3种培养基植物组织培养实验方案
植物组织培养实验报告
摘要：以大豆子叶为外植体，在MS 培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。
实验结果显示第 2 组即 MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即 MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。
关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织1.1 实验材料：大豆子叶1.2 实验试剂与仪器〔1〕试剂： 75%酒精、MS 干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂〔NAA、2，4-D、KT、6-BA〕、无菌水、升汞、 NaOH 溶液〔2〕仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。
1.3 实验方法培养基的配制与灭菌1.3.1.1 配制培养基的准备阶段〔1〕准备 80 个培养试管及封口膜， 2 个小培养皿、 1 个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每一个培养试管、润洗一下。
带晾干后将试管编号 1-80；〔2〕在称量纸上用百分之一天平分别称取 1.5g 琼脂 4 份， 7.5g 蔗糖 4 份，在烧杯里用千分之一天平上称取 1.185g MS 干粉 4 份〔烧杯不要清洗〕；〔3〕剪小圆纸片 40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。
然后分别用报纸包好。
〔4〕把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。
1.3.1.2 配制培养基〔1〕在装有 MS 干粉的烧杯中按下表参加植物生长调节剂实验所用的所有激素浓度均为 0.5mg/mL编号培养基配置激素的加样量(ml)6-BA N A A K T2,4-D1 23 4 MS+6-BA〔1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L)MS+KT〔1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)0.51.00.250.50.250.50.51.0〔2〕用量筒量取250ml 〔稍多〕蒸馏水，取一个不锈钢杯子参加150ml 蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾 2min，再参加混合好的 MS 培养基 1 号和蔗糖，混合沸腾 2min，用剩余的蒸馏水定容至 250ml；〔3〕当温度降到 60℃摆布时，将溶液 pH 调至 5.8，普通加 4 滴 NaOH 溶液即可；〔4〕取编号 1-20 的培养试管，用大量注射器以每瓶 12.5ml 摆布培养基分装在培养试管中，用封口膜封口， 4 支一捆捆扎好。
植物组织培养实验报告
院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师）年级13级学号17130208 组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6指导老师实验名称植物组织培养综合实验一、实验目的1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法；3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法；4.了解组织培养的基本程序；5.掌握接种的方法和材料的培养过程；6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术；7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体；8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别二、实验原理1.植物细胞的全能性一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。
植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。
2.植物细胞表现出全能性的条件1.离体状态；2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）；3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型3.无菌条件把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。
用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。
在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。
组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。
4.脱分化与愈伤组织已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。
脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。
所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。
5.培养基植物组织培养常用的培养基为MS培养基。
常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。
第五章植物组织培养技术实验方案
第五章植物组织培养技术实验方案一、实验目的：1.了解植物组织培养的基本原理和方法。
2.掌握植物组织培养的实验操作技巧。
3.培养植物组织并观察其生长和发育情况。
二、实验材料和设备：材料：麦芽糖、琼脂、植物激素（如IAA、ABA、GA3等）、幼绿豆胚轴组织。
设备：平板培养器、显微镜、高压锅、移液器、无菌操作器具等。
三、实验步骤：1.制备琼脂培养基a）称取适量琼脂加入适量蒸馏水中，搅拌均匀。
b）高压锅加热至沸腾，放入琼脂溶液，保持沸腾10-15分钟，使琼脂充分溶解。
c）将高压锅冷却后取出，倒入洁净的培养器中，晾凉并凝固。
2.准备植物组织a）将绿豆种子浸泡于水中，待种子发芽至一定程度。
b）取出绿豆胚轴组织，用刀切割成适当大小的组织片段。
3.制备植物组织培养基a）取适量砂糖和植物激素（如IAA、ABA、GA3等），溶解于蒸馏水中。
b）加入适量制备好的琼脂培养基，搅拌均匀。
4.进行组织培养a）将准备好的植物组织片段放入培养器中，倒入制备好的植物组织培养基，使组织片段完全浸没其中。
b）盖上培养器盖子，用透明胶带密封，防止细菌浸入。
c）将培养器置于适当的温度和光照条件下，进行培养。
5.观察和记录a）每天观察组织的生长和发育情况，记录变化。
b）使用显微镜观察细胞结构和细胞分裂情况。
c）观察是否有细菌感染或其他异常情况。
d）记录实验数据，如生长速率、生长周期等。
四、实验要点：1.所有实验操作都要在无菌环境下进行，避免细菌和其他微生物的污染。
2.组织培养基的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。
3.培养条件也根据不同植物种类的要求进行调整，如温度、光照等。
4.实验中要注意观察并记录实验数据，对结果进行分析和总结。
五、预期结果：通过植物组织培养技术，可以观察到植物组织的生长和发育情况，研究不同因素对植物生长的影响，培养出健康的植物组织，为其他相关研究提供基础数据和实验材料。
六、安全注意事项：1.操作时要小心使用实验器具，避免切伤或烫伤等事故发生。
植物组织培养实验指导
实验一培养器皿的洗涤与环境的消毒及培养基母液的配制实验二植物组织培养的培养基配制、分装与灭菌实验三番茄子叶愈伤组织诱导培养阿实验四马铃薯茎段的扩繁培养实验五海棠叶片的离体培养实验六胡萝卜离体根的培养实验七组织培养物的继代培养实验八马铃薯脱毒与组培快繁实验九沙棘组织培养实验方案设计及实施实验一培养器皿的洗涤与环境的消毒及培养基母液的配制常用组织培养的玻璃容器及接种用的玻璃器皿如锥形瓶、培养皿、试管、配置培养基用的试剂瓶、烧杯等以及金属的镊子、剪刀、接种铲等，用前必须经过洗涤，有的还要消毒。
一器皿的洗涤方法1.一般玻璃器皿，特别是第一次使用的新的玻璃器皿，首先用清水充分浸泡后用碱水刷洗，然后用清水充分除去碱液，再用无离子水或蒸馏水刷洗干净后烘干或晾干，待用。
检查玻璃器皿是否洗刷干净的标准是：洗后的玻璃器皿沾水后，布满于整个玻璃表面并形成完整的水膜，而不会有不均匀的水珠出现。
当玻璃器皿十分肮脏，带有不同的污渍时，则需要特殊的洗涤液浸泡4-12小时，然后再用清水漂洗干净，较常用的是铬酸洗液，它是用重铬酸钾加入浓硫酸配制而成，其腐蚀性极强，对衣物、皮肤等均十分有害，一般尽量避免使用。
目前生产有各种合成的化学洗涤剂，可清除各种污物，使用方便，是实验室内常用的。
2.金属用具在第一次使用前必需先用四氯化碳或乙醚等有机溶剂将其表面的防锈油擦洗干净，用布擦干方可使用，每次使用后需用水清洗并保持干燥。
二器皿及环境的消毒方法器皿的消毒方法分为：1.物理方法又可细分为：（1）干热消毒法（Dry heat sterilization）：适用于玻璃器皿、金属和一些不怕高温的物品，如培养皿、锥形瓶、各种试剂瓶、刀、剪、镊子等。
一般在150℃烘箱内烤2-3小时，在消毒灭菌前将所要消毒的物品包装于固定容器或耐热的包装材料内（如饭盒、培养皿灭菌筒、铝箔纸等），防止在使用前的再次污染。
（2）湿热消毒法（Wet heat sterilization）：不能用干热消毒的物品，如配置好的培养基、易燃的棉花、工作服、口罩等，要使用高压灭菌锅，通过水蒸气压达到灭菌消毒的目的，常用气压为15磅或1.2kg/cm2，温度为121-124℃，灭菌20分钟即可达到杀灭细菌、消毒的目的。
植物组织培养实验(2)
（二）实验原理
在一定的条件下，不同器官（根、茎、叶 等）来源的外植体均可以脱分化形成愈伤 组织。
（三）实验材料和用具
实验材料：黄瓜无菌苗 实验药品： MS、 1mg/ml NAA 、 1mg/ml 6-BA、
1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸馏水、灯 用酒精、70％酒精、无菌水 。 灭菌培养基：MS1 （MS+1.0mg/LBA+0.5mg/L NAA）
实验用具：
天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三 角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。
无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、 解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、 滴管、记号实验步骤
1. 配制以下培养基各100ml ： MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAA MS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAA MS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAA ① 取200ml烧杯3只，标记，各加入4g MS培养基和
4. 接种 ① 进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒
精灯。 ② 解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。 ③ 再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润
湿。 ④ 在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊
子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。 ⑤ 剪成5～10mm小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后
剪成50mm2左右的小片），每平皿接种3～5段（片）。 每组接种8瓶，根、茎段、茎尖、叶各2瓶。 ⑥ 光照培养箱25℃暗培养。
作业
1. 1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿 内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染 菌原因。
植物组织培养实验
取后各放入50-100ml的烧杯中，加蒸馏水约
50ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中，
转移到储液瓶中，贴好标签保存于4℃冰箱。
配制培养基时，每配制1000ml培养基取此液
10ml。
表2 MS培养基微量元素的称量及定容（50×） MnSO4.4H2O 22.3 1115 ZnSO4.7H2O 8.6 430 CuSO4.5H2O 0.025 1.25 H3BO3 6.2 310 Na2MoO4.2H2O 0.25 12.5 KI 0.83 41.5 CoCl2.6H2O 0.025 1.25
培养基配制
移母液 确定配方 称取蔗糖、琼脂 二次定容 定 容 培养基熬制 调pH值
接
种
灭
菌
扎
口
分
装
母液吸取量的计算
公式1：
配制培养基的升数 母液吸取量= 母液体积×———————— 母液浓缩倍数 公式2： 培养基要求的含量 母液吸取量= —————————— 母液每ml的含量
调pH值：
•ｐH影响培养基的硬度 ｐH ＞6.5 ｐH ＜5.0 培养基会变硬 培养基不易凝固
容于500ml重蒸馏水中。
表1 MS培养基大量元素的称量及定容（5×） KNO3 1900 9500 NH4NO3 1650 8250 KH2PO3 170 850 MgSO4.7H2O 370 1850 CaCl2.2H2O 440 2200 定容于500ml重蒸馏水中，最后加入 CaCl2.2H2O，每升培养基取此液100ml
表3 MS培养基铁盐母液的称量及定容（100×） FeSO4.7H2O Na2-EDTA.2H2O 27.8 37.3 2780 3730
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取
菊花的组织培养实验设计
菊花的组织培养实验设计引言概述：菊花的组织培养是一种常见的实验方法，它可以用来研究菊花的生长发育、遗传变异以及植物组织的再生能力等。
本文将介绍一种菊花的组织培养实验设计，包括实验材料的准备、实验步骤的安排以及实验结果的分析等。
一、实验材料的准备1.1 菊花的种子：选择健康、无病虫害的菊花种子作为实验材料。
1.2 培养基：准备含有适当濃度的植物激素的培养基，如MS培养基。
1.3 高温消毒器具：为了防止细菌和真菌的污染，需要准备高温消毒的器具，如高温培养箱。
二、实验步骤的安排2.1 种子表面消毒：将菊花的种子表面进行消毒处理，以杀灭种子表面的细菌和真菌。
2.2 菊花的离体培养：将消毒后的种子放置在含有培养基的培养皿中，进行离体培养。
2.3 培养条件的调节：调节培养皿中的温度、光照和湿度等条件，以促进菊花的生长和发育。
三、实验结果的分析3.1 菊花的生长情况：观察菊花在培养基上的生长情况，包括根系的形成、茎的生长以及叶片的展开等。
3.2 菊花的再生能力：观察菊花在培养基上的再生能力，包括新芽的形成、花蕾的发育以及花朵的开放等。
3.3 菊花的遗传变异：通过观察不同菊花品种在培养基上的生长情况和形态变化，分析菊花的遗传变异情况。
四、实验注意事项4.1 实验环境的准备：实验室应保持整洁，避免细菌和真菌的污染。
4.2 实验操作的规范：实验操作要严格按照实验步骤进行，避免误操作导致实验结果的偏差。
4.3 实验结果的记录：实验过程中要及时记录实验结果，以便后续的数据分析和讨论。
综上所述，本文介绍了一种菊花的组织培养实验设计，包括实验材料的准备、实验步骤的安排以及实验结果的分析等。
通过这种实验方法，可以深入研究菊花的生长发育、遗传变异以及植物组织的再生能力等方面的问题。
希望本文能为菊花的组织培养实验提供一定的参考和指导。
植物组织培养实验教案
一、教案基本信息1. 课程名称：植物组织培养实验教案2. 课程类型：实验课3. 课时：2课时4. 年级：八年级5. 学科：生物二、教学目标1. 让学生了解植物组织培养的基本概念和原理。
2. 培养学生运用实验方法探究植物组织培养的能力。
3. 提高学生对生物技术的认识，培养学生的创新意识和实践能力。
三、教学内容1. 植物组织培养的定义和意义。
2. 植物组织培养的基本原理。
3. 植物组织培养的步骤和操作方法。
4. 植物组织培养的应用实例。
四、教学重点与难点1. 教学重点：植物组织培养的基本原理、步骤和操作方法。
2. 教学难点：植物组织培养过程中条件的控制和实验操作技巧。
五、教学过程1. 课前准备：教师准备植物组织培养实验所需的材料和仪器。
2. 导入新课：介绍植物组织培养的基本概念和意义，激发学生的兴趣。
3. 讲解原理：讲解植物组织培养的基本原理，让学生理解其科学依据。
4. 演示实验：教师演示植物组织培养的实验步骤和操作方法，强调注意事项。
5. 学生实验：学生分组进行植物组织培养实验，教师巡回指导。
6. 总结拓展：总结植物组织培养实验的原理和操作要点，引导学生思考植物组织培养在生产生活中的应用。
六、教学评价1. 学生实验报告的质量：评估学生在实验过程中的观察、操作和分析能力。
2. 学生课堂表现：评估学生在课堂上的积极参与程度、提问和回答问题的能力。
3. 学生作业完成情况：评估学生对课后作业的认真程度和思考深度。
4. 学生小组合作能力：评估学生在实验过程中的团队协作和沟通能力。
七、实验材料与仪器1. 植物材料：选择具有良好再生能力的植物组织，如茎段、叶片等。
2. 培养基：含有植物激素、营养物质和抗生素的培养基。
3. 容器：无菌培养瓶、三角瓶等。
4. 仪器：显微镜、消毒器、恒温培养箱、移液器等。
八、实验步骤与操作方法1. 准备材料：选择健康的植物组织，切割成适当大小，进行消毒处理。
2. 制备培养基：按照配方配制培养基，分装到培养瓶中。
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植物组织培养实验方案
一、实验仪器：
烧杯、三角瓶、玻棒、电子天平、药匙、量筒、三角瓶、镊子、剪刀、手术刀、酒精灯、容量瓶（1L）、PH试纸、移液管、牛皮纸、橡皮筋、培养皿、高压灭菌锅、无菌操作台
二、实验药品：
大量元素：硝酸钾KNO3、硝酸铵NH4NO3、磷酸二氢钾KH2PO4、硫酸镁MgSO4.7H2O、氯化钙CaCl2.2H2O、硝酸钙Ca(NO3)2.4H2O、氯化钾KCl
微量元素：硼酸H3BO3、硫酸锰MnSO4.4H2O、硫酸锌ZnSO4.7 H2O、钼酸钠Na2MoO4.2 H2O、硫酸铜CuSO4.5 H2O、氯化钴CoCl2.6H2O、碘化钾KI、浓硫酸Concentrated H2SO4
注：NB培养基中用浓硫酸代替碘化钾
铁盐：乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)
有机成分：肌醇Myo-inositol、盐酸硫胺素Thiamin HCl VB1、盐酸吡哆醇Pyridoxin HCl VB6、烟酸Nicotinic acid VB5或VPP、甘氨酸、泛酸钙Calcium pantothenate、腺嘌呤Adenine、L-半胱氨酸L-cysteine、生物素D-biotin
葡萄糖、琼脂
70%酒精，NaClO2%，0.1%生汞（HgCl2）
三、实验材料：
无性系菊科蒿属植物蒌蒿嫩茎、叶、根
四、实验步骤
1、培养基的配制
以MS为基本培养基，附加不同浓度的IAA、NAA和6-BA、琼脂0.7%，蔗糖3%，PH5.8~6.0，于121℃下灭菌20min，放置备用
2、外植体的取材与消毒
采取直径0.8cm左右的嫩芽、嫩茎、嫩根，用清水将其洗干净，再用75%的酒精浸泡30s，再用0.1%HgCl2灭菌7min或者用2% NaClO浸泡30min，无菌水冲洗4~5次后备用。
3、接种培养
在无菌条件下，用手术刀切去部分枝叶，接种于诱导培养基上，诱导芽的分化。
4、培养条件
每天光照10h，光照强度为2000lx，温度25℃±1℃
5、继代培养
待丛生芽生成后，将丛生芽切成单株接种到继代培养基（MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA）上
6、生根与移栽
待继代获得较多丛生芽后，将丛生芽切成单株，大部分接种到生根培养基（MS+0.25mg/LNAA+0.25mg/LIAA）上，其余再继代一次。
待生根后，将生根试管苗开盖炼苗，移栽。
五、实验结果与分析：
NB培养基
NB Medium
NB培养基产品价格用途：用于植物组织培养
【求助】请教用作水稻愈伤诱导再生的CC培养基配方
以前用MS,N6基,现在做籼稻,需要用CC基,可是查了不少地方，都没有配方。
请有具体配方的战友告知,或者告知原始出处.
PM偶。
或者，EMAIL: daofu001@
非常感谢!
以下为抄录
1，CC无机大量：20×母液（g/L）
KNO3 24.24
NH4NO3 12.80
KH2PO4 2.72
MgSO4.7H2O 4.94
CaCl2.2H2O/ CaCl2 11.16/8.8
2，CC无机微量I：100×母液（g/200ml）MnSO4.4H2O/MnSO4.H2O 0.233/0.169
H3BO3 0.062
ZnSO4.7 H2O 0.115
3，CC无机微量II：1000×母液（mg/500ml）KI 4.5
Na2MoO4 120
CuSO4.5 H2O 12.5
CoCl2.6H2O 14
4，CC有机100×母液（g/100ml）
VB1 0.17
VB6 0.02
烟酸0.12
肌醇 1.8
甘氨酸0.04
5，CC铁盐100×母液（g/L）
FeSO24.7H2O 2.78
Na2.EDTA 3.73
配制1L CC培养基，加
麦芽糖20g
甘露醇25g
phytagel/ Agar 3g/8g
VC 60mg。