反相色谱峰形拖尾的原因和改善方法极限色谱柱
色谱峰拖尾的原因及处理方法
色谱峰拖尾的原因及处理方法色谱峰拖尾那可真让人头疼！为啥会拖尾呢？可能是色谱柱受损啦，就像你的宝贝手机屏幕被划了一道，那肯定不好使了呀！也可能是样品过载，哎呀妈呀，这就好比小货车硬要装大卡车的货，能不垮嘛！还可能是流动相不合适，这就跟你穿了不合脚的鞋子去跑步，能舒服嘛！
那咋处理呢？如果是色谱柱受损，赶紧换一根新的呗！要是样品过载，那就减少进样量呀，可别贪心哦！流动相不合适的话，就调整流动相的组成和比例呗，这就跟做饭调味一样，得恰到好处。
这过程中安全性很重要哦！可别不小心碰到那些有毒的试剂，那可不得了。
稳定性也得注意，别一会儿这样一会儿那样，得有个准头。
这在很多场景都能用得上呢！比如药物分析，你想想，要是药物分析不准确，那多吓人呀！优势嘛，能让你的分析更准确，就像有了一双火眼金睛，啥问题都能看出来。
我给你说个实际案例哈，有一次在实验室，大家就遇到了色谱峰拖尾的问题，后来一检查，原来是色谱柱不行了，换了一根新的，嘿，立马就好了。
这效果，杠杠的！
色谱峰拖尾就得赶紧找原因解决，这样才能让我们的实验更顺利，分析更准确。
咱可不能让这小问题影响了大事。
色谱拖尾原因及解决办法
【转】色谱拖尾原因及解决办法色谱拖尾原因及解决办法，我查看一些资料来班门弄斧了。
1、当经历维修色谱问题（色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等）时，切去色谱柱前端的1/2 到1 米。
必要时，更换进样口内衬管、隔垫，并清洗进样口。
保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。
（气相）2、衬管脱活进样口衬管上的活性点可以吸附样品组分并导致出现拖尾峰，并可能损失灵敏度和重现性。
用脱活制剂用来覆盖衬管玻璃表面的活性点或与之发生反应。
脱活程序进行脱活，该程序可以使衬管重现性高、惰性好，且使用寿命长。
对于不分流的应用，或者在必须分析极性很弱的化合物时，应当使用脱活的衬管。
即使使用脱活的衬管开始也会表现出活性，当这种情况发生时，应当更换衬管。
可以清洁衬管以除去颗粒物或用溶剂冲洗衬管以除去挥发性较低的组分。
但是，选择合适的衬管清洗程序可能较为困难。
某些溶剂可能会除去脱活层，并且工具可能会划伤衬管的玻璃表面，从而导致出现多余的活性点。
新的衬管几乎总比已清洁过并且重新脱活的衬管表现优异- 尤其对于痕量分析。
3、色谱柱、进样口衬管或被污染的金属进样口密封垫所吸收的样品组分使用新的脱活的衬管或清洗旧衬管并更换玻璃毛。
进样针针头撞击，进样口衬管内的填充物破碎。
从衬管中取出部分填充物，或使用无填充的衬管。
色谱柱末端切口不整齐（样品吸附于此）卸下色谱柱。
使用安全的毛细管熔融石英切割工具（例如陶瓷片或色谱柱切割器）将色谱柱切成垂直的齐口，然后重新装入色谱柱。
断裂或破碎的进样口衬管确保进样口中的总流速为40 ml/min以上。
4、色谱柱在进样口中的位置不正确，可能载气流路存在密封垫的颗粒。
5、一支色谱柱上不能装入超过2-3 个接头。
多个接头会造成死体积（拖尾峰）问题。
6、超出色谱柱的温度上限会造成固定相和管表面的加速损坏。
这样会造成色谱柱的过分流失，活性组分形成拖尾，以及/或降低柱效（分离度）。
幸好热损坏是一个很慢的过程，因此，在色谱柱严重损坏之前还有一段很长的时间可在高于温度极限的条件下使用。
反相色谱峰形拖尾的原因和改善方法极限色谱柱
各种造成峰形拖尾的原因分析：[柱物理损坏]色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。
唯一的解决方法就是更换新柱。
[柱内填料污染]流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。
流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。
流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。
用前先用0.45um溶剂微孔过滤（器）过滤，除去可能存在的微粒。
流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。
此外还得保证储存流动相的容器清洁。
复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤（器）或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。
若样品不便处理，要使用保护柱。
柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。
或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱（约20至30倍柱体积，或视具体情况而定；另外，此时不能接检测器），将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。
[柱进口处有异物]当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再置于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。
[样品浓度过高致使柱超载]样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾（或伸舌）。
适当减小进样量或样品浓度（需要时，可提高检测器灵敏度）直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。
减小进样量还能改善其分离度。
正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。
[样品溶剂不对]选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。
最好选用流动相溶解样品。
[柱外效应]柱外效应（即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积）是影响色谱柱柱效的主要因素之一。
色谱峰拖尾解决方法
色谱峰拖尾解决方法色谱峰拖尾解决方法近年来，越来越多的研究者选择使用色谱仪来进行化学分析，尤其是高效液相色谱仪（HPLC）。
然而，HPLC中的色谱峰拖尾问题一直是研究人员们面临的最大挑战之一。
以下是几种解决色谱峰拖尾问题的方法。
1. 优化仪器条件当研究者遇到色谱峰拖尾问题时，首先应考虑的是优化仪器条件。
常见的优化仪器条件方法包括：优化流速、更换柱子、更换进样针头、更换活塞密封圈等等，这些常见的优化方法可以让仪器恢复到正常的运行状态，从而更好地消除拖尾问题。
2. 改善样品制备另一个可能导致色谱峰拖尾问题出现的原因是样品制备不当。
如果样品含有大量的杂质或者过于浓缩，这些都可能导致拖尾问题出现。
因此，研究者可以考虑改善样品制备方法，如使用更好的萃取工具、制备更纯净的样品和深度稀释等等，以减少拖尾现象的出现。
3. 优化柱子选择在进行柱子选择时，研究者可以考虑选用具有更好分离能力和更高效率的柱子。
较高的分离力可以保证样品分子最大程度地分离，减少拖尾问其他的。
同时，较高的柱效率可以保证分离的同时不会对样品造成太大影响，从而使拖尾问题得以解决。
4. 调整pH值和缓冲液浓度在HPLC分离过程中，样品的pH值和缓冲液浓度都会对色谱峰的形状产生影响，如果分析人员在选取分离柱和实施柱效验测时，能够正确选择条件，峰才能得到兼顾尖度与实时保留时间稳定性的最佳平衡。
这些变量对单色谱峰的对称性、峰的高度以及分离度都会产生影响，因此，也可以考虑通过调整pH值和缓冲液浓度来解决色谱峰拖尾问题。
5. 增加底物或添加剂为消除色谱峰拖尾现象，研究者们可以尝试提高底物或添加剂的浓度。
例如，对于氨基酸分析，可以添加高浓度底物，这样可以增加检测灵敏度，并使拖尾问题得到解决。
总之，色谱峰拖尾问题是化学分析实验中很常见的现象，但它所导致的结果可能会对实验结果的准确性带来很大的影响。
因此，研究者们可以根据上述方法，采取不同策略，找到最符合实验条件的解决方案，以确保得到最准确、最可靠的实验结果。
改善反向液相色谱峰拖尾的方法
改善反向液相色谱峰拖尾的方法改善反相HPLC中的峰拖尾一、溶解样品的溶剂极性强于流动相引起的拖尾现象:1、先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重; 分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾2、进样量减少或样品经流动相稀释后进样峰拖尾情况减轻。
峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。
(峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关;准确度和精密度因数据系二、由样品量(进样量超过柱子容量)过载引起的峰拖尾统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响)现象: 峰拖尾原因及解决方案1、样品峰呈现直角三角形，当更多的样品量注入时，峰前端变尖、编号原因解决方案后端拖尾更严重。
2、色谱柱过载后，保留时间随样品量的增加而提前。
(见图3) 样品溶剂在流动相中溶解样品，或者将样品经解决方案:减少进样量一极性强于流流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求，动相总之尽可能降低样品溶剂的强度柱直径(mm)参考最大样品样品量过减少进样量，参考表2中推荐的不同ID 量(mg) 二载柱型对应的不同进样体积 10 35-65 1.调节流动相的pH<3.0。
4.6 4.5-9.0 2.增加流动相的离子强度，25mM,3.0 2.0-4.0 50mM。
表2 HPLC色谱柱的直径、参考的最大进样量、进样量的范围硅醇基与因为实际进样量依赖于柱子的填料(具有高的表面积的填充材料三胺类物质的3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM可以具有大的进样量)，分析物质(分子量大的进样量要少)，和其他结合的TEA(三乙胺)。
的因素比如样品在流动相中的溶解性。
4.选择低硅醇活性的固定相。
参照图6 C18柱按固定相硅醇活性分级。
1.增加流动相中盐的浓度，25mM,50mM。
酸性物质四在硅胶上的2.调节流动相的pH<3.0 吸附 3.增加竞争性的有机酸，1%醋酸或者是0.1%TFA(三氟乙酸) 更换新的色谱柱五柱子空隙尝试填充空隙很少能达到较好的效果。
峰托尾的原因及解决办法
色谱拖尾原因及解决办法1、当经历维修色谱问题（色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等）时，切去色谱柱前端的1/2 到1 米。
必要时，更换进样口内衬管、隔垫，并清洗进样口。
保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。
（气相）2、衬管脱活进样口衬管上的活性点可以吸附样品组分并导致出现拖尾峰，并可能损失灵敏度和重现性。
用脱活制剂用来覆盖衬管玻璃表面的活性点或与之发生反应。
脱活程序进行脱活，该程序可以使衬管重现性高、惰性好，且使用寿命长。
对于不分流的应用，或者在必须分析极性很弱的化合物时，应当使用脱活的衬管。
即使使用脱活的衬管开始也会表现出活性，当这种情况发生时，应当更换衬管。
可以清洁衬管以除去颗粒物或用溶剂冲洗衬管以除去挥发性较低的组分。
但是，选择合适的衬管清洗程序可能较为困难。
某些溶剂可能会除去脱活层，并且工具可能会划伤衬管的玻璃表面，从而导致出现多余的活性点。
新的衬管几乎总比已清洁过并且重新脱活的衬管表现优异- 尤其对于痕量分析。
3、色谱柱、进样口衬管或被污染的金属进样口密封垫所吸收的样品组分使用新的脱活的衬管或清洗旧衬管并更换玻璃毛。
进样针针头撞击，进样口衬管内的填充物破碎。
从衬管中取出部分填充物，或使用无填充的衬管。
色谱柱末端切口不整齐（样品吸附于此）卸下色谱柱。
使用安全的毛细管熔融石英切割工具（例如陶瓷片或色谱柱切割器）将色谱柱切成垂直的齐口，然后重新装入色谱柱。
断裂或破碎的进样口衬管确保进样口中的总流速为40 ml/min以上。
4、色谱柱在进样口中的位置不正确，可能载气流路存在密封垫的颗粒。
5、一支色谱柱上不能装入超过2-3 个接头。
多个接头会造成死体积（拖尾峰）问题。
6、超出色谱柱的温度上限会造成固定相和管表面的加速损坏。
这样会造成色谱柱的过分流失，活性组分形成拖尾，以及/或降低柱效（分离度）。
幸好热损坏是一个很慢的过程，因此，在色谱柱严重损坏之前还有一段很长的时间可在高于温度极限的条件下使用。
当有氧存在时会大大加速热损坏。
峰形拖尾的原因及解决方法
技术报告改善反相HPLC中的峰拖尾在反相HPLC中峰拖尾是一个普遍的现象。
特别是分离碱性化合物和通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾缘由。
峰拖尾可以引起分离度降低，灵敏度减弱，精密度和定量变差。
图1表明峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关。
图2表明准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响。
图1 拖尾对分离度和灵敏度的影响当峰拖尾（T，拖尾因子）从1.0增加到2.0时，分离度（Rs）从1.5降到1.0。
灵敏度（峰高）由于峰的体积增大和样品的浓度降低而降低。
图2 峰拖尾对准确度和精密度的不利影响拖尾峰使数据系统难以准确确定峰的终点，故而影响准确度和精密度。
在这个例子中，在B点测得到峰面积比在A点测得的峰面积少约3%。
峰拖尾的原因，峰拖尾的主要原因有：1、溶解样品的溶剂比流动像更强，2、样品量过载，3、固定相中的硅醇基与胺类物质相结合反应，4、硅胶吸附酸性化合物，5、色谱柱柱床中有空隙。
只要确定了拖尾的原因就可以采取措施减少拖尾并消除之。
（表1）表1 峰拖尾：原因及解决方案原因解决方案样品溶剂极性强于流动相在流动相中溶解样品，尽可能降低样品溶剂的强度样品量过载减少进样量，参考表2中推荐的不同柱型对应的不同进样体积硅醇基与胺类物质的结合 1.调节流动相的pH<3.0。
2.增加流动相的离子强度，25mM～50mM。
3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM一、由于溶解样品的溶剂极性强于流动相而引起的拖尾如果溶解样品的溶剂极性强于流动相，就会引起宽的甚至是拖尾的峰。
有几种线索可以帮助确定是由于此种原因引起的拖尾。
第一种就是先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重；另一种迹象就是进样量减少或者是样品经流动相稀释后进样峰拖尾减轻了。
如果怀疑拖尾的原因是流动相的强度引起的，解决很简单。
将样品溶解在流动相中，或者将样品经流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求。
二、由样品量过载引起的峰拖尾当进样量超过柱子的容量，样品峰会呈现一个直角三角形。
改善反相HPLC 中的峰拖尾
技术报告改善反相HPLC中的峰拖尾在反相HPLC中峰拖尾是一个普遍的现象。
特别是分离碱性化合物和通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾缘由。
峰拖尾可以引起分离度降低，灵敏度减弱，精密度和定量变差。
图1表明峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关。
图2表明准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响。
图1拖尾对分离度和灵敏度的影响当峰拖尾（T，拖尾因子）从1.0增加到2.0时，分离度（Rs）从1.5降到1.0。
灵敏度（峰高）由于峰的体积增大和样品的浓度降低而降低。
图2峰拖尾对准确度和精密度的不利影响拖尾峰使数据系统难以准确确定峰的终点，故而影响准确度和精密度。
在这个例子中，在B点测得到峰面积比在A点测得的峰面积少约3%。
峰拖尾的原因，峰拖尾的主要原因有：1、溶解样品的溶剂比流动像更强，2、样品量过载，3、固定相中的硅醇基与胺类物质相结合反应，4、硅胶吸附酸性化合物，5、色谱柱柱床中有空隙。
只要确定了拖尾的原因就可以采取措施减少拖尾并消除之。
（表1）表1峰拖尾：原因及解决方案原因解决方案样品溶剂极性强于流动相在流动相中溶解样品，尽可能降低样品溶剂的强度样品量过载减少进样量，参考表2中推荐的不同柱型对应的不同进样体积硅醇基与胺类物质的结合 1.调节流动相的pH<3.0。
2.增加流动相的离子强度，25mM～50mM。
3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM的TEA（三乙胺）。
4.选择低硅醇活性的固定相。
参照图6C18柱按固定相硅醇活性分级。
5.酸性物质在硅胶上的吸附 1.增加流动相中盐的浓度，25mM～50mM。
2.调节流动相的pH<3.03.增加竞争性的有机酸，1%醋酸或者是0.1%TFA（三氟乙酸）柱子空隙更换新的色谱柱尝试填充空隙很少能达到较好的效果。
一、由于溶解样品的溶剂极性强于流动相而引起的拖尾如果溶解样品的溶剂极性强于流动相，就会引起宽的甚至是拖尾的峰。
有几种线索可以帮助确定是由于此种原因引起的拖尾。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
各种造成峰形拖尾的原因分析：
[柱物理损坏]
色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。
唯一的解决方法就是更换新柱。
[柱内填料污染]
流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。
流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。
流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。
用前先用0.45um溶剂微孔过滤（器）过滤，除去可能存在的微粒。
流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。
此外还得保证储存流动相的容器清洁。
复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤（器）或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。
若样品不便处理，要使用保护柱。
柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。
或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱（约20至30倍柱体积，或视具体情况而定；另外，此时不能接检测器），将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。
[柱进口处有异物]
当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再置于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。
[样品浓度过高致使柱超载]
样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾（或伸舌）。
适当减小进样量或样品浓度（需要时，可提高检测器灵敏度）直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。
减小进样量还能改善其分离度。
正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。
[样品溶剂不对]
选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。
最好选用流动相溶解样品。
[柱外效应]
柱外效应（即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积）是影响色谱柱柱效的主要因素之一。
所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。
[缓冲不足或不合适]
在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留时间重现性差和峰形拖尾。
增加缓冲浓度（与样品大小相匹配）能改善此情况。
[硅醇基团作用]
仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。
所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。
但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。
为了减小峰形拖尾，通常可在流动相加入25mM三乙胺（抑制剂）。
三乙胺能与硅醇基
团发生强烈的相互作用，从而降低或阻断样品分子与硅醇基团的作用，以保证保留机理正常进行，并大大缓解了峰形拖尾。
使用长链的硅醇基抑制剂，虽起效较慢，但持续力较三乙胺长。
因为抑制剂分子中除了胺基与硅醇基团发生极性作用外，大分子中非极性部分与固定相也会发生反相作用而产生保留现象。
如果将抑制剂加至样品中，效果会显著。
[柱内金属污染]
柱内金属污染（Fe，Ni等）可引起某引些化合物峰形拖尾。
金属可由填料本身带进，也可由腐蚀性流动相缓慢溶解柱进口的金属滤片，随流动相沉积到柱填料中。
例如C18柱填料被金属污染后，造成酸性/碱性样品拖尾，可用碱洗/酸洗后再键合的填料，得到的峰是尖锐且对称的。