微生物污染，帮助保护自然资源和生态环境。
此外，它还可以用于工业生产过程中的微生物监测，控制生产质量和防止生物污染。
微生物检测标准
微生物取样方法、微生物检测标准举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制2采样（空气沉降法）2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37°C培养24小时。
4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5X5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法2.1细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37C培养24小时后计菌落数。
结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数X样液稀释倍数/30X22.2致病菌的检验沙门氏菌，参照GB4789.4进行金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行4.检验合格标准：细菌总数10—100个/cm2，5.关键点：细菌总数W10个/cm2一般区域：细菌总数W100个/cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1.采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
微生物限度检查法简介
微生物限度检查法简介目录•1拼音•2注解1拼音wēi shēng wù xiàn dù jiǎn chá fǎ2注解微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查 *** 。
包括染菌量及控制菌的检查。
供试品应随机抽样。
如遇有异常或可疑的样品，须选取有疑义的样品。
一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。
供试品在检验前不得开启，在检查前及检查中应防止供试品污染菌受损、致死或繁殖。
凡能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出发霉、变质的药品，可直接判为不合格，无需再抽样检查。
检查的全部过程均应严格遵守无菌操作，严防再污染。
除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25℃～28℃，控制菌培养温度为36±1℃ 。
细菌、霉菌（酵母菌）计数和控制菌检查，均应作对照试验。
检验结果的报告以1g、1ml或10cm<2>为单位。
培养基及其制备 *** ：1 、营养琼脂培养基与营养肉汤培养基见无菌检查法（附录ⅩⅢ Ｂ）2 、虎红琼脂培养基胨5g虎红（四氯四碘荧光素）0.0133g葡萄糖10g（或0.133％虎红溶液10ml）磷酸二氢钾(KH2PO4)1g琼脂15～20g*** 镁(MgSO4.7H2O)0.5g水1000ml除葡萄糖、虎红外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、虎红，分装，115℃灭菌30分钟。
3 、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨10g琼脂15～20g酵母浸出粉5g水1000ml葡萄糖20g除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热融化后，滤过，加入葡萄糖，分装，115℃ 灭菌15分钟。
4 、胆盐乳糖培养基(BL)胨20g牛胆盐1.3g乳糖（或去氧胆酸钠0.25g）氯化钠5g水100ml磷酸氢二钾(K2HPO4)4.0g磷酸二氢钾(KH2PO4)1.3g除乳糖、牛胆盐外，取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，115℃灭菌30分钟。
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大肠菌群检测方法
• MPN(Most Probable Number)法
最大可能数法
• 直接计数法
3MTMPetrifilmTM法 VRB(Violet Red Bile)培养基法
Microbiology
国标MPN 法
乳糖胆盐发酵 24 ± 2 h
EMB琼脂平板 18 – 24 h
乳糖发酵管 18 – 24 h
Microbiology
3MTM PetrifilmTM细菌总数测试片
Microbiology
平板法和 Petrifilm纸片法的对照试验
表 琼脂平板法和 PetrifilmTM纸片法对6类试样对比试验结果的差异检验
Samples
肉与肉制品 奶和奶制品 饮料 糕点 调味品 冷荤制品
No
29 17 14 30 27 21
细菌总数检测标准
• 国标 (GB 47892—94)
我国
• FDA平板法
美国 (FDA，l986) 日本 (日本食品卫生协会，1993) 台湾 (Marin，1978)
• PetrifilmTM纸片法
美国AOAC, 美国公共健康协会，法国AFNOR, 日本卫生部等
Microbiology
影响平板法检测结果的因素
Microbiology
3M微生物产品
有效控制食品工业中的微生物危害
Microbiology
3M微生物产品
Microbiology
检测方法概述
1. 食品卫生细菌的检测
细菌总数、大肠菌群
2. 食品中病原菌的检测
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌
3. 食品中霉菌酵母菌的检测
霉菌酵母菌
Microbiology
• 培养基制备
培养基质量 培养基灭菌时间、加热时间 倾注时的培养基温度控制
• 菌落计数
样品干扰 菌落小 菌落成片
Microbiology
菌落指示剂
TTC
(Tri-phenyl Tetrazolium Chloride, 氯化三苯基四氮唑) 原理 细菌具有脱氢酶能使相应的底物脱氢而释放出氢离子， 培养基中的 TTC作为氢离子的受体，在接受氢离子后会 被还原为红色非溶解性产物－三苯甲 (Formazan)，从而 使细菌着色，达到易观察便计数的效果。
食品微生物检测技术
陆苏飚
技术工程师/硕士 3M 技术中心
Microbiology
全
球
¾ 3M产品远销200多个国家
¾ 在60多个国家设有分支机构 拥有29个国际研究所和开发实验室 建立41家工厂
Microbiology
Welcome
Microbiology
Microbiology
创意全为你
¾ 3M为全球市场生产创新 产品 ¾ 3M具有发现顾客需求， 发明核心技术，提供价 值服务的独特能力
－大肠菌群的检测
大肠菌群的定义： 需氧及兼性厌氧、在37 °C能分解乳糖产 酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
*国家1994年颁布的食品卫生检验方法微生物学部分
Microbiology
大肠菌群
• • • •
埃希氏菌属
大肠埃希氏菌
肠杆菌属
阴沟肠杆菌
枸橼酸杆菌属
弗劳地枸橼酸杆菌
克雷伯氏菌属
产气克雷伯氏菌
Microbiology
p3 3
− 0.001λ p3
) (e
− 0.001λ 3− p3
)
Microbiology
最大可能数 ≠ 最大数
2-0-0 (90 MPN/100g) Pmax = 31.9% 50 45 40 35 Probability (%) 30 25 20 15 10 5 0 0 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 275 300 325 350 375 400 425 450
) (e
−0.1λ 3− p2
)
) (e
− 0.01λ 3− p3
)
接种量为 0.1,0.01,0.001 ml(g)时的概率：
P = C (1 − e
p1 3
−0.1λ p1
) (e
−0.1λ 3− p1
)
+ C (1 − e
p2 3
−0.01λ p2
) (e
−0.01λ 3− p2
)
+ C (1 − e
GB
3.97 2.13 2.13 2.68 3.43 5.04
Petrifilm
3.96 2.22 2.16 2.70 3.55 5.06
P > t
0.8481 0.2848 0.2093 0.5462 0.2062 0.2100
*卫生部食品卫生监督检验所
Microbiology
食品卫生细菌的检测
)
阴性管: 阳性管:
1− e
e
− vλ
− vλ
Microbiology
概率公式
3×3管
接种量பைடு நூலகம் 1,0.1,0.01 ml(g)时的概率：
P = C3p1 (1 − e ) p1 (e ) 3− p1 + C3p2 (1 − e + C3p3 (1 − e
− 0.01λ p3
−λ
−λ
−0.1λ p2
Microbiology
MPN 原理
k (k=0,1,2…) 个菌落出现在每个试管中的概率服从泊松 (Poisson) 分布:
Pn = e
− vλ
(vλ ) k!
k
Microbiology
MPN 原理
细菌存在的概率：
P = ∏ C (1 − e
i =1 pi ni
k
− vi λ pi
) (e
− vi λ ni − pi
Microbiology
FDA MPN法
LST肉汤
24 – 48 h
煌绿乳糖胆汁肉汤(BGLB)
48 ± 2 h
Microbiology
MPN 法
• 1915发表 • 估算菌落浓度 • 使用置信区间
Microbiology
30 MPN/100 g = ?
A: X = 30 cfu/100g B: X <= 30 cfu/100g C: X >= 30 cfu/100g D: above all
Microbiology
3MTM PetrifilmTM测试片的结构
例：3MTM PetrifilmTM细菌总数测试片 薄膜 粘合剂＋指示剂 冷水可溶性凝胶 标准培养基 粘合剂 印有格子纸片
Microbiology
3MTM PetrifilmTM细菌总数测试片
z z z z z z z
标准培养基 添加TTC菌落指示剂 培养时叠放片数小于20 培养时间为48 h 合理计数范围 25~250 方格设计便于计数 AOAC Official Method
10~360
Concentration (cfu/100g)
Microbiology