双脱氧法
双脱氧核苷酸测序法
双脱氧核苷酸测序法实验原理双脱氧测序▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼▼双脱氧测序法是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得可见的DNA碱基序列。
▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲▲DNA测序DNA测序技术,即测定DNA序列的技术。
在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。
目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和 Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。
这二种方法在原理上差异很大,但都是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,产生 A,T,C,G四组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得DNA序列.目前 Sanger测序法得到了广泛的应用.测序原理DNA链中的核苷酸是以3’，5’-磷酸二酯键相连接，合成DNA 所用的底物是2’-脱氧核苷三磷酸（dNTP），属于单脱氧核苷酸，Sanger 双脱氧链终止法中被掺入了少量2’3’-双脱氧核苷酸(ddNTP)，在核酸聚合酶链式反应（PCR）过程中，ddNTP 会随机地代替dNTP参加反应，一旦ddNTP加入了新合成的DNA 链, 由于其3位的羟基变成了氢, 不能再与其它的脱氧核苷酸形成3′,5′-磷酸二酯键，DNA合成便在此处终止，如果此处掺入的是一个ddATP，则新生链的末端就是A，依次类推可以通过掺入ddTTP、 ddCTP、 ddGTP ，则新生链的末端为T、C或G。
测序应用测序时分成四个反应, 每个反应除上述成分外分别加入2,3-双脱氧的A, C, G, T核苷三磷酸(称为ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP), 然后进行聚合反应。
双脱氧技术的原理及应用
双脱氧技术的原理及应用1. 双脱氧技术的定义双脱氧技术是一种基因工程技术，通过将目标基因片段的两个碱基对脱氧，使其对应的核苷酸发生缺失，从而实现特定基因的编辑和功能研究。
2. 双脱氧技术的原理双脱氧技术的原理基于一种特殊的酶，称为CRISPR-Cas9（聚合酶链反应 - Cas9），它是一种天然存在于细菌中的防御机制。
该机制通过识别和切断外来基因组的DNA，以防止病毒侵入。
在双脱氧技术中，科学家将CRISPR-Cas9系统应用于特定基因的编辑和研究。
步骤如下：1.设计导向RNA（gRNA）：根据目标基因的序列，科学家可以设计出特异性的导向RNA，将其引导Cas9蛋白靶向到目标基因的特定区域。
2.合成和导入Cas9和gRNA：将合成的Cas9蛋白和gRNA导入到目标细胞中，使其与细胞内部的DNA发生结合。
3.DNA切割和修复：一旦Cas9蛋白与gRNA识别到目标基因的特定区域，Cas9蛋白会切割目标DNA，导致基因片段发生缺失。
细胞会利用自身的修复机制来恢复DNA，但通常会导致缺失的区域出现插入或缺失的突变。
4.验证编辑结果：科学家可以通过测序和其他分子生物学技术来验证基因编辑的结果，以确保目标基因的特定区域已经发生了双脱氧。
3. 双脱氧技术的应用双脱氧技术在基因工程和生物学研究中有广泛的应用。
3.1 基因敲除通过双脱氧技术，可以选择性地敲除目标基因的特定区域，从而研究基因在生物体中的功能和调控机制。
这种方法可以帮助科学家深入了解特定基因的作用，从而揭示相关疾病的发病机制。
3.2 基因突变通过双脱氧技术，科学家可以引入特定的基因突变，从而研究这些突变对基因功能的影响。
这种方法可以帮助科学家了解基因突变与人类遗传病之间的关系，并为疾病治疗提供新的方法和观点。
3.3 基因修复双脱氧技术还可以用于修复某些遗传病的基因缺陷。
通过修复特定基因的缺失或突变，可以恢复基因的正常功能，从而治疗遗传性疾病。
3.4 转基因生物的构建利用双脱氧技术，科学家可以有效地构建转基因生物。
dna双脱氧末端终止法名词解释
DNA双脱氧末端终止法1. 介绍DNA双脱氧末端终止法（DNA double-stranded termination method），简称为双脱氧法，是一种用于测定DNA序列的方法。
它是由弗雷德里克·桑格和沃尔特·吉尔伯特于1977年首次提出的。
该方法通过在DNA合成过程中加入一种特殊的二进制末端标记物，使得DNA合成在特定位置停止，从而确定目标DNA序列。
2. 原理DNA双脱氧末端终止法的原理基于DNA链延伸和合成的过程。
在实验中，需要使用一小段已知序列的DNA作为引物（primer），通过引物与待测DNA序列的互补配对，引导DNA聚合酶（DNA polymerase）在待测序列上进行链延伸和合成。
为了标记终止位点，实验中会加入四种不同的二进制末端标记物：A、T、C、G（即脱氧核苷三磷酸）。
这些标记物与待测序列中下一个碱基互补配对，并由聚合酶添加到扩增链上。
然而，在添加完一个脱氧核苷三磷酸后，聚合酶无法再添加新的核苷酸，导致DNA链的终止。
在实验中，会同时进行四个反应管，每个反应管中只加入一种特定的脱氧核苷三磷酸。
通过控制不同脱氧核苷三磷酸的浓度和添加顺序，可以得到标记了不同碱基的DNA片段。
这些片段经过电泳分离后，就可以得到一个带有不同长度的DNA序列。
3. 实验步骤DNA双脱氧末端终止法包括以下几个主要步骤：3.1 DNA提取和纯化首先需要从待测样品中提取出目标DNA，并进行纯化以去除杂质。
这通常涉及到细胞裂解、蛋白酶处理、有机溶剂萃取等步骤。
3.2 引物设计和合成根据已知的目标序列设计引物，并通过化学合成方式合成引物。
引物通常由15-30个碱基组成，并具有与待测序列互补的区域。
3.3 PCR扩增将待测DNA与引物一起加入PCR反应体系中，通过多轮循环扩增，使得目标DNA序列得到大量复制。
PCR反应包括DNA变性、引物结合和扩增等步骤。
3.4 标记DNA片段在PCR反应中加入四种不同的脱氧核苷三磷酸（A、T、C、G），使得DNA链的合成在特定位置停止。
双脱氧测序法原理
双脱氧测序法原理引言：双脱氧测序法（Double-stranded DNA Sequencing）是一种常用的基因组测序技术，它能够准确地测定DNA序列。
本文将介绍双脱氧测序法的原理和步骤。
一、原理概述双脱氧测序法是以DNA聚合酶为基础的测序技术。
它利用DNA聚合酶的特性，在DNA合成过程中加入少量的双脱氧核苷酸（ddNTP），从而导致DNA链的终止。
通过检测终止位置的ddNTP类型，就可以确定原始DNA的序列。
二、步骤详解1. DNA提取和纯化：从待测序的样品中提取DNA，并经过一系列纯化步骤，以去除杂质和其他干扰物质。
2. DNA扩增：采用聚合酶链式反应（PCR）技术，选择性地扩增待测序列的DNA片段。
PCR反应中，引物（primer）与DNA序列的两端结合并在其上进行DNA合成，从而产生多个DNA复制体。
3. DNA片段准备：将扩增得到的DNA片段进行电泳分离，获得单链DNA片段。
4. 生成测序模板：将单链DNA片段与引物进行杂交，形成DNA-引物复合物。
引物与DNA片段的连接部位作为起始点，DNA聚合酶将在其上合成新的DNA链。
5. DNA合成反应：在DNA合成过程中，引入四种不同的双脱氧核苷酸（ddNTP），其与普通脱氧核苷酸（dNTP）竞争进入新合成的DNA链。
ddNTP在DNA链上连接后，由于其缺少3'-OH基团，无法继续延长链的长度，从而导致DNA链的终止。
6. 电泳分离：将反应产物进行电泳分离，使不同长度的DNA链迁移到不同位置。
电泳结束后，可以得到一系列由不同长度的DNA 链组成的序列。
7. 序列分析：通过读取电泳分离结果，根据不同长度的DNA链对应的ddNTP类型，可以确定原始DNA序列。
三、优势和应用双脱氧测序法具有高度准确性、较低的成本和高通量的特点，因此被广泛应用于基因组学、遗传学、疾病研究等领域。
它可以用于研究基因变异、寻找突变位点、确定DNA修饰模式等。
四、发展与展望双脱氧测序法在过去几十年中不断发展，出现了多种改进和衍生技术，如Sanger测序、Next-Generation Sequencing（NGS）等。
双脱氧法测序检测方法
双脱氧法测序检测方法说实话双脱氧法测序检测方法这事，我一开始也是瞎摸索。
我最初看那些专业资料的时候，看得云里雾里的。
我就想，这东西咋这么复杂呢。
那资料里又是说原理又是说步骤的，原理我就看了好久才似懂非懂。
它不就是利用双脱氧核苷酸终止链的延伸嘛，就好像一群人跑步，突然给某些人前面设个障碍让他们不得不停下来，这些停下来的人对应的位置就是我们要的信息。
这是我自己琢磨出来的比较通俗的理解方法。
我开始做实验的时候啊，就先准备样品。
这样品的准备可不能马虎，我有一次就因为样品纯度不够，结果那数据测出来乱七八糟的。
就像你做饭，食材本身不好，做出来的饭肯定难吃，这是一个道理啊。
然后那个反应体系的构建，各种试剂的量得控制好。
我就小心翼翼地按照比例加那些东西，像加双脱氧核苷酸的时候，感觉就像是在给精密的机械上螺丝，多一点少一点可能都不行。
有一回我不小心加多了一种试剂，整个实验结果就全毁了，当时那个挫败感啊，就像是搭了很久的积木，一下被推倒了。
退火温度也很关键呢。
这个我也是不断尝试才找到合适的值。
温度高了低了都不好，就好像穿衣服，温度不合适就会让你感觉不舒服一样。
测序过程中，我还发现仪器的调整也很重要。
我试过一个仪器，看起来很高级，但我没调好一些参数，出来的信号就很弱，就像收音机没调好台，听到的只是嘈杂声一样。
我觉得双脱氧法测序检测是得细心再细心的事儿。
每一步都像是在走钢丝，不容许有太多偏差。
你要是开始做这个实验，可千万别急功近利，要一步一步来，把基础的东西做好，像样品准备、试剂比例这些，还有别害怕失败，我也是失败了好多次才慢慢找到感觉的。
双脱氧法测序的原理
双脱氧法测序的原理双脱氧法测序的原理双脱氧法测序是一种广泛应用于基因组研究的DNA测序技术，它是由Frederick Sanger于1977年提出的。
这种技术是在DNA链延伸的过程中，将特定的双脱氧核苷酸（ddNTP）作为集成的终止剂，以减慢碱基添加并标记DNA 单链。
通过分析被终止的位置就可以确定DNA的序列。
1. DNA复制和双脱氧核苷酸在DNA复制过程中，DNA的两条链分开形成两条互补的单链。
在生成新DNA链的同时，DNA聚合酶会将核苷酸依照其互补关系添加进新的DNA链中。
这就是DNA复制最核心的过程，DNA的指定位置与碱基对应关系是DNA测序的基础。
双脱氧核苷酸是DNA聚合酶所需的核苷酸的一种，它的结构与标准的核苷酸不同，并且缺少3’羟基，这样它就不能与下一个核苷酸连接在一起形成链，从而使聚合酶停止操作。
这是双脱氧核苷酸可以用来终止DNA链的原因。
具体来说，当聚合酶遇到一个ddNTP分子时，已有的DNA 链上的碱基添加到一个停止DNA链的位置，并且终止DNA 合成。
因此，这种技术利用了双脱氧核苷酸的特殊性质，使得在DNA复制和测序中，我们可以区分和标识出不同的碱基。
2. 标记DNA链对于DNA测序来说，首先要做的是通过标记DNA链来确定DNA序列。
为了标记DNA链，我们需要将特定的放射性标记分子标记在DNA末端，其中最常用的放射性标记是放射性同位素，例如32P。
实际上，在每个继承DNA链的末端，DNA聚合酶选择一个携带标记（例如放射性标记）的普通的核苷酸，这个被选择的核苷酸就成了终止这条DNA链的位置。
因为聚合酶找不到连接下一个核苷酸的能力，所以只能停止操作。
因此，我们可以看到，虽然终止核苷酸的位置是随机的，但我们可以通过在所制备的特异性模板DNA片段中可重复地制备该特定位置，从而确定去除终止基团之前的所有碱基。
3. 分离DNA链上的碱基接下来，我们需要将DNA链分离并分级分离。
这可以通过将测序扩增产物分离到不同的单元格提示来实现。
双脱氧末端终止法的原理
双脱氧末端终止法的原理双脱氧末端终止法是一种常用的 DNA 测序技术。
在这种技术中，DNA 被将其序列确定，其中使用一种特殊的DNA 多聚酶来合成新的 DNA 链，这种酶被称为 DNA 聚合酶。
双脱氧末端终止法的原理是在 DNA 合成过程的每个碱基加入一种化学试剂，即双脱氧核苷酸。
这些双脱氧核苷酸缺乏一个 2' 羟基，这是合成新 DNA 链所必需的。
这种化学试剂阻止 DNA 聚合酶进行下一个碱基的取代，最终导致哪个碱基是消耗完。
每个反应中使用的四种不同的核苷酸中只包含一种特殊的双脱氧核苷酸。
在双脱氧末端终止法中，DNA 片段首先通过 PCR 扩增，形成双脱氧核苷酸。
在扩增 PCRs 过程中，单独的DNA 片段在不断地复制，每个循环都会产生双脱氧核苷酸，从而形成了一系列短 DNA 片段。
每个片段长短不一，但每个片段上的双脱氧核苷酸都在特定的位置。
每个片段在电泳过程中根据其长度分离。
在测序过程中，这些分离的片段分别通过一定使定量分析技术，比如测出其荧光强度或飞行时间等等。
根据其中双脱氧核苷酸测序，确定所需要的 DNA 链。
由于DNA 聚合酶必须依赖于 3' 羟基，因此向 3' 端添加新核苷酸是 DNA 合成的第一步。
DNA 合成过程中需要四种不同的碱基，吉妥氨酸、胸腺嘧啶、腺嘌呤和胞嘧啶（G, C, A 和 T）。
DNA 聚合酶会扫描 DNA 模板，与其互补的碱基会被连接到正在合成的 DNA 链的 3' 端。
DNA 聚合酶在进行这种扫描操作时，需要 DNA 模板上存在的已经合成的 DNA链。
在终止法初始的反应混合物中，单纯的DNA 片段和逆转录酶聚合的引物片段和逆转录酶聚合问题都会包含特定的核苷酸，这意味着特定的度数，比方说三十分之一，将以双脱氧核苷酸的形式出现。
这个度数非常重要，如果摆错了，整个分离过程都将失败。
在分离过程结束后，我们可以检查荧光读数或者例如飞行时间的大小，根据这些数据来确定每个片段上特定的核苷酸。
双脱氧测序法原理
双脱氧测序法原理双脱氧测序法（Double-stranded DNA sequencing），简称双脱氧测序，是一种用于测定DNA序列的重要方法。
它的原理是通过DNA聚合酶酶链终止法，将待测序列DNA复制成一系列不同长度的DNA片段，然后通过电泳技术将这些片段分离并测定其长度，最终得到DNA的序列信息。
双脱氧测序法的步骤如下：1. DNA样本制备：首先，需要从待测序的DNA样本中提取纯净的DNA。
通常使用化学方法或商用DNA提取试剂盒进行提取。
2. DNA扩增：将DNA样本分成两条单链，然后加入特定的引物（寡核苷酸序列），利用DNA聚合酶进行扩增。
引物会选择性地结合到待测序列的起始点，并向其延伸，最终得到两条单链的复制物。
3. 双脱氧核苷酸反应：在扩增反应中，除了常规的四种脱氧核苷酸（dATP、dCTP、dGTP和dTTP）外，还添加了少量的双脱氧核苷酸（ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP），它们缺少3'羟基，无法与下一个核苷酸连接，从而使DNA聚合过程停止。
4. 片段分离：将反应产物进行电泳分离，通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳。
由于双脱氧核苷酸的引入，会在不同位置导致DNA链的延伸终止，从而产生一系列不同长度的DNA片段。
5. 读取序列：通过测定电泳图谱上每个片段的长度，可以确定DNA 序列。
通常使用自动测序仪进行测定，它能够自动识别并记录不同长度的片段，并将其转化为对应的DNA序列。
双脱氧测序法的原理简单明了，但是在实际操作中仍需注意一些细节。
首先，引物的选择非常重要，它应该与待测序列的起始点相匹配，以确保扩增反应的准确性。
其次，双脱氧核苷酸的浓度需要控制在适当的范围内，以避免过多或过少导致测序结果的错误。
此外，电泳条件的优化也是至关重要的，可以通过调整电场强度和电泳时间来提高分离效果。
双脱氧测序法的应用非常广泛，它在基因组学研究、遗传学分析、疾病诊断等领域发挥着重要作用。
通过测定DNA序列，科学家可以揭示基因的结构与功能，研究基因变异与疾病的关系，甚至进行个体化医学的实践。
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双脱氧链终止法
概述：双脱氧链终止法是现在应用最多的核酸测序技术，由Sanger等1977年提出。
主要用于DNA基因分析。
原理：核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧碱基存在条件下复制或转录时，如果在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧碱基，只要双脱氧碱基掺入链端，该链就停止延长，链端掺入单脱氧碱基的片段可继续延长。
如此每管反应体系中便合成以共同引物为5'端，以双脱氧碱基为3'端的一系列长度不等的核酸片段。
反应终止后，分四个泳道进行电泳。
以分离长短不一的核酸片段(长度相邻者仅差一个碱基)，根据片段3'端的双脱氧碱基，便可依次阅读合成片段的碱基排列顺序。
Sanger双脱氧链终止法(酶法)测序程序：（注：RNA部分不看）(一) Sanger双脱氧链终止法(酶法)测序程序操作程序是按DNA复制和RNA反转录的原理设计的。
1.分离待测核酸模板，模板可以是DNA，也可以是RNA，可以是双链，也可以是单链。
2.在4只试管中加入适当的引物、模板、4种dNTP(包括放射性标记的ddNTP，例如P ddNTP 和DNA聚合酶(如以RNA为模板，则用反转录酶)，再在上述4只管中分别加入一种一定浓度的ddNTP(双脱氧核苷酸)。
3.与单链模板(如以双链作模板，要作变性处理)结合的引物，在DNA聚合酶作用下从5'端向3'端进行延伸反应，32P随着引物延长掺入到新合成链中。
当ddNTP掺入时，由于它在3'位置没有羟基，故不与下一个dNTP结合，从而使链延伸终止。
ddNTP在不同位置掺入，因而产生一系列不同长度的新的DNA链。
4.用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳同时分离4只反应管中的反应产物，由于每一反应管中只加一种ddNTP(如ddATP)，则该管中各种长度的DNA都终止于该种碱基(如A)处。
所以凝胶电泳中该泳道不同带的DNA 3' 末端都为同一种双脱氧碱基。
5.放射自显影。
根据四泳道的编号和每个泳道中DNA带的位置直接从自显影图谱上读出与模板链互补的新链序列。
双脱氧法原理示意图：如下图
双脱氧测序的试剂及具体操作步骤
变性双链模板的制备：(1) 材料Tris/葡萄糖缓冲液(20mmol/L Tris-HCl pH8.0，10mmo1/L EDTA，50mmo1/L 葡萄糖)，1% SDS，0.2mo1/L NaOH，异丙醇，TE缓冲液pH8.0，4mol/L LiCl，冰冷70%和无水乙醇，2mol/L NaOH，2mmol/L EDTA。
(2) 配制方法
①取1.5ml处于对数生产期的培养菌液(含有待测病毒核酸的重组质粒模板)，离心除去上清液后，用150ml Tris/葡萄糖缓冲液重悬菌团，在室温下放置5分钟。
②加入300ml的1%SDS，0.2mol/L NaOH，颠倒混合约15次，在室温下放置15分钟，加入225ml 3mol/L醋酸钠(pH4.5)，颠倒约15次混合，在冰浴中放置45分钟，然后离心5分钟。
③将650ml上清液转移至一支新管中，加入650ml异丙醇，混合后在室温下放置10分钟，离心5分钟后弃去异丙醇，抽真空干燥沉淀。
④用125ml TE(pH 8.0)重新溶解DNA，加入375ml的4mol/L LiCl，在冰浴中放置20分钟后，于4℃下离心5分钟。
⑤将上清液转移至一支新管中用饱和苯酚抽提后再用氯仿抽提，加入2倍体积的异丙醇，在室温下沉淀30分钟，离心5分钟，弃去上清液。
⑥用冰冷的70%乙醇洗沉淀，离心5分钟，弃去上清液并干燥，用50ml TE缓冲液重新溶解沉淀。
用紫外分光光度计测定质粒DNA含量。
⑦取0.2mg质粒DNA，并将体积调至9ml，加入1ml 2mol/L NaOH，2mmol/L EDTA，在室温下放置5分钟，加入2ml 30mol/L醋酸钠(pH 4.5)和8ml水。
⑧加入6ml冰冷无水乙醇，混合后在干冰/乙醇浴中放置15分钟，在4℃下离心5分钟，小心地弃去上清液，用冰冷的70%乙醇洗沉淀，离心5分钟并小心地弃去上清液，真空抽干沉淀，并用TE缓冲液重新溶解沉淀。
延伸和终止反应：以利用T7DNA聚合酶进行的双脱氧链终止反应为例。
(1) 材料变性的双链DNA模板(溶解在TE缓冲液中)，0.5pmol/mL寡核苷酸引物(溶解在TE中，-20℃贮存)，5×测序缓冲液(200mmol/L Tris pH7.5，50mmol/L MgCl2，-20℃贮存)，0.1mol/l DTT(当月新配-20℃贮存)，15pmol/L的3种dNTP混合物(缺dATP)，1 000至1 500Ci/mmol32p dATP(在-20℃下达4至6周)，修饰的T7 DNA聚合酶，标准酶稀释溶液(20mmol/L Tris-HCl pH7.5，0.5mg/mlBSA，10mmol/L- 巯基乙醇，4℃贮存)，终止混合物(表2-30)，甲酰胺上样缓冲液(0.2ml 0.5mol/LEDTA pH8.0，10mg溴酚蓝，10mg二甲苯青，10ml甲酰胺)。
T7DNA聚合酶终止反应混合物
反应成分ddG ddA ddT ddC 最终浓度
H2O 15 15 15 15 -
5×测序缓冲液6 6 6 6 - 1mmol/L
4dNTP 6 6 6 6 200μmol/L
1mmol/L ddGTP 3 - - - 20μmol/L
1mmol/L ddATP - 3 - - 20μmol/L
1mmol/L ddTTP - - 3 - 20μmol/L
1mmol/L ddCTP - - - 3 20μmol/L
(2) 配制方法
①取4支0.5ml小离心管，标上G、A、T、C，每管加入7ml变性的双链DNA模板(分别为1和2mg)，1ml寡核苷酸引物和2ml 5×测序缓冲液混合，65℃保温2分钟，在室温下冷却30分钟。
②每管加入1ml 0.1mol/L DTT，2ml 1.5mol/L 3种dNTP混合物，0.5ml32P dATP和
2ml(2IU)修饰的T7DNA多聚酶混合物，在室温下放置5分钟。
③按标记每管分别加入3ml 4种ddNTP终止混合物的一种。
④短促离心后，在37℃下保温5分钟。
⑤加入5ml甲酰胺上样缓冲液，上样前在80℃下加热2分钟，并迅速置于冰浴上，每个样品取3ml，上样电泳。
折叠测序反应物电泳和序列读取：(1) 按普通聚丙烯酰胺凝胶制作方法制作梯度胶。
(2) 按G、A、T、C次序加入每种样品，在G、A和T各泳道上样1ml，而在C泳道上样1.5ml。
(3) 上样完毕加压1700V电泳，根据样品中溴酚蓝和二甲苯青染料迁移情况确定电泳时间。
(4) 电泳完毕，在10℃冰醋酸中漂洗30分钟脱去尿素。
(5) 在60℃或80℃干燥30分钟后，放射自显影读取序列。
读取合成链的核苷酸序列时，应从下往上读取。
因为电泳时是从上向下的，即上为负极，下为正极，DNA带负电，从负极向正极移动。
其中，小片段DNA移动速度最快，距离正极的点样处最远。
所以，应该从最小片段读起，即，从下向上读取。
而模板链则应该从上向下读取，并且转换为测序的核苷酸的互补的核苷酸。