酶的激活和抑制作用
酶的抑制剂与激活剂
Folin-酚法测碱性蛋白酶酶活原理
Folin-酚试剂在碱性条件下，其磷钼酸盐-磷钨酸 盐易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混 合物)。
在一定浓度范围内，蓝色深浅与含酚羟基氨基酸 (酪 氨酸)的量成正比，通过比较加入金属离子(或洗衣粉)后 和未加入金属离子(或洗衣粉)的反应酶液的OD680值，可 以推断出该种金属离子是该酶的激活剂还是抑制剂。
(4)反应结束时加入10%三氯醋酸溶液2 ml(终止反应) ， 立即摇匀，静置10 min。
(5)各取上清1.5ml于EP管中，6000rpm,离心1min 。取上 清1ml于试管中，各加入0.4 mol/L Na2CO3溶液5ml及 福林一酚试剂1 ml，置于40℃显色15 min 。
(6)测定OD680值 ，并以原酶活力为100，算出相对酶活 。空白试验时，先加三氯醋酸溶液，再加入酶液和 底物，同样测定OD680值。
酶的抑制剂与激活剂
一.目的与内容
目的：学习研究酶的抑制剂和激活剂的方法，并通 过几种金属离子和表面活性剂对枯草杆菌碱性蛋白酶 活力的影响，筛选出该酶的某些抑制剂和激活剂。
内容：1.几种金属离子Ca2+、Ag+、Cu2+、Hg2+和 Mg2+对枯草杆菌碱性蛋白酶活力的影响；2.洗衣粉对枯 草杆菌碱性蛋白酶活力的影响。
2．洗衣粉对酶活力的影响： (1)分别在pH 7.0和pH 10.0酶液中加入洗衣粉(反应液
终浓度为0.03%)。 (2)混合液和pH7原酶液、 pH7空白(共4支)于25℃下放
置20 min。 (3)测酶活力，并以原酶活力为100，算出相对酶活。
五.注意事项
1.实验中，以先加TCA的酶液为空白，以原酶液试管为 标准液，对其操作应与实验试管同步一致。
激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
影响酶作用的因素：影响酶促反应的因素常有酶的浓度、底物浓度、pH值、温度、抑制剂、激活剂等。
其变化规律有以下特点：
1、酶浓度对酶促反应的影响：在底物足够，其它条件固定的条件下，反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其它不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。
2、底物浓度对酶促反应的影响：在底物浓度较低时，反应速度随底物浓度增加而加快，反应速度与底物浓度近乎成正比，在底物浓度较高时，底物浓度增加，反应速度也随之加快，但不显著，当底物浓度很大且达到一定限度时，反应速度就达到一个最大值，此时即使再增加底物浓度，反应也几乎不再改变。
3、酶的活性受激活剂或抑制剂的影响。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂，激活剂使酶的活性升高，抑制剂使酶活性降低。
注意事项：
激活剂和抑制剂对于酶活性的影响，常常分不清激活剂，因为加入蒸馏水、NaCl、Na2SO4这3支试管的颜色一致，都是黄色。
出现这种现象的原因是酶活性太高了，需要稀释唾液，唾液稀释至加入蒸馏水的试管呈浅红色即可。
这样一来，这3支试管的颜色分别是浅红、黄、浅红，就可以断定Cl-是激活剂。
偶尔也有分不清抑制剂的就是加入蒸馏水、CuSO4、
Na2SO4这三支试管的颜色一致，都是蓝色。
因为酶活性太低，需要提高酶活性，只要重新制备唾液淀粉酶就行（但是新酶的活性不可太高，否则又分不清激活剂）。
最后3支试管的颜色应该是浅红、蓝、浅红，可以断定Cu2+是抑制剂。
酪氨酸酶抑制及激活作用动力学的分析.ppt
实验中尽可能了解其他同学的实验过程和实
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验结果，如果可能结合起来一起进行分析。
2021/3/16
四、实验注意事项
1. 实验中，需要细心，要正确使用移液器 2. 一次性比色皿有方向性，使用时要注意 3. 实验结果分析、讨论须有自己的论点
2021/3/16
❖ 大量的研究表明，黑素细胞内黑色素的生物合成是一个由 酪氨酸酶催化体内酪氨酸羟化而启动的一系列生化反应： 体内酪氨酸在酪氨酸酶催化下生成 3,4-二羟基苯丙氨酸 即多巴，多巴进一步氧化生成多巴醌，多巴醌经多聚化反 应与氧化反应生成多巴色素，在多巴色素异构酶 作用下, 多巴色素羟化为5,6-二羟基吲哚羧酸, 脱羧成 5,6-二羟基 吲哚, 再在酪氨酸酶催化下氧化成 5,6-吲哚醌, 最后与其 它中间产物结合形成真黑色素。脱黑色素的形成其前部分 -由酪氨酸到多巴醌与真黑色素一致, 但在以后的反应中有 半胱氨酸参加, 产生Cys-多巴和 Cys-多巴醌, 通过关环､ 脱羧, 最后形成脱黑色素。
实验安排
3，抑制剂IC50的测试 改变样品溶液的剂量，分别
测试酶催化活性。可以通过稀 释的方式改变样品的浓度。
以没有加入样品的酶催化活 性OD/min值为100%，用抑 制百分数(指被抑制而失去活 力的百分数)表示不同浓度样 品对酶的抑制活性，作图求出 抑制50%时样品的浓度。
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实验安排
测试酶催化活性。可以通过稀 释的方式改变样品的浓度。
以没有加入样品的酶催化活 性OD/min值为100%，用激 活百分数(指被激活而增加活 力的百分数)表示不同浓度样 品对酶的激活活性，作图求出 最大激活活性时样品的浓度。
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实验安排
6，激活剂动力学的测试 适当选择2个不同的样品浓
酶的调节与功能调控
酶的调节与功能调控在生物体内，酶起着至关重要的作用，它们是调控生物体代谢过程的关键分子。
酶的活性和功能可以通过多种途径进行调节和控制，以适应不同环境条件和生物体的需求。
本文将探讨酶的调节机制和功能调控的重要性。
一、酶的调节机制1. 反馈抑制反馈抑制是一种常见的酶调节机制，指的是代谢途径中产物对其合成酶的活性起到负调控作用。
当代谢产物积累到一定程度时，它们会与酶结合，抑制反应的进行。
这种负反馈机制能够维持代谢途径的动态平衡，防止代谢物的过度积累。
2. 底物浓度调节酶的活性还可以通过底物浓度来调节。
当底物浓度较高时，其与酶的结合增加，从而增加酶的活性。
这种调节机制能够确保在底物充足的情况下，反应能够高效进行。
3. 激活与阻遏除了反馈抑制和底物浓度调节，酶的活性还可以通过激活和阻遏来调节。
某些物质可以结合到酶上，增加酶的催化效率，这称为酶的激活。
相反，有些物质可以结合到酶上，阻碍其催化活性，这称为酶的阻遏。
二、功能调控的重要性酶的功能调控是生物体适应环境变化和维持内稳态的关键机制。
通过调节酶的活性和功能，生物体可以在不同生理状态和环境条件下合理利用和调控代谢路径，以满足生物体的需求。
以下是功能调控的几个重要方面：1. 代谢适应性生物体在不同的环境中需要适应不同的代谢途径，以最大限度地利用可获取的能源。
通过调节酶活性，生物体能够在能量供应不足时利用代谢途径以合成和储存能量物质，在能量过剩时利用代谢途径以降解和排除多余的能量物质。
2. 营养摄取与利用酶的功能调控还能够帮助生物体实现营养物质的摄取和利用。
例如，消化系统中的酶能够在食物摄入后启动消化过程，将复杂的营养物质分解成可吸收的形式。
3. 细胞信号传导酶在细胞信号传导过程中起到关键作用。
细胞内的酶可以被信号分子所调节，从而传导外界信号，调节细胞的生理与代谢状态。
这种调控机制对于维持细胞内平衡和响应外界刺激具有重要意义。
4. 疾病发生与治疗酶的功能调控异常与多种疾病的发生和治疗密切相关。
酶抑制剂与激活剂
酶抑制剂与激活剂酶抑制剂和激活剂是生物化学领域中重要的研究课题。
酶抑制剂可以通过阻止酶催化反应的发生或减缓其速率来发挥作用，而激活剂则可以提高酶催化反应的速率。
这两种化合物在许多领域中都有重要的应用，包括药物研发、农业生产以及食品加工等。
一、酶抑制剂酶抑制剂是一类能够与酶结合并减慢酶催化反应速率的化合物。
酶抑制剂可以通过以下几种方式来实现对酶的抑制作用：1. 竞争性抑制剂：竞争性抑制剂与酶底物结合的活性位点竞争，从而减慢底物与酶结合的速率。
竞争性抑制剂通常具有与底物类似的结构，从而与酶底物结合的位点相似。
2. 非竞争性抑制剂：非竞争性抑制剂与酶结合的非活性位点互相竞争，从而改变酶的构象并减慢酶催化反应的速率。
3. 不可逆性抑制剂：不可逆性抑制剂与酶结合后，形成永久性的复合物，从而完全抑制酶的活性。
不可逆性抑制剂通常与酶的功能位点结合，破坏酶的结构或功能。
酶抑制剂在医药领域中有重要的应用。
例如，抗生素就是一类特定的酶抑制剂，通过抑制细菌细胞内的酶活性来杀死细菌。
此外，许多药物都是通过与特定酶结合来实现治疗效果，如抑制病毒复制或减慢肿瘤生长等。
二、酶激活剂酶激活剂是一类能够提高酶催化反应速率的化合物。
酶激活剂可以通过以下几种方式来实现对酶的激活作用：1. 温度激活：酶催化反应速率通常随着温度的升高而增加。
适当提高反应温度可以增加酶的催化效率，从而加快反应速率。
2. 辅酶激活：许多酶催化反应需要辅酶的参与。
辅酶作为酶的辅助因子，可以提供必要的化学基团或电子从而加速酶的催化反应。
3. 金属离子激活：某些酶的活性需要特定的金属离子的参与。
金属离子可以改变酶的构象或提供化学催化位点，从而激活酶催化反应。
酶激活剂在许多领域中都有应用。
例如，在食品加工过程中，酶激活剂可以用于增强酶的催化效率，从而提高食品生产的效率和品质。
此外，在农业生产中，酶激活剂也被用于增加植物对养分的吸收效率。
结论酶抑制剂和激活剂在生物化学领域中发挥着重要作用。
浙江大学生物化学实验甲酶的基本性质激活剂与抑制剂对酶活力的影响
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
常见的酶的抑制剂：重金属离子（Ag+，Hg2+等）， CO，氰化物，有机磷农药等。
少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且 它常具有特异性。
一种物质对某种酶是激活剂，对另一种酶则可能 是抑制剂。
有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，在高浓 度时则可能为该酶的抑制剂。
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.2、原理
• 本试验利用淀粉水解不同阶段产物与碘有不同颜 色反应的特点，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应 中激活或抑制的现象。
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉酶
淀粉
紫色糊精
红色糊精
无色糊精
麦芽糖
葡萄糖
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
I2
I2
I2
I2
I2
I2
蓝色
紫色
红色
不显色（碘色） （金黄色）
不显色 （碘色）
不显色 （碘色）
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.3、操作方法
• 操作过程及注意事项参P99。
1.4、实验结果及处理
• 仔细观察并纪录各管颜色，对试验现象进行简要说 明并判断激活剂和抑制剂。
酶的基本性质（4）-激活剂与抑制剂
1.1、激活剂和抑制剂简介
激活剂：凡能使酶活性增加的物质。 抑制剂：凡能使酶活性降低但并不引起酶蛋白变性
的物质。 常见的酶的激活剂： ⑴、无机离子：常为阳离子，如Mg2+，Na+等，但也
有阴离子，如Cl-。 ⑵、中等大小的有机分子：如抗 坏血酸，谷胱苷肽 ⑶、某些蛋白分子：指对某些无活性的酶原起激活作
温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
[目的] 1.掌握温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性影响 的基本原理； 2.熟悉唾液淀粉酶所催化的酶促反应过程；
[原理] 1. 温度：对酶的活性的影响为双效性，当酶促反应 的温度为最适温度时，最有利于酶促反应的进行。 温度过低，酶的活性减弱，温度太高，会使酶变性、 失活； 2.pH ：酶活性最大时的环境 pH 为最适 pH 。 pH 不仅 会影响酶的活性，还会影响底物的解离状态，从而 影响酶与底物的结合。过酸或过碱性的环境可使酶 变性、失活。
3、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
C．激活剂、 抑制剂组 1%淀粉 试剂 （2滴） 唾液
C1管
1ml 1%NaCl 10d
C2管
1ml 1%CuSO4 10d
C3管
1ml
C4管
1ml
1%Na2SO4 蒸馏水 10d 10d
摇匀， 37℃保温,每隔30秒从1号管中吸取溶液1d加到白瓷 盘小池中（小池预先加好0.1%碘液） 。当碘液不变色时， 分别向4管中加入1%碘液2滴，观察颜色变化。
收集唾液 ( 自来水漱口、收集唾液约 2-3ml 于小烧杯 中，蒸馏水稀释10倍,备用) 1、温度对酶活性的影响 A．温度组 唾液 （2ml） 1%淀粉 （1ml） 1%碘液 A1管 冰水浴 5分钟 冰水浴 15分钟 2d A2管 37 ℃水 浴5分钟 37℃水浴 15分钟 2d A3管 沸水浴 5分钟 沸水浴 15分钟 2d
2、pH对酶活性的影响 B．PH值组 B1管 PH5.0 2ml 10d B2管 PH6.8 2ml 10d B3管 PH8.6 2ml 10d
磷酸盐缓冲液 （2ml） 1%淀粉 唾液
摇匀，立即置37℃保温，每隔30秒从2号管中吸取溶液1滴 加到白瓷盘小池中（小池预先加好0.1%碘液）。当碘液不 变色时，分别向3管中加入1%碘液2滴，观察颜色变化。
酶抑制与激活
酶抑制与激活酶是一种生物催化剂，对于生物体内的代谢活动起着重要的调节作用。
而酶的活性可以受到抑制或者激活的影响，这种调节方式对于维持生物体内的代谢平衡至关重要。
一、酶抑制酶抑制是指某些分子或化合物结合到酶的活性部位上，从而降低了酶的催化活性。
酶抑制可以是可逆的，也可以是不可逆的，主要有以下几种类型：1. 竞争性抑制：竞争性抑制是指抑制剂与底物竞争结合到酶上，从而阻碍了底物结合并催化反应。
这种抑制可以通过增加底物浓度来减轻。
2. 非竞争性抑制：非竞争性抑制是指抑制剂结合到酶的其他位置，改变了酶的构象，从而影响了酶的催化活性，这种抑制不能通过增加底物浓度来减轻。
3. 混合性抑制：混合性抑制结合到酶的活性部位和其他位置，同时影响了酶的催化活性。
这种抑制既不是竞争性的也不是非竞争性的，其特点是对底物的亲和力和催化速率都起到作用。
二、酶激活与酶抑制相对应的是酶激活，酶激活是指某些辅助因子对酶的催化活性起到促进作用。
酶激活可以是直接的，也可以是间接的，主要有以下几种类型：1. 金属离子激活：一些金属离子可以与酶结合，促进酶的构象变化，增加酶的催化活性。
例如，锌离子对碳酸酸化酶的活性起到了重要作用。
2. 辅酶激活：一些辅酶可以结合到酶上，增强酶的催化活性。
例如，NAD+和FAD等辅酶在氧化还原反应中发挥着激活作用。
3. 蛋白质激活：有些蛋白质可以与酶结合，改变了酶的构象，从而增加了酶的催化活性。
这种激活方式在调节代谢途径中扮演着重要的角色。
总之，酶抑制与激活是细胞内代谢调节的两种重要方式，通过这种调节机制可以更好地维持生物体内代谢的平衡。
对于相关疾病的治疗和药物研发也有着重要的意义。
希望本文对读者对酶抑制与激活有所启发。
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一、教学目的和要求：①让学生初步认识酶的性质，了解酶促反应的激活剂与抑制剂；
②学习检定激活剂和抑制影响酶反应的方法和原理；二、教学实验原理：酶是具有高效专一催化活性的蛋白质，其活性常受温度PH及些物质的影响。
某些物质可以增加其活性，称为激活剂；某些物质能降低其活性，称为抑制剂。
很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且这种作用常常具有特异性。
但要注意的是激活剂和抑制不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂时却为另一种酶的抑制剂，而在高浓度时则为该酶的激活剂（如NaCl）。
三、教学主要内容：激活剂和抑制的认识：取4支试管，按下表加试剂：管号 12340.1%淀粉（ml）1.51.51.51.51%CuSO4（ml）0.5///1%NaCl（ml）/0.5//1%Na2SO4（ml）//0.5/水///0.5稀淀粉酶（ml）0.50.50.50.5保温（37℃）10分钟后KI―I22―3d2―3d2―3d2―3d现象四、注意事项：1、激活剂抑制剂实验中淀粉酶要最后加（为什么？）2、加入淀粉时要小心，不要沾到试管壁；另外，摇匀时也不宜用力过猛，使淀粉溶液或淀粉粒过多地沾在试管壁上，这样会影响结果的观察，误差较大。
五、思考题： 1.试说明本实验第3号管的意义，并推出Cl-和Cu2+各是唾液酶的激活剂还是抑制剂？举例说明抑制与变性剂有何异同？ 2.为什么温度对酶的活性具有双重影响？。