改善反向液相色谱峰拖尾的方法
液相色谱峰拖尾的原因
液相色谱峰拖尾的原因
1.样品组分的不均一性：样品组分的分子量分布不均一性、极性或疏
水性的变化，以及表面活性剂等添加剂的存在，都可能导致峰拖尾现象。
2.色谱柱的选择：柱填充材料的不均一性或不适当的填充剂粒径大小、固定相表面官能团密度、载液的缓冲性能，都会影响到样品的保留与分离，从而导致峰拖尾现象。
3.操作条件的选择：流速过高、柱温过高、pH过高或过低，以及过
高的载液浓度等操作条件都可能导致峰拖尾现象。
4.柱效应：当样品中存在吸附性物质时，这些物质会在柱表面吸附并
难以解吸，从而导致峰拖尾现象。
对于液相色谱峰拖尾问题，可以采取以下措施进行解决和改善：
1.选择合适的色谱柱：根据样品的特性选择适合的色谱柱，如使用亲
水性柱或疏水性柱进行适当的尝试和比较。
2.调整操作条件：优化流速、温度和pH条件，适当降低载液浓度或
者添加缓冲剂等。
3.优化样品前处理：对于复杂的样品，可以采取前处理步骤，如溶剂
萃取、样品稀释等，以减少样品中的干扰物。
4.柱前附加剂：可以尝试添加适量的有机溶剂或胶体物质作为柱前附
加剂，以提高样品与固定相的相容性，从而减少峰拖尾现象。
5.使用合适的检测器：采用合适的检测器，如质谱检测器、荧光检测
器等，可以提高检测精度和分离度，从而减少峰拖尾现象的影响。
综上所述，液相色谱峰拖尾的原因是多方面的，需要综合考虑柱的选择、操作条件、样品处理等因素，采取相应的措施进行改善。
HPLC峰形问题的原因分析及应对方法
HPLC峰形问题的原因分析及应对⽅法前⾔峰形异常（包括峰拖尾，前延和裂分等）是液相⾊谱中最常见的问题之⼀，因此在绝⼤多数系统适⽤性实验中都包括峰形的测定，量化的峰形也可以随时被追踪到。
不好的峰形会减少邻近洗脱出来的峰的分离度（如下图），降低测定的峰⾯积的精确度和准确度；同时，峰形的变化也是⾊谱柱开始失效的信号之⼀。
对于⾊谱分析⼈员来说，快速找到异常背后的原因并针对性地解决也是⼀项重要的专业能⼒。
理想的⾊谱谱带是呈现正态分布（（Normal Distribution）[也被称为⾼斯分布（Gaussian理想的⾊谱谱带是呈现正态分布Distribution）］但是现实情况完美的对称峰形在实际的⾊谱图中是很少见的。
绝⼤多数的峰都会存在不同程度的拖尾，⽽且随着⾊谱柱的使⽤⼀般拖尾现象会加剧。
然⽽也有⼀些其它的可能原因造成峰的拖尾（或者前延），因此随时追踪峰形以估计什么时候实际问题会发⽣是⾮常有必要的。
基本概念最常见的峰形评价参数：两种最常见的峰形评价参数：有两种中使⽤的峰形评价参数。
如上图右边部分，这是在制药⾏业制药⾏业中使⽤的峰形评价参数。
如上图右边部分，拖尾因⼦（拖尾因⼦（Tailing Factor，TF）：这是在其定义为：TF = (A + B)/2A其中A和B为5%峰⾼处的左右半峰宽；）：这是制药⾏业以外的其他⾏业使⽤的峰形评价参数，如制药⾏业以外的其他⾏业使⽤的峰形评价参数，如对称因⼦对称因⼦（（Asymmetry Factor，As）：这是上图左边部分。
其定义为：As = B/A其中A和B为10%峰⾼出的左右半峰宽。
为：近似关系为：TF和As的近似关系As ≈ 1 + 1.5(TF - 1)⼤部分情况下，As的值⽐TF⼤，如：（Peak Fronting）：当TF < 1.0时，峰就表现为前延。
峰前延（峰前延当测试⼀⽀柱⼦的状况时，0.9< TF < 1.2是⽐较理想的情况。
色谱常见问题解答
色谱常见问题解答问题1:为什么有些峰出现拖尾答:①这可能是由于进样口或色谱柱不干净,或色谱柱切割不正确.冷却进样口,关闭气流并更换或清洁进样口部件,包括进样口衬管和金密封垫.取出色谱柱.切掉一段色谱柱以清除不挥发性残留物,隔垫碎屑和密封圈碎片.这段色谱柱的长度可以是 1 英寸到 1 米,如果需要的话,可以更长.使用正确的切割工具来切割色谱柱.如果切割不好,则可能导致样品吸收.使用黄铜刷子或氧化铝粉末等软质研磨剂擦洗进样口钢质内壁.在重新安装其他部件前,要确保已将进样口清洗干净.对于5890,卸下分流出口管路并用溶剂清洗是比较好的方式.②在不分流方式下进行分析时,不分流时间过长可能导致拖尾.通常时间应在0.5 至 1 分钟范围内.③未吹扫(死)体积也可能导致拖尾.确保在进样器和检测器中色谱柱安装正确.④如果考虑色谱柱部分流失,则可以使用色谱柱前的保留间隙(制备色谱柱).如果没有降低色谱柱效率,则可以将其切割掉或更换掉,并可延长色谱柱的寿命.但要注意保留间隙和分析色谱柱的连接可能引起泄漏和样品吸收.问题2:如何改善峰形(前伸峰,拖尾峰)答:前伸峰是由于色谱柱过载.当一种或多种化合物的进样量超过色谱柱固定相容量时,可能发生这种情况.液相膜越薄,色谱柱中保留的每种化合物就越少. 这涉及到进样体积和进样中每个峰的化合物浓度.通过减少进样量,分流样品或进样浓度较低的样品,可减小进样体积.问题3:什么原因导致峰比原来大,而且出现的早答:过快,过大的峰通常是由于从分流口和隔垫吹扫口排出的载气减少,而更多的进入色谱柱;因此增加柱头压力,可降低分流比.检查分流出品的气体流量,如需调整分流比则对调整此流量.如果问题依然存在,可卸下并清洁分流口.这个问题也可能由于柱头压调节阀有问题而引起.问题4:何时需更换隔垫或衬管答:通常比较好的隔垫至少能保证100 次进样不发生问题. 当色谱特征说明衬管有问题时,需要更换衬管.影响隔垫寿命的因素有注射器尺寸,进样口温度和压力,当然受压力影响的程度比较小.影响衬管寿命的因素通常是样品的清洁度.应该根据仪器维护历史记录来选择色谱需要的特定程序.问题5:随着进样室温度升高,对分析物分解有影响吗答:如果化合物热稳定性差,分析物分解可能会带来一些问题.这在制药工业中比较常见.如果药物或中间体热分解温度低于进样口温度,则分析结果中将出现特殊的峰或与目标分析物发生反应.问题6:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题7:如何得知分流/不分流进样口的进样体积不超过进样口衬管反应室的容积答:如果不是多次重复进样引起精度问题,则不会经常发生这个问题.精度问题经常是由于不合适的进样体积引起.因为分流进样的进样口流速比较高,样品进出进样口比不分流快得多.同样地,由于溶剂没有时间扩散到衬管外,因此分流模式进样体积要求没有那么严格.实际上,1 微升是比较合适的,由于降低分流比对增大峰面积比增加进样量更有效.然而,不分流进样要求要严格的多,建议使用蒸汽体积计算器估算最终的扩散体积.问题8:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题9:色谱分析运行时,标样和样品的峰均随时间加宽,这正常吗答:如果保留时间没有很大区别,只是加宽的峰拖尾,可能表明有活化点.如果加宽的峰是对称的,可能是由于正常的色谱柱"损耗和流失".如果峰前伸,说明色谱柱过载.问题10:为什么在空白运行中出现了我的样品组分峰答:有可能是由于样品制备或系统清洁问题.尝试在样品和空白样品制备中使用新溶剂,并在样品清洗瓶中装上新溶剂.尝试使用新的注射器和隔垫.取出并清洗分流出口管路.在未进样情况下运行以观察仅加热色谱柱有无峰出现.问题11:什么原因导致基线不稳和干扰答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.检测器一般需要24h才能得到平衡.4. 在程序升温的时候改变载气流速(在很多情况下为正常现象).问题12:什么原因导致过多的基线噪音答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.清洗检测器,通常噪音不是突然增大而是逐渐产生.4. 污染或载气质量降低.使用高质量的载气或检查气体是否泄露.一般在换载气钢瓶的时候会突然发生.5. 柱子安装太过.可重新安装.6. 载气流速不合适.重新设定流速.7. 与MS,ECD,TCD联用时发生漏洞,查找并消除漏洞即可.8. 检测器的灯或电子倍增管老化.问题13:什么原因导致峰形改变答:1.检测器响应改变.检查气体流速,温度和设置.2.样品的浓度改变.检查并检验样品的浓度,样品的蒸发或成分的改变都可能引起.3. 色谱柱受污染.问题14:如果分离度下降,如何处理1.柱温不同.检查柱温.2.不同的色谱柱的维数和相位.核实色谱柱的特性.3.改变载气流速.4.色谱柱受污染,应用溶媒清洗柱子.5.进样器的改变.检查进样器的设置.6.样品的浓度或溶解能力的改变.试用一个不同的浓度.问题15:如果出现分裂峰,如何处理1.试着改变一下进样方法.2.改变溶媒,使其成为单一的溶媒.3.重新安装色谱柱.4.减小进样温度.问题16:如果怀疑进样器或载气被污染了,应采用何种检测1. GC在40-50℃保持8小时或8小时以上.2. 运行一个空白分析(开启GC,但不进样).3. 收集空白分析的色谱图.4. 第一个空白分析完成以后立即开始第二次,二者间隔时间不要超过5min.5. 收集第二次空白分析的色谱图,并与第一次的图谱进行比较.6. 假如在第一次时,峰图包含了大量的色谱峰,而且基线不稳定,那就暗示了毛细管柱被污染了(进样器或载气被污染).7. 假如两次色谱峰图都包含少数的峰或基线的微小漂移,那就可以假定进样器或载气是比较干净的.假如8. 假如两次色谱峰图都包含重大数量的噪音和(或)基线漂移,那通常也就表明了进样器或载气被污染了.问题17:保护柱应为多长比较有代表性的保护柱柱长为0.5-10m.虽然没有确定的长度适合所有的样品,但是以下一些建议也可以参考.假如样品相对来说比较纯净,溶质为极性,保护柱应该在0.5-1.0m之间;若样品相对来说不纯净,保护柱应该适当长些.5-10m长的主要是为了维护单一系统.长保护柱允许使用者减去大约1m而代替整个保护柱安装.问题18.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
色谱峰拖尾解决方法
色谱峰拖尾解决方法色谱峰拖尾解决方法近年来，越来越多的研究者选择使用色谱仪来进行化学分析，尤其是高效液相色谱仪（HPLC）。
然而，HPLC中的色谱峰拖尾问题一直是研究人员们面临的最大挑战之一。
以下是几种解决色谱峰拖尾问题的方法。
1. 优化仪器条件当研究者遇到色谱峰拖尾问题时，首先应考虑的是优化仪器条件。
常见的优化仪器条件方法包括：优化流速、更换柱子、更换进样针头、更换活塞密封圈等等，这些常见的优化方法可以让仪器恢复到正常的运行状态，从而更好地消除拖尾问题。
2. 改善样品制备另一个可能导致色谱峰拖尾问题出现的原因是样品制备不当。
如果样品含有大量的杂质或者过于浓缩，这些都可能导致拖尾问题出现。
因此，研究者可以考虑改善样品制备方法，如使用更好的萃取工具、制备更纯净的样品和深度稀释等等，以减少拖尾现象的出现。
3. 优化柱子选择在进行柱子选择时，研究者可以考虑选用具有更好分离能力和更高效率的柱子。
较高的分离力可以保证样品分子最大程度地分离，减少拖尾问其他的。
同时，较高的柱效率可以保证分离的同时不会对样品造成太大影响，从而使拖尾问题得以解决。
4. 调整pH值和缓冲液浓度在HPLC分离过程中，样品的pH值和缓冲液浓度都会对色谱峰的形状产生影响，如果分析人员在选取分离柱和实施柱效验测时，能够正确选择条件，峰才能得到兼顾尖度与实时保留时间稳定性的最佳平衡。
这些变量对单色谱峰的对称性、峰的高度以及分离度都会产生影响，因此，也可以考虑通过调整pH值和缓冲液浓度来解决色谱峰拖尾问题。
5. 增加底物或添加剂为消除色谱峰拖尾现象，研究者们可以尝试提高底物或添加剂的浓度。
例如，对于氨基酸分析，可以添加高浓度底物，这样可以增加检测灵敏度，并使拖尾问题得到解决。
总之，色谱峰拖尾问题是化学分析实验中很常见的现象，但它所导致的结果可能会对实验结果的准确性带来很大的影响。
因此，研究者们可以根据上述方法，采取不同策略，找到最符合实验条件的解决方案，以确保得到最准确、最可靠的实验结果。
改善反向液相色谱峰拖尾的方法
改善反向液相色谱峰拖尾的方法改善反相HPLC中的峰拖尾一、溶解样品的溶剂极性强于流动相引起的拖尾现象:1、先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重; 分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾2、进样量减少或样品经流动相稀释后进样峰拖尾情况减轻。
峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。
(峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关;准确度和精密度因数据系二、由样品量(进样量超过柱子容量)过载引起的峰拖尾统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响)现象: 峰拖尾原因及解决方案1、样品峰呈现直角三角形，当更多的样品量注入时，峰前端变尖、编号原因解决方案后端拖尾更严重。
2、色谱柱过载后，保留时间随样品量的增加而提前。
(见图3) 样品溶剂在流动相中溶解样品，或者将样品经解决方案:减少进样量一极性强于流流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求，动相总之尽可能降低样品溶剂的强度柱直径(mm)参考最大样品样品量过减少进样量，参考表2中推荐的不同ID 量(mg) 二载柱型对应的不同进样体积 10 35-65 1.调节流动相的pH<3.0。
4.6 4.5-9.0 2.增加流动相的离子强度，25mM,3.0 2.0-4.0 50mM。
表2 HPLC色谱柱的直径、参考的最大进样量、进样量的范围硅醇基与因为实际进样量依赖于柱子的填料(具有高的表面积的填充材料三胺类物质的3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM可以具有大的进样量)，分析物质(分子量大的进样量要少)，和其他结合的TEA(三乙胺)。
的因素比如样品在流动相中的溶解性。
4.选择低硅醇活性的固定相。
参照图6 C18柱按固定相硅醇活性分级。
1.增加流动相中盐的浓度，25mM,50mM。
酸性物质四在硅胶上的2.调节流动相的pH<3.0 吸附 3.增加竞争性的有机酸，1%醋酸或者是0.1%TFA(三氟乙酸) 更换新的色谱柱五柱子空隙尝试填充空隙很少能达到较好的效果。
色谱柱峰形后拖尾原因造成的 色谱柱常见问题解决方法
色谱柱峰形后拖尾原因造成的色谱柱常见问题解决方法1.柱物理损坏色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。
的解决方法就是更换新柱。
2.柱内填料污染流动相和样品中的杂质是色谱柱紧要污染源。
流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。
流动相所用的水要是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。
用前先用0.45um 溶剂微孔过滤（器）过滤，除去可能存在的微粒。
流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或显现沉淀。
此外还得保证储存流动相的容器清洁。
多而杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤（器）或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。
若样品不便处理，要使用保护柱。
柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。
或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱（约20至30倍柱体积，或视实在情况而定；另外，此时不能接检测器），将污染物冲杰出谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。
3.柱进口处有异物当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再置于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。
4.样品浓度过高致使柱超载样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾（或伸舌）。
适当减小进样量或样品浓度（需要时，可提高检测器灵敏度）直至峰形和保留时间不再更改，便可除去这种不良影响。
减小进样量还能改善其分别度。
正常情况下，样品中每种化合物在1504.6mm 柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。
5.样品溶剂不对选择合适的样品溶剂，以排出不必要的干扰。
要选用流动相溶解样品。
6.柱外效应柱外效应（即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积）是影响色谱柱柱效的紧要因素之一、所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。
液相色谱峰形拖尾解决方案
液相色谱峰形拖尾解决方案液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于食品、医药、环境、化学等领域。
在液相色谱分析中，峰形是评判分离效果和定性定量分析的重要指标之一。
然而，由于多种因素的影响，液相色谱峰形有时会出现拖尾（tailing）现象，影响分析的准确性和灵敏度。
本文将介绍液相色谱峰形拖尾的原因及解决方案。
峰形拖尾的原因液相色谱峰形拖尾常常由以下原因引起：1.柱温过高：柱温过高会导致样品在柱中停留时间过长，进而引发拖尾。
因此，在操作过程中需要根据分析物的性质和柱的温度稳定性进行合理控制。
2.样品溶液中存在离子：样品溶液中存在离子可能会与色谱柱填料表面形成静电吸附，导致峰形拖尾。
此时可以通过选择合适的移动相和调整离子强度来减轻或消除拖尾现象。
3.色谱柱填料表面活性：色谱柱填料表面的活性可能导致部分化合物与填料表面发生相互作用，从而造成峰形拖尾。
此时可以选择活性更低的色谱柱填料或在样品中添加适量的对应剂以减轻或消除拖尾现象。
4.柱寿命过长：使用时间过长的色谱柱填料可能会出现表面酸化、损伤等现象，导致峰形拖尾。
在实际操作中，及时更换色谱柱填料是重要的预防措施。
解决方案为了解决液相色谱峰形拖尾问题，可以采取以下措施：1.优化柱温：合理控制柱温可以有效减轻峰形拖尾。
根据样品的性质和柱的稳定温度范围，选择合适的柱温进行实验。
2.调整流速：合适的流速可以改善峰形拖尾。
通常情况下，过高的流速会导致色谱峰扩展和形状变化，而过低的流速会增加分析时间和柱寿命。
因此，通过选取适当的流速范围，可以寻找到最佳条件。
3.选择合适的固定相和移动相：色谱柱的固定相和移动相的选择对峰形拖尾有很大影响。
合适的固定相可以提供最佳相互作用，减少拖尾的发生。
移动相的选择也非常重要，需要考虑到离子强度、酸碱度等因素。
4.降低样品浓度：如果样品浓度过高，液相色谱峰形可能会出现拖尾现象。
在实际操作中，可以适当稀释样品，以降低浓度，改善峰形。
色谱峰的前沿与拖尾问题
1.产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？拖尾：1 干扰峰，优化条件分离2 色谱柱塌陷，更换色谱柱3 流动相pH不合适，调节pH值 4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下前沿：1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂 2 样品过载，降低进样量 3 柱温太低，升高柱温4 色谱柱损坏，更换色谱柱5 干扰峰，优化色谱条件分离可能的问题：1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适产生峰前沿的原因：柱过载，柱头塌陷，溶剂选择不对产生峰拖尾的原因：存在杂质未分开，柱污染，柱子选择不对。
拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做吧一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质，要根据具体情况而定。
柱子可能污染了吧，溶剂也可能有，或柱效下降。
图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。
一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。
柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。
液相拖尾峰出现原因及解决办法：1.柱头有空隙。
解决办法：使用填料或玻璃珠填充柱顶部。
2.柱上样品超载。
解决办法：使用更高负载量的固定相。
增加色谱柱内径、减少样品量。
3.单峰- 存在干扰性组分。
解决办法：净化样品；预分离。
4.存在未扫的死体积。
解决办法：减少接头的数量、确保进样器密封垫紧密、确保接头正确固定。
5.碱性化合物- 硅醇相互作用。
解决办法：换成聚合物固定相。
6.碱性基质- 硅醇相互作用。
解决办法：使用更强的流动相或添加竞争碱（例如，三甲胺）。
7.硅胶基- 柱降解。
解决办法：使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻。
8.溶剂相极性不匹配。
较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾，解决办法：改变样品溶剂。
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改善反相HPLC中的峰拖尾
分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾
峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。
（峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关；准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响）
峰拖尾原因及解决方案
引起的拖尾
现象：
1、先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重；
2、进样量减少或样品经流动相稀释后进样峰拖尾情况减轻。
二、由样品量（进样量超过柱子容量）过载引起的峰拖尾
现象：
1、样品峰呈现直角三角形，当更多的样品量注入时，峰前端变尖、后端拖尾更严重。
2、色谱柱过载后，保留时间随样品量的增加而提前。
（见图3）
表
进样量、进样量的范围
因为实际进样量依赖于柱子的填料（具有高的表面积的填充材料可以具有大的进样量），分析物质（分子量大的进样量要少），和其他的因素比如样品在流动相中的溶解性。
图3 样品量过载引起的拖尾
表3 反相HPLC常用缓冲液
三、固定相中的硅醇基与胺类相互作用引起的拖尾
原因：带正电荷的溶液（胺类）与固定相颗粒表面上的酸性硅醇发生了离子交换，引起二次保留(图 4)，常见于固定相具有显著的硅醇活性的的色谱柱，中性pH（6～8）条件下比酸性pH（<3）更易发生。
酸性和中性的化合物一般不受影响，一些碱性化合物更易受到此效应的影响。
解决：
1、确认流动相中有合适的缓冲盐，可能的话尽量在pH<3的条件下操作（使硅胶固定相上的硅醇基质子化，减少溶质与硅醇反应的几率）。
使用足够的缓冲液控制pH并减少离子交换效应。
在pH<3的条件下操作，可减少由图4
相互作用引起的峰拖尾，原理：
固定相表面的酸性硅醇基可以形成与碱性化合物反应的离子交换位点，经反相HPLC分离胺类化合物时，这种离子交换反应常常引起峰的保留（二次保留）和峰拖尾。
2、在流动相中加入竞争性的胺类，如：在流动相中加入三乙胺（TEA）（多数情况下，约10mM即可）。
TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应。
如图5：向流动相中加入TEA用来提高峰形
1.苯丙醇胺
2.麻黄碱
3.苯丙胺
4.甲基苯丙
胺5. 苯三胺
色谱柱：Eclipse XDB-C8，4.6*150mm
流动相：85%25mMNa2HPO4，pH7.0，
15%ACN
流速：1.0ml/min
温度：35℃
样品：苯丙胺类
缺点：此法增加了分析方法复杂性并且改变色谱柱性质不易逆转。
强度胺类（如三乙胺），不易从色谱柱上洗脱下来。
既用过含有TEA的色谱柱就不再适合应用于流动相中不含TEA的分析。
原理：三乙胺与硅醇强烈作用，减少了样品混合物中胺类与硅醇的作用，因此，使用三乙胺可以不用选择低硅醇活性的固定相。
反相HPLC色谱柱检测固定相硅醇活性的方法：根据阿米替林的对称性（峰拖尾），柱子对称性低则硅醇活性低。
阿米替林在固定相中拖尾较低（对称值低），则固定相硅醇活性较低，并且检测碱性化合物时就会有较低的拖尾。
图6根据测定阿米替林的对称性（即硅醇活性）排列了常用的C18反相色谱柱
色谱柱：4.6×150mm，5um
流动相：80%甲醇；20%0.05M磷酸盐缓冲液pH7
流速：2.0ml/min
温度：24℃
样品：阿米替林
四、酸性化合物在硅胶上吸附引起的拖尾
原因：硅胶固定相的吸附。
解决：提高流动相中盐的浓度来抑制二次反应，降低流动相的pH使硅醇和溶质质子化，必要时可以向流动相中加入竞争性的酸（如图）。
色谱柱：4.6×150mm，C18
流动相：40%5mMNaH2PO460ACN
样品：布洛芬（酸性化合物，严重拖尾，向流动相中加入乙酸可以改善。
乙酸优先和硅胶固定相表面的酸性硅醇基反应，抑制了布洛芬和硅醇基的反应，减低了拖尾。
）
五、柱床空隙引起的拖尾
随填装技术完善，柱头空隙越发少见，除非在极高的压力或流速的条件下装柱时可能出现。
现象：平时色谱柱柱效良好，突然性发现所有的峰均拖尾时；
先洗脱出的峰较后洗脱的峰更易受柱空隙的影响。
解决：更换柱子。