常用培养基及基本特性
植物组培常用培养基重要特性
根据植物种类和培养目的选择合适的碳源，如某些植 物对糖类的种类和浓度有特殊要求。
氮源
氮源
01
为植物细胞提供合成蛋白质和其他含氮化合物的原料。
作用
02
氮是植物生长所必需的大量元素之一，参与细胞中多种生物合
成反应。
选择依据
03
根据植物种类和培养目的选择合适的氮源，如有机氮源和无机
氮源的选择需考虑植物的吸收利用和培养基的稳定性。
灭菌后应尽快使用， 避免长时间放置导致 培养基变质。
在灭菌过程中，应确 保培养基密封性良好 ，防止空气进入影响 灭菌效果。
05
培养基的保存
保存方法
冷藏保存
将培养基放置在4℃冰箱中保存，可保持培养基的 稳定性和有效性。
冷冻保存
在长时间不使用的情况下，可以将培养基进行冷 冻保存，使用前需解冻。
干燥保存
无机盐
无机盐
为植物细胞提供必需的矿物质营养，如钾、钙、镁、铁等。
作用
参与细胞代谢活动，维持细胞正常生理功能，促进植物生长。
选择依据
根据植物种类和培养目的添加适量的无机盐，注意配比和浓度，避 免过高或过低对植物生长造成不利影响。
维生素和生长调节剂
维生素
生长调节剂
为植物细胞提供生长所需的微量有机营养 物质，如维生素B1、维生素B2等。
包括植物生长素和细胞分裂素等，调控植 物细胞生长和分化。
作用
选择依据
促进细胞分裂、诱导芽的形成和发育、延 缓衰老等。
根据植物种类和培养目的选择合适的维生 素和生长调节剂，注意浓度和配比的合理 性，以达到最佳的培养效果。
02
培养基的物理特性
粘度
总结词
培养基的粘度是影响培养基质量的关键因素，粘度过高或过低都会对植物的生 长产生不利影响。
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
微生物培养基的分类
应用：实验室内，研究微生物营养、代谢、菌种选
育、菌种鉴定、生物测定等定量要求较高的研究。
2.天然培养基
又称复杂培养基，采用动植物组织或微生物细胞 或其提取物和粗消化产物制成的。 营养物质来源于天然物质。
天然物质：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麦芽汁、玉米粉、
用途：分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等 。
凝固剂：琼脂、明胶和硅胶三种。 凝固剂要求: ①不被微生物利用分解，生长温度范围为固体。 ②凝固点温度不能太高。琼脂:45 -55℃ ③无毒，灭菌不会破坏。 ④透明及粘着力强。 ⑤凝胶强度和韧度要适中。
2.半固体培养基
在液体培养基中加入少量凝固剂,使之呈柔软的糨糊 状或直接将营养物质配制成半流体状态的培养基。
应用：微生物生理生化特性研究、大规模的工业生 产（啤酒、葡萄酒、乳制品生产）。
液体流乙醇酸盐流体培养基
好氧菌，厌氧菌，兼性厌氧菌的检验
（三）按照培养基的功能分 (1)基础培养基:含有一般微生物生长繁殖所需的基
本营养物质的培养基。 用途:作为一些特殊培养基的基础成分。 细菌:牛肉膏蛋白胨培养基 霉菌:马铃薯葡萄糖琼脂培养基 酵母菌:麦芽汁琼脂培养基
紫色菌落
菌群
培养基是微生物菌种生长繁殖和发酵的重 要物质基础，也是微生物赖以生存的外界环 境。在科学实验和实际生产中，会遇到许多 问题，有些培养基即是液体培养基，又是选 择培养基也可能是天然培养基，掌握不同类 型的培养基特点，并将之灵活地应用于具体 的实际工作之中。
与选择培养基区别： 加富培养基：增加所要分离的微生物数量，成为优 势菌，逐步淘汰其他微生物。 选择培养基：抑制不需要微生物的生长，使所需要 菌成为优势菌。
培养基及其配制
☺作用：
☺对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用， 但对器官的分化作用不明显。
☺注意：其成分大多不清楚，所以一般应尽量避免使用。
2.活性炭
☺作用：活性炭结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作 用它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质。 ☺浓度: 0.5—l0g／L。
BL（Brown和 Lawrene,1968）
成分与MS类似
BM(Button,1975)
成分与MS类似，仅将盐酸硫胺素除 去，蔗糖为3%
ER(Eriksson,1965)
☺形式：MgSO4·7H20
☺Ca：
☺作用：Ca是构成细胞壁的一种成分，对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用 ☺形式：CaCl2·2H2O。
2.微量元素：
☺主要元素：Fe、B、Mn、Cu、Mo、Co等。
☺Fe:
☺作用： ☺是某些酶的组成成分：氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶
☺是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和 幼苗转绿有促进作用。
生长。
☺ 作用：
☺ 糖作为碳源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架 ☺ 为细胞的呼吸代谢提供底物与能源 ☺ 同时维持一定的渗透势，并且能够维持一定的渗透压
（一般在1.5～4.1×10５Pa）。
☺ 浓度：在2%—3%，常用3%。高压灭菌时，一部分糖会发
生分解，制定配方时要给予考虑。 ☺ 在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。
☺形式：FeSO4·7H20和Na2—EDTA ☺思考：为何不用Fe2（SO4）3，和FeCl3？
☺B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物组织培养中不可缺少 的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。
（二）有机营养成分
培养基类型
培养基类型引言在生物科学研究中，培养基是一种重要的工具，它提供了一种人工的环境，使得生物样本可以在实验室中继续生长和繁殖。
培养基类型广泛，各种生物样本都需要适合其生长特性和需求的培养基。
本文将介绍常见的培养基类型，包括液体培养基和固体培养基。
一、液体培养基液体培养基是最常见的一种培养基类型。
它由水、营养物以及其他添加物组成，可以提供生物样本所需的养分和环境条件。
液体培养基通常用于细菌和酵母等微生物的培养。
在制备液体培养基时，我们需要注意以下几个关键因素：1. 成分选择：液体培养基的成分选择应根据生物样本的特性和需求进行。
常见的成分包括碳源、氮源、矿物质和生长因子等。
根据不同的微生物要求，可以选择合适的成分组合。
2. pH值调节：液体培养基的pH值对生物样本的生长和繁殖起着重要作用。
不同的生物样本对pH值有不同的要求，一般范围在6.5-7.5之间。
可以使用缓冲溶液来调节液体培养基的pH值。
3. 混合均匀：在制备液体培养基时，需要将各种组分充分混合，以确保培养基中各种养分分布均匀。
可以使用搅拌器或摇床等设备进行混合。
液体培养基的优点是易于制备和操作，可以提供大量的生物样本供科研人员使用。
然而，它也存在一些缺点，如难以分离和纯化生物样本等。
为了解决这些问题，人们采用了固体培养基。
二、固体培养基固体培养基是一种将液体培养基添加凝胶剂（通常是琼脂）后制成的固体状培养基。
它可以提供更稳定的平台，使得生物样本能够在其表面上生长和繁殖。
固体培养基通常用于培养细菌、真菌和植物等生物样本。
制备固体培养基与液体培养基有一些不同之处：1. 凝胶剂添加：在制备固体培养基时，需要将合适的凝胶剂添加到液体培养基中。
琼脂是最常用的凝胶剂，它可以增加培养基的稳定性和坚固性。
2. 灭菌：由于固体培养基中存在微生物生长的可能性，制备过程中需要严格控制卫生条件，并进行灭菌处理，以杀死潜在的污染微生物。
3. 均匀涂布：在制备固体培养基时，需要将凝胶状的培养基均匀涂布在培养皿或培养瓶的表面上。
m63培养基用途
m63培养基用途M63培养基是一种经典的无机盐基础培养基，最早由Miller于1972年开发出来，被广泛应用于微生物学领域。
它的组成相对简单，主要由无机盐、有机氮源、糖类和微量元素组成。
M63培养基的特点是无机盐浓度低，不含复杂的有机物质，因此可以提供一个较为简单的环境，用于研究微生物的生理代谢和生长特性。
M63培养基的无机盐成分包括氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾等，它们提供了微生物生长所需的基本元素。
有机氮源一般选择氨基酸，如谷氨酸、精氨酸等，它们可以为微生物提供氮源。
糖类一般选择葡萄糖或甘露糖，作为微生物的碳源和能源。
此外，M63培养基中还添加了微量元素，如铁、锌、钼等，以满足微生物对微量元素的需求。
M63培养基的应用十分广泛。
首先，它常被用于研究微生物的生长特性。
由于M63培养基的简单成分，可以方便地控制和调整培养基的组成，从而研究微生物对不同营养物质的利用能力、生长速率以及代谢途径的变化。
其次，M63培养基也常被用于研究微生物的突变体。
通过在M63培养基中添加适当的选择性物质，如抗生素或色素，可以筛选出突变体，进一步研究其突变基因或突变表型。
此外，M63培养基还可以用于检测微生物的生长状态和群体行为。
例如，可以通过添加某些指示剂，如溴蓝脱色剂，观察微生物生长过程中的颜色变化，从而判断其生长状态和代谢活性。
除了以上应用，M63培养基还可以用于微生物遗传学研究。
在微生物的遗传改造中，M63培养基可以作为基础培养基，用于培养携带特定遗传元件的微生物。
例如，在重组DNA技术中，可以利用M63培养基培养携带目的基因的重组菌株，进一步进行目标基因的表达和纯化。
此外，M63培养基还可以用于微生物的增殖和储存。
由于其简单的成分和操作简便性，M63培养基可以作为常用的培养基，用于微生物的扩大培养和保存。
M63培养基是一种无机盐基础培养基，具有简单的组成和操作方便的特点。
它在微生物学研究中有着广泛的应用，包括研究微生物的生长特性、突变体、生长状态和群体行为，以及在微生物遗传学和储存中的应用。
细菌培养的条件
细菌培养的条件引言：细菌是微生物界中一类重要的生物，它们广泛存在于自然界中的各个角落，并在生物学、医学、工业等领域中发挥着重要的作用。
要想研究细菌的生理特性、代谢途径以及进行相关实验，就需要进行细菌的培养。
细菌培养是一项关键的实验技术，它需要提供适宜的环境条件来促进细菌的生长和繁殖。
本文将介绍一些常见的细菌培养条件，以帮助读者更好地理解和实施细菌培养实验。
一、培养基的选择培养基是细菌培养的基础，它提供了细菌所需的营养物质和环境条件。
常见的培养基包括富含营养物质的琼脂糖培养基、含有特定物质的选择性培养基等。
在选择培养基时，需要考虑细菌的种类和培养的目的。
例如，对于一般的细菌培养，琼脂糖培养基是常用的选择；而对于某些特定的细菌，如大肠杆菌等，LB培养基是更为常见的选择。
二、温度的控制细菌对温度有着较高的敏感性，不同的细菌在生长的最适温度上有所差异。
一般来说，细菌培养的适宜温度为37℃。
为了实现温度的控制，常用的方法是使用恒温培养箱或恒温培养器。
在进行细菌培养时，需要将培养物放置在恒温设备中，并设置适宜的温度。
三、pH值的调节细菌对培养基的pH值也有一定的要求，一般在6.5-7.5之间。
为了调节pH值，可以向培养基中加入缓冲剂，如磷酸盐缓冲液。
在进行细菌培养实验时，需要在实验前测定和调节培养基的pH值，以确保细菌能够在适宜的酸碱环境中生长。
四、氧气的供应细菌的生长需要适量的氧气供应，不同的细菌对氧气的要求也有所不同。
一些细菌属于需氧菌，它们需要较高浓度的氧气来进行呼吸作用；而另一些细菌属于厌氧菌，它们在氧气缺乏的环境中生长。
为了满足细菌的氧气需求，可以通过搅拌培养物或使用含氧气的培养器来增加氧气供应。
五、营养物质的添加除了基础的培养基成分外，细菌培养中还需要添加一些特定的营养物质，以满足细菌的特殊需求。
例如，对于某些细菌来说，它们需要特定的氨基酸、维生素或微量元素来进行生长和代谢。
在进行细菌培养实验时，需要根据细菌的需求向培养基中添加适量的营养物质。
几种常见培养基作用
几种常见培养基作用培养基是细菌学和微生物学实验的基础，用于培养、繁殖和研究细菌和其他微生物。
不同的培养基具有不同的特性和作用。
下面将介绍几种常见的培养基及其作用：1.营养琼脂基本培养基：这是最常用的培养基之一，它提供了细菌生长所需的各种营养物质，包括碳源、氮源、矿物质和维生素。
该培养基能够满足细菌的基本营养需求，促进其繁殖和生长。
2.差异性培养基：差异性培养基的作用是区分不同细菌的生长和代谢特点。
例如，大肠杆菌选择性培养基能够抑制其他菌群的生长，只允许大肠杆菌生长，从而帮助鉴定和分离大肠杆菌。
3.选择性培养基：选择性培养基的作用是选择性地培养其中一类细菌。
根据细菌对不同抑制剂和抗生素的敏感性，可以选择性地促进或抑制一些细菌的生长。
例如，巴氏杆菌选择性培养基会抑制大多数菌群的生长，只允许巴氏杆菌生长。
4.富集培养基：富集培养基的作用是加强其中一类细菌的生长。
富集培养基通常会包含一些特定成分，如特定营养物质或抗生素，以促使目标菌株的繁殖。
例如，革兰氏阳性杆菌富集培养基中含有高浓度的碳源和氮源，有助于改善革兰氏阳性杆菌的生长。
5.不含营养物质的培养基：不含营养物质的培养基还被称为无机培养基或基本盐蔗糖培养基(BSC)。
这种培养基只提供细菌生长所需的无机物质和一定浓度的蔗糖，不含有机营养物质。
这种培养基的作用是用于检测细菌对不同抗生素和化合物的敏感性，从而为抗生素临床应用提供参考。
6.非选择性培养基：非选择性培养基是一种通用的培养基，适用于不同种类的细菌。
它提供了细菌生长所需的各种营养物质，并不含有可能抑制菌群向生长的物质。
这种培养基通常用于分离和纯化未知细菌，以便进一步研究其特性和功能。
7.复合培养基：复合培养基是由多种不同成分组成的培养基，包括富集培养基、选择性培养基和差异性培养基等。
复合培养基的作用是兼顾多种细菌的营养需求和特性，为细菌的培养和研究提供全面的支持和条件。
总结起来，不同的培养基具有不同的作用，能够满足细菌的基本营养需求、区分不同细菌的生长和代谢特点、选择性地培养或抑制一些细菌、加强其中一类细菌的生长，或用于检测细菌对抗生素和化合物的敏感性。
植物组培常用培养基重要特性
06
培养基的应用与发展趋势
植物组培技术的应用
快速繁殖优良品种
01
02
脱毒与提纯复壮
人工种子生产
03
04
细胞工程育种
基因工程育种
05
06
生物反应器应用
新型培养基的开发与研究
基于生物技术的培养基优化 纳米材料在培养基中的应用
无激素培养基研究与应用 3D培养基的研究与开发
未来发展趋势与展望
基于大数据与人工智能的培养基优化研究 植物组培技术将在农业现代化进程中发挥重要作用
避光保存
避免阳光直射，防止培养基变质。
密封保存
保持培养基的密封状态，防止污染和水分散失。
05
培养基的常见问题与解决方案
培养基凝固不良
总结词
培养基凝固不良可能是由于凝固剂添加 量不足或凝固剂类型不匹配造成的。
VS
详细描述
当培养基过稀时，可以尝试增加凝固剂的 用量，例如增加琼脂的用量，以使培养基 达到适当的粘度。如果使用的是热凝固剂 ，可以尝试增加加热时间或提高加热温度 。
优化器官分化
通过调整培养基中的激素配比和营养成分，可以促进根、茎、叶等 器官的分化，提高植物组培的成功率和效率。
诱导开花
通过调整培养基中的激素种类和浓度，可以诱导组培苗开花，为植 物繁殖和品种改良提供帮助。
根据植物种类优化培养基
适应不同植物种类
不同植物种类对培养基中的营养成分和激素配比有不同的需求，需要根据植物种类进行优化，提高组 培效果。
维生素C
可以促进植物的生长和抗逆性。来自培养基的pH值酸性
有利于细胞分裂和根的生长。
中性或稍碱性
有利于组织的生长和发育。
02
培养基及一般操作技术
氯化钠等。
成分定量检测
02
通过滴定、分光光度计等方法测定培养基中成分的含量，如使
用酚酞滴定法测定氢氧化钠含量等。
成分调整
03
根据微生物生长需求和培养基成分的检测结果，调整培养基的
配方和浓度，以满足微生物生长的需要。
05
培养基操作技术的注意事项
防止污染和交叉污染
1 2
严格清洁和消毒工作
在操作前，确保工作区域和使用的工具都经过严 格的清洁和消毒，以减少污染的风险。
培养基及一般操作技术
目录 Contents
• 培养基的种类与特性 • 培养基的制备与保存 • 微生物接种与培养 • 培养基的观察与检测 • 培养基操作技术的注意事项
01
培养基的种类与特
天然培养基是指利用天然 物质制成的培养基，如肉 汤、血清等。
特点
天然培养基的营养成分较 为丰富，能够满足大部分 微生物的生长需求。
3. 调节pH值至适宜范围。
4. 进行高温灭菌处理。
培养基的灭菌与保存
01
02
03
04
高压蒸汽灭菌
将培养基置于高压蒸汽灭菌锅 中，在121℃下灭菌20-30分
钟。
干热灭菌
将培养基置于烘箱中，在160170℃下加热2小时。
过滤除菌
将培养基通过细菌过滤器，以 除去微生物。
保存方法
灭菌后的培养基应保存在干燥 、阴凉处，避免直接阳光照射 ，并在规定的有效期内使用。
微生物接种数量与密度
接种数量
根据微生物的种类和培养基的营养需求，确定适宜的接种数 量。
接种密度
在液体培养基中，通过调整微生物的浓度来控制接种密度。
微生物培养温度与时间
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常用培养基及基本特性
1、RPMI-1640Medium
RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用
2、Minimum Essential Medium（MEM）
也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12
DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM 以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。
1
6、McCoy’s5A9
McCoy’s5A Medium主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。
7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium(IMDM)
Guilber和Iscove将Dulbecco’Medium改良为Iscove’s Medium，用于培养红细胞和巨噬细胞前体。
此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。
并用硝酸钾取代了硝酸铁。
IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T 细胞和淋巴瘤细胞的生长。
IMDM为营养非常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。
8、M-199Medium
1950年，Morgan成功研制出具有确定化学成分的细胞培养液，即M-199，主要用于鸡胚成纤维细胞培养。
此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。
M-199可用于培养多种种属来源的细胞，并能培养转染的细胞。
4
9、Leibovitz Medium（L-15）
L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养，用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。
此培养液采用磷酸盐缓冲体系，氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。
10、Ham’s F-10培养基：适应小鼠细胞、人类二倍体的培养。
11、Ham’s F-12培养基：可以在加入很少血清的情况下应用，特别适合单细胞培养和克隆化培养，是无血清培养中常用的基础培养液。
12、William’s Medium E：用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。
13、MCDB131培养液：用于培养内皮细胞。
14、Opti-MEM I Reduced Serum Media：用于培养造血细胞。
15、植物血凝素（PHA）：增加细胞转化和DNA合成。
4。