高效液相色谱柱的保护
液相色谱柱的保存 液相色谱维护和修理保养
液相色谱柱的保存液相色谱维护和修理保养1.反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度好是室温。
液相色谱柱的使用和维护在液相色谱操作过程中，我们需要下面的问题，便利维护液相色谱柱。
A柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。
必需防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
B.假如仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
C.避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的蓦地变化或者使液相色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
D.应渐渐更改溶剂的构成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂更改为全部是水，反之亦然。
E.如使用柱温掌控装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
F.一般说来液相色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会快速降低柱效。
G.选择使用适合的流动相，以避开固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解。
H.避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。
保护柱一般是填有相像固定相的短柱。
保护柱可以而且应当常常更换。
watersxbridge苯基柱使用说明
watersxbridge苯基柱使用说明【原创实用版】目录1.引言2.柱子准备3.样品准备4.进样和洗脱5.检测6.柱子清洗与保存7.结论正文一、引言watersxbridge 苯基柱是一种高效液相色谱柱，广泛应用于药物分析、生物制品、环境监测等领域。
为了帮助用户更好地使用这款柱子，本文将详细介绍其使用说明。
二、柱子准备1.在使用前，检查柱子是否有损坏，如破损、漏液等，确保柱子完好无损。
2.根据实验需要，选择合适的保护柱。
保护柱可以有效保护色谱柱，延长其使用寿命。
3.将保护柱和色谱柱安装到液相色谱仪上，确保连接处紧密无漏。
三、样品准备1.样品应尽可能纯净，避免柱塞、污染色谱柱。
2.根据实验需要，选择合适的流动相。
流动相可以影响色谱柱的分离效果，因此需要根据样品的特性选择合适的流动相。
四、进样和洗脱1.进样前，应充分清洗进样器，避免样品污染。
2.进样时，应确保样品与流动相充分混合，以保证样品在色谱柱中的分离效果。
3.洗脱时，应根据实验需要选择合适的洗脱液，并确保洗脱液与流动相相容。
五、检测1.在检测器前，应安装合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等。
2.检测时，应确保检测器与色谱柱连接紧密，避免检测器污染。
六、柱子清洗与保存1.实验结束后，应及时清洗色谱柱，避免柱内残留物影响下次实验结果。
2.清洗时，应选择合适的清洗剂，并确保清洗剂与色谱柱相容。
3.清洗结束后，应将色谱柱保存在干燥、避光的环境中，避免柱子损坏。
七、结论通过以上介绍，相信您已经了解了如何正确使用 watersxbridge 苯基柱。
只有遵循正确的操作步骤，才能确保实验结果的准确性和色谱柱的使用寿命。
保护液相色谱柱的三个简单方法
保护液相色谱柱的三个简单方法我们会不会觉得实验室的经费好像都在用来买色谱柱了？我们是否会想为什么色谱厂家不能生产寿命更长的色谱柱呢？实际上，如果在使用过程中有适当的保护，购买色谱柱的费用只占色谱分析总费用中非常小的部分。
一般色谱柱正常使用的寿命大概500-1000针左右，如果以这个数字来计算，色谱柱所占有的费用大概是整个分析费用的1-2%而已。
所以就算是我们觉得色谱柱的单价很高，想努力增加额外的保护以增加其寿命，其实对整体分析而言也无法省下太多费用。
我的观点是，如果一支色谱柱能有500针的进样，就可以算是完成它的使命了。
在一般情况下，对色谱柱寿命的合理期望是什么样的呢？又有哪些保护措施可以延长色谱柱使用寿命？一、绝对不要进样“垃圾”我经常开玩笑说，要保护色谱柱以得到最长寿命的方法就是不要开封色谱柱。
一旦开始使用，色谱柱的寿命就逐渐衰减一直到用坏为止。
而影响色谱柱寿命的两个主要因素是样品中的杂质和颗粒，因此如果我们能够在进样前去除样品中的杂质和颗粒，色谱柱的寿命一定会延长。
前处理的方法包括固相萃取（SPE），液液萃取和其他的过滤方法。
简单地说，如果在样品进入色谱柱前能大量减少其中的污染物，色谱柱的寿命一定会延长，但是同时我们也必须考虑花在前处理的时间和费用是否能得到合理的回报。
如果目前使用的色谱柱已经达到500针的进样量，而使用前处理所增加的时间和费用，如果需要将色谱柱的寿命由进样500针增加到2500针才划得来的话，就必须好好考虑是否前处理有其经济效益。
但是如果进血浆样品，不经过前处理，可能不到10针柱子就废了，这时候前处理就非常有必要了。
但是除了经济效益以外，对于使不使用前处理，对色谱数据的优劣也必须做一个比较。
在我们实验室中，这些前处理往往能够让我们即使在更低的浓度下也能收集到有效的数据，也能让我们得到更一致的结果。
不管有没有使用前处理，建议所有的样品在进样前经过过滤或是离心处理。
例如当样品经过滤膜可以滤除颗粒从而减少堵塞色谱柱的筛板，滤膜的孔隙大小必须小于色谱柱的筛板孔径大小。
液相色谱柱的使用和维护保养
液相色谱柱的使用和维护保养液相色谱柱是一种广泛使用的分离技术，可用于分离和测定复杂混合物中的组分。
由于液相色谱柱具有精确分离、操作简便、分离效率高等特点，因此，越来越多的实验室都开始使用该技术。
在使用液相色谱柱时，正确的维护保养非常关键。
本文将介绍液相色谱柱的使用方法和维护保养技巧，以便确保您的分离实验能够得到最佳的结果。
一、液相色谱柱的使用1. 准备工作使用液相色谱柱之前，必须先进行预备工作。
这包括：清洗和准备液相色谱柱以免携带有污染物。
准备需要分离和测定的样品。
准备适当的流动相。
流动相必须符合样品的性质。
液相色谱柱的流动相应该是无色的，纯净的水或相应的缓冲液，并具有必要的缓冲能力。
根据柱的尺寸来选择适当的样品注射量。
2. 柱的装配通常情况下，液相色谱的柱是由管状的柱壳、填充柱节、柱端固定件和柱段之间的密封件组成。
在对柱进行装配的时候，对组件应该加强检查以保证每一个元件的质量。
柱被放置在可控压力的色谱装置中，直到达到设定的温度，流动相通过柱床高度。
在样品通过柱床的过程中，要确保流动相的速度恰好足够将所有的组分都分开并在规定的时间内溶出。
3. 分析过程准备工作完成后，可以开始进行样品的分离实验。
在整个过程中，以下措施应予以注意：在样品从样品室进入色谱柱之前，流动相必须在柱中流动。
否则，在注入样品时，将有空气囤积在柱床中，会在透射检测器处产生噪音。
更换液相色谱柱的流动相时需要小心，因为对于一些化学品来说，即使是微量的杂质也会对结果产生影响。
如果发现柱床粘住或困住，不应使用力量来拉动柱子，而应该使用相反方向的流动相，以使样品回到某一个位置，并反向流动一会，这样可以避免样品损坏柱子床。
二、液相色谱柱的维护保养液相色谱分析的成功与否，除了预备工作和分析过程外，还与样品的制备、取样位置以及样品进入液相色谱柱中的流动相的条件等因素有关。
因此，经常做好液相色谱柱的保养工作，可以有效防止柱子损坏，延长其寿命并保证实验结果的准确。
高效液相色谱荧光检测器操作和维护保养规程
文件制修订记录1.目的建立高效液相色谱（荧光检测器）的操作规程，使检验员正确使用高效液相色谱，确保实验结果准确性。
2.适用范围适用于检验人员使用高效液相色谱。
3.操作规程3.1开机：按下输液泵和检测器模块电源开关，蜂鸣器短暂鸣响，进入自检界面，然后进入程序主界面。
打开柱温箱，设置柱温。
3.2排液：将进液管及过滤头放入相应流动相，将排液阀旋钮以逆时针方向旋转180°，以打开排液阀。
开启purge键，以9mL/min的流速开始排空，3min后自动停止排空。
3.3流量设定：在输液泵模块，按“Func”光标在“流量设定”字段中闪烁，按照标准要求，输入0.8或1.0mL，按“Enter”确认。
开始走基线，以低流速运行30min左右。
3.4波长设定：在检测器模块，按“Func”键，光标闪烁，根据国标输入标准中要求的Ex和Em波长，按“Enter”确认。
按“CE”回到初始界面。
按“zero”基线归零。
3.5登录在线用户：电脑开机，打开色谱工作站软件“N2000+在线”，点击仪器1登陆，阶层：管理员，密码：123456。
3.6设置实验方法：点击“实验信息”编辑项目、单位、简介，设置保存路径，勾选是否扣除背景。
点击“方法”设置仪器配置、组分表、计算、谱图显示、报告编辑。
在“仪器配置”菜单下的“仪器描述1”模块中设置波长、流速、柱温等仪器信息，在“进样阀”模块下设置进样体积、结束时间和标题格式（样品批号），点击“采用”，保存方法。
下次可直接调用方法。
3.7设置积分方法：在“采集数据”模块下，点击“零点校正”下方的按钮，可显示隐藏菜单，在“方法：全局参数”的积分参数表中设置峰宽、峰高、最小面积、锁定时间、漂移、负峰阈值、扣除背景，点击“采用”完成设置并保存。
在“方法：手动积分”模块下，可以对谱图进行手动积分。
在“结果”模块下，可以查看谱图积分结果。
3.8数据采集：在进样信息模块下输入样品批号后，点击“采集数据”，进入采集界面，点击“查看基线”，待基线走稳后，点击“零点校正”，并在检测器上按“zero”按钮，使基线归零。
色谱柱保护
延长色谱柱使用寿命的方法色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关系外，最主要的是与日常的委会密切相关。
为延长色谱柱的使用寿命，维护您的利益，请仔细阅读此部分。
色谱柱的使用寿命主要是分局柱效和柱压两个指标来衡量，如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱已经结束。
因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，消除引起柱效下降和柱压升高的因素。
以下是色谱柱的日常维护方法：一、流动相的PH应在使用的范围内Welch公司的色谱柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外，其反相色谱柱的PH范围均为1.5-10，由于填料中存在Si-C和Si-O键，流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。
由于流动相的PH 控制不当而对色谱柱造成的损害，通常很难是色谱柱恢复，因此必须认真对待，严格控制流动相的PH值。
二、去除样品和流动相中的固体颗粒样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵住不仅会引起柱压的升高，而且也会引起柱效下降，因为筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰型拖尾、变宽，从而使柱效下降。
因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析样品前对样品进行针筒过滤，流动相过0.45μm滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质，因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压升高、柱效下降。
保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱孔径相同，因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。
由于柱压升高在分析故障中占很大比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
如果去人色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的，科选择一下方式进行补救：1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min。
高效液相色谱柱的正确使用 液相色谱操作规程
高效液相色谱柱的正确使用液相色谱操作规程色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
关于色谱柱的安装、维护、保色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
关于色谱柱的安装、维护、保存以及由色谱柱导致的这样那样的色谱故障也是一门学问。
高效液相色谱柱的正确使用包含：加装保护柱，过滤流动相和样品，净化样品，避免过高的柱压，注意温度和酸碱度，正确及时的冲洗等。
1.加装保护柱保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。
尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器,但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染,因此,加装保护柱是必要的,特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱必不可少的措施。
保护柱填料应与分析柱一致,粒径可较分析柱大。
保护柱属消耗品,经过一定次数的样品分析(5～1次)后,出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时,应考虑更换保护柱。
2.过滤流动相和样品流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,原则上,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级,水用石英亚沸水或其它超纯水时,在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时,过滤并无更多实际意义。
当流动相中含有缓冲盐时,则过滤是必要的,如前所述,当缓冲溶液放置一段时间(视环境温度不同而异,夏季一般不超过48h,冬季一般不超过一周)后,在使用前还应重新过滤。
所配制的样品试液在注入流路系统前均要经.45μm(.22μm则更好)孔径滤膜过滤。
要注意区分水系和油系,二者不可混用,以防止滤膜溶解而造成污染。
装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换,以避免滤器因过载而起不到过滤作用。
液相色谱柱的安装和使用 液相色谱如何做好保养
液相色谱柱的安装和使用液相色谱如何做好保养液相色谱柱的安装和使用液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分构成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工获得正确牢靠的试验数据的必经之路。
一、液相色谱柱的安装：1、液相色谱柱的结构：a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
柱接头接受低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3／16英寸的内螺纹（国内外已规范化）。
7／16英寸外螺纹与 1／4英寸柱管（Φ6.35mm）连接，中心放置压坏用于密封。
3／16英寸的内螺纹与1／16英寸（Φ1.57mm）的连接管连接，中心也放置压环用于柱接头的密封。
为了尽量削减柱外死体积，在安装色谱柱时，用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底，然后再拧紧空心螺钉。
压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上（连接管通过压环后露出的管长度应严格掌控在2．5mm长或其他固定尺寸）。
在两端柱接头内，柱管两端各放置一片不锈钢滤片（或滤网），用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。
空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。
但由于含氯化物的溶剂对其有确定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避开腐蚀。
b、柱填料：液相色谱柱的分别作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱：多以硅胶为柱填料。
依据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10 μm的范围内。
另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，—NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱：紧要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团（ODS）的非极性填料。
也有无定型和球型之分。
常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 μm之间。
2，色谱柱的安装：a、拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。
b、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。
液相色谱柱保护柱安全操作及保养规程
液相色谱柱保护柱安全操作及保养规程液相色谱柱保护柱是在液相色谱分析中不可或缺的部分，它不仅可以延长色谱柱使用寿命，还能保证结果的准确性和可靠性。
但是，在使用液相色谱柱保护柱的过程中也存在一些潜在的危险，因此我们需要了解液相色谱柱保护柱的安全操作以及保养规程。
安全操作1. 确认柱保护柱适用于分析物在选择柱保护柱之前应该首先确认柱保护柱是否适用于分析物，也需要明确分析物的性质以及流动相的性质。
如果分析物中含有弱酸、弱碱成分，应该选择正相柱保护柱；如果分析物中含有酸性、碱性成分，则应该选择反相柱保护柱。
2. 正确连接柱保护柱在连接柱保护柱的时候需要确认连接口是否密封，避免柱保护柱造成柱床或者柱头受到破坏。
3. 确认起点和终点在连通柱保护柱之前，必须确定身份的起点和终点，以此来避免将流动相直接注入保护柱内部。
4. 避免高压冲击在液相色谱分析中，高压是常见的现象。
当高压过大或者压力突然降低时，会对柱保护柱造成冲击，导致保护柱损坏。
因此，需要避免压差过大，分段进行柱洗和换柱。
5. 避免液相中的氧化剂一些溶解度较差的氧化剂（如过氧化氢、亚硝酸盐等）会与柱保护柱中的硅酸胶反应，导致保护柱损坏。
因此，在使用液相色谱柱保护柱的时候需要避免使用这些氧化剂。
6. 定期更换柱保护柱柱保护柱是一种消耗品，在使用过程中需要定期更换。
如果不及时更换，柱保护柱中的沉淀物和过期的填料会对柱床造成污染，降低分析结果的准确性和可靠性。
保养规程1. 消毒为了避免保护柱内部发生细菌或者霉菌污染，需要定期消毒保护柱。
常用的消毒方法包括用有机溶剂洗涤、用二氧化硫气体灌注或者用过氧化氢消毒液处理。
2. 清洗柱体柱保护柱内部可能会形成脱落的硅酸胶颗粒，如果不及时清洗会对分析结果产生影响。
因此，需要定期用高纯度溶剂清洗柱体。
避免使用大量有机溶剂或者酸碱溶液，以免损坏保护柱。
3. 定时更换柱保护柱柱保护柱属于消耗品，使用一定时间之后需要及时更换。
在更换柱保护柱之前，应该进行柱床洗涤，避免污染保护柱内部。
反相高效液相色谱柱C18保护柱说明
酸性及两性小分子化合物的分析。
对于酸性和两性化合物，调流动相到pH2~3左右质子化酸性官能团时可取得极佳峰形和良好分离。
对于碱性化合物，调流动相到pH1~3时可取得比较好的峰形。
但在许多情况下，也可将流动相pH调至4~8甚至更高，以维持化合物稳定性或改变分离选择性。
pH4~8时推荐使用10~100mM缓冲盐溶液。
对于峰明显拖尾的强碱性化合物，推荐添加10~20mM三乙胺或5~10mM二甲基辛胺改善峰形。
这个时候特别推荐使用BetaBasic C18或TX产品。
柱性能Innovation TM ZW&A C18色谱柱性能参数(柱效、拖尾因子、测试条件等)详见产品测试证书。
色谱柱安装和使用旋下色谱柱两端柱头，按照色谱柱标签上液体流动方向将其连接于仪器。
色谱柱不使用时，旋上两端柱头。
样品和流动相为了避免堵塞色谱柱，样品和流动相使用前，须过0.45um滤膜、甚至孔径更小的滤膜。
流动相为有机相和水相混合相，例如甲醇-水、乙腈-水。
流动相脱气后方可使用。
操作注意点承载溶剂：由于C18键合相为非极性相，因此，流动相最好为甲醇-水、乙腈-水等混合相。
一般情况，随着有机相比例的增加，样品的保留时间会缩短。
梯度洗脱时，10%甲醇或乙腈常作为初始流动相，100%甲醇或乙腈常作为终点流动相。
需要说明的是，C18键合相可以与大多数有机相兼容。
对于新的色谱柱，柱内含有甲醇(或乙腈)和水混合相，因此，用户初次使用的流动相中不能含有与之反应的成分。
应首先用60%左右甲醇冲洗色谱柱，以除去色谱柱在包装和运输过程中引入的杂质。
然后使用目标流动相。
如果柱压或基线出现波动，说明柱内有气泡，此时，应打开排气阀，同时把流速调至更高，并维持2~5min，以除去气泡，例如，对于250×4.6mm色谱柱，可将流速调至3mL/min。
pH：推荐pH使用范围为2~8。
温度：如果流动相黏度较高，可采用升高柱温的办法以提高分离效率。
虽然最高操作温度为70℃，但是，为了更长的使用寿命，建议最佳操作温度为<50℃，在温度高于70℃下连续使用，可能损坏色谱柱，尤其是在pH>8或pH<2条件下，对色谱柱损坏更大。
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2001年11月第7卷第4期
安庆师范学院学报(自然科学版)
J ourna l of Anq ing Te a che rs Co lle ge(Na tura l S c ie nce)
Nov.2001
Vo l.7NO.4
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高效液相色谱柱的保护
王 新
(安庆市化工总厂化验室, 安徽安庆 246003)
摘 要:本文讨论流动相及样品对高效液相色谱柱的损害因素,探讨高效液相色谱柱的保
护方法。
关键词:色谱柱;损害;高效液相色谱法
中图分类号:O657.7+.2 文献标识码:B 文章编号:1007-4260(2001)04-0071-02
在高效液相色谱仪的使用中,保持高效液相色谱柱的柱效、容量和渗透特性,延长柱子的使用寿命非常重要。
色谱柱用久后常出现柱压升高,柱效降低,峰形畸变,保留时间改变等变化,如不采取适当措施,色谱柱将无法再使用,缩短色谱柱的使用寿命,本文从影响色谱柱的外界因素出发,并考虑色谱柱固定相性质的变化,讨论流动相和样品对色谱柱造成损害的因素,探讨保护方法。
1 流动相对色谱柱的损害因素
颗粒杂质:目前广泛使用的柱填料直径多在10um以下,微小的颗粒杂质很容易使柱子发生堵塞,因此使用的溶剂应当过滤,柱子上端接头应当装微孔过滤片以阻挡颗粒物进入柱中。
水溶液中的微生物:以水溶液为流动相时,应防止细菌的生长,五氯酚、叠氮化钠、辛酸等能防止细菌生长。
当用水溶液或有机酸缓冲液保护柱子时,一些厌氧霉菌可能在色谱柱中滋生,堵塞固定相颗粒间的空隙。
pH值:对硅胶基键合相填料,水溶液pH值不可超过2-7.5这一范围,当pH>8时,硅胶会释出生成絮状物堵塞柱子,且难以复原,柱效很快降低,甚至完全失效。
盐类析出:当在流动相缓冲液中加入和水混溶的有机溶剂时,其中的盐类溶解度下降,可析出盐类沉淀,堵塞柱子;加入粘度不同的样品溶液也可能发生类似现象。
所以缓冲液中盐的浓度宜低,样品提取液的组成应和流动相匹配。
2 样品对色谱柱的损害因素
杂质堵塞:样品中的微粒同样会使柱子堵塞,样品也应进行过滤处理。
样品组分的不可逆吸附:通常被吸附的组分有蛋白质、醣等,可以采取加装保护柱,或使用适应的溶剂反冲来处理。
常用溶剂有四氢呋喃(适用于溶解有机高聚物和工业样品中的焦油)、高浓度的脲或盐酸胍溶液(使蛋白质改性而洗脱)、高离子强度的磷酸盐缓冲液(pH=7,适合反相柱和离子交换柱,可除去蛋白质和醣等)。
样品组分与固定相反应:这种反应对N H2柱的影响较严重,N H2易和酐、酮形成希夫(Sch iff)缩合而减少活性点,使保留时间缩短,因此羰基化合物样品和流动相(如丙酮、乙酸乙酯等)不宜使用N H2柱。
活性点被覆盖:由于固定相吸附样品中的组成或杂质而使活性点被覆盖,在柱压升高的同时保留时间减少,将样品过滤或使用萃取分离柱(对大分子有机物如蛋白质、白细胞等)效果较好。
3、色谱柱固定相的化学变化
色谱柱固定相分解、活性基团变性以及键合相基团脱落会使保留时间显著变化。
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收稿日期:2001-07-18
3.1 键合相基团脱落绝大多数键合相都是通过硅氧硅键(Si -O -Si )连接在硅基质上,形成带有机基团的固定相Si -O -Si -R (R 为G 18H 37、C 8H 17、C n H 2n+1)。
硅氧硅键可在水溶液中水解而断裂,使键合相基团脱落,对C 2和N H 2柱键合相基团脱落不可忽视。
为减少或防止基团脱落,可增加流动相的有机溶剂量,降低离子强度和pH 值,对基团已脱落的固定相,可用合适的硅烷试剂再生。
3.2 固定相分解或活性基团变性
例如氰基柱的保留时间显著缩短,但键合相中C 、H 、N 的百分含量并无大变化,证明未发生—CN 水解成-COO H 反应,而是形成了衍生物。
在硅上增加烷基可减少水解。
4、高效液相色谱柱的保养
色谱柱在使用一段时间后,常遇到柱子受污染,柱效下降的问题,采用适当的方法对色谱加以保护和再生,能够延长色谱柱的使用寿命。
使用保护柱和过滤样品、流动相:流动相中若有不纯物聚积存柱顶,将影响柱寿命,所以溶剂应使用H PL C 级的,样品和流动相用前先以微孔薄膜过滤。
对于较昂贵的色谱柱,可以在柱前加一个保护柱,防止样品中杂质污染分析柱,对于制备柱,因其进样量大,使用保护柱尤为重要。
已污染柱的处理:因保留强的物质污染,柱顶或样品中不溶物沉积于柱顶,可用下列方法洗涤:(1)去除脂类可用四氢呋喃 乙腈或甲醇洗涤;(2)去除蛋白质可用乙腈,丙醇和1%三氯乙酸进行梯度洗脱;(3)某些高疏水性化合物,可用乙腈或甲醇洗脱,同时反复注入四氢呋喃(100-200)m l 。
对于使用一段时间后柱效下降的色谱柱可按下列方法进行再生。
再生处理包括活化(右→左)和净化(左→右)两种。
(1)硅胶、氧化铝和极性(正相)键合相色谱柱按下列顺序依次冲冼:三甲基戍烷或已烷→三氯乙烷→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水。
(2)键合相硅胶柱:苯基、氰基键合相柱按以下顺序冲洗:蒸馏水→甲醇(冲洗过程中可加入少量二甲基甲酰胺)→分离样品用的流动相。
(3)阴、阳离子交换柱:酸性有机物吸附在固定相表面的用低pH 缓冲液冲洗,碱性有机物用高pH 缓冲液冲洗,然后依次用蒸馏水→甲醇→二氯甲烷→甲醇→蒸馏水冲洗干净。
柱头处理:对于柱顶堵塞、严重污染,用溶剂冲洗无效的色谱柱,只有打开柱子去掉柱顶的填料重填:先拆下不锈钢烧结过滤器,检查柱床,常见塌陷或受污染的带色填料,剔掉无规则床层和带色填料,使柱床显白色并完全水平,再用甲醇作糊状填料匀浆液,将糊状填料匀浆液滴在柱上靠重力从匀浆液中排出甲醇液,重复直到填料水平。
柱子的贮存:柱子不能贮存于水或水性溶剂中,否则会引起细菌在柱中生长或产生盐类沉淀。
贮存前应先用适当的溶剂(如甲醇),将柱子冲洗干净,再将柱子两头密封,以防溶剂蒸发使柱子干燥而引起柱子结构的几何学改变。
[参考文献]
[1] 张玉奎,张维冰,邹汉法.分析化学手册(第二版)第六分册.液相色谱分析[M ].北京:化学工业出版社,2000.
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Protection of h igh -performance liquid chromatograph ic colu mn
W AN G X ing
(T he Computer D ep t .of A nqig T eachers’Co llege ,A nqing 246011,Ch ina )
Abstract :T he destroying facto rs of mob ile phase and H PL C co lum n and the p roper p ro tective
m ethods w ere discu ssed in the paper .
Keywords :ch rom atograph ic co lum n ;destrying facto rs ;h igh -perfo rm ance liqu id ch rom atography
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27・安庆师范学院学报(自然科学版)2001年。