食品安全国家标准 食品中叶酸的测定 编制说明
_国标《食品中叶酸的测定》的标准曲线绘制与计算
[基金项目] 浙江省卫生高层次创新人才培养、浙江省151人才培养、浙江省医学科学院青年基金[作者简介] 唐靓(1979-),男,本科,助理研究员,主要从事微生物检测与研究工作。
＊通讯联系人,E-m a i l :w y 3333@163.c o m【经验交流】国标《食品中叶酸的测定》的标准曲线绘制与计算唐靓,李跃中,王晗,陆明旸,李昉贇,王茵＊(浙江省医学科学院,杭州 310013)[关键词] 微生物法;叶酸;标准曲线;E X C E L[中图分类号] R 155.5 [文献标识码] C [文章编号] 1004-8685(2009)07-1682-02 中华人民共和国国家标准G B /T 5009.211-2008《食品中叶酸的测定》于2008-11-21发布,2009-03-01正式实施[1]。
标准7.6结果计算中说明:以标准系列管叶酸含量为横坐标、透光率为纵坐标,绘制标准曲线。
从标准曲线查得试样管或酶空白管中叶酸的相应含量,如果每个试样的三支试样管中有两支叶酸含量落在0.20～1.0n g 范围内,则可继续进行计算。
1 标准曲线建立笔者参与标准的起草,对微生物法测定食品中叶酸含量的准确度、精密度和重复性做了验证与评价。
在实验过程中,发现干酪乳杆菌A T C C 7469标准管的O D 值随着叶酸浓度增加而增长趋缓,略呈S 形。
若使用线性方程,数据点分布在方程两侧,求得的叶酸浓度不准确(见表1与图1)。
表1 叶酸标准系列管的O D 值C (n g )0.00.050.10.20.3O .D 0.0000.0350.0920.2210.333O .D 0.0060.0280.0850.2020.319均值0.0030.0320.0890.2120.326C (n g )0.40.50.60.81.0O .D 0.4180.4990.5930.7360.839O .D 0.4090.5030.5800.7010.837均值0.4140.5010.5870.7190.838图1 叶酸1阶线性方程标准曲线标准曲线:y =0.8693x +0.0284r 2=0.984若使用E X C E L 的功能,可以建立4阶曲线方程,该方程与实验数据的拟合程度较好。
叶酸测定
1.原理叶酸是酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei, L. C,ATCC7469）生长所必需的营养素。
在一定条件下，L.C的生长繁殖与培养基中叶酸含量呈正比关系，细菌增殖的量以光密度值计，通过与标准曲线相比较，计算出样品中叶酸的含量。
2.适用范围参考《Methods of Vitamin Assay》，第4版。
本方法适用于各类食物中叶酸的测定。
检测限为0.1ng。
3.仪器与设备（1）恒温培养箱（2）离心机（3）高压消毒锅（4）震荡器（5）接种针和接种环（6）分光光度计4.试剂除特殊说明外，本实验中所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
（1）菌种：酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei, L.C, ATCC 7469）（2）磷酸缓冲液(0.05mol/L, pH6.8):称取4.35gNa3PO4·12H2O,10.39gNa2HPO4·7H2O溶解于800ml水中。
临用前用约5g抗坏血酸调节pH至6.8。
（注：叶酸对光、热敏感，易被氧化破坏，抗坏血酸有助于保护叶酸被氧化。
）（3）鸡胰酶溶液：称取100mg干燥的鸡胰酶（Difco公司）（注：含有叶酸轭合酶，用于水解叶酸多谷氨酸盐），加入20ml磷酸缓冲液制成匀浆，3000rpm离心10min,取上清液备用。
临用前现配。
（4）蛋白酶-淀粉酶溶液：分别称取200mg蛋白酶（Sigma公司）和淀粉酶（Sigma公司），加入20ml磷酸缓冲液制成匀浆，离心3000rpm10min,取上清液备用。
临用前配制。
（5） 2+8乙醇溶液：量取20ml无水乙醇溶液，加入80ml水混匀。
（6） 0.1mol/L NaOH: 称取0.4g氢氧化钠，加2+8乙醇溶液溶解并稀释至1L。
（7） 10mol/L NaOH。
称取400g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L。
（8）叶酸标准储备液（200mg/ml）：准确称取200mg叶酸标准品（Sigma公司，纯度大于98%），用0.01mol/LNaOH溶解并定容至1L。
食品中叶酸的测定方法
中南大学食品分析课程论文题目：食品中叶酸的测定方法学生姓名：毛慧悦所在学院：化学化工学院专业班级：应用化学1105班学生学号：1505110706指导老师: 张泰铭目录1叶酸 (1)1.1叶酸的化学结构 (1)1.2叶酸的理化性质 (1)1.3叶酸的作用效果 (2)2 果蔬中叶酸含量的测定方法 (2)2.1化学发光测定法 (2)2.2离子捕获法 (3)2.3F ENTON试剂氧化-荧光分析法 (3)2.4催化氧化荧光法 (3)2.5衍生荧光法 (4)2.6间接原子吸收光谱法 (4)3 保健品中叶酸的测定方法 (5)3.1铽一环丙沙星稀土敏化荧光猝灭法 (5)3.2表面等离子共振技术（SPR） (5)3.3高效液相色谱法（HPLC）法 (5)3.4高分离度快速液相色谱法（RRLC） (6)3.5氨基硅油修饰碳糊电极阳极伏安法 (6)3.6发光免疫法 (7)3.7PEI修饰的量子点作为叶酸荧光探针 (7)4结论与展望 (7)4.1结论 (7)4.2展望 (8)食品中叶酸的测定方法毛慧悦（中南大学，湖南长沙 410012）摘要：叶酸，又称为维生素B9，是维生素B9的水溶形式。
叶酸是一种重要的一碳载体，在核苷酸合成等重要生理代谢功能方面有非常重要的作用。
因此叶酸在细胞分裂和生长过程（如婴儿发育、怀孕）中有着重要的作用。
叶酸的检测已成为食品研究中的热点，本文从叶酸的结构和检测几个方面展开研究，并重点阐述了果蔬和保健品中叶酸的几种测定方法。
关键词：叶酸；测定方法；果蔬；保健品Testing of folic acid in foodsMAO Hui-yue（Central South University，Hunan Changsha 410012，China）Abstract:Folic acid, also known as vitamin B9 or B c, a water-soluble form of vitamin B9. Folic acid is an important one-carbon carrier in nucleotide synthesis, metabolism of many important physiological functions of homocysteine re methylation plays an important role. Therefore, there is a particularly important role of folic acid in the rapid cell division and growth (such as infant development, pregnancy) in. Folic acid food testing has become a hot research paper from the structure, preparation of folic acid, extraction and detection aspects of a study, and focuses on the determination of several fruits and vegetables and health supplements of folic acid.Key words：folic acid；testing；vegetables and foods；health products.1叶酸1.1 叶酸的化学结构叶酸(Folic acid)，是维生素B9的水溶形式，也被称为蝶酞谷氨酸。
食品安全标准企业标准编制说明模板
《××××××××》广东省食品安全企业标准编制说明本标准是在国家尚无该产品相关国家标准、地方标准的情况下，为保证产品质量，指导企业生产，根据标准化法、产品质量法、食品安全法及相关法律法规，制定本标准，现就标准编制的有关情况说明如下：
一、编写格式依据GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的规定而制定。
二、产品配方如下：（详细列出，包括主料、配料和使用的食品添加剂的名称及用量）
三、产品生产工艺：详细列出
四、本标准与食品安全相关的指标（企业标准内所有指标，包括理化、微生物指标）、限量及制订依据：
五、修订指标的说明（若无修订指标，可删掉此项）：
六、企业标准比较情况说明：详细说明企业标准制定过程中与相关国家标准、地方标准、国际标准及国外标准比较情况。
七、参考的国内外相关标准或有关资料（详细列出引用的产品标准，检验方法标准不用列出）。
如采用国际标准或国外标准制定的企业标准，须附所采用标准原文及译文各一份。
如：GB 15266-2009 运动饮料……
单位名称
编制日期。
叶酸的测定方法
叶酸的测定方法微生物法1.原理叶酸是酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei, L. C, ATCC 7469）生长所必需的营养素。
在一定条件下，L.C的生长繁殖与培养基中叶酸含量呈正比关系，细菌增殖的量以光密度值计，通过与标准曲线相比较，计算出样品中叶酸的含量。
2.适用范围参考《Methods of Vitamin Assay》，第4版。
本方法适用于各类食物中叶酸的测定。
检测限为0.1ng。
3.仪器与设备（1）恒温培养箱（2）离心机（3）高压消毒锅（4）震荡器（5）接种针和接种环（6）分光光度计4.试剂除特殊说明外，本实验中所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
（1）菌种：酪乳酸杆菌（Lactobacillus casei, L.C, ATCC 7469）（2）磷酸缓冲液(0.05mol/L, pH6.8):称取4.35g Na3PO4·12H2O,10.39g Na2HPO4·7H2O溶解于800ml水中。
临用前用约5g抗坏血酸调节pH至6.8。
（注：叶酸对光、热敏感，易被氧化破坏，抗坏血酸有助于保护叶酸被氧化。
）（3）鸡胰酶溶液：称取100mg干燥的鸡胰酶（Difco公司）（注：含有叶酸轭合酶，用于水解叶酸多谷氨酸盐），加入20ml磷酸缓冲液制成匀浆，3000rpm离心10min,取上清液备用。
临用前现配。
（4）蛋白酶-淀粉酶溶液：分别称取200mg蛋白酶（Sigma公司）和淀粉酶（Sigma公司），加入20ml磷酸缓冲液制成匀浆，离心3000rpm 10min,取上清液备用。
临用前配制。
（5） 2+8乙醇溶液：量取20ml无水乙醇溶液，加入80ml水混匀。
（6） 01mol/L NaOH: 称取0.4g氢氧化钠，加2+8乙醇溶液溶解并稀释至1L。
（7） 10mol/L NaOH。
称取400g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L。
（8）叶酸标准储备液（200mg/ml）：准确称取200mg叶酸标准品（Sigma公司，纯度大于98%），用0.01mol/L NaOH溶解并定容至1L。
叶酸测定原始记录表
标准溶液名称：叶酸 标准工作液 标准曲线工作液：0.200ng/mL
试管号
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
0.200ng/mL标准曲线工作液
0.00
0.25
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
4.00
5.00
叶酸含量
0.00
0.05
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
0.60
0.80
1.00
吸光度两次平均值
回归方程标准曲线Y=
样品测定
提取液定容体积V mL；；计算公式 C=Cx/Vx；X=C×V×f×100/（m×1000）
空白
吸取酶空白液体积V1
吸光度
从曲线查得叶酸含量m3（ng）
酶液中叶酸含量
/
/
试样中叶酸含量X
μg/100g
备注
A1
B1
C1
序号
试样质量m（g）
样品编号
样品名称
检验项目
叶酸
检验依据
GB5009.211—2022食品中叶酸含量的测定
检出限
仪器名称
仪器型号
仪器编号
检测起止日期
环境条件
温度 湿度
分析步骤：称取试样_____按标准中5.1制备接种液，按标准中6.2进行试验提取。根据试样中叶酸含量用水对试样提取液进行适当稀释。取3支试管，分别加入1.0mL、2.0mL、3.0mL试样稀释液(V),补水至5.0mL,混匀。另取3支试管同法加入酶空白液。每个梯度做2个平行。取试管分别加入叶酸标准工作溶液0.00mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL,补水至5.00mL混匀。制备2套~3套标准系列管，绘制标准曲线时，以每个标准点平均值计算。将所有测定系列管、叶酸测定培养基于121℃(0.10MPa~0.12MPa)高压灭菌15min(或根据培养基要求进行灭菌)。待测定系列管冷却至室温后，在无菌操作条件下，每10mL叶酸测定培养基加人接种液40μL,混匀，每支测定管中加入接种后的叶酸测定培养基5mL,混匀。置于36℃士1℃恒温培养箱中培养20h~40h,获最大混浊度时终止培养。另准备一支标准0管（含0.00ng叶酸）不接种作为0对照管。将培养好的标准系列管、试样和酶空白系列管用漩涡振荡器混匀。用1cm比色杯，于540nm处，以未接种0对照管调节透光率为100%（或吸光度值为0），依次测定标准系列管、试样和酶空白系列管的透光率（或吸光度值）。
叶酸食品级fcc质量标准
叶酸是一种重要的维生素，对于人体的发育和健康起着至关重要的作用。
为了确保叶酸产品的质量和安全性，制定了一系列的质量标准。
其中，食品级FCC（Food Chemicals Codex）质量标准是广泛应用于食品行业的一项标准。
本文将详细介绍叶酸食品级FCC 质量标准，包括其定义、要求和相关检测方法。
一、叶酸食品级FCC质量标准的定义叶酸食品级FCC质量标准是指符合食品化学法典（Food Chemicals Codex）规定的叶酸质量要求的产品。
该标准包括对叶酸产品的纯度、含量、物理性质、微生物指标等方面的要求。
二、叶酸食品级FCC质量标准的要求1. 纯度要求：叶酸食品级FCC标准要求叶酸产品的纯度达到一定的标准。
其中，有机杂质的含量要低于规定的限量，无机盐类的含量也要符合要求。
此外，还要求叶酸产品不得含有对人体有害的物质，如重金属等。
2. 含量要求：叶酸食品级FCC标准对叶酸产品的含量有详细的规定。
一般来说，叶酸产品的含量应在一定的范围内，并且要与产品标签上所示的含量相符合。
3. 物理性质要求：叶酸食品级FCC标准还对叶酸产品的物理性质进行了要求。
例如，叶酸产品的外观应为无色结晶或结晶性粉末，不应有异物。
此外，还要求叶酸产品的溶解度、熔点、旋光度等物理性质符合规定。
4. 微生物指标要求：叶酸食品级FCC标准对叶酸产品的微生物指标也有一定的要求。
例如，叶酸产品的总菌落数、霉菌和酵母菌的数量都应低于规定的限值。
另外，对大肠杆菌和沙门氏菌等致病菌的检测结果也必须符合相关标准。
三、叶酸食品级FCC质量标准的检测方法为了评估叶酸产品是否符合食品级FCC质量标准的要求，需要进行相应的检测。
以下是常用的叶酸检测方法：1. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法是目前最常用的叶酸含量测定方法。
通过将叶酸样品与特定试剂反应后，利用高效液相色谱仪进行分离和定量分析，可以准确测定叶酸的含量。
2. 紫外分光光度法：该方法是一种快速测定叶酸含量的方法。
食品安全国家标准食品中叶酸叶酸盐的测定征求意见稿
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.食品安全国家标准食品中叶酸（叶酸盐）的测定中华人民共和国卫生部发布4.1前言本标准代替GB/T 5009.211-2008《食品中叶酸的测定》。
本标准与GB/T 5009.211-2008相比，主要变化如下：——修改了菌种名称,由干酪乳杆菌改为鼠李糖乳杆菌；——删除了培养基和用于叶酸盐降解的鸡胰腺供货信息。
本标准中附录A、B均为资料性附录。
（本标准中附录性质的说明）本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB/T 5009.211-2008。
食品安全国家标准食品中叶酸（叶酸盐）的测定1范围本标准规定了食品中叶酸（叶酸盐）的测定方法。
本标准适用于食品中叶酸（叶酸盐）的测定。
2原理叶酸是细菌生长所必需的营养素，在一定控制条件下，细菌的生长响应与培养基中叶酸含量呈线性关系。
用比浊法测定试样液中细菌增殖后的混浊度，通过与标准曲线相比较计算出试样中叶酸的含量。
3试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1甲苯（C7H8）。
3.2磷酸钠（Na3PO4·12H2O）。
3.3磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）。
3.4抗坏血酸（C6H8O6）。
3.5无水乙醇（C2H6O）。
3.6氢氧化钠（NaOH）。
3.7盐酸（HCl）。
3.8鸡胰腺（Chicken Pancreas）。
3.9木瓜蛋白酶（Papain）。
3.10淀粉酶（Taka-Diastase）。
3.11叶酸（C19H19N7O6）：纯度＞98 %。
3.12葡萄糖（C6H12O6）。
3.13蛋白胨（peptone）。
3.14酵母提取物（yeast extract）。
3.15琼脂。
3.16磷酸氢二钾（K2HPO4）。
3.17磷酸二氢钾（KH2PO4·3H2O）。
3.18硫酸镁（MgSO4·7H2O）。
3.19氯化钠（NaCl）。
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《食品安全国家标准食品中叶酸的测定》（征求意见稿）编制说明
一、标准起草基本情况
本标准制定任务来源于国家卫生健康委员会（原国家卫生和计划生育委员会）委托制定的食品安全国家标准项目，由由山东省食品药品检验研究院和中国疾病预防控制中心营养负责修订SPAQ-2017-065《食品安全国家标准食品中叶酸的测定》。
2017年11月8日收到正式通知，2017年11月16日在北京召开2017年食品安全国家标准项目启动会，启动会后项目组正式协调成立，在广泛调查研究和讨论的基础上，起草了本标准，并邀请三家以上专业技术机构进行方法标准实验室间验证工作。
2018年12月在方法验证的基础上，形成讨论稿，并通过信函的方式向有关机构和专家广泛征求意见，期间未收到重大分歧意见，经整理归纳后，形成送审稿。
2019年9月3日-9月5日，第二届食品安全国家标准审评委员会理化检验方法与规程专业委员会、微生物检验方法与规程专业委员会第一次会议审查通过。
二、标准的主要技术内容
本标准中试管法适用于食品中叶酸的测定，微孔板法适用于添加了叶酸的食品中叶酸的测定。
相较于GB 5009.211-2014，进行样品前处理后，在保留原试管法的基础上，缩小反应体系，增加微孔板法，使用酶标仪进行反应液浊度的测定。
天然叶酸在自然界中有几种存在形式，其母体化合物是由喋啶、对氨基苯甲酸结合成蝶酸，再与一个或多个谷氨酸结合成蝶酰谷氨酸盐。
蝶酰单谷氨酸（PteGlu），是可被吸收利用的最简单叶酸形式，也是营养添加剂的主要形式，有多种衍生形式；蝶酰多谷氨酸盐（PteGlu n）是天然食物中存在的主要形式，英文folate，folacin常用于描述蝶酰谷氨酸盐或酯。
从营养学概念上，folic acid, folate, folacin多可通用，中文统称为叶酸。
由于液相色谱-质谱等化学分析方法仅可对单一组分进行测定，当前尚没有建立好有效的样品前处理方法，故不适用于混合形式叶酸的测定。
本标准对接种液的制备、培养基的选择、微孔板法的反应时间、标准曲线范围等方面内容进行了叶酸测定的相关实验，确定了市售测定培养基和微孔板法的适用性。
最终确定每10 mL叶酸测定培养基中加入菌种接种液40 μL，在叶酸浓度为0.005～0.1 ng/mL范围内，培养时间32～40h，使用微孔板法测定添加了叶酸的食品中叶酸含量时，对应关系良好。
以无外源叶酸添加的乳粉为基质，进行加标回收率测定，实验平均加标回收率为97.3～118.5%，相对标准偏差为3.45%～5.85%。
在一定生长条件下，Lactobacillus rhamnosus的生长速度与溶液中叶酸的含量存在正相关。
通过对不同浓度叶酸标准溶液的测定，推测微生物法的检出限。
标准曲线中叶酸可被确认检出的最低浓度为0.005 ng/mL。
据此推算，称样量为1g，计算最低稀释度为1倍，方法的检出限为0.5 μg/100g，定量限为1.0 μg/100g，与试管法测定检出限相同。
三家实验室间的方法验证结果指标也均符合GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》中附录F规定的检测方法确认的技术要求。
因此，本方法灵敏度、准确性、精密度，可满足大批量、且含量水平相对稳定的婴幼儿配方乳粉的高效检测工作需求。
三、国内外相关法规标准情况
我国标准中对叶酸含量进行了规定，主要有GB 10765-2010《食品安全国家标准婴儿配方食品》、GB 10767-2010《食品安全国家标准较大婴儿和幼儿配方食品》、GB 10769-2010 《食品安全国家标准婴幼儿谷类辅助食品》、GB 22570-2014 《食品安全国家标准辅食营养补充品》、GB 31601-2015《食品安全国家标准孕妇及乳母营养补充食品》、GB 25596-2010《食品安全国家标准特殊医学用途婴儿配方食品通则》、GB 29922-2013《食品安全国家标准特殊医学用途配方食品通则》，其中叶酸的最低限量为1.0 μg/100KJ，能量按2000 KJ/100g计算，叶酸含量为20 μg/100g。
我国食品中叶酸的测定标准为GB 5009.211-2014《食品安全国家标准食品中叶酸的测定》，欧盟及AOAC食品中叶酸测定标准有BS EN14131-2003、AOAC 2004.05、AOAC992.05-1995、AOAC944.12-1997、AOAC 960.46、AOAC 2011.05、AOAC 2011.06，其中5个采用微生物方法进行叶酸的测定，检测原理与GB 5009.211-2014相同。
其中BS EN 14131-2003和AOAC 2004.05标准中规定，可选择使用分光光度计或酶标仪对菌液浓度进行测定。
涉及到的国内国际相关标准情况如表1所示。
表1、国内国际相关检测标准
四、其他需要说明的事项
无。