分子诊断检测项目介绍-分子诊断检测项目介绍
分子诊断检测项目介绍(1)-分子诊断检测项目介绍
分子诊断检测工程介绍前言某某万盖得门诊部是一家由海外归国人员为主体创办的股份制民营医疗机构, 以引进、开发和推广新的医学检验技术为主要经营内容。
万盖得三字来自英语“Vanguard〞的音译，其意译为前哨或尖兵的意思，这明确了创办者“敢为天下人先〞的意愿。
希望能够凭借自身的知识、技术、信息和观念优势，为国内医学检验方面的技术进步以及医疗体制的改革做出奉献。
万盖得将以严肃、严谨和科学的态度开展各项业务，为医院和社区提供高质量的医疗和检验效劳。
分子诊断是我们首先开展的实验诊断效劳，这是一个全新的、被称之为实验诊断一场革命的领域，因为分子技术的临床应用已经使很多用常规技术根本无法检测的病理变化可以被准确的测到。
我们首先开展的用细胞DNA定量分析系统进展肿瘤的早期诊断，处于世界领先地位，这项技术已使脱落细胞的检查成为一项客观、准确、自动化和高通量的肿瘤筛查和早期诊断的技术平台。
我们自主开发的多重PCR检测性病病原、病毒和难以培养的细菌性病原，将给感染性疾病的诊断和治疗带来新的突破性进展。
在医疗效劳方面，我们方案引入兴旺国家中行之有效的家庭医生效劳模式，为中等收入以上的家庭和个人提供个体化和优质的医疗和保健效劳，引导我们的效劳对象建立起防病重于治病的观念，主动地提高自身的保健意识。
与同等规模的医疗机构，保持一种即竞争又合作的新型关系。
与大型综合医院和专科医院，我们希望能建立起互补和互利的协作关系。
我们相信，万盖得在各级领导和医务界同仁的关心和支持下，定能开展壮大。
万盖得首席科技参谋临床微生物学博士吴尚为2006年元月分子诊断目录细胞分子生物学检测细胞DNA定量分析系统简介细胞DNA定量分析的根本原理细胞DNA定量分析的临床应用价值不同DNA指数〔DI〕在宫颈癌普查中的临床意义宫颈癌和宫颈癌的早期诊断宫颈癌筛查和常规宫颈细胞学检查宫颈细胞学检查的方法宫颈细胞DNA定量分析细胞DNA定量分析的其他用途核酸检测技术根本概念多聚酶链反响-PCR人类乳头状瘤病毒的检测人类乳头状瘤病毒人类乳头状瘤病毒与宫颈癌人类乳头状瘤病毒对宫颈癌的“预警〞作用万盖得宫颈癌筛查—预警—监测和早期诊断系统宫颈标本采集、送检须知事项慢性生殖道感染和性传播疾病病原的检测慢性生殖道感染和性传播疾病引起慢性生殖道感染和性传播疾病的常见病原诊断困难造成对发病率统计的困难实验检测方法及优、缺点分子扩增技术的应用促进了对性病的了解PCR已成为检测性病病原的金标准万盖得多重PCR检测性病病原脑脊液中感染病原的检测中枢神经系统感染和诊断人类疱疹病毒与中枢神经系统感染脑脊液中检测病毒的困难万盖得多重PCR检测脑脊液中的疱疹病毒细菌性中枢神经系统感染PCR检测脑脊液中细菌的优越性万盖得多重PCR检测脑脊液中的致病菌呼吸道感染病原的检测呼吸道感染呼吸道感染病原的检测PCR检测法的优越性万盖得多重PCR检测细菌性非典型肺炎病原PCR是检测病毒非典型肺炎病原的最好方法万盖得多重RT-PCR检测病毒性非典型肺炎病原细胞分子生物学检测细胞DNA定量分析细胞DNA定量分析系统简介1、系统组成：数码显微镜、自动送片机、计算机和先进的软件系统〔自动化控制软件和DNA定量分析软件〕。
遗传学的分子诊断技术简介
技术难点
检测操作注意事项：
• 试剂的离子成分和PH值对杂交的好坏有直接的影响。 因而在实验的试剂配置准备过程中要注意使用超纯水 进行配置，同时配好的试剂要使用PH试纸或PH仪校准。
• 细胞质较多时也会引起杂交率低下，信号弱，因而在 实验操作时应特别注意消化时间的掌握。
优技术点优：势
• 探针能长期保存，重复性好、稳定； • 安全快速，高灵敏性及特异性； • 可用于中期染色体和间期细胞的分析，不需要细胞
• FISH技术无法达到百分百完全杂交，特别是在应用 较短cDNA探针时存在杂交效率明显下降的问题。 但随着各种新型分子探针以及更为精密高端的光学
显微镜和功能强大的计算机分析系统的不断问世，问 题可以得到解决。 • 无法准确判断断裂基因的具体坐标位置，进一步判
断需要RNA seq来检测。
技术优势
多少基因或染色体可用FISH检测：
培养； • 可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及（羊水）
穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测。
目前，FISH已成为一种常见检测手段，国内外广 泛地用于产前、产后遗传病诊断及血液肿瘤、实体 瘤等方面的检测。 （欧美发达国家应用FISH产前诊断检测染色体异常占 30-40%）。
技术优势
缺点：
• 目前FISH主要集中在DNA水平方面检测，而针对 RNA这块比较困难。
如果针对ALK设计一个探针，但是如果发生了融合， 也不能确定是何种融合类型。
技术优势
设计已知融合基 因的探针，比如 针对ALK和 EML4的，ALK 全部用红色探针 覆盖，EML4用 黄色探针覆盖， 正常就是红黄分 开，融合就是红 黄在一起。
ALK EML4技术优势来自设计已知融合基 因的探针，比如 针对ALK的，用 红色和黄色覆盖 ALK基因的上下 游区域，正常就 是红黄在一起， 融合就是ALK发 生了断裂就是红 黄分开了
2024年分子诊断相关项目实施方案
供应商选择
建立严格的供应商筛选和评估机制，选择具有稳定供货能力 、良好信誉和合理价供应商的沟通和协作，建立长期稳定的合作关系，实 现供应链的整合和优化，降低采购成本，提高采购效率。同 时，建立原材料库存管理制度，合理控制库存量，避免浪费 和损失。
通过定期召开项目进展会议、收集进度数据 、分析偏差原因等方式，及时掌握项目进展 情况，确保按计划推进。
成果评价指标体系构建
确定核心评价指标
结合项目目标和实施内容，确定能够反映项目成果的核心评价指 标，如诊断准确率、检测速度、成本效益等。
建立综合评价指标体系
在核心评价指标的基础上，构建包括技术创新、市场推广、社会效 益等多个方面的综合评价指标体系，全面评估项目成果。
推动科研成果转化
将研究成果转化为实际应用，推动分 子诊断技术的产业化发展。
提高疾病诊断水平
通过应用新型分子诊断技术，提高疾 病诊断的准确性和及时性，为患者提 供更好的医疗服务。
培养专业人才
通过项目实施，培养一批具备分子诊 断技术研发和应用能力的专业人才。
02 项目实施内容与步骤
关键技术研发与创新点
应用领域广泛
分子诊断技术已广泛应用于遗传病筛查、肿瘤诊 断、病原体检测、个性化医疗等多个领域。
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市场需求增长
随着人们健康意识的提高和医疗水平的进步，分 子诊断技术的市场需求不断增长。
市场需求及前景分析
精准医疗需求 公共卫生安全
科研需求 未来发展趋势
随着精准医疗的不断发展，分子诊断技术在疾病诊断、治疗和 预防方面的作用日益凸显。
2024年分子诊断相关 项目实施方案
汇报人：
2024-02-05
目录
Contents
分子诊断知识科普
分子诊断知识科普分子诊断是一种基于分子生物学和遗传学原理的诊断方法，通过分析个体的基因、蛋白质或其他分子水平的信息，来判断其是否患有某种疾病或具有某种特定的遗传变异。
分子诊断可以通过检测基因突变、基因表达水平、蛋白质标记物等来识别疾病的存在或发展状态。
与传统的疾病诊断方法相比，分子诊断具有更高的准确性和灵敏度。
传统的诊断方法主要依靠临床症状、体征和影像学检查等，但这些方法往往无法提供足够的信息来进行准确的诊断。
而分子诊断则可以直接检测疾病相关的分子标记物，从而提供更为准确的诊断结果。
一、分子诊断的基本原理分子诊断的基本原理是通过检测和分析个体的基因组、转录组和蛋白质组等分子信息，来确定是否存在某种疾病或病理状态。
这种方法通常需要从患者的血液、体液或组织样本中提取并分析分子，并与正常个体或已知疾病个体的分子信息进行比对。
分子诊断的核心技术包括基因测序、PCR(聚合酶链式反应)、核酸杂交等。
其中，基因测序是一种通过测定DNA序列来获取个体基因信息的方法。
PCR是一种通过扩增DNA片段来增加检测灵敏度的方法。
核酸杂交则是一种通过将目标序列与一段互补的DNA或RNA序列结合来检测目标序列的方法。
通过这些技术，分子诊断可以检测到包括遗传疾病、感染病、肿瘤等在内的多种疾病。
例如，通过检测BRCA1和BRCA2基因的突变可以判断一个人是否患有乳腺癌或卵巢癌的遗传风险。
通过检测某种病原体的DNA或RNA可以确定感染者的感染状态。
通过检测肿瘤细胞中的特定基因突变可以确定肿瘤的类型和治疗策略。
二、分子诊断的应用领域分子诊断在医学领域有着广泛的应用。
下面将介绍一些常见的应用领域。
1. 遗传疾病诊断：分子诊断可以通过检测个体的基因突变来确定遗传疾病的存在和风险。
例如，通过检测孩子的基因突变可以确定其是否患有遗传性疾病，如先天性心脏病、遗传性失聪等。
2. 传染病诊断：分子诊断可以通过检测病原体的DNA或RNA来确定感染病的存在和类型。
分子诊断及其临床应用
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分子信标 molecular beacon）
分子信标是一种茎环结构的双标记寡核苷酸探针。 分子信标的茎环结构中，环一般为 15-30 个核苷酸长， 并与目标序列互补；茎一般 5-7 个核苷酸长，并相互配对 形成茎的结构。荧光基团连接在茎臂的一端，而淬灭剂则 连接于另一端。 在此结构中，位于分子一端的荧光基团与分子另一端 的淬灭基团紧紧靠近。此时，荧光基团与淬灭基团形成 FRET结构，致荧光淬灭。 在变性后退火复性过程中，分子信标与靶DNA结合， 茎环结构打开成链状，荧光基团与淬灭基团分开，产生荧 光。
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遗传性疾病 基因突变：单基因病 遗传风险因素
感染性疾病
病原微生物鉴定，定 量，分型，耐药检测
肿瘤
诊断，分型，治疗 检测，耐药
临床常用的分子诊断技术：
PCR扩增（临床最常用） 探针杂交技术 测序技术 片段分析技术 等
分子诊断技术：
实时荧光定量PCR技术 PCR-探针杂交技术 PCR-测序技术
临床科研常用
常规PCR技术： 对PCR扩增反应的终产物进行半定量 及定性分析
普通PCR
荧光定量PCR
定量PCR技术： 对PCR扩增反应中每一个循环的产物进行定量及定性分析
实时荧光（定量）PCR荧光示踪方法
• 荧光染料法：SYBR Green 1 ，EB
• 荧光探针法：基于FRET(荧光共振能量转移) 技术 Taqman(水解探针) Hybridization probe(杂交探针) Molecular Beacon(分子信标)
Taqman 探针（水解探针）
R
Q
R Reporter Q Quencher
5’端标记荧光基团，3’端标记淬 灭基团，探针完整时，没有荧光，探 针断裂后，在激发光的作用下，荧光 基团产生荧光；
一、项目名称基于临床分子诊断技术的基础研究及临床推广
一、项目名称：基于临床分子诊断技术的基础研究及临床推广应用二、推荐单位：四川省教育厅三、项目简介本项目属于实验诊断学领域，分子诊断技术因具有高敏感度和高特异度等优点，是临床检验领域的主要发展方向，但由于该技术所需的平台与人员条件相对较高，使得该技术在国内外临床实验室应用并不广泛。
基于此，课题组历时13年，在国家自然科学基金等资助下，进行了以下研究。
1.课题组率先创建了多种分子诊断新技术：①课题组首次建立了基于新型仿生通道的活细胞传感技术及用于核酸和抗体检测的蛋白纳米孔道技术，可定量探测离子、质子和生物大分子，具有高灵敏度、高特异性、实时分析的特性，为核酸和疾病标记物检测的应用提供了新的平台，为单细胞、单分子临床检验提供了理论和技术基础。
②创新性建立了多重PCR和荧光多重PCR为主要检测技术的STR分型检测手段，成功运用法医DNA鉴定和临床分子诊断。
2.创新开展了多种疾病的遗传易感基因研究：筛选出了多种疾病相关的分子诊断标记物，为疾病的临床分子诊断提供了重要的科学依据。
①首次发现rs28683050位点可能是COPD发生发展的易感基因；②首次报道了TLR信号通路的miRNAs相关的SNPs与活动性肺结核的相关性；③首次在结核病研究领域对Wnt信号通路SNPs遗传多态性进行了系统性的研究。
3.国内率先成立了多平台分子诊断中心：①采用实时荧光定量PCR和DNA测序技术建立了感染性疾病检测平台，可进行乙肝、丙肝、艾滋及结核等十余种病原体检测；②采用实时荧光定量PCR及双环探针技术，开展了融合基因、肿瘤靶向药物EGFR基因及Kras基因突变检测；采用二代测序技术开展了肿瘤易感基因筛查及白血病相关基因突变筛查；③采用多重连接探针扩增和片段分析技术，建立了遗传性疾病检测平台，研发了试剂盒并申请发明专利，开展了多项遗传病检查；④采用荧光杂交测序方法建立了精准药物基因检测平台，开展了药物基因检测；⑤采用Luminex流式荧光杂交分型技术建立了移植配型检测平台，为肾脏等器官移植进行抗原和抗体检测。
分子诊断学
第一章分子诊断学：以分子生物学理论为基础，利用分子生物学技术和方法研究人体内/外源性生物大分子体系的存在、结构或表达调控变化，为疾病的预防诊断治疗和转归提供信息和依据。
基因：有功能的DNA片段，含有合成有功能的蛋白质多肽琏或RNA所必需的全部核苷酸序列，是遗传的结构和功能单位。
分子诊断学主要任务利用基础医学和生命科学理论和方法探讨疾病的发生发展和转归的分子机制；为整个疾病过程寻求准确特异的分子诊断指标；利用分子生物学技术为这些分子诊断指标建立临床实用可靠的检测方法。
应用：诊断感染性疾病，遗传病，肿瘤，个体化医疗。
特点：①直接以疾病基因为探查对象，属于病因学诊断②灵敏度高，便于早期诊断及疾病预防③以基因分析为基础，特异性高。
第二章基因（Gene Mendelian Factor）：也称为遗传因子，是控制性状的基本遗传单位（突变单位、重组单位和功能单位），是指线性排列在染色体上的，携带有一定遗传信息，具有一定结构，并能进行自我信息复制与传递，控制生物个体性状表现的一段DNA或RNA序列常常称为“染色体基因”基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。
基因组大小又称C值，指一种物种单倍体基因组的DNA总量。
常用碱基数目或碱基对数目来描述。
C值大小基本反映生物其进化程度，是特异的，物种不同C值差异大。
C值矛盾又称C值悖论，指生物的进化程度与基因组大小不完全成比例的现象。
操纵子：操纵基因与其控制下的结构基因共同组成的功能单位。
断裂基因：指基因的内部存在间隔区，间隔区的DNA序列与该基因所决定的蛋白质没有关系。
间隔区又称为内含子。
出现在成熟RNA中的有效区段称为外显子。
真核生物的基因结构及其功能真核生物：所有含细胞的(单细胞或多细胞)生物的总称，包括动物、植物、真菌和原生动物。
特点：均含有细胞核（核遗传）和其他细胞器（核外物质遗传/胞质遗传/母系遗传），如线粒体或叶绿体，有细胞骨架。
真核生物基因特点(有细胞核基因组和细胞器基因组之分)：A.1 细胞核基因组由染色体DNA组成，分子量大，结构复杂，与蛋白质结合。
免疫及分子诊断技术介绍
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退火温度（AnnealingTemperature）是指引物和模板结合时候的
温度参数，当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。它是影响 PCR特异性的较重要因素。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目 的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从 55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。
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艾滋病毒进入人体后，需要经过一段时间血液才会产生艾滋病毒抗体，在 此期间抗体检测呈阴性，这段时间即为窗口期。感染者体内的HIV数量会 在这时达到一个峰值，传染性极强。急性感染期也出现在这段时间。多数 人在感染艾滋病毒后有3至12周“窗口期”，在此期间，人体仍在产生艾 滋病毒抗体，但这些抗体尚无法测出。
分子生物学技术
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Kary Banks Mullis 1993年诺贝尔化学奖
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分子诊断检测项目介绍-分子诊断检测项目介绍前言
天津万盖得门诊部是一家由海外归国人员为主体创办的股份制民营医疗机构, 以引进、开发和推广新的医学检验技术为要紧经营内容。
万盖得三字来自英语“V anguard”的音译，其意译为前哨或尖兵的意思，这表明了创办者“敢为天下人先”的意愿。
期望能够凭借自身的知识、技术、信息和观念优势，为国内医学检验方面的技术进步以及医疗体制的改革做出奉献。
万盖得将以严肃、严谨和科学的态度开展各项业务，为医院和社区提供高质量的医疗和检验服务。
分子诊断是我们第一开展的实验诊断服务，这是一个全新的、被称之为实验诊断一场革命的领域，因为分子技术的临床应用差不多使专门多用常规技术全然无法检测的病理变化能够被精确的测到。
我们第一开展的用细胞DNA定量分析系统进行肿瘤的早期诊断，处于世界领先地位，这项技术已使脱落细胞的检查成为一项客观、准确、自动化和高通量的肿瘤筛查和早期诊断的技术平台。
我们自主开发的多重PCR检测性病病原、病毒和难以培养的细菌性病原，将给感染性疾病的诊断和治疗带来新的突破性进展。
在医疗服务方面，我们打算引入发达国家中行之有效的家庭大夫服务模式，为中等收入以上的家庭和个人提供个体化和优质的医疗和保健服务，引导我们的服务对象建立起防病重于治病的观念，主动地提升自身的保健意识。
与同等规模的医疗机构，保持一种即竞争又合作的新型关系。
与大型综合医院和专科医院，我们期望能建立起互补和互利的协作关系。
我们相信，万盖得在各级领导和医务界同仁的关怀和支持下，定能进展壮大。
万盖得首席科技顾咨询
临床微生物学博士
吴尚为
2006年元月
分子诊断名目
细胞分子生物学检测
细胞DNA定量分析系统简介
细胞DNA定量分析的差不多原理
细胞DNA定量分析的临床应用价值
不同DNA指数（DI）在宫颈癌普查中的临床意义
宫颈癌和宫颈癌的早期诊断
宫颈癌筛查和常规宫颈细胞学检查
宫颈细胞学检查的方法
宫颈细胞DNA定量分析
细胞DNA定量分析的其他用途
核酸检测技术
差不多概念
多聚酶链反应-PCR
人类乳头状瘤病毒的检测
人类乳头状瘤病毒
人类乳头状瘤病毒与宫颈癌
人类乳头状瘤病毒对宫颈癌的“预警”作用
万盖得宫颈癌筛查—预警—监测和早期诊断系统宫颈标本采集、送检注意事项
慢性生殖道感染和性传播疾病病原的检测
慢性生殖道感染和性传播疾病
引起慢性生殖道感染和性传播疾病的常见病原
诊断困难造成对发病率统计的困难
实验检测方法及优、缺点
分子扩增技术的应用促进了对性病的了解
PCR已成为检测性病病原的金标准
万盖得多重PCR检测性病病原
脑脊液中感染病原的检测
中枢神经系统感染和诊断
人类疱疹病毒与中枢神经系统感染
脑脊液中检测病毒的困难
万盖得多重PCR检测脑脊液中的疱疹病毒
细菌性中枢神经系统感染
PCR检测脑脊液中细菌的优越性
万盖得多重PCR检测脑脊液中的致病菌
呼吸道感染病原的检测
呼吸道感染
呼吸道感染病原的检测
PCR检测法的优越性
万盖得多重PCR检测细菌性非典型肺炎病原PCR是检测病毒非典型肺炎病原的最好方法
万盖得多重RT-PCR检测病毒性非典型肺炎病原
细胞分子生物学检测
细胞DNA定量分析
细胞DNA定量分析系统简介
系统组成：数码显微镜、自动送片机、运算机和先进的软件系统（自动化操纵软件和DNA定量分析软件）。
Feulgen染色中细胞核着色深浅度与DNA的含量正有关。
细胞DNA的定量检测是通过逐一检测每一个细胞核的积分光密度值（IOD）实现的。
因此IOD代表细胞核DNA的含量。
显微镜拾取细胞涂片的光学信号后，被数码相机转化为模拟电信号，在经模—数转化成为数字信号，经运算机处理，将运算产生的各种参数、储存的图像和数据进一步分析诊断。
对比设置：A. 染色对比:预备一批已知DNA含量的细胞涂片, 每次染色
取一张对比, 染色结果的IOD值要在对比片均值±10%以内。
B．内对比细胞: 检测同一切片上100个正常细胞作照。
4、工作效率：A：扫描时刻:10~15分/例，24小时自动扫描诊断;
B: 细胞病理学大夫仅对＜10%的可疑病例进行复查。
细胞DNA定量分析的差不多原理
每一个正常的细胞核内均有23对染色体，并有固定数量不变的DNA 含量（7pg）。
占人体90%的细胞处于细胞周期总的静止期（Go），其DNA 指数（DI）为1。
只有当细胞增殖时才有DNA含量的增加。
G1期是细胞增殖周期中的第一个时期，现在细胞尚未开始增殖，DI仍为1。
S期为DN A复制期，DNA倍增，DI为1~2。
G2为有丝分裂期，DI为2（14pg）。
M期为有丝分裂期，细胞分裂为二个子细胞，DNA含量又复原到7pg。
DN A是细胞生长、分化和繁育的基础。
致癌因子引起基因的突变，导致DNA 含量和信息的改变，即使DNA仅有2%的变化，都可被现代的DNA图像分析系统所检出。
细胞形状学改变如核增大、染色质染色加深、核形状不规则等外在表现均提示细胞DNA的变化。
细胞DNA定量分析的临床应用价值
提升细胞学诊断的准确性：80~90%的实体肿瘤细胞其DNA为非整倍体，即异倍体。
DNA异倍体细胞的显现是提示恶性细胞的标志。
细胞恶变
过程中，显现DNA含量的改变较形状学改变要早, 而且前者为量化诊断,更客观。
肿瘤的预后评估：整倍体系列的肿瘤其预后较非整倍体好。
指导肿瘤的治疗：经放、化疗治疗后，异倍体细胞是否消逝直截了当反映抗癌治疗的疗效好坏。
宫颈癌和宫颈癌的早期诊断
中国是宫颈癌高发生率和高死亡率的国家
宫颈癌是女性的要紧恶性肿瘤之一，每年全世界有50余万新发病例，其中大约1/3来自中国。
在中国，宫颈癌造成的死亡率也专门高，以省市为单位的死亡率为3/10万（西藏）到20.5/10万（山西）。
中国宫颈癌的平均死亡率（9.9/10万），甚至高于一些发达国家的宫颈癌发病率，如加拿大为3/10万。
全球不同国家或地区宫颈癌新发病数
（WHO上世纪80年代中期的资料）
中国以省市为单位的死亡率统计（1/10万）
早期发觉
宫颈癌如能早期发觉是能够治愈的
正常癌前病变浸润癌。