HDN产前血型血清学检验操作规程
新生儿溶血病产前产后检测操作步骤
产前血型血清学检查标本要求：夫妻双方抗凝血2ml（尽量要求父亲抗凝血2ml，非必要），母亲促凝血3-5ml（血清）。
第一步：取两个试管分别标记 A 和BA管 700 μL生理盐水 B管（从A管取200 μL混合液+100 μL母亲血清混匀再加入200 μL血浆IgM稀释液）混匀 B管封口绑紧37℃温育1小时。
第二步:紧接着做父母ABO血型、RH型和母亲的不规则抗体。
第三步：取六个试管，分别标记123456，每管里面加200 μL盐水（父亲AB型需要同时做IgG抗A效价和IgG抗B,各做1次）。
第四步：等B管温育时间到了，从B管吸200微升到1管，混匀后从1管吸200 μL到2管........从5管吸200 μL到6管，依次添加稀释（倍比稀释）。
第五步：取不规则卡标记好 6 5 4 3 2 16 5 4 3 2 11.所有孔先分别加入50 μL父亲（与父亲同型）的0.8%红细胞悬液。
2.然后每孔再依次加入相对应管号里面的稀释液50 μL（防止交叉污染，从浓度最低往最高依次加）。
第六步：1.放到37℃温箱温育15分钟。
2.离心5分钟，取出判读结果。
注：判读结果往前推一位（例如6号孔是阳性，就报5号管是阳性）。
母亲RhD阴性血型，不用加入血浆IgM稀释液，不用37℃温育1小时。
直接第二步同上。
产后血型血清学鉴定标本要求：新生儿抗凝血2-3ml第一步：1.收到标本之后离心2分钟，取两个空试管，标记红细胞1和血浆2。
红细胞1 血浆22.将离心好的血样中血浆全部吸入空试管2中，剩余的红细胞吸入另一空试管1中。
3.向试管1中加3000μL生理盐水，进行洗涤，洗涤红细胞三次后，取压积红20μL+2480μL盐水加入新的试管中配制成0.8%红细胞。
（剩余的压积红留着做放散液）。
第二步;直抗试验、血型试验取0.8%红细胞50μL分别加入血型卡和不规则抗体卡中（只加一个孔）做好标记，直接离心五分钟看结果。
第三步：游离试验、放散试验1.取试管1中压积红1000μL+盐水1000μL（1:1适量配比）。
产前血清学筛查操作常规
产前血清学筛查操作常规1、标本采集与保存：（1）用静脉穿刺术取静脉血2ml，待其凝集后离心分离得到血清。
（2）外来标本在运输过程中要避免高温。
（3）血清标本可在2－8℃温度下保存，一般不超过6天；-20℃以下保存不超过3月；长期保存应在-70℃，避免反复冻融。
（4）标本需及时编号，采用唯一编号，实验前必须再次核对号码，做到准确无误。
2、实验室操作注意事项实验前准备（1）检查所有仪器是否处于正常运行状态。
（2）冻干品复溶：冻干型标准品（Standards）需要重新溶解，加超纯水或三蒸水后静置30分钟，颠倒混匀，观察干粉是否被全部湿润和充分溶解。
（3）试剂盒板条一次如有剩余，则将板条置于有干燥剂的塑料袋内，2－8℃保存待用；质控品可分装100ul－300ul于多个eppendorf管中-70℃冷冻保存，每次一管，一次使用后即弃。
（4）标准品和样品必须做复孔，每次检测应做标准曲线。
所有的试剂和标本在使用前必须回复到室温（20－25℃）。
（5）洗液按需配制，2~25℃放置两周后需重新配置。
实验过程（1）浓缩示终液或血清抗体液在稀释后必须在1小时内使用完，各实验根据具体操作步骤安排稀释的时间。
（2）加样时，按照Protocol程序设定的标准品、质控品、待测样品顺序进行。
（3）加样时，吸嘴避免触及微孔和孔内液体，防止交叉感染；控制加样速度，避免溅起。
（4）根据试剂盒操作说明书要求设定孵育开始时间和终止时间提醒，以免遗忘，影响实验结果，并留有记录。
（5）反应微孔板在搬移过程中要平稳并小心安放，避免溅出。
实验结束（1）实验结束后，及时将测定微孔从仪器中取出。
（2）整理打印数据报告，与实验记录一起装订后归档、保存。
（3）洗板机定期消毒，一般为一个月一次，标本量大时两周一次。
以保证实验结果的可靠性。
血清标本及废弃物处理（1）所有血清标本在实验结束后-70℃冷冻保存，保存时间在胎儿出生后至少一年，以备复查。
实验剩余的稀释示终液、血清抗体液及测定微孔板条需在仪器放置及实验操作环境以外处理。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程PPT文档共52页
45、自己的饭量自己知道。——苏联
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己——德国43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验 标准检测流程
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法， 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样 一种的 网，触 犯法律 的人， 小的可 以穿网 而过， 大的可 以破网 而出， 只有中 等的才 会坠入 网中。 ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏，庇 护着我 们大家 ；它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程一、目的为规范新生儿溶血性疾病（HDN）产前血型血清学检测的技术操作，准确评估胎儿发生HDN 的危险程度，从而辅助临床正确的诊断和治疗。
二、适用范围输血科进行新生儿HDN产前血型血清学检测。
三、原理通过鉴定孕妇及其胎儿父亲的血型，推测胎儿可能的血型，进一步检测孕妇体内是否有针对胎儿红细胞血型抗原的抗体及其效价来评估胎儿发生HDN的危险程度。
四、步骤和方法1、检测孕妇ABO、RhD血型，红细胞不规则抗体及其丈夫ABO、RhD血型。
根据夫妇ABO 血型组合来推测母婴ABO血型是否相合：如果母婴血型配合则不需检测孕妇ABO血型IgG 抗体效价；如果母婴血型不配合（可能不配合）则需检测孕妇可能致敏胎儿红细胞的ABO 血型IgG抗体效价。
2、由于抗-A或者抗-B主要为IgM类，ABO血型不合极少发生胎儿HDN，故除有死胎史或者新生儿黄疸史的孕妇外，不需检测IgG抗-B及抗-A的效价。
3、如果孕妇为RhD阴性，丈夫RhD为阳性，孕妇不规则抗体阴性，建议孕妇以后每个月复检不规则抗体直至分娩。
4、如果孕妇不规则抗体为阳性，则需鉴定其特异性、Ig类型、37℃反应情况及其效价和丈夫红细胞是否表达对应的抗原，来评估抗体引起的HDN危险程度。
5、结果判定：效价>143有临床意义。
五、质量控制1、用于试验的试剂都在有效期内使用。
2、严格试验操作，设置阴、阳对照，结果符合预期才可判定试验结果。
六、注意事项1、HDN产前血型血清学检测结果只能为评估胎儿发生HDN的风险提供依据，并不能确定HDN 。
母婴ABO血型不合且孕妇IgG类ABO血型抗体效价在妊娠期持续升高或者检出了IgG类红细胞不规则抗体都是HDN的风险因素。
2、传统认为ABO血型系统IgG抗体效价高于64具有临床意义。
随着检测水平得的提高，其作为临床参考意义不大。
3、抗体效价与HDN的发生有一定的相关性，但是抗体效价的高低与HDN的严重程度并不完全一致，可能与IgG抗体亚类不同有关。
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。
3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。
4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。
本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。
应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。
5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。
6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。
7.3按照要求进行血液采集。
将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。
并填写《外来标本交接记录》及相关记录。
7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。
7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。
新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程1、目的为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶卡式法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。
当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。
离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。
5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3～4ml,24小时内送检。
将不抗凝血离心分离出血清备用。
6、试剂：5.1 0.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.4 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1)XTL-4.7细胞洗涤离心机；2)DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器；3)DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ7.5操作程序：7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。
7.5.2如母子ABO不合（母O子A、B，母A子B、AB，母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1)取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。
2)在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50μl。
3)将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。
母婴ABo HDN血型血清学检查
母婴ABo HDN血型血清学检查摘要】血型血清学检查对HDN的诊断有重要意义。
通过血清学检查可了解母婴血型是否不合，母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应的IgG抗体，患儿红细胞是否被来自母亲的IgG抗体所致敏。
【关键词】血型血清学检查检查结果分析血型抗体孕妇血清1 临床资料一般资料通过4例母子Rh血型不合引起的新生儿溶血症的病因调查分析，探讨普及开展产前血型血清学检查的必要性。
方法：产前血型血清学检测和新生儿溶血三项试验。
结果：4例新生儿溶血症中3例由Rh血型系统抗-D引起，1例由抗-E引起。
2 母亲血清中IgG抗A(B)检查ABO血型系统HDN由 IgG抗A(B)引起，检测母亲血清中有无IgG抗A(B)抗体及其效价，即可预测ABO血型系统HDN发生的可能性。
正常人血清中的抗A(B)，一般多为IgM和IgG抗体的混合物，当IgM抗A(B)抗体效价等于或大于IgG抗A(B)抗体时，则IgG抗A(B)抗体被其掩盖，因为它们具有相同的特异性，因为无法检出IgG抗A(B)抗体，必须除IgM抗A(B)抗体。
应用2-巯基乙醇(2-Me)，可以打开IgM型抗体重链之间的二硫键，使之不能再与相对应的红细胞发生凝集。
当母亲血清中IgG抗体效价≥64，其血型不合胎儿就可能发生ABO新生儿溶血病。
应用达亚美微柱凝胶卡检测母亲血清IgG抗体效价，操作步骤如下：(1)配制中和血清。
取母亲血清、二巯基乙醇液各200td，充分混匀。
(2)将上述中和血清置37℃水浴30分钟，以充分破坏血清中的IgM类抗体。
(3)取6支干净试管排于试管架上。
(4)第1管加50/11中和血清和达亚美2号稀释液350μl。
(5)第2～6管分别加入达亚美2号稀释液200μl。
(6)从第1管吸出200μl液体，加入第2管，混匀，再从第2管吸出200μl液体，加入第3管混匀，依次倍比稀释。
(7)取达亚美Liss/Coombs卡(一卡六管)1张，撕去铝箔，在达亚美Liss/Coombs卡的六管中，各加入父亲0.8%的红细胞悬液50μl。
产前夫妇血型血清学检查的意义方法及应采取的措施
产前夫妇血型血清学检查的意义方法及应采取的措施随着人们对母子血型不合引起新生儿溶血病（HDN）认识的日益深入，检验方法的不断完善，HDN绝大多数病例不但在产后能作出明确的诊断，而且Rh系统HDN在产前大都可以作出诊断，ABO系统HDN也可通过检测机体IgG抗A（B）效价的增长情况，来判断HDN发生的可能性。
因此，如果能作到产前夫妇血型血清学检查，检查夫妇血型是否相合和孕妇体内是否有IgG抗体，并及时采取适当的治疗措施，对于防止HDN的发生，具有重要意义。
一、产前血型血清学检查的方法如下：1、检查夫妇双方ABO、Rh血型是否相合。
2、证明在孕妇血清中有与患儿红细胞不相合的免疫性抗体及其特异性。
3、测定孕妇血清内免疫性抗体的效价.若孕妇血清中抗体效价很高或效价虽不高，但有增高的趋势，均应采取必要的措施，以免胎儿继续受害。
如第一次免疫性抗体的测定，一般可在妊娠初期或第4个月进行，作为抗体的基础水平，然后于妊娠7-8个月作第二次测定，如果抗体效价上升者，即IgG抗A（B）＞1：64，Rh抗体＞1：16，提示胎儿受害的可能性增大，需以后隔2-4周重复一次，测定IgG抗体上升的速度。
最好妊娠7-8个月之间作羊水胆红素光密度（OD）的测定，以了解胎儿的受害程度。
二、措施对于产前夫妇血型血清检查可能发生HDN的孕妇，应采取预防和治疗相结合的原则，具体如下：1、Rh系统溶血病最有效的办法是预防Rh阴性妇女发生同种免疫，具体地说，即避免输Rh阳性血液，防止人工流产，尽可能保证第一胎存活。
如果孕妇体内巳有Rh抗体，并且效价＞1：32，可采用单采孕妇血浆，以降低Rh抗体的效价，或者尽可能提早分娩，给婴儿换血，蓝光照射、输白蛋白等方法治疗。
2、ABO系统溶血病的预防方法是：防止IgG抗A（B）效价升高，具体可采用中药治疗，以降低IgG抗体的效价。
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HDN产前血型血清学检验操作规程 SXYJ-GZ-0218
1目的辅助临床诊断母婴血型不合而引发的新生儿溶血病的预测。
2适用范围既往患有新生儿溶血病病史、不明原因流产或死胎史的孕妇；夫妇ABO血型不相容的孕妇；Rh阴性并有过流产史、输血史的孕妇。
3职责检测者负责依据此程序进行HDN产前血型血清学检验操作。
4材料与设备抗-A、抗-B血清、反定型试剂红细胞、血型物质或二硫苏糖醇（DTT）；实验室常规应用的耗材备品准备充分、仪器设备运行状态正常
5操作方法
5.1ABO血型鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0202）
5.1.1ABO血型不合可致ABO溶血：例如，孕妇O型，丈夫A型/B型/AB型；
5.1.2ABO系统以外溶血：孕妇可以是A、B、O、AB型，丈夫ABO血型可以是和孕妇同型，
也可以不同型。
5.2RhD抗原鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0205）。
5.3免疫性抗体检查
5.3.1IgM抗A(B)破坏：夫妇ABO血型不合；
5.3.1.1血型物质中和法：以孕妇为O型，丈夫为A型为例：取孕妇血清0.15ml或0.05ml
加A型血型物质0.15ml，混匀→置室温15分钟→得到中和后血清、若孕妇为O 型，丈夫为AB型，可分别用A型、B型血型物质中和；
5.3.1.2二硫苏糖醇法(DTT)：取0.1ml孕妇血清加0.7ml DTT做1:8稀释， 37℃水浴30分
钟；
5.3.2ABO以内免疫性抗体（IgG性质的抗A或/和抗B）检测：用中和或处理后血清2d加
入相应的Ac或/和Bc（或用丈夫细胞）悬液1d，离心，检测是否中和彻底，若仍有
凝集，可加大中和液的比例至中和后血清为理想血清。
5.3.3检出免疫性抗体者同时报效价，抗-A（B）抗体效价参考值为8-64。
ABO以外红细胞
血型抗体的筛选和鉴定：方法参见SXYJ-GZ-0216。
5.3.4效价的检测：IgG抗A（B）用中和或处理后血清、ABO以外抗体用女血清分别加相应
的红细胞悬液测定（方法参见SXYJ-GZ-0217）。
5.3.5溶血素检测：取4支小试管，标明序号，在每支管中加入0.2ml的生理盐水，再在
第一支管中加入孕妇0.2ml血清，依次向后做倍比稀释，最后一管中吸出0.2ml混
合液弃去，在每管中加入等量的丈夫3％红细胞悬液或含有相应抗原的试剂红细胞悬
液，混匀置37℃孵育1小时，取出离心后观察其溶血程度。
按红细胞溶解的百分比进行判读。
6结果判定根据凝集强度(方法参见SXYJ-GZ-0202:5.2.1.6)对结果进行判读。
7报告发放每周四下午13:00发放报告，检验申请者到中心血站三楼输血研究所领取。
8注意事项溶血素检测常规时不做（2009年11月23日后），如果临床医生要求可加做此项实验。
9相关记录
输血相关免疫学检测会诊申请单（JL-SXYJ-0501-1）
HDN产前血型血清学检验记录（JL-SXYJ-0107）。