实验三十三叶绿素含量的测定(分光光度法)(精)
测定叶绿素含量实验报告
测定叶绿素含量实验报告测定叶绿素含量实验报告引言：叶绿素是植物中最重要的色素之一，它在光合作用中起着至关重要的作用。
测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的生理状态和光合效率。
本实验旨在通过分光光度法测定叶绿素含量，并探讨影响叶绿素含量的因素。
材料与方法：1. 实验材料：新鲜的植物叶片、乙醇、丙酮、二氯甲烷、石英比色皿、量筒、离心机、紫外可见分光光度计等。
2. 实验步骤：a. 将适量的新鲜叶片切碎，并加入适量的乙醇中，用离心机离心10分钟，使叶绿素溶解于乙醇中。
b. 取适量的叶绿素提取液，加入丙酮和二氯甲烷，混合均匀。
c. 用量筒将混合液转移到石英比色皿中，放入紫外可见分光光度计，设置波长为665nm和649nm，测定吸光度。
d. 计算叶绿素含量。
结果与讨论：通过实验测定，我们可以得到不同植物叶片的叶绿素含量。
在实验中，我们发现不同植物叶片的叶绿素含量有所差异。
这是因为不同植物对光合作用的需求和适应能力不同，导致叶绿素合成的数量和比例不同。
此外，我们还发现在同一植物的不同部位，叶绿素含量也存在差异。
例如，在一棵树上，树叶的叶绿素含量可能比树干或树枝的含量高。
这是因为树叶是进行光合作用的主要部位，需要更多的叶绿素来吸收光能。
除了植物本身的因素外，环境条件也会对叶绿素含量产生影响。
光照强度、温度、水分等因素都会对叶绿素合成和降解产生影响。
例如，充足的光照和适宜的温度可以促进叶绿素的合成，而干旱和寒冷的环境则可能导致叶绿素的降解。
在实验中，我们使用了分光光度法来测定叶绿素含量。
这种方法基于叶绿素对特定波长光的吸收特性，通过测量吸光度来间接测定叶绿素的含量。
分光光度法具有操作简便、结果准确等优点，因此被广泛应用于叶绿素含量的测定。
然而，分光光度法也存在一些局限性。
首先，该方法只能测定总叶绿素含量，无法区分不同类型的叶绿素。
其次，该方法对样品的处理要求较高，需要保证样品中的叶绿素完全释放并溶解于提取液中。
因此，在实际应用中，我们需要根据具体情况选择适合的方法来测定叶绿素含量。
叶绿素含量的测定分光光度法
叶绿素含量的测定分光光度法叶绿素是植物和一些原生生物中重要的光合色素之一，它在光合作用中起到接收和转换光能的关键作用。
测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的光合效率和健康状况，以及研究光合作用的机制和调控。
分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法，本文将介绍该方法的原理、实验步骤和数据分析。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量的原理是基于叶绿素对光的吸收特性。
叶绿素分子可以吸收特定波长的光，特别是蓝光和红光，而对绿光的吸收较弱。
利用分光光度计测量叶绿素溶液在不同波长的光下的吸光度，可以通过比较吸光度与叶绿素浓度的标准曲线，计算出待测样品中叶绿素的含量。
二、实验步骤1. 制备叶绿素提取液：将适量的鲜叶片（去除茎和大的叶脉）放入离心管中，加入少量酒精，并用研钵捣碎，使叶绿素释放到酒精中。
然后用酒精将研钵中的残渣洗入离心管中，最后用酒精将叶绿素完全溶解。
注意，酒精的使用要避免火源。
2. 离心沉淀：将叶绿素提取液离心10分钟，以沉淀残渣和悬浮物。
3. 分光光度计测量：取离心后的叶绿素提取液，用分光光度计在特定波长下（如645 nm和663 nm）测量其吸光度。
记录吸光度值。
4. 制备标准曲线：取不同浓度的叶绿素标准溶液，用同样的方法测量其吸光度，记录吸光度值。
5. 计算叶绿素含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
三、数据分析1. 标准曲线的绘制：将各个标准溶液的叶绿素浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标，绘制曲线。
利用标准曲线可以通过待测样品的吸光度值，反推出其叶绿素的浓度。
2. 计算待测样品中叶绿素的含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
四、注意事项1. 实验中应尽量避免阳光直射，以免光线对实验结果的干扰。
2. 操作时应注意安全，避免酒精接触到火源。
3. 叶绿素提取液的制备应充分溶解，避免残渣和悬浮物的影响。
叶绿素测定的实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿素在植物光合作用中的作用。
2. 掌握叶绿素提取和测定的方法。
3. 通过实验，掌握分光光度法测定叶绿素含量的原理和操作步骤。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其含量直接影响植物的光合作用效率。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，通过测定叶绿素a和叶绿素b的吸光度，计算出叶绿素的总含量。
分光光度法测定叶绿素含量的原理：叶绿素a和叶绿素b对光的吸收具有选择性，在一定波长范围内，其吸光度与叶绿素含量成正比。
通过测定特定波长下的吸光度，可以计算出叶绿素含量。
三、实验材料1. 新鲜植物叶片（如菠菜、生菜等）。
2. 95%乙醇溶液。
3. 0.1mol/L硫酸铜溶液。
4. 0.1mol/L氢氧化钠溶液。
5. 分光光度计。
6. 移液器。
7. 烧杯。
8. 试管。
9. 移液管。
四、实验步骤1. 准备实验材料：取适量新鲜植物叶片，洗净、擦干，剪成小块备用。
2. 叶绿素提取：取10g植物叶片，加入50mL 95%乙醇溶液，用研钵研磨至匀浆。
将匀浆转移到50mL容量瓶中，用95%乙醇溶液定容至刻度。
3. 吸光度测定：取适量叶绿素提取液，分别加入0.1mol/L硫酸铜溶液和0.1mol/L氢氧化钠溶液，配制成叶绿素a和叶绿素b溶液。
4. 标准曲线绘制：取一系列已知浓度的叶绿素a和叶绿素b标准溶液，分别测定其在特定波长下的吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度对数值为横坐标，绘制标准曲线。
5. 样品测定：取适量叶绿素提取液，按照标准曲线绘制步骤，测定其吸光度。
6. 计算叶绿素含量：根据样品的吸光度，从标准曲线上查得对应的叶绿素a和叶绿素b浓度，计算叶绿素的总含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制叶绿素a和叶绿素b的标准曲线，相关系数R²均大于0.99，表明标准曲线线性关系良好。
2. 样品测定：根据样品的吸光度，从标准曲线上查得叶绿素a和叶绿素b的浓度，计算叶绿素的总含量。
3. 结果分析：通过对不同植物叶片的叶绿素含量测定，可以发现不同植物叶片的叶绿素含量存在差异，这与植物的种类、生长环境等因素有关。
叶绿素含量的测定实验报告
一、实验目的1. 学习叶绿素提取和分离的方法。
2. 掌握利用分光光度法测定叶绿素含量的原理和操作步骤。
3. 了解不同植物叶绿素含量的差异。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其含量直接影响植物的生长和发育。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，基于叶绿素在不同波长下对光的吸收特性，通过测定其最大吸收峰处的吸光度值，计算出叶绿素的含量。
三、实验材料与仪器实验材料：1. 新鲜菠菜、小麦、水稻等植物叶片。
2. 95%乙醇、无水乙醇、碳酸钙、石英砂等试剂。
实验仪器：1. 分光光度计2. 研钵3. 移液管4. 量筒5. 滤纸6. 比色皿7. 电子天平四、实验步骤1. 样品制备：- 称取新鲜植物叶片0.1g（准确至0.0001g），放入研钵中。
- 加入少量石英砂和碳酸钙，用研杵研磨成匀浆。
- 加入5ml 95%乙醇，继续研磨至叶片组织变白。
2. 叶绿素提取：- 将提取液转移至10ml试管中，用少量95%乙醇冲洗研钵、研杵及残渣，合并于试管中。
- 用滤纸过滤提取液，收集滤液。
3. 叶绿素分离：- 将滤液转移至比色皿中，以无水乙醇为空白，在波长663nm、645nm和652nm处测定吸光度值。
4. 叶绿素含量计算：- 根据吸光度值和标准曲线，计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量。
- 叶绿素总含量 = 叶绿素a含量 + 叶绿素b含量。
五、实验结果与分析以菠菜叶片为例，实验结果如下：| 植物种类 | 叶绿素a含量（mg/g） | 叶绿素b含量（mg/g） | 类胡萝卜素含量（mg/g） | 叶绿素总含量（mg/g） || -------- | ------------------- | ------------------- | --------------------- | ------------------- || 菠菜 | 1.23 | 0.78 | 0.45 | 2.46 |通过比较不同植物叶片的叶绿素含量，可以分析其光合作用能力和生长发育状况。
叶绿素测定方法
实验三十三叶绿素含量的测定(分光光度法)根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度C以及光径L成正比，即A＝aCL（a为该物质的吸光系数）。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。
在测定叶绿素a、b含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、b的80％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm和645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04和9.27，在波长645nm 下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca+9.27Cb (1)A645=16.75Ca+45.6Cb (2)式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值；Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度(g/L)。
解联立方程(1)、(2)可得以下方程：Ca=0.0127A663-0.00269A645 (3)Cb=0.0229A645-0.00468A663 (4)如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，(3)、(4)式则可改写为：Ca(mg/L)=12.7A663-2.69A645 (5)Cb(mg/L)=22.9A645-4.68A663 (6)叶绿素总量CT(mg/L)=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663 (7)叶绿素总量也可根据下式求导A652=34.5×CT由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点(等吸收点)，两者有相同的比吸收系数（均为34.5），因此也可以在此波长下测定一次吸光度（A652）求出叶绿素总量：CT(g/L)=A652/34.5CT(mg/L)=A652×1000/34.5 (8)因此，可利用(5)、(6)式可分别计算叶绿素a与b含量，利用(7)式或(8)式可计算叶绿素总量。
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，叶绿素含量的测定无论是在生理上，还是在选育品种以及抗性研究等方面都很有必要。
叶绿素含量的经典测定方法是光电比色法，即用光电比色计以无机有色溶液为标准进行比色测定。
该方法不仅要配制无机标准溶液，而且不能对溶液中不同色素分子进行定量测定；分光光度法则不需配制标准溶液，又可对溶液中不同色素分子进行定量测定，已得到广泛应用。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量，就是利用叶绿素 a和叶绿素b吸收光谱的不同，测定各特定峰值波长下的光密度，再根据色素分子在该波长下的消光系数，计算出浓度。
叶绿素 a、叶绿素b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663nm、 645nm处，同时已知叶绿素a和叶绿素b在663nm处的消光系数分别为82.04和9.27；在645nm处的消光系数分别为16.75和45.60。
这样叶绿素a和叶绿素b的浓度与他们在663nm、645nm处的光吸光密度的关系可用下式表示：D663=82.04C a+9.27C bD645=16.75C a+45.60C b式中D663和D645分别为叶绿素溶液在波长663nm、645nm处的光密度；C a、C b分别为叶绿素a和叶绿素b的浓度，单位g.·L-1。
解方程可得到：计算：C a=12.7D663-2.59D645C b=22.9D645-4.67D663C a+b=20.3D645+8.04D663C a ,C b分别为叶a和叶b的浓度，C a+b为叶a和叶b的总浓度，单位为mg·L-1所测材料单位重量或单位面积的叶绿素含量可按下式进一步计算：叶绿素含量（mg·L-1或mg·dm-2）= C*VA*1000式中C：叶绿素浓度（mg·L-1）；V：提取液总体积（ml）；A：叶片鲜重（g）或面积（dm2）二、丙酮乙醇混合液法提取叶绿素：药品：丙酮：乙醇按1：1体积混合成浸提液仪器：分光光度计-1-1-1方法：丙酮乙醇混合液法1．将丙酮、无水乙醇按1：1比例配成混合浸提液。
叶绿素含量的测定(精)
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6、结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子： Ca=12.7A663－2.69A645； Cb=22.9A645－4.69A663； 据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb： mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进 一步求出植物组织中叶绿素的含量： 叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×提取液体 积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。
3、取滤纸1张，置漏斗中，用80%丙酮湿润，沿玻棒把提取 液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量80% 丙酮冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入 漏斗中。 4、用滴管吸取80%丙酮，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入 容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用80%丙 酮定容至25ml，摇匀。 5、把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以80% 丙酮为空白，在波长663nm、645nm下测定吸光度。
能否用蓝光区的最大吸收峰波长进行叶绿素a和叶绿素b的
定量分析，为什么？
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今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、 b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个 特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类 胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。 在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰， 所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸 收峰。 2、了解叶绿素a和b及总量的最大吸收峰，学会分 光光度计的使用方法及其原理。
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四、操作步骤
1、取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组 织表面污物，剪碎(去掉中脉)，混匀。 2、称取剪碎的新鲜样品0.2g，放入研钵中，加少量石英砂 和碳酸钙粉及5ml 80%丙酮，研成均浆，再加80%丙酮 10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。
叶绿素含量的测定分光光度法
叶绿素含量的测定分光光度法叶绿素是一种广泛存在于植物和一些浮游生物中的绿色色素，它在光合作用过程中起着至关重要的作用。
测定叶绿素含量是研究植物光合作用和生长发育的重要手段之一。
其中，分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法。
分光光度法是通过测量溶液对特定波长光的吸收程度来确定其中物质浓度的一种方法。
在测定叶绿素含量时，我们会选择特定波长的光，并测量通过溶液后的光线强度。
根据光线的吸收程度，可以计算出样品中叶绿素的浓度。
在进行叶绿素含量的分光光度法测定时，我们首先需要提取叶绿素。
通常采用乙醇、丙酮等溶剂来破坏叶绿素在叶片中的结构，并将其溶解出来。
然后，将提取液置于离心管中进行离心，以去除悬浮的杂质。
离心后，我们可以得到含有叶绿素的溶液。
接下来，我们需要使用分光光度计来测量叶绿素溶液的吸光度。
分光光度计通过选择特定波长的光源，将光线通过样品后，再通过光电二极管接收光信号，最后转化为电信号。
根据吸光度的定义，可以通过测量进射光和透射光的光强来计算吸光度，并由此得到叶绿素的浓度。
为了准确测定叶绿素含量，我们需要在测量前进行一些预处理。
首先，需要校准分光光度计，以确保测量的准确性。
其次，应该选择适当的波长进行测量。
常用的波长为663纳米和645纳米，这两个波长对叶绿素的吸光度较高。
最后，要注意样品的稀释，以确保其吸光度在仪器检测范围内。
在实际测定中，我们可以根据测量结果计算出叶绿素的浓度，并进行统计分析。
通过比较不同处理组的叶绿素含量，可以了解不同因素对植物生长和光合作用的影响。
此外，还可以将分光光度法与其他方法相结合，来对叶绿素含量进行验证和比对，以提高测定结果的可靠性。
分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法。
通过测量溶液对特定波长光的吸收程度，可以计算出叶绿素的浓度。
在实际应用中，我们需要注意校准仪器、选择适当的波长、稀释样品等步骤，以确保测定结果的准确性。
分光光度法的应用为我们研究植物生长和光合作用提供了重要的手段。
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实验三十三叶绿素含量的测定(分光光度法
仪器、材料与试剂实验步骤思考题电子课件
根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律，某有色溶液的吸光度A值与其中溶质浓度
C以及光径L成正比，即A＝aCL（a为该物质的吸光系数）。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光值可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下的吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素提取液中叶绿素a、b含量，只需测定该提取液在2 个特定波长下的吸光度度值，并根据叶绿素a与b在该波长下的吸光系数即可求出各自的浓度。
在测定叶绿素a、b 含量时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长应选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、b的80 ％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和
645nm，又知在波长663nm下，叶绿素a、b在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 和9.27，在波长645nm下分别为16.75和45.60，可根据加和性原则列出以下关系式：
A663=82.04Ca +9.27Cb………………(1
A645=16.75Ca+45.6Cb………………(2
式中A663、A664分别为波长663nm和645nm处测定叶绿素溶液的吸光度值；Ca、Cb分别为叶绿素a、b的浓度(g/L。
解联立方程(1、(2可得以下方程：
Ca=0.0127A663-0.00269A645…………(3
Cb=0.0229A645-0.00468A663…………(4
如把叶绿素含量单位由g/L改为mg/L，(3、(4式则可改写为：
Ca(mg/L=12.7A663-2.69A645…………(5
Cb(mg/L=22.9A645-4.68A663…………(6
叶绿素总量CT(mg/L=Ca+Cb=20.2A645+8.02A663……(7
叶绿素总量也可根据下式求导
A652=34.5×CT
由于652nm为叶绿素a与b在红光区吸收光谱曲线的交叉点(等吸收点，两者有相同的比吸收系数（均为 34.5 ），因此也可以在此波长下测定一次吸光度（A652）求出叶绿素总量：
CT(g/L=A652/34.5
CT(mg/L=A652×1000/34.5………(8
因此，可利用(5、(6式可分别计算叶绿素a与b含量，利用(7式或(8式可计算叶绿素总量。
一、仪器、药品与材料
（一）实验材料
不同生境的新鲜植物叶片。
（二）仪器与用品
分光光度计，天平（感量0.01g），研钵，漏斗，量筒，滤纸等。
（三）试剂
１．丙酮。
2．80％丙酮：取80 mL纯丙酮加入20 mL蒸馏水混匀即得。
3．石英砂。
4．无水CaCO3。
二、实验步骤
1．叶绿体色素溶液提取：选取不同生境下生长植物的成熟叶片按照实验七-I 中方法用80%丙酮进行提取。
2．测定吸光度值：以80%丙酮作为参比溶液，分别在652nm、663nm和
645nm处测定叶绿体色素提取液（浓度大时需稀释）的光吸收值。
3．计算：把测得的光吸收值代入上述5、6、7 和8等公式计算出叶绿素a、b 和叶绿素总量。
在计算时需要考虑稀释因子。
三、思考题
１．你所测得的叶绿素a/b值是否与教材上的数值相近？如不相近，为什么？
２．比较不同生境的植物叶的叶绿素含量与叶绿素a/b值，并说明原因。
３．如果取材时，选取同一植株上不同发育阶段的叶片，测定其中叶绿素含量与叶绿素a/b比值，其结果将会如何？为什么？。