改善反向液相色谱峰拖尾的方法修订稿
液相色谱峰形拖尾解决方案
峰形后拖解决方案和实例继前一篇《峰形前拖解决方案》，我们对峰形后拖的情况及其解决方案也进行了总结。
与《峰形前拖解决方案》相同，在这里我们也同样的撇开所有的污染、塌陷、死体积等其它因素，假设系统是好的，柱子是新的、好的，单纯探讨液相方法与峰形后拖之间的关系，通过调整液相方法来解决峰形前拖的问题。
这样有利于厘清拖尾产生的根本原因，对峰形拖尾的问题提供一些经验上解决方案。
首先让我们了解一下峰形后拖的几种常见形式，三种常见的拖尾如下：系统是好的，柱子是好的，为什么会产生后拖？我们还是回顾一下，色谱分离的一般过程，正常的峰形应该是样品在色谱柱上均匀前移的情况下得到的，浓度分布在整个通过色谱柱柱床的过程中任何时候都呈正态分布，如下图所示：色谱分离是一个物理过程，样品分子经过在固定相与流动相之间的多次分配、吸附解吸，由于不同分子与固定相和流动相之间的相互作用力的差异而使它们在色谱柱中的移动速度不同，以此实现分离的目的。
相同色谱条件下，有些化合物容易产生拖尾，有些则不产生拖尾，这说明拖尾的产生跟样品本身的性质是密切相关的，通常非极性和弱极性的化合物能获得良好的峰形，而带有－COOH、－NH2、－NHR、－NR2等极性基团的化合物则比较容易产生拖尾。
可以想象一下，样品分子在分析过程所处的环境，一是流动相，二是固定相，流动相可以自由流动的，均一性比较好，因此可以认为样品分子四周都被相同组成的流动相所包围，其对每个样品分子的相互作用力也是均匀的、对称的，不应该是引起浓度分布发生变化的主要原因。
考虑固定相，固定相中除了C18长链外还有填料键合时残余的硅羟基，由于C18长链是非极性的，其与样品分子的相互作用力也是很微弱的范德华力，而硅羟基则具有一定的极性Si－Oδ－Hδ＋，在pH一定的条件下甚至还会发生电离，形成－Si－O－形式的离子态。
Si－Oδ－Hδ＋和－Si－O－对于极性化合物之间的作用力则是一种极性的静电作用力，这种作用力比范德华力要强得多，同时，因为硅胶表面键合了C18长链，由于空间位阻作用，样品分子中能接触到残余硅羟基的机会不会很多，只有少部分的分子才能与残余硅羟基产生作用。
色谱峰拖尾的原因及处理方法
色谱峰拖尾的原因及处理方法色谱峰拖尾那可真让人头疼！为啥会拖尾呢？可能是色谱柱受损啦，就像你的宝贝手机屏幕被划了一道，那肯定不好使了呀！也可能是样品过载，哎呀妈呀，这就好比小货车硬要装大卡车的货，能不垮嘛！还可能是流动相不合适，这就跟你穿了不合脚的鞋子去跑步，能舒服嘛！
那咋处理呢？如果是色谱柱受损，赶紧换一根新的呗！要是样品过载，那就减少进样量呀，可别贪心哦！流动相不合适的话，就调整流动相的组成和比例呗，这就跟做饭调味一样，得恰到好处。
这过程中安全性很重要哦！可别不小心碰到那些有毒的试剂，那可不得了。
稳定性也得注意，别一会儿这样一会儿那样，得有个准头。
这在很多场景都能用得上呢！比如药物分析，你想想，要是药物分析不准确，那多吓人呀！优势嘛，能让你的分析更准确，就像有了一双火眼金睛，啥问题都能看出来。
我给你说个实际案例哈，有一次在实验室，大家就遇到了色谱峰拖尾的问题，后来一检查，原来是色谱柱不行了，换了一根新的，嘿，立马就好了。
这效果，杠杠的！
色谱峰拖尾就得赶紧找原因解决，这样才能让我们的实验更顺利，分析更准确。
咱可不能让这小问题影响了大事。
色谱拖尾原因及解决办法
【转】色谱拖尾原因及解决办法色谱拖尾原因及解决办法，我查看一些资料来班门弄斧了。
1、当经历维修色谱问题（色谱峰拖尾、灵敏度降低、保留时间改变等）时，切去色谱柱前端的1/2 到1 米。
必要时，更换进样口内衬管、隔垫，并清洗进样口。
保护柱可用于提高色谱柱的使用寿命。
（气相）2、衬管脱活进样口衬管上的活性点可以吸附样品组分并导致出现拖尾峰，并可能损失灵敏度和重现性。
用脱活制剂用来覆盖衬管玻璃表面的活性点或与之发生反应。
脱活程序进行脱活，该程序可以使衬管重现性高、惰性好，且使用寿命长。
对于不分流的应用，或者在必须分析极性很弱的化合物时，应当使用脱活的衬管。
即使使用脱活的衬管开始也会表现出活性，当这种情况发生时，应当更换衬管。
可以清洁衬管以除去颗粒物或用溶剂冲洗衬管以除去挥发性较低的组分。
但是，选择合适的衬管清洗程序可能较为困难。
某些溶剂可能会除去脱活层，并且工具可能会划伤衬管的玻璃表面，从而导致出现多余的活性点。
新的衬管几乎总比已清洁过并且重新脱活的衬管表现优异- 尤其对于痕量分析。
3、色谱柱、进样口衬管或被污染的金属进样口密封垫所吸收的样品组分使用新的脱活的衬管或清洗旧衬管并更换玻璃毛。
进样针针头撞击，进样口衬管内的填充物破碎。
从衬管中取出部分填充物，或使用无填充的衬管。
色谱柱末端切口不整齐（样品吸附于此）卸下色谱柱。
使用安全的毛细管熔融石英切割工具（例如陶瓷片或色谱柱切割器）将色谱柱切成垂直的齐口，然后重新装入色谱柱。
断裂或破碎的进样口衬管确保进样口中的总流速为40 ml/min以上。
4、色谱柱在进样口中的位置不正确，可能载气流路存在密封垫的颗粒。
5、一支色谱柱上不能装入超过2-3 个接头。
多个接头会造成死体积（拖尾峰）问题。
6、超出色谱柱的温度上限会造成固定相和管表面的加速损坏。
这样会造成色谱柱的过分流失，活性组分形成拖尾，以及/或降低柱效（分离度）。
幸好热损坏是一个很慢的过程，因此，在色谱柱严重损坏之前还有一段很长的时间可在高于温度极限的条件下使用。
色谱峰拖尾解决方法
色谱峰拖尾解决方法色谱峰拖尾解决方法近年来，越来越多的研究者选择使用色谱仪来进行化学分析，尤其是高效液相色谱仪（HPLC）。
然而，HPLC中的色谱峰拖尾问题一直是研究人员们面临的最大挑战之一。
以下是几种解决色谱峰拖尾问题的方法。
1. 优化仪器条件当研究者遇到色谱峰拖尾问题时，首先应考虑的是优化仪器条件。
常见的优化仪器条件方法包括：优化流速、更换柱子、更换进样针头、更换活塞密封圈等等，这些常见的优化方法可以让仪器恢复到正常的运行状态，从而更好地消除拖尾问题。
2. 改善样品制备另一个可能导致色谱峰拖尾问题出现的原因是样品制备不当。
如果样品含有大量的杂质或者过于浓缩，这些都可能导致拖尾问题出现。
因此，研究者可以考虑改善样品制备方法，如使用更好的萃取工具、制备更纯净的样品和深度稀释等等，以减少拖尾现象的出现。
3. 优化柱子选择在进行柱子选择时，研究者可以考虑选用具有更好分离能力和更高效率的柱子。
较高的分离力可以保证样品分子最大程度地分离，减少拖尾问其他的。
同时，较高的柱效率可以保证分离的同时不会对样品造成太大影响，从而使拖尾问题得以解决。
4. 调整pH值和缓冲液浓度在HPLC分离过程中，样品的pH值和缓冲液浓度都会对色谱峰的形状产生影响，如果分析人员在选取分离柱和实施柱效验测时，能够正确选择条件，峰才能得到兼顾尖度与实时保留时间稳定性的最佳平衡。
这些变量对单色谱峰的对称性、峰的高度以及分离度都会产生影响，因此，也可以考虑通过调整pH值和缓冲液浓度来解决色谱峰拖尾问题。
5. 增加底物或添加剂为消除色谱峰拖尾现象，研究者们可以尝试提高底物或添加剂的浓度。
例如，对于氨基酸分析，可以添加高浓度底物，这样可以增加检测灵敏度，并使拖尾问题得到解决。
总之，色谱峰拖尾问题是化学分析实验中很常见的现象，但它所导致的结果可能会对实验结果的准确性带来很大的影响。
因此，研究者们可以根据上述方法，采取不同策略，找到最符合实验条件的解决方案，以确保得到最准确、最可靠的实验结果。
液相色谱峰形问题 减少拖尾
液相色谱峰形问题减少拖尾2010-09-17 06:46:08| 分类：03液相色谱问答 | 标签：液色迷人液相色谱专家四极杆液质联用仪液相色谱品牌排名|字号订阅液相色谱峰形问题减少拖尾液相色谱峰形拖尾解决方案液相色谱峰形问题- 夜色砖家的日志- 网易博客高效液相色谱法专家专注hplc药物分析液相...在流动相中加入三乙胺，能显著的改善...四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四...3）增加流动相中缓冲盐的浓度增加缓冲/hplc2@126/blog/static/108348 ... 2010-12-26 - 百度快照三、峰形问题峰形对称性的优劣对峰面积和分离度有很大的影响，从而影响分析结果的准确性。
引起峰形异常的因素很多，柱外死体积引起峰形异常有个特点：对先出的峰影响大，对后出峰影响小；柱头塌陷、柱头和筛板污染会引起所有的峰形都异常，而硅醇基次级保留只引起部分峰拖尾。
相塌陷除了引起保留下降外，也会造成峰拖尾。
色谱实践中，大部分的峰形问题都不是色谱柱的问题，仪器参数设定、色谱条件和方法正确与否对峰形有很大影响。
1. 峰后拖常见的3种拖尾情况：次级保留引起峰拖尾的机理解析：反相色谱中，通常非极性和弱极性的化合物能获得良好的峰形，而带有－COOH、－NH2、－NHR、－NR2等极性基团的化合物则比较容易产生拖尾，原因是硅胶表面残留硅羟基对极性和碱性样品分子产生次级保留效应。
反相填料表面有残余的硅羟基，具有一定的酸性，其pKa约为4.5～4.7。
根据电离规律，流动相的pH－pKa>2即pH>6.7时，99％以上的硅羟基应该是呈离子状态的，即Si－O－，而pKa－pH>2即pH<2.5时，酸性环境抑制了硅羟基的电离，99％以上的硅羟基应该是呈分子状态的，即Si－OH，但其极性仍然存在，即Si－Oδ－Hδ＋。
Si－Oδ－Hδ＋和－Si－O－对于极性化合物之间的作用力则是一种极性的静电作用力，这种作用力比范德华力要强得多。
改善反向液相色谱峰拖尾的方法
改善反向液相色谱峰拖尾的方法改善反相HPLC中的峰拖尾一、溶解样品的溶剂极性强于流动相引起的拖尾现象:1、先流出的峰的拖尾较后流出的峰拖尾严重; 分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾2、进样量减少或样品经流动相稀释后进样峰拖尾情况减轻。
峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。
(峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关;准确度和精密度因数据系二、由样品量(进样量超过柱子容量)过载引起的峰拖尾统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响)现象: 峰拖尾原因及解决方案1、样品峰呈现直角三角形，当更多的样品量注入时，峰前端变尖、编号原因解决方案后端拖尾更严重。
2、色谱柱过载后，保留时间随样品量的增加而提前。
(见图3) 样品溶剂在流动相中溶解样品，或者将样品经解决方案:减少进样量一极性强于流流动相稀释至进样后峰拖尾符合要求，动相总之尽可能降低样品溶剂的强度柱直径(mm)参考最大样品样品量过减少进样量，参考表2中推荐的不同ID 量(mg) 二载柱型对应的不同进样体积 10 35-65 1.调节流动相的pH<3.0。
4.6 4.5-9.0 2.增加流动相的离子强度，25mM,3.0 2.0-4.0 50mM。
表2 HPLC色谱柱的直径、参考的最大进样量、进样量的范围硅醇基与因为实际进样量依赖于柱子的填料(具有高的表面积的填充材料三胺类物质的3.流动相中增加竞争性的胺类，10mM可以具有大的进样量)，分析物质(分子量大的进样量要少)，和其他结合的TEA(三乙胺)。
的因素比如样品在流动相中的溶解性。
4.选择低硅醇活性的固定相。
参照图6 C18柱按固定相硅醇活性分级。
1.增加流动相中盐的浓度，25mM,50mM。
酸性物质四在硅胶上的2.调节流动相的pH<3.0 吸附 3.增加竞争性的有机酸，1%醋酸或者是0.1%TFA(三氟乙酸) 更换新的色谱柱五柱子空隙尝试填充空隙很少能达到较好的效果。
液相色谱峰形拖尾解决方案
液相色谱峰形拖尾解决方案液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于食品、医药、环境、化学等领域。
在液相色谱分析中，峰形是评判分离效果和定性定量分析的重要指标之一。
然而，由于多种因素的影响，液相色谱峰形有时会出现拖尾（tailing）现象，影响分析的准确性和灵敏度。
本文将介绍液相色谱峰形拖尾的原因及解决方案。
峰形拖尾的原因液相色谱峰形拖尾常常由以下原因引起：1.柱温过高：柱温过高会导致样品在柱中停留时间过长，进而引发拖尾。
因此，在操作过程中需要根据分析物的性质和柱的温度稳定性进行合理控制。
2.样品溶液中存在离子：样品溶液中存在离子可能会与色谱柱填料表面形成静电吸附，导致峰形拖尾。
此时可以通过选择合适的移动相和调整离子强度来减轻或消除拖尾现象。
3.色谱柱填料表面活性：色谱柱填料表面的活性可能导致部分化合物与填料表面发生相互作用，从而造成峰形拖尾。
此时可以选择活性更低的色谱柱填料或在样品中添加适量的对应剂以减轻或消除拖尾现象。
4.柱寿命过长：使用时间过长的色谱柱填料可能会出现表面酸化、损伤等现象，导致峰形拖尾。
在实际操作中，及时更换色谱柱填料是重要的预防措施。
解决方案为了解决液相色谱峰形拖尾问题，可以采取以下措施：1.优化柱温：合理控制柱温可以有效减轻峰形拖尾。
根据样品的性质和柱的稳定温度范围，选择合适的柱温进行实验。
2.调整流速：合适的流速可以改善峰形拖尾。
通常情况下，过高的流速会导致色谱峰扩展和形状变化，而过低的流速会增加分析时间和柱寿命。
因此，通过选取适当的流速范围，可以寻找到最佳条件。
3.选择合适的固定相和移动相：色谱柱的固定相和移动相的选择对峰形拖尾有很大影响。
合适的固定相可以提供最佳相互作用，减少拖尾的发生。
移动相的选择也非常重要，需要考虑到离子强度、酸碱度等因素。
4.降低样品浓度：如果样品浓度过高，液相色谱峰形可能会出现拖尾现象。
在实际操作中，可以适当稀释样品，以降低浓度，改善峰形。
消除拖尾的方法
由于被分析物与色谱柱间的相互作用导致峰拖尾。
这种相互作用是在做反相分析中所发生的分配行为以外的作用。
峰拖尾一般发生在碱性化合物上，通常是由于残留的硅羟基和带正电荷的碱性化合物之间的相互作用引起的。
这种相互作用一般是发生在带正电荷的碱性化合物与带负电荷的色谱柱表面硅羟基之间的离子交换。
当流动相的pH 值大于4.5-5.0 时，色谱柱表面的硅羟基会带负电荷。
因此，消除峰拖尾的最有效方式是使用pH 值小于4 的缓冲流动相。
由于硅羟基的活性和离子化会降低，因此选择更换新的高纯羟基化硅胶色谱柱也会减少峰拖尾。
ZORBAX 色谱柱中使用这类硅胶的有：StableBond 色谱柱、Eclipse XDB 色谱柱、Bonus-RP 和Extend-C18 色谱柱。
这些色谱柱均可以减少峰拖尾，但是它们又有所不同。
StableBond (SB) 色谱柱在低pH 值时比较理想，因此在使用较低pH 值的流动相时通常是首选色谱柱。
在pH 值为5-9 时，Eclipse XDB 色谱柱是减少峰拖尾的首选色谱柱。
这类色谱柱有双重封端，因此它可以通过覆盖色谱柱表面上尽可能多的残留硅羟基以消除可能的硅羟基副作用，从而减少峰拖尾。
对于这个中间pH 值区，Bonus-RP 色谱柱也是一个减少峰拖尾的不错选择。
Bonus-RP 色谱柱有一个植入极性物质的键合相。
这些极性物质可减少碱性化合物和残留硅羟基之间的相互作用，因此改善碱性化合物的峰形。
这类色谱柱可以在pH 值为2-8 的条件下使用。
Extend-C18 用于高pH 值，最高可用于pH 值为11.5 的条件下。
在较高pH 值下，很多碱性化合物已经不带电荷，因此和硅羟基的相互作用减小，峰拖尾也减少。
认真选择流动相也可以减少峰拖尾。
缓冲流动相(25–50 mM) 可减少峰拖尾，同时首选低pH 值(pH 2–3) 流动相。
这还会产生更多的可再生色谱。
如果需要的话，可以添加一些流动相添加剂如三乙胺(TEA) 以减少碱性化合物的峰拖尾。
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改善反向液相色谱峰拖
尾的方法
内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
分离碱性化合物、通过HPLC分析药物成分时是经常产生拖尾
峰拖尾可以引起分离度降低、灵敏度减弱、精密度和定量变差。
（峰之间的分离度和灵敏度与峰拖尾成负相关；准确度和精密度因数据系统无法准确识别峰的起点和终点而受到影响）
峰拖尾原因及解决方案
图3 样品量过载引起的拖尾
表3 反相HPLC常用缓冲液
三、固定相中的硅醇基与胺类相互作用引起的拖尾
原因：带正电荷的溶液（胺类）与固定相颗粒表面上的酸性硅醇发生了离子交换，引起二次保留(图 4)，常见于固定相具有显着的硅醇活性的的色谱柱，中性pH（6～8）条件下比酸性pH（<3）更易发生。
酸性和中性的化合物一般不受影响，一些碱性化合物更易受到此效应的影响。
解决：
1、确认流动相中有合适的缓冲盐，可能的话尽量在pH<3的条件下操作（使硅胶固定相上的硅醇基质子化，减少溶质与硅醇反应的几率）。
使用足够的缓冲液控制pH并减少离子交换效应。
在pH<3的条件下操作，可减少由
图4相互作用引起的峰拖尾，原
理：
固定相表面的酸性硅醇基可以形成与碱性化合物反应的离子交换位点，经反相HPLC分离胺类化合物时，这种离子交换反应常常引起峰的保留（二次保留）和峰拖尾。
2、在流动相中加入竞争性的胺类，如：在流动相中加入三乙胺（TEA）（多数情况下，约10mM即
可）。
TEA可以与硅醇发生强的反应，并抑制样品中的胺类与硅醇反应。
如图5：向流动相中加入TEA用来提高峰形
1.苯丙醇胺
2.麻黄碱
3.苯丙胺
4.甲基
苯丙胺5.
苯三胺
色谱柱：Eclipse XDB-C8，
4.6*150mm
流动相：85%25mMNa2HPO4，
pH7.0，15%ACN
流速：1.0ml/min
温度：35℃
样品：苯丙胺类
缺点：此法增加了分析方法复杂性并且改变色谱柱性质不易逆转。
强度胺类（如三乙胺），不易从色谱柱上洗脱下来。
既用过含有TEA的色谱柱就不再适合应用于流动相中不含TEA 的分析。
原理：三乙胺与硅醇强烈作用，减少了样品混合物中胺类与硅醇的作用，因此，使用三乙胺可以不用选择低硅醇活性的固定相。
反相HPLC色谱柱检测固定相硅醇活性的方法：根据阿米替林的对称性（峰拖尾），柱子对称性低则硅醇活性低。
阿米替林在固定相中拖尾较低（对称值低），则固定相硅醇活性较低，并且检测碱性化合物时就会有较低的拖尾。
图6根据测定阿米替林的对称性（即硅醇活性）排列了常用的C18反相色谱柱
色谱柱：4.6×150mm，5um
流动相：80%甲醇；20%0.05M磷酸盐缓冲液pH7
流速：2.0ml/min
温度：24℃
样品：阿米替林
四、酸性化合物在硅胶上吸附引起的拖尾
原因：硅胶固定相的吸附。
解决：提高流动相中盐的浓度来抑制二次反应，降低流动相的pH使硅醇
和溶质质子化，必要时可以向流动相中加入竞争性的酸（如图）。
色谱柱：4.6×150mm，C18
流动相：40%5mMNaH2PO460ACN
样品：布洛芬（酸性化合物，严重拖尾，向流动相中加入乙酸可以改善。
乙酸优先和硅胶固定相表面的酸性硅醇基反应，抑制了布洛芬和硅醇基的反应，减低了拖尾。
）
五、柱床空隙引起的拖尾
随填装技术完善，柱头空隙越发少见，除非在极高的压力或流速的条件下装柱时可能出现。
现象：平时色谱柱柱效良好，突然性发现所有的峰均拖尾时；
先洗脱出的峰较后洗脱的峰更易受柱空隙的影响。
解决：更换柱子。