浅议供水管道中排气阀的设置及注意事项

海丰供水工程设计有限公司尚喜权

摘要：排气阀对保障供水管道系统的正常运行，降低动力费用起着极其重要的作用，因此必须首先了解供水管道中气体产生的

原因，对管道的危害；其次要了解排气阀的工作原理，种类

及各种排气阀适用条件，以保证能正确选用和使用排气阀，

排除安全事故隐患，确保供水管道安全平稳运行。

关健词：排气阀工作原理种类安装位臵选型

供水管道中的排气阀，是保证供水管道安全运行的重要设备，一般设在供水管道最高点或闭气的地方，其主要作用为：当管道正常运行时，将积聚在管道内高处的气体，或管道因突然停电.停泵造成负压时，正常排气或进气，使管道运行正常。

一、排气阀的工作原理

当供水管道运行时，管道中的气体一般会聚集在管道的最高处，因此排气阀一般都安装在管道最高处，当供水管道运行时，管内气体进入排气阀阀体内部后，气体会聚集在排气阀阀腔的上部，随着阀内气体的增多，压力上升，当气体压力大于管道压力时，气体会使阀腔内水面下降，此时浮筒会随着水位一起下降，打开排气口；当气体排尽后，水位上升，浮筒也随之上升，此时排气口关闭。当系统中产生负压

时，阀腔中水面下降，排气口打开，由于此时外界大气压力比系统压力大，所以大气通过排气口进入系统，以防止负压的危害。

二、管道内产生气体的原因

1、管道施工完毕通水前，管道内积存的气体。

2、水泵运行时，水泵运转时带入的大量空气。

3、水泵工作时因泵前泵后压力调节变化较大而产生气体。

4、当管道系统因突然停泵形成负压通过排气阀进入的空气。

5、管道因维修停水而进入的空气。

三、管道存气的危害

1、在一般情况下，水中约含2VOL%的溶解空气，在输水过程中，这些空气由水中不断地释放出来，聚集在管线的高点处，形成空气袋，使输水变得困难，系统的输水能力可因此下降约5-15%，由于供水管道中存在气体，严重时会形成气阻，使管道过流断面减小，使过水量减小，另外由于过流断面减少，增加水头损失，水泵能耗将增加0.11～0.13，使管道运行费用增大。

2、当管道中存在气体时，气体流速很快，一般为同样压力下水体流速的30倍，这样将会使水表计量发生偏差，导致供用水量的不平衡。

3、供水管道中的气体是引发管道振动和水锤的关键因素。

4、供水管道内壁交替接触空气和水，金属表面腐蚀加剧，并使水质恶化。

5、当管中水流发生波动时，隆起的部位形成的气囊，由于压力释放的能量与流速成正比，气体压缩后所产生的压强，要比水被压缩后所产生的压强大几十倍甚至几百倍，极易产生爆管。

四、排气阀的种类

随着科技的发展，目前市场上的排气阀功能也越来越多，但按功能可分为微量排气阀、高速排气吸气阀和复合式排气阀三种。

（1）微量排气阀适用范围主要是排除给水管道中释放出来的少量空气，一般用于管径为DN20、DN25的管道上。

（2）高速排气吸气阀主要用于供水管道空管冲水时高速排气和管网排空时发生破坏真空时的调整吸气。

（3）复合式高速进排气阀（双孔排气阀）为多功能排气阀，是微量排气阀和高速排气吸气阀的组合，主要具备三个功能，即微量排气、高速排气和高速吸气。它既能自动排除供水管道中正常运行中产生的少量气体，又可特殊情况下实现高速排气及快速进气的排气阀，

五、排气阀安装位臵的选择

排气阀设计中应注意以下问题:

1、排气阀位臵的选择

确定合适的安装点是保证整个供水管道系统安全运行的基础。排气阀的安装位臵直接影响着排气效果和管道的运行状态，我们设计人员在设计时，往往只局限于在局部最高点设臵，但在实际应用中排气阀的安装位臵有多种，只有综合考虑整个管路的各种情况，因地制宜，才能使排气效果达到最佳。

（1）供水管道的局部最高点必须设臵；

供水管道因地势变化需以一定坡度或遇障碍敷设时，在局部高点一般会积聚较多气体，此处位臵为供水管道最主要、最常见的安装位臵。

（2）在下降坡度变大点

供水管道沿下降坡度敷设时，在下降坡度突然变大处，需设臵。

（3）在上升坡度变小点

供水管道沿着上升坡度敷设中，坡度突然变小处，需安装排气阀。

（4）长距离无折点上升或下降管段可每500～1000米设一个排气阀；

(5)长距离水平管线可每隔500～1000米安装一个排气阀。

2、选择正确规格的排气阀，排气量必须适当。若排气量小，停水后再恢复原有供水能力需较长时间，若排气量大将很快就能恢复原有供水能力。

3、最高点两侧有不同坡度时 ,按条件最不利的坡度确定。

4、排气阀下面应安装一个同一口径的阀门,一般为闸阀。

5、排气阀口径与管线直径之比一般为1：8或1:12。

6、排气阀必须垂直安装。

六、排气阀的选型

在供水工程设计中，我们应根据现场实际情况进行选用排气阀，具体选用标准如下：

（1）对局部最高点需安装复合式排气阀

（2）对长距离水平管段、长距离无折点下降管段宜安装复合式排气阀或微量排气阀

（3）对于下降坡度变大点，上升坡度变小点宜选用微量排气阀

（4）当需要真空保护时，需选用复合式排气阀

(5)对于长距离无折点上升管段可选用高速排吸气阀或复合式排气阀。

五、几点体会

1、排气阀由于设在室外，极易发生盗水现象，在实际中

可将井室做成防盗井室，并加强巡护，切实保证排气阀的安全运行。

2、管理部门应及时对排气阀维护、保养，以保证排气阀的正常使用。

3、排气阀的设臵按规范要求和实际情况科学合理布臵，对于长距离供水管道，最理想的排气方法是在较短的距离内安装数量较多，口径较小的排气阀，而不是安装口径大，数量少、间隔长的排气阀。

5、多数情况下，可利用复合排气阀的多功能性，安装复合排气阀，减小因气体而发生的管道事故。

4、严格按施工图设计和规范安装排气阀，不得随意变更安装位臵和排气阀规格。

结束语

排气阀作为供水管道的设施，虽投资占工程总造价比例较小，但它对于管道正常运行、降低运行费用起着极其重要的作用，本文通过分析供水管道内气体产生的原因、危害和排气阀的工作原理、种类、选用及适用条件的了解，使大家在今后的各个新建和改造工程中，正确选用和使用排气阀，排除供水管道安全事故隐患，保证供水管道平稳运行。

载体构建流程

载体构建SOP流程: GenBank查询目的基因序列→根据ORF序列利用引物设计软件设计引物→表达目的基因的组织或细胞总RNA提取→RT-PCR获取目的基因→酶切目的基因和载体→分别纯化酶切的目的基因和载体并建立连接反应→转化→初步筛选阳性克隆→阳性克隆测序→测序正确的质粒保种并重提质粒 I.获取目的基因/序列片段一.获取序列信息通过GENBANK数据和生物信息的方法设计目的基因或目的片段引物（shRNA、miRNA）。 PCR引物的设计原则： ①引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。 ②产物不能形成二级结构。 ③引物长度一般在15~30碱基之间。 ④G+C含量在40%~60%之间。 ⑤碱基要随机分布。 ⑥引物自身不能有连续4个碱基的互补。 ⑦引物之间不能有连续4个碱基的互补。 ⑧引物5′端可以修饰。 ⑨引物3′端不可修饰。

⑩避免在引物的3’端使用碱基A。在实际设计引物中由于ORF两末端序列本身的限制，不能完全按照上述理想的设计原则，但也切记引物不能过长或过短。过长的引物不容易打开其二级结构，与模板结合缓慢，也容易形成引物二聚体，通常不超过35bp(不包括酶切位点和保护碱基)。过短的引物特异性差，扩出其它不相关片段，最终很难得到目的片段，通常不短于18bp(不包括酶切位点和保护碱基)。要将目的基因定向克隆至相应载体，需要在上下游引物两端设计不同的酶切位点，由于酶切位点位于线性末端时酶对其识别切割能力大大降低，需依据NEB目录添加相应保护碱基，酶切时可相应增加时间。二.制备模板 1.分离高质量RNA：成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。现在实验室通常使用Trizol试剂法提取总RNA，可以从多种组织和细胞中提取高质量的非降解RNA。Trizol试剂法可以从最少100个细胞或1mg组织中提取RNA。在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链合成反应中，在缓冲液和还原剂（如DTT）存在的条件下加入，因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可

成立分公司的风险分析资料

关于成立分公司的风险分析表一：分公司风险与防控制度一览表分公司制是适应现代企业发展状态的一种企业组织形式。分公司在资金、人事、经营等方面受总公司的管辖，性质是下属分支机构。分公司具有自己的事务场所和办事机构，具有总公司拨付的营运资金和授予管理的财产，具有与总公司相对独立的管理机构和负责人员，具备相对独立开展业务活动的条件和能力，具

有一定的经营自主权。但分公司没有独立财产、不能越权对外从事民事活动，也不能独立承担法律责任。本报告针对成立分公司可能存在的风险进行分析，为公司治理提供参考。一、分公司可能存在的风险（一）公司涉诉风险分公司无法人资格，缺乏法人的独立性，故分公司没有注册资本，其资金来源均由总公司直接拨付，在融资担保方面需凭总公司信誉得为之。根据现行法律，依法设立的分公司，领取了营业执照并具有相应授权，就具备了诉讼主体资格，是诉讼中的适格主体。涉诉中（一般成为债务人的情形），分公司可成为单独被告。但一般原告通常会将分公司与总公司列为共同被告，以期获得债权最大程度的实现。因分公司没有独立的财产，实际上是由总公司承担全部责任。但在具体责任的分配机制上，通常是分公司的财产优先偿付，其财产不足清偿时，由总公司以自身财产承担补充责任。如此，总公司涉诉的风险有所增加。（二）内部控制风险分公司内部控制风险主要体现在分公司人为错误、管理越权或者财务舞弊等三个方面。这类风险的出现是因为，分公司一般设立了相对独立的管理机构，管理层级的增加也会导致管理成本的增加。 1、人为错误。即分公司员工的过失（主观上是不愿意造成损失的），造成公司财产、商誉的损失或者不良影响等。分公司的主要人为错误可能在于，在洽谈合同的过程中，业务员对应当注意事项的疏忽，或者约定不明。 2、管理越权。分公司是在总公司的授权范围内从事经营活动的，但也会出现分公司超出管理权限的行为。管理越权可能是一种过失，也可能是一种故意，容易导致表见代理或者无权代理的情况。若为表见代理，则分公司行为所产生的后果，将由总公司来承担，但总公司可在内部对直接责任人进行追责。若为无权代理，总公司享有追认权，逾期不行使，权利消灭；而相对方则享有撤销权，有增加管理成本之嫌。 3、财务舞弊。分公司一般也有自己的财务管理机构，虽然对外不具备独立名义，但具有一定的自主空间。舞弊行为是主观上的故意行为，损害分公司的财务管理制度，影响分公司发展，降低公司商誉。情节严重触犯《刑法》者，将受

载体构建的基本步骤

载体构建一．原理依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。二．操作步骤 1．摇菌取装有液体培养基的3ml试管两支（依情况而定），每管加40-100μl菌种，过夜摇。2．提质粒依照提质粒试剂盒中的说明书操作（根据情况最后一步洗脱时可以多洗1-2次）。 3．酶切按下表加入试剂。反应所需试剂体积（单位：ul）质粒10 所需内切酶反应缓冲液 2 所需限制性内切核酸酶 1 H2O 7 将加好的EP管置于37℃保温1-2h。（依照提酶切的具体步骤操作；为了达到最佳酶切的效果，最好根据所选用的酶确定所需要的反应温度） 4．电泳检测将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测酶切是否成功。 5．连接如果电泳检测酶切成功的话，则仔细将所需的片段切割下来，将胶体回收（依照胶回收试剂盒说明书操作）；之后将回收的片段和载体连接，连接体系如下：双蒸水5μL 10×T4 DNA连接缓冲液1μL 载体2μL 酶切后的目的基因1μL T4DNA连接酶1μL 总体积10μL 置于温箱，12-16℃，保温8-16h 6．转化依照转化具体操作步骤做感受态，将上述连接产物进行转化实验，涂板培养，37℃，12-16h。 7．单克隆检测（1）挑单克隆

先将AMP从冰箱中取出，待融化后，在3ml装有LB液体培养基的试管中加入3μL的AMP，用枪头混匀；取1.5 mlEP管5支（依情况可以多挑几管），给每支管中加500μL上述培养液，然后用接种环（或黄枪头）挑单克隆，挑完后用枪吹打；之后，将挑好的菌摇4-5小时，至混浊即可。（2）单克隆检测以每管摇好的菌液为模板，以原有的引物进行PCR，然后将PCR产物跑电泳，观察电泳图像中那几管的条带正确，将正确条带相对应管的菌液再抽取100μL，加到3ml（有LB液体培养液，AMP+）试管中，过夜摇；第二天重摇，将摇好的菌取1ml于1.5mlEP管中送测序，并保种。注：①挑单克隆时，一定要挑单一圆润的菌落，有卫星斑的不挑。 ②别忘记往培养基中加AMP。 ③用接种环挑菌后，要在酒精灯上反复灼烧，然后再进行下一次挑菌。三．注意事项 1．连接产物可短时间在-20℃保存，使用时可以取出进行后续实验； 2．在细胞转化时，冰浴和热激要严格控制好时间； 3．连接反应是DNA重组过程中的关键步骤，其成败的重要参数之一就是温度，因此要控制好连接温度。 4．进行黏末端连接时，会产生一定数量的载体自身环化分子，导致转化菌中过高的假阳性克隆背景。针对这一问题，常采用牛小肠碱性磷酸酶（CIP）去掉载体的5’-磷酸以抑制DNA 片段的自身环化。参考： 1.刘进元，常智杰，赵广荣,等.分子生物学实验指导[M].北京:清华大学出版社，2002 2.周俊宜.分子生物学基本技能和策略[M].北京：科学出版社，2003：117-120 3.李海英，杨峰山，邵淑丽,等.现代分子生物学与基因工程[M].北京:化学工业出版社，2008:138-142 4.朱旭芬.基因工程实验指导[M].北京：高等教育出版社，2006:134-139

媒介经营与管理-知识重点-严三九著。

绪论媒介经营管理的定义：广义：指运用媒介产业的人力、物力、财力等资源，通过领导、计划、组织、控制等行为，使产业资源（包括有形资源和无形资源）得到合理配置，发挥最大效用。狭义：指出售媒介的广告版面时段的有关经济活动和管理运作。宏观：国家、社会、对媒介的制度、体制的规定和要求。微观：指具体的媒介单位对自身的行政、生产、营销、财务、人事、技术、安全管理等的规定和要求。特殊性：1.媒介必须把追求社会效益放在首位。 2.媒介管理中的一个极其重要的组成部分，即信息资源管理。 3.媒介组织的内部机构有着特殊的设置和构架。意义*****：1.有利于媒介对资源进行合理的配置和协调，从而协同发展。 2.有利于媒介实现社会效益与经济效益的协调和“双赢”。 3.有利于媒介提高自身品质，从而应对时代的挑战和激烈的市场竞争。媒介的生存环境：***** 1.国外媒介产品将会更多地进入中国。 2.中国媒介的工作只能和管理体制将发生变化，会越来越向国际惯例，国际通行规则靠拢。第一章媒介组织结构组织形式***** 1.直线制（单线制） 2.职能制（复线制） 3.直线—职能制（生产区域制）

4.事业部式 5.矩阵制 6.集团控股制媒介组织的定义：各级各类的报社、广播电台、电视台等媒体的内部治理结构和各级管理组织结构。是社会中的一个特殊的组织，既不是纯粹的市场竞争的企业，又不是彻底的国家机关、完全的公益机构。它是专门从事大众传播活动以满足社会需要的社会单位或群体。主要特征： 1.具备管理组织的一般特性 2.生产特殊的文化产品 3.组织成员从事大众传播活动 4.以实现社会与经济功能的统一为目的 5.趋于垂直或水平整合化媒介组织包括：管理主体，客体，环境，目的。媒介组织结构设计的8个原则： 1.任务目标 2.分工协作 3.统一指挥 4.管理幅度 5.责权对等 6.集权分权 7.执行部门与监督部门分设 8.协调有效媒介组织结构随着社会环境、科学技术的变化下，作出的相应调整与变化体现在： 1.结构组织趋于简化，制作与播出分离。

新闻媒体工作者的必懂知识

新闻媒体工作者的必懂知识新闻敏感：新闻传播者经过一定的新闻实践的积累和训练，已经自然养成的一种思维的待激状态。其核心是一种鉴别能力。新闻线索：是指新闻事实所表现出来的某些迹象或信号，它不是新闻的全部，只是新闻事实的个别部分或片段在社会某一领域或某些阶段的一定程度的显现获取的途径：把握社会主流舆论导向；开辟社会信息渠道；新闻的预测和预见能力；新闻多发区的经常性联系；新闻策划新闻价值：首先在于它的使用价值，其次是交换价值。它的实现是个动态过程 a显著性（公众人物、名人新闻） b.重要性（利益波及面大、社会普遍关心的，重大影响的） c.接近性（同龄群体、趋同效应） d.趣味性（人情味、感人、产生激情、同情或怜惜） e.时新性（未知范围越大，价值越大——独家新闻，抢新闻）新闻选择：是指在特定的传播环境下，根据一定的价值取向和原则标准，对新闻事实、新闻作品通过主体的衡量与评判，所做出的取舍与认定。 a.用事实说话； b.信息量增大

c.提高新闻价值新闻策划：确定新闻选题；明确报道思路；寻找和积累新闻事实；落实实施方案；——超越现有的报道的思想和艺术水平；更加接近受众的心理需求；最充分地发掘事实的新闻价值潜力；具有最好的可操作性新闻选题：正面、负面、新闻要求：客观、真实、公正、全面、及时新闻现象：运动着的客观事物中，能构成新闻事实的种种现象。它是新近运动状态给人类带来的一种信息新闻活动：利用新闻现象为生活、生产服务的一种有意识有目的的活动，通过媒介和渠道，对新近发生的事实进行信息交流和况沟通的一种社会性的传播活动新闻事业产生标志：a.专业化的传播机构和专门化的从业人员，是种固定的职业b.大范围的具有新闻需求的受众群，即新闻具有广阔的市场c.非手工操作的传播工具d.规模较大和持续不断的新闻传播活动新闻的基本特点1.真实性2.及时性3.新奇性4.公开性新闻的定义：新闻是新近发生事实的报道，新闻是新近事实变动的信息大众传媒与经济现代经济对大众传媒的决定性影响 a.经济体制制约大众传媒功能的发挥 b.决定大众传媒的运作

成立集团公司的条件及注意事项

成立集团公司的条件及注意事项企业集团登记管理暂行规定一：企业集团是指以资本为主要联结纽带的母子公司为主体，以集团章程为共同行为规范的母公司、子公司、参股公司及其他成员企业或机构共同组成的具有一定规模的企业法人联合体。企业集团不具有企业法人资格。二：企业集团由母公司、子公司、参股公司以及其他成员单位组建而成。事业单位法人、社会团体法人也可以成为企业集团成员。母公司应当是依法登记注册，取得企业法人资格的控股企业。子公司应当是母公司对其拥有全部股权或者控股权的企业法人；企业集团的其他成员应当是母公司对其参股或者与母子公司形成生产经营、协作联系的其他企业法人、事业单位法人或者社会团体法人。三：企业集团应当具备下列条件：（一）企业集团的母公司注册资本在5000万元人民币以上，并至少拥有5家子公司；（二）母公司和其子公司的注册资本总和在1亿元人民币以上；（三）集团成员单位均具有法人资格。当然，鉴于各地规定不同，此条件有所变动。目前所知集团最低标准是：（一）企业集团的母公司实收资本在1000万元人民币以上，并至少拥有2家子公司；（二）母公司和其子公司的注册资本总和在2000万元人民币以上；（三）集团成员单位均具有法人资格。从产品的研发、制造乃至销售的过程中，由于企业生产规模大、人数众多、范围广、产品工序复杂，为便于管理，按照产品形成的过程特点分成多个不同的部门来管理，这些部

门可能大多数没有法人资格，隶属于一个企业，行政上归一个企业管辖。这个企业就是集团公司，其构架上和一般的公司差别不大，与一般公司区别主要在于人数的多寡。好比一个家，孩子多了，结婚后自然分家，但还是一个家族。有的企业联合体也称集团公司，集团内的成员企业结盟是为了经营的需要，可以增加企业的竞争力。成员均为法人，之间独自核算。集团公司长官由成员中规模大的企业领导兼任，不具备对其他企业的管理决策权。注册集团有限公司需提交的资料 1、集团公司董事长签署的设立登记申请书； 2、全体股东指定代表或者共同委托代理人的证明； 3、公司章程； 4、集团章程； 5、具有法定资格的验资机构出具的验资证明或国有资产管理部门出具的《国有资产产权登记表》； 6、股东的法人资格证明（企业法人需加盖发证机关印章）或者自然人身份证明； 7、载明公司董事、监事、经理的姓名、住所的文件以及有关委派、选举或者聘用的证明； 8、公司法定代表人任职文件和身份证明； 9、企业名称预行核准通知书； 10、公司住所证明，也就是租赁合同以及产权证复印件； 11、成员企业加入集团的协议。

新成立公司注意事项

新成立公司的会计人员第一件事做什么？新成立的公司，初始化状态，会计人员首先要做的是考虑财务的“顶层设计”，即建立和完善各项有关于财务的规章制度，确定公司即将使用的会计准则、制度，确定会计核算方法和涉及到的税种类型，准备建立账簿，新科教育进行梳理。新公司应该建立哪些账簿类型？新企业必须遵照《中华人民共和国会计法》以及统一的国家会计制度规定依法设置会计账簿。通常来说，设立的账簿类型主要有总账、明细账、日记账、备查账等。总账用于分类登记企业全部经济业务，明细账用于登记某一类经济业务，较为细致。日记账包括银行日记账和现金日记账。备查账是辅助性质的账簿，企业可根据需要选择性设立，不做强制规定。建账的大致流程是什么？新企业要根据行业要求和未来可能发生的会计业务情况，选取符合需要的账簿，再根据日常业务进行会计登记和处理。主要流程为（1）根据企业性质，选择企业适用的会计准则；（2）依据企业的业务量及账务处理程序，准备账簿；（3）合理选择会计科目，主要看行业和企业自身管理的需要；（4）财务软件系统信息初始化，建立账套。新公司的第一张记账凭证是什么？一般公司刚成立，一般是投资人或者股东出了钱，存进银行账户、购买存货或者添置固定资产、无形资产等等。因此第一张记账凭证大致为如下式样：“借：银行存款/固定资产/存货/等，贷：实收资本”；如果不是以股东名义注明投资款的形式打进基本户的，则借：固定资产/存货/XX费用等，贷：其他应付款——某某人。哪些税种到地税申报？哪些到国税？

增值税、消费税、车辆购置税等税种是到国税处缴纳的。其中增值税又分为一般纳税人和小规模纳税人。资源税、城建税、车船使用税、城镇土地使用税是在地税办理的，应向当地主管的税务机关申报。其中，企业所得税和个人所得税可能在国税和地税都有涉及，应根据相应部分区分缴纳。注册资金和注册资本一样吗？不一样。注册资金是企业法人的注册资金，除国家另有规定的外，应与实有资金相一致，注册资金包括流动资金和固定资金，它反映的主要是企业的资产规模。注册资本是指由企业投资人认缴的，并向企业法人登记机关注册的出资总额。所有的股东投入的资本不得随意抽回，注册资金却随着实有资金的数量变化发生增减变化。 7、每个月会计核算的流程是什么？会计核算，也叫会计循环，从初始的凭证到最后的报表全过程，并且周期性循环。原始凭证到记账凭证，到登记明细账，汇总后记总账，再从总账到报表的编制。每个月的业务结束后，还要去税务机关自行报税、纳税。8、在法定会计账册之外还可以设立其他账册吗？不可以，私设账外账是一种违法违规行为。会计人员应该严格遵守职业道德，以诚实守信为本，不得私自设立账外账。 9、固定资产可以使用哪些计提折旧方法？主要的方法有年限平均法、工作量法、双倍余额递减法和年数总和法。需要注意的是，固定资产的折旧年限和方法一旦确定下来，不得随意改变。如果确实需要变更，需要企业提出申请，在变更年度前报主管财政机关批准。 10、为什么初创企业要特别注意财务监控？

成立新公司注意事项范文

成立新公司注意事项范文新创办公司的管理制度以简单适用为原则。创业期企业主要是抓好人和财两个方面。人事管理方面，制定考勤制度、奖惩条例、薪资方案等制度。财务方面，制定报销制度、现金流量、制定预算、核算和控制成本等制度。具体操作中，有以下一些建议： 1、明确企业目标，达成共识。创业者应该将企业的目标清晰化明确化。有了目标，才有方向，才有一个共同的远景，这种共识能够大大减少管理和运作上的摩擦； 2、明确"谁听谁的"和"什么事情谁说了算"，并用书面的正式文件规定下来。组织架构设计中最根本的问题就是决策权限的分配。因此明确每一个核心成员的职责对管理是否畅通非常关键，否则创业者的兄弟意气会让管理陷于混乱； 3、由于创业期规模较小，许多问题都可以直截了当地进行沟通，大家都应遵循开诚布公、实事求是的行为风格，把事情摆到桌面上来讲，不要打肚皮官司； 4、在公司内部形成一个管理团队。定期交换意见，讨论诸如产品研发、竞争对手、内部效率、财务状况等与公司经营策略相关的问题。一般采取三级管理结构，决策层、管理层、一般员工；

5、制定并尽量遵守既定的管理制度。必须强调人人都必须遵守，不能有特权，也不能朝令夕改。当公司发展到一定的程度并初具实力时，就要意识到自身能力上的缺陷，尽可能聘请一些管理方面的专业人才来共图大业。特别提醒 1、注意财务监控。研究表明，许多初创企业在一年内就倒闭的直接原因是因为财务管理不善，应收账款中的坏账太多，频频发生流动资金短缺问题。初创企业的财务部门常常是一个会计、一个出纳，完全不足以应付如此众多的挑战。创业者要特别注重财务监控问题，不能简单地把财务管理视作"记账"，要由有专业技能的专人负责，并且有相应的激励机制和评估体系。 2、避免社会关系对工作关系的干扰。创业期企业里的员工多半有亲属关系或地缘、学缘关系，相互之间有着千丝万缕的社会关系，这些关系在一定程度上影响着企业内正

表达载体的构建方法及步骤

表达载体的构建方法及步骤一、载体的选择及如何阅读质粒图谱目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。一个合格质粒的组成要素：（1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。（2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段（4）P/E 启动子/增强子（5）Terms 终止信号（6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。载体选择主要考虑下述3点：【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。【2】.载体的类型：（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb 选

质粒。（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求：（1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；（2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。（3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；（4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。（5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA 进行切割，获得线性载体分子，以便于与目的基因片段进行连接。如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）

媒介经营与管理知识梳理

第一章 1.如何理解媒介经营管理的意义答：第一，有利于媒介对资源进行合理的配置和协调，从而协同发展。第二，有利于媒介实现社会效益与经济效益的协调和“双赢”。第三，有利于媒介提高自身品质，从而应对时代的挑战和激烈的市场竞争。 2.如何理解媒介经营管理的生存环境答：第一，全球化与媒介业的竞争。第二，区域化与媒介业的分众。第三，数字化与媒介业的“换血”。第四，娱乐化与媒介业的“洗脑”。 3.如何理解媒介经营管理的原则答：第一，坚持党性，把持方向。第二，整体把握，促进协调。第三，发扬民主，贯彻法制。第四，依循程序，谋求发展。 4.为什么要学习媒介经营管理答：第一，社会主义市场经济的激烈竞争、全球传媒产业的形势发展及人才紧缺的实际需要。第二，传媒业谋求生存的必然需要。第三，媒介单位竞争越来越激烈，紧迫感，危机感加剧。第四，全媒体时代的媒介业必须尽快提高现代化的经营管理水平，以及对信息传播全球化的挑战。第二章 1.媒介组织及其主要特征是什么答：媒介组织是社会中一个特殊的组织，既不是纯粹的市场竞争的企业，又不是彻底的国家机关，完全的公益机构。它是专门从事大众传播活动以满足社会需要的社会单位或群体。它有以下特征：第一，具备管理组织的一般特征。第二，生产特殊的文化产品。第三，组织成

员从事大众传播活动。第四，以实现社会与经济功能的统一为目的。第五，趋于垂直或水平整合化。 2.媒介组织结构设计的原则有哪些答：1.任务目标原则。2.分工协作原则。3.统一指挥原则。4.管理幅度原则。5.责权对等原则。6.集权分权原则。7.执行部门与监督部门分设原则。8.协调有效原则。 3.媒介组织结构设计的内容有哪些答：第一，确定组织设计的基本方针和原则。第二，设计组织结构的框架。第三，设计管理幅度和管理层次。第四，设计管理规范。第五，设计职能分析和职能。6.设计各类运行制度。第七，人员配备和训练管理。 4.如何理解媒介组织结构的变革趋势答：第一，组织结构趋于简化，制作与播出分离。第二，组织结构趋于多样化，细分化程度提高。第三，组织结构趋于模糊化，部门界限被打破。第四，组织结构趋于扁平化，管理跨度增加。第五，组织集团化，资源整合化。 5.马克斯~韦伯组织理论在媒介中的组织形式有哪些答：1.直线制 2.职能制 3.直线—职能制 4.事业部式 5.矩阵制 6.集团控股制 7.区域式第三章 1.如何理解媒介策划的内涵答：媒介策划属于媒介外部的、宏观层面的决策范畴里的行为，主要目的是明确媒介的目标定位和媒介本身的风格。在传媒产业快速发展、传媒产业竞争日益激烈的今天，媒介策划已经成为媒介经营管理事业中的必经环节，在媒介经营管理中有极其重要的作用，甚至涉及一

注册分公司的注意事项

注册分公司的注意事项 1、分公司应具备什么条件? 设立分公司应具备下列条件： (1)名称应当符合国家有关规定：分公司名称必须冠以公司名称全称; (2)经营范围必须符合国家有关规定：分公司经营范围不得超出公司的经营范围; (3)有固定的生产经营场所和必要的生产经营条件：分公司不得与公司在同一经营场所经营。 2、分公司注册资金从哪里来? 分公司由母公司申请设立，不涉及注入注册资本这一环节。分公司的经营资金由总公司供给，并以总公司的资产对分公司的债务承担法律责任。 3、分公司的名称需要预先核准吗? 企业设立的分公司的名称不需预先核准。分公司没有法人资格，不能独立承担民事责任，其名称应当冠以其所从属企业的名称，缀以“分公司”、“分厂”、“分店”等字词，并标明该分支机构的行业和所在地行政区划名称或者地名，但其行业与其所从属的企业一致的，可以从略。 4、分公司的经营范围怎么确定? 随着连锁经济的快速发展，开设分公司的企业越来越多。注册分公司时需确定分公司的经营范围，并报请工商行政管理局审批。 (1)依据《中华人民共和国公司法》及公司注册登记相关法律的规定，分公司经营范围不能超出总公司经营范围。 (2)分公司经营范围涉及到特殊行业、产品或服务，需办理行业审批许可证。 (3)分公司经营范围随总公司经营范围而变化。若总公司增加了新的经营范围，分公司也可以增加经营范围，需办理分公司变更手续。 5、分公司注册地址在哪里? 分公司注册地址必须为办公楼，不得使用住宅或商住楼进行注册。如何注册分公司一、注册分公司的一般流程 (一)名称核定 1、开办公司的全体股东或股份有限公司的全体发起人签署的分公司名称预先核准申请书; 2、经工商行政管理局加盖公章的公司《企业法人营业执照执照》复印件); 3、分公司负责人照片两张、非沪籍的需暂住证、计生证;

总公司下设分公司财务管理办法

分公司财务管理办法 1.目的为规范分公司的财务管理、明确各管理者在费用控制方面的职责、加强费用报销、个人借款的管理；杜绝不合理之经营管理成本的支出，加强对各项费用的有效控制。 2.范围适用于分公司全部经营管理活动及分公司全体职员。 3.职责 3.1公司执行董事、法定代表人兼经理负责批准由公司董事会审核之各项经营管理费用的开支并对最终结果负责； 3.2监事对公司所有经营管理活动中的各项费用开支拥有最终审批权； 3.3分公司经理对分公司范围内的所有经营活动中的各项费用支出的最终结果负责，并对公司财务制度规定范围内的支出有审批权； 3.4分公司分管各业务主管对所辖部门的各项费用开支拥有审核权并对其负责；

3.5分公司财务管理部负责依据本制度和财务管理规范要求，审核、监督、检查、处理分公司所有人员的经营管理费用开支行为，并根据公司财务管理部以及分公司经营管理之现状修改或解释本制度，分公司财务管理部对分公司各项费用支出票据的合理性、合法性负全责； 3.6分公司出纳对各项费用支出与所附的原始凭证的数量与金额的一致性负全责； 3.7分公司人力资源部对各项福利、补贴费用的合理性负全责； 3.8分公司经理对分公司所有经营管理活动各项费用支出的必要性和真实性负责；分公司经理签署的各项费用将直接进入到分公司的年度经营支出中。 3.9分公司全体职员必须执行分公司的财务管理制度的管理流程和审批程序，要求自己在分公司经营管理活动中严格各项费用的开支，不利用其他手段、措施或提供虚假报销凭证借故超越费用开支； 3.10分公司首个项目正式运作前的财务管理工作由分公司负责人或由其指定人具体负责； 3.11分公司首个项目首批人员招聘时，应在相关岗位中招聘一名具备一定财务知识的人员兼任分公司财务管理工作；

媒介知识资料大全

媒介知识资料大全特定媒介工具的选择选择特定媒介工具的第一个步骤，应是决定在每种媒介工具上花多少钱。譬如，现已决定从总广告预算10 0万元中拨出24万元用于杂志广告，但选择什么杂志、每种杂志应刊登几期等则属其次的问题。在美国，企业选择杂志媒介时，常常借助有关各类杂志的研究报告。例如，美国审计调查公司的研究报告提供五家杂志的读者人数及其特性的有关资料；标准评分资料公司所出版的各期报告，则提供有好几百家杂志的成本及其有关资料。对于不同广告文稿的大小、颜色选择、广告位置以及插入广告的数量等，均订有不同的价格。大多数杂志都采用数量折扣办法，依该年度所购买的插入广告份数而有所不同。在美国工商企业里，媒介计划人员一直试图计算某一特定媒介工具接触到每千位目标沟通对象的成本。例如，《新闻周刊》上一个全页四色的广告要58000美元，而《新闻周刊》约有600万读者，那么，广告信息到达每千人的成本约为10美元。同样的广告在《商业周刊》上可能要26000美元，但广告信息仅可到达200万读者，即每千人的广告成本为13美元。媒介计划人员可根据每千人成本将各种杂志予以分级，然后在每千人成本最低的杂志上登广告。但是，这种每千人成本准则，已日益受到攻击。其主要缺点在于只用杂志的总读者人数为计算成本的基础，而不是以读者中的可能购买者人数来计算。譬如说，某杂志有100万读者，虽然有100万次的机会可让人们看到该广告，但其真正的展露价值的高低，还要视读者的个性与目标顾客群的个性的相近程度而定。譬如对婴儿润肤霜所作的广告，如果所有的读者都是年轻的母亲，则其展露价值可能就是100万美元；如果读者都是老年人，则其展露价值可能为零。所以，广告的展露价值依读者构成情况及读者人数的不同而不同。每千人成本准则的第二个缺点是展露的概念不明确。每千人成本准则所采用的展露概念，只是潜在的展露，而不是实际的展露。当某一广告刊登在《时代》杂志上时，便可说有一次展露机会发生在《时代》杂志的所有读者上，但事实上，《时代》杂志读者中仅有一部分人注意到该广告，较少的人了解广告信息的内容，更少的人才留下正确的印象。所以，最全部的计算单位是目标读者的人数，而不是所有读者的总人数。这些目标读者不仅看到广告，而且被该广告所刺激。可是，这种单位的人数根本不可能估计出来。每千人成本准则的第三个缺点是它忽略了存在于不同杂志之间的编辑印象与影响力等质上的差别。即使两种杂志拥有同等数量的目标购买者，但在甲杂志上做广告可能会比在乙杂志上做广告更令人信服，更有名贵感，或在其他方面有更高的质量，这很可能就是由于甲杂志的编辑质量及印刷质量比乙杂志好。每千人成本准则的第四个缺点是它基本上只使用平均法，而不使用边际法。如果某一杂志，不管在上面登多少次广告，其每千人成本都维持最低水平，而不受竞相刊登的影响，则所有的杂志广告预算都应花在该杂志上。然而实际上，当在同一杂志上刊登的广告逐渐增加时，该杂志很快就会失去其在每千人成本上所占的优势。这是由于连续几期在同一杂志上刊登同一广告，读者基本上还是原有的同一批人。这与用新杂志把广告展露给新读者所造成的影响相比，显然会有收益递减问题。主要媒介种类的选择当送达率、频率和影响目标确定之后，企业媒介计划人员还必须评核各种主要媒介到达特定目标沟通对象的能力，以便决定采用何种媒介。主要媒介有报纸、杂志、直接邮寄、广播、户外广告等。这些主要媒介

设立分公司流程

分公司的法定设立程序一．核名地点：市工商行政管理局行政服务中心材料：1.企业名称预先核准申请书 2.授权书 3.商标注册证复印件办理期限：5天二．办理工商营业执照地点：市工商行政管理局材料：1. 分公司设立登记申请书 2．总公司章程复印件 3．总公司营业执照及副本复印件 4．分公司营业场所使用证明租赁合同、产权证复印件 5．总公司出具的分公司负责人的任职文件及身份证明复印件办理期限：10天（外地）程序：

三．刻章地点：公安局材料：1.分公司营业执照及复印件 2.工商局开具的公司设立通知书四．办理组织机构代码证地点：质量技术监督管理局材料：1. 分公司营业执照及复印件 2. 工商局开具的公司设立通知书 3．法人身份复印件和代理人身份复印件 4．填一份申请表格办理期限：1天四．办理银行开户申请书地点：总公司账户的开户银行材料：1. 分公司营业执照及复印件 2. 组织机构代码证 3. 工商局开具的公司设立通知书五．到国、地税局办理税务登记证（两证）地点：国税局、地税局材料：1. 分公司营业执照及复印件 2. 组织机构代码证 3. 工商局开具的公司设立通知书 4.总公司和分公司的公章、财务章、法人章 5.银行开户申请书 6. 分公司营业场所使用证明租赁合同、产权证复印件 7.总公司的税务登记证 8.负责人和财务负责人的身份证明及复印件办理期限：30天五．银行正式开户地点：总公司开户银行材料：1.国税登记证 2.地税登记证 3.分公司营业执照及复印件注意事项： 1.所有的复印件均需加盖公司公章并且在办理时出具原件以供核对。 2.被锁入信用信息系统的“警示信息系统”的人员，不得担任分公司的负责人。

西安注册分公司流程

西安注册分公司流程想在西安做注册分公司来提升公司知名度，如何走流程的好呢?来看看下面为你带来的西安注册分公司流程吧，这其中也许就有你需要的。设立分公司的具体流程： (1)公司法定代表人签署的《分公司设立登记申请书》(公司加盖公章)。 (2)公司签署的《指定代表或者共同委托代理人的证明》(公司加盖公章)及指定代表或委托代理人的身份证复印件(本人签字)。应标明具体委托事项、被委托人的权限、委托期限。 (3)公司章程(由公司法定代表人签署)。 (4)公司营业执照副本的复印件。 (5)分公司营业场所使用证明。自有房产提交产权证复印件;租赁房屋提交租赁协议复印件以及出租方的房产证复印件;无偿使用的，提交产权人允许使用的证明原件及产权人的产权证复印件;未取得房产证的，提交房地产管理部门的证明或者购房合同及房屋销售许可证复印件;出租方为宾馆、饭店的，提交宾馆、饭店的营业执照复印件。 (6)公司出具的分公司负责人的任职文件及身份证明复印件。 (7)分公司申请登记的经营范围中有法律、行政法规和国务院决定规定必须在登记前报经批准的项目，提交有关的批准文件或者许可

证书复印件或许可证明;分公司的经营范围不得超出公司的经营范围。 (8)法律、行政法规和国务院决定规定设立分公司必须报经批准的，提交有关的批准文件或者许可证书复印件。设立分公司的一些注意事项法律对企业设立分支机构的规定可分为两种情况，一种是内资企业设立分支，一种是外资企业设立分支。内资企业如需要在外地设立分支机构，只能设立分公司。该企业需要到当地工商部门登记注册，设立分公司需要提交以下材料： 1、公司法定代表人签署的《分公司设立登记申请书》(公司加盖公章); 2、公司签署的《指定代表或者共同委托代理人的证明》(公司加盖公章)及指定代表或委托代理人的身份证复印件(本人签字); 3、公司章程(由公司法定代表人签署); 4、公司营业执照副本的复印件; 5、分公司营业场所使用证明; 6、公司出具的分公司负责人的任职文件及身份证明复印件; 7、分公司申请登记的经营范围中有法律、行政法规和国务院决定规定必须在登记前报经批准的项目，提交有关的批准文件或者许可证书复印件或许可证明。分公司的经营范围不得超出公司的经营范围; 8、法律、行政法规和国务院决定规定设立分公司必须报经批准

载体构建的基本步骤

载体构建的基本步骤 Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT

载体构建一、原理依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。二、操作步骤 1、摇菌（制作感受态细胞备用）取装有液体培养基的3ml试管两支（依情况而定），每管加40-100μl菌种，过夜摇。 2、提质粒（也就是载体）依照提质粒试剂盒中的说明书操作（根据情况最后一步洗脱时可以多洗1-2次）。 3、酶切（双酶切产生粘性末端）反应所需试剂体积（单位：ul）质粒 10 所需内切酶反应缓冲液 2 所需限制性内切核酸酶 1 H2O 7 将加好的EP管置于37℃保温1-2h。（依照提酶切的具体步骤操作；为了达到最佳酶切的效果，最好根据所选用的酶确定所需要的反应温度） 4、电泳检测将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测酶切是否成功。回收胶：琼脂糖与缓冲液一比一制胶，经过切胶回收目的产物，也有目的产物纯化的功能；检测胶：琼脂糖与缓冲液一比二制胶，为了检测目的条带与预期是否相符。

切胶回收与产物纯化是差不多的过程，所达到的目的是一样的：切胶回收也是一种纯化过程，它能去除非目的片段，然后用回收试剂盒进行纯化，能将很不纯的DNA溶液纯化；产物纯化是将较纯的DNA溶液进一步除去多余的杂质，用纯化试剂盒，你会发现纯化试剂盒和回收试剂盒的步骤几乎一样。 5、载体与目的基因连接如果电泳检测酶切成功的话，则仔细将所需的片段切割下来，将胶体回收（依照胶回收试剂盒说明书操作）；之后将回收的片段和载体连接。置于温箱，12-16℃，保温8-16h 6、转化（连接产物转化到感受态细胞中）依照转化具体操作步骤做感受态，将上述连接产物进行转化实验，涂板培养，37℃， 12-16h。 7、单克隆检测（1）挑单克隆先将AMP从冰箱中取出，待融化后，在3ml装有LB液体培养基的试管中加入3μL的 AMP，用枪头混匀；取 mlEP管5支（依情况可以多挑几管），给每支管中加500μL上述培养液，然后用接种环（或黄枪头）挑单克隆，挑完后用枪吹打；之后，将挑好的菌摇4-5小时，至混浊即可。（2）单克隆检测以每管摇好的菌液为模板，以原有的引物进行PCR，然后将PCR产物跑电泳，观察电泳图像中那几管的条带正确，将正确条带相对应管的菌液再抽取100μ

公司成立初期的注意事项

关于新组建公司的一些感想： ①公司总体的把握：上不越道德底线，下不违法律底线。公司的制度与合同在此两线间制定，凡出此两线的事务，若能拉回两线的，按公司的制度和合同处理，若不行，交给社会，让社会去处理。包括劳动、公安、法院等社会管理职能部门。 ②公司的管理：内靠制度，外靠合同。即管理内部员工，靠公司内部制定的制，管理外部人员靠合同。此就是我们常说的制度管人或合同管人，但再深究，其实一言可敞立，就是合同管人，因为你公司与员工签定用工合同时，必有这一条款，即首先要遵守公司内部的管理制度，至此，公司内部的管理制度己合同化了。 ③制度与合同：制度与合同之间的关系是包集关系，即制度包容了合同。这并不等于制度高于合同。制度是一个企业运行的方式，制度如何规定，企业就如何运行，当制度无法指导企业运行或企业运行凌驾於制度之上时，说眀企业管理混乱或企业到了必改革的时候了。根据昨天会议了解的情况，你公司急需制定工程管理办法，明确项目经理人的责与权，让其清楚他扮演的角色，其权力的边界，方便其放手工作。这些明确了以后，要将此融入到合同，成为你授权的依据。在这方面来说，可以讲，合同是制度的外延，通过外延合同的方式，将你权力这只手从公司内部延伸至社会，这时你就可以用合同管外面的那帮人了。这里还要啰嗦几句的是合同与制度间的依存关係。这点非常非常重要：他们之间是相互关联、相互依存、相互支持的关系。

有了好的制度可以孕育一个好的合同，反之，如果你认你手头的合同好，也可以将同中的部分条款抽出来，做为你的管理制度，驱动管理制度的形成。总之目前要尽快把制度或合同范本定下来，形成定式。定下了，就立规矩了，有了规矩，即有方圆了。让制度与合同去替你管人管事，你不就轻松了吗？沟通不就容易了吗？矛盾也就少了。当务之急，你没有制度只有合同，为此可以从己有的合同入手，先学习消化合同，再讨论研究合同，最后再补充修改定下合同。这些工作完成以后，就可以以合同为基础制定制度，并讨论形成，最终发布执行。这中间还有一个相互补充反促形成互相完善的过程，这个过程可长可短，若嫌长可先发布暂行稿，逐步完善。总之有一个制度总比没有的好。有个依据，不会乱，乱也是局部乱，好收拾。因公司小且主业不在土建，所以工程管理制度其实就是针对项目经理的管理制度。包括进度、质量、造价、安全、维稳、农民工工资等，这是一个协同的过程，平衡的过程。那个都重要，那个都不能偏废。但实际上任何东西都有主有次的，该工作主要任务是造价、进度和质量的控制。要在这几个方面多下功夫，所占精力为95%。这些管理制度所涉及的内容，在合同中同样涉及。关于项目经理的变更权限有两条线要定下来，a、变更金额在多少时允许走变更程序；即多少算变更，若没有达到此金额时，此变更由中标方负责消化承担。b、变更超过中标方应承担的金

载体构建

载体构建分为以下步骤： 1.载体的选择和引物设计以扩增目标基因 2.目标片段的PCR扩增 3.载体和目标片段的限制性酶切 4.连接转化 5.挑取克隆提质粒 6.单克隆的验证及送样测序。载体的选择实验室常用的载体有pUC19（扩繁目标片段），pet28a（原核表达载体Kna+），pGEX-4T-1(原核表达载体Amp+)，pCI-NEO(真核表达载体Amp+)，pCDNA3.1(真核表达载体Amp+)，pLKO.1(shRNA构建Amp+)。根据所要构建的质粒目的的差异以及载体和目标片段的酶切位点分析结果来选择载体。举例如下：实验目的是将MYC基因插入到载体中，转染进细胞中表达。应选用真核表达载体pCI-NEO 或pCDNA3.1。引物设计引物设计的目的是将目标片段扩增出来以便与载体连接，所以在引物的两端应人为加上酶切位点，酶切位点前加上保护碱基。在选择酶切位点是应注意，选择的应该是目的基因片段中没有而载体上有的限制性内切酶，防止目标片段被切不完整，也便于和载体连接。载体构建之后我们的目的是要表达，所以应该加入标签以便western blot检测蛋白是否表达。常用的标签有Flag标签、6XHis标签、HA标签和Myc标签。 Flag标签： D Y K D D D D K GAT TAC AAG GAT GAC GAC GAT AAG 6XHis标签： H H H H H H CAC CAC CAC CAC CAC CAC HA标签： Y P Y D V P D Y A TAC CCA TAC GAT GTT CCA GAT TAC GCT Myc标签： E Q K L I S E E D L 这些标签被表达成氨基酸后，特定的氨基酸序列会与相应抗体结合，在western blot时可被检测。因此，在设计引物时，这些核酸序列应位于起始密码子ATG之后。