测定奶体细胞数的方法
牛奶中体细胞数的表述方式

牛奶中体细胞数的表述方式26中国奶牛?21106年第2期牛奶中体细胞数的表述方式董德宽(上海奶业行业协会,上海200072)中图分类号:TS252.7文献标识码:B文章编号:1004—4264(2006)02—0026一O1 从某头牛(或其乳房的某乳区),某牛群(或某储奶罐中),采集生鲜牛奶有代表性的样品,藉助于显微镜观测计数,流动细胞荧光计数仪或视频显微仪检测等手段,算得每毫升牛奶中所含的体细胞数,称为(乳)体细胞(计)数(somaticcellcount,SCC).大量的检测实践表明,未受感染的乳腺组织产出的乳汁SCC约为2万一5万.当奶牛的泌乳系统受病原微生物入侵而发生感染和损伤时,血液中的白细胞就会穿越毛细血管壁及乳腺泡壁层,进入腺泡腔移入乳汁中.该乳腺分泌的牛奶收稿日期:2005—09—09作者简介:董德宽,男,1940年生,上海市人,高级畜牧师,长期从事奶巾SCC随即不同程度地上升,可达3O万,5O万,8O万,100万,甚至数百万.SCC直接计数所得的数值差距范围太宽.为使数量级简单化,能够呈现较理想的统计学特征,以及便于比较与分析,早在数十年前,Afifi(1967)等学者就提出了用自然数为底的SCC对数转换公式.1982年RaubertasR.F等提出的体细胞评分(somaticcellscore,scs)公式为:SCS=Iog2(SCC/l0OOOO)+3体细胞评分分1O个等级,SCS与SCC的对应值见表l左侧两列数值.SCS与SCC可以相互换算,成为可交替的表达方式.逆运算的公式为:SCC=2~3)(100000)牛生产,科研及有关信息编辑工作Rodriguez-Zas,S.L等(2000)~的SCC对数转换表4娟X荷F1母牛与荷斯坦母牛的泌乳性能比较注1.…1'为30头娟×荷FI母牛的荷斯坦母亲的第一胎泌乳情况.2.纵向肩标相同字母表示差异不显着(P>O.os),不同字母表示差异显着(P(O.05).激影响比较小.3讨论与总结3.1在本次试验中,杂交牛在青年时期的生长发育性能介于纯种娟姗牛与荷斯坦牛之间,各项性能发育良好,初配体重与荷斯坦牛相近,初产月龄与产犊问隔接近于纯种娟姗牛,对肢蹄病,生殖系统等疾病表现出较强的抵抗力.因此可以初步认为:娟X荷Fl母牛在福建亚热带气候环境下能比较好的发挥出其娟姗父系的优秀种质特性,对高温高湿的环境比荷斯坦牛有更强的适应能力.3.2在本试验中.娟X荷Fl母牛头胎305天平均产奶量为5745kg,虽然比同期投产的荷斯坦母牛低,但比其荷斯坦母亲的头胎305天产量增加了221kg,随着饲养管理水平的不断提高,其产奶量应该还有上升的潜力.3.3娟姗牛对亚热带气候比荷斯坦牛适应性好,但娟姗牛个体比较小,产奶量相对较低.我国娟姗牛数量很少,几乎都是从美国,加拿大等国家引进的,生产型奶牛场如果从国外引进大量的纯种娟姗牛.其投入成本将是奶牛场无法承受的,而引进娟姗牛的冷冻精液与荷斯坦母牛进行杂交,则既可以降低成本投入,又能改良奶牛对高温高湿气候的适应性.3.4本试验仅对娟X荷Fl母牛第一个泌乳期进行了总结,对于这批牛的后续表现及其后代在本地区的性能发挥,我们会继续关注.另外,会继续观察含不同比例娟姗牛血液的娟×荷杂交牛在高温高湿环境中的适应能力,以寻找比较恰当的杂交程序.参考文献[1]王福兆,2oo4(~L牛学》(第三版),18.[2]汪翔,关伟昆等,美国娟姗牛在广州地区的适应性研究初报,广东畜牧兽医,2000,(5)42—43.[3】张金钟,1996(d~国农业百科全书》(畜牧业卷)M,39.口中国奶牛?2006年第2期?27?对当前中国荷斯坦牛育种工作的建议任忠伟,张文志(1.西安现代农业开发总公司,西安710021;2.西安市奶牛研究所,西安710021) 中图分类号:$823.I.2文献标识码:A文章编号:1004—4264(2006)02—022一O1 改革开放以来,我国奶牛养殖业得到了突飞猛进的发展.2003年我国奶牛存栏数已达到893.2万头,牛奶总产达到l746.3万t,人均占有牛奶量达到12kg,取得了可喜的成绩.但是,成年母牛平均单产仅有3200余,同国际奶牛业发达国家平均900010O00kg相比较,差距很大,仅是人家的三分之一左右.造成这一差别的原因丰要有:一,饲养水平低下;二,我国荷斯坦牛良种覆盖率太低,大约在30%~35%左右.为此,就必须下苦功夫抓奶牛育种工作,提高奶牛遗传品质,增加良种奶牛数量;强化奶牛饲养管理,提高奶牛单产水平.作为奶牛育种工作人员,我认为必须抓好以下七方面工作.1尽快制定中国荷斯坦牛品种标准现行的品种标准还是上世纪八十年代国家颁布的"中国黑白花奶牛品种标准",随着时代的发展,此标准已不适应目前的现状.早在上世纪九十年代中期,老一辈的奶牛育种工作者即开始着手此项工作,前后已经讨论过数次.至今已十年多了.但修改的中国荷斯坦奶牛品种标准至今未颁布实施.这对我国荷斯坦牛品种登记和良种奶牛的发展有一定的影响,建议此项工作尽早落实,以促进奶业生产的快速发展.2解决DHI实验室的定位收稿日期:2005—04—18在国外,奶牛业比较发达的国家均建立有一个完表1体细胞数.体细胞评分与体细胞线性分的对应值及比较公式(1ogarithmictransformation)表述为体细胞线性分(1ineorscore,LS),其对应评分与体细胞数参见表1右侧两列数值.比较表1四列数据可以看出.SCS与LS其实是相当的;前者的SCC近似于后者SCC的中位数.表2牛奶体细胞数分级标准最近,沈美英等(2005)介绍,国际乳业联合会(IDF)推荐的牛奶体细胞数分级划归为4级(表2).该分级标准被认为可以快速,简便,准确地判别奶牛乳腺受感染或发炎情况.根据采集生奶样品的不同.体细胞数可表述为:(1)某乳区所产的奶;(2)某个体牛所产的奶;(3)某牛群或某牧场所产的奶;(4)某储奶罐内的混合奶(bulk tanksomaticcellcount,BTsCC).搜集各采样日牛奶的SCC或SCS.可以计算某牛的泌乳期平均乳体细胞评分(1actationmeanofsampedaylos;somaticcellscores,LSCS).总之.人们可根据需要与可能,在评估奶质,生产实践或科研试验中.选用和读懂不同的乳体细胞数表述方式.参考文献【1】M.MSchutz.Geneticevaluationofsomaticcellscoresforunited statesdairycattle.[JJJIDairySci.,1994(77)7:2113—2129.[21H.D.Norman.et.a1.Herdandstatemeansforaomaticcellcount fromdairyherdimprovement.fJ】J.DairySci.,2000(83)11:2782-2788. [3】M.Chassagne.et.a1.,Expertassessmentstudyofmilkingand hygienepracticescharacterizingverylowsomaticcellscoreherdsin France.fJ1J.DairySci.2005(88)5:1909-1916.[4]沈美英,孙海洲,卢德勋等.利用CMT法评判乳中体细胞数及奶牛乳房炎.[J]畜牧与饲料科学,2005.2:48—49.U。
牛奶中体细胞数的研究进展

玲囊 蠹
动 物 保 健
牛奶 中 体 细 胞主 要 是 白细胞 和 乳 房 分 泌 组织 的上 皮 细胞 , 细胞 数 (oa— 体 S m t i C l C u t 简 称 S C)是 衡 量 生 奶 中 微 生 物 状 况 的 一 个 重 要 指 标 。随 着 体 细 c e l on , C
过 50 00m 0 , 0 / l是 大 多 数 国 家 生 奶 拒 收 的 标 准 。本 文 就 有 关 体 细 胞 数 的 研 究 进 展 作一综述。 1 S C 与 乳 房 炎 发 病 率 的 关 系 C 牛奶 中 体 细胞 由 多形 核 白细胞 (M P N)、 噬 白 细 胞 和 淋 巴 细 胞 组 成 , 于 健 巨 对 康 奶 牛所 产 牛 奶 , 成较 为 稳 定 , 种 细 胞 分 别 占 1 、0 4 组 三 2 6 、 8% ,M 的 主 要 作 用 PN 就 是分 解 及 吞 噬 微 生物 ( uvnc B r e ih等 , 9 5 也 是 牛 奶 体 细 胞 数 变 化 最 大 的 部 19 ), 分 , 常 情 况 下 当 奶 牛 患 乳 房 炎 后 P N的 数 量 显 著 提 高 ; 着 胎 次 和 泌 乳 阶 段 的 通 M 随 增 加 原 因 是 PN 的 数 量 显 著 增 加 ( . . L S I D 19 , . . e l 等 , 9 8 M U M E — A E , 9 7 A L K ly 19 )。 在 泌 乳 初 期 与 其 他 泌 乳 阶 段 相 比 较 , 巴 细 胞 和 单 核 细 胞 较 高 , P N和 巨 噬 细 淋 而 M 胞 只 有 一 半 (< . 1 , 淋 巴 细 胞 在 泌 乳 中 期 与 泌 乳 后 期 相 似 ( . o on PO O ) H D sg e等 , 2 0 : a O s v lt等 , 0 1 0 2 V n o t ed 2 0 )。
浅析奶牛牛乳汁中电导率、PH值变化与体细胞数的相关关系的研究

浅析奶牛牛乳汁中电导率、PH值变化与体细胞数的相关关系的研究赵静【摘要】本试验随机采集本中心荷斯坦奶牛的生鲜乳的奶样为研究对象,对乳样的电导率、pH值和体细胞数的测定以及相关关系研究后得出结论:体细胞数在50万个/mL以下时,电导率值在4.40~4.75ms/cm之间、pH值在6.40~6.80之间;体细胞数在50~150万个/mL以上时,电导率在5.20~7.00ms/cm之间、pH值在6.80~7.15;体细胞数在150万以上,电导率值在7.00ms/cn以上、pH值在7.15以上,结果表明,牛乳电导率、pH值的变化与体细胞的含量呈正比,电导率pH值越高、体细胞数越高,患隐性乳房炎的可能性就越大.因此可以利用牛乳体细胞数与电导率pH值变化的相关关系来判断奶牛是否患有隐性乳房炎.【期刊名称】《青海畜牧兽医杂志》【年(卷),期】2016(046)003【总页数】2页(P10-11)【关键词】牛生鲜乳;体细胞;电导率;ph值;隐性乳房炎【作者】赵静【作者单位】青海省家畜改良中心,西宁,810016【正文语种】中文【中图分类】S826.9+4乳房炎是对奶牛养殖业危害最严重的疾病之一,特别是隐性乳房炎,由于没有明显的临床症状,不仅会导致奶牛乳产量和质量的降低。
而且还可能传染给其他奶牛,导致疾病的扩散。
因此。
对隐性乳房炎进行监测是奶牛场最重要的工作之一.由于患隐性乳房炎的奶牛没有明显的临床症状.因此只有运用各种方法对乳汁进行检测。
由于乳中的盐类对牛乳及乳制品的品质及贮藏等影响很大,但其影响程度需视其在乳中的状态及含量而定。
乳中矿物元素的含量受乳房炎的影响视感染的原因和程度而定。
发生炎症的情况下,乳牛分泌的乳液与正常乳差异极大。
牛乳的pH值、钠、氯的浓度均会增加,引起电导率的增加,而钾和乳糖的浓度会有所下降,影响了乳中无机盐的平衡,这就会导致一些离子活性的改变及离子强度的改变,直接影响了酪蛋白胶体的稳定性,并且这可作为牛乳分泌过程中的特殊影响作用而一直存在。
奶牛生产性能测定

奶牛生产性能测定(DHI)(一)体细胞计数的应用牛奶体细胞通常由巨噬细胞、淋巴细胞和多形核嗜中性白细胞(PMN)等组成。
正常情况下,牛奶中的体细胞数一般在20 万个/mL-30 万个/mL。
当乳房受到外伤或者发生疾病(如乳房炎等)时体细胞数就会迅速增加。
如果体细胞数超过50 万个/mL,就导致产奶量下降。
测量牛奶体细胞数的变化有助于及早发现乳房损伤或感染、预防治疗乳腺炎,同时还可降低治疗费用,减少牛只的淘汰,增加产奶能力。
因此,体细胞数反映了牛奶产量、质量以及牛只的健康状况,也是奶牛乳房健康水平的重要标志。
1、奶牛理想的体细胞数:第1 胎≤15 万/ml 第2 胎≤25 万/ml 第3 胎≤30 万/ml 影响体细胞数变化的主要因素有:病原微生物对乳腺组织感染、应激、环境、气候、泌乳天数、遗传、胎次等,其中致病菌影响最大。
临床乳房炎的发生,将会损失20%~70%的奶量,个别牛只甚至会无乳汁分泌。
例如:一个牛场有泌乳牛300 头,体细胞数平均40 万/ml,一年仅奶产量损失的费用就可达4.5 万元(假设头胎牛占25%,奶价2.2 元/千克),这其中还不包括因乳腺炎造成的其它损失,如乳房永久性破坏、牛只间相互传染、头胎牛过早干奶与淘汰、兽药费、抗生素残留奶、原料奶质量下降等,约占总费用的36%。
2、体细胞数对奶牛乳房健康及牛奶品质的影响:测定牛奶体细胞,是判断乳房炎轻重的有力手段,特别是能预示隐性乳房炎。
奶牛一旦患有乳房炎,产奶量、奶的质量都会有相应的变化。
患乳房炎的奶牛其乳腺组织的泌乳能力下降,达不到遗传潜力的产奶峰值,并对干奶牛的治疗花费较大。
如果能有效的避免乳房炎,就可达到高的产奶峰值,获得巨大的经济回报。
患乳房炎的奶牛所分泌的牛奶与正常牛奶的主要区别,是干物质含量减少及各种乳成分的含量比例发生变化。
如乳房炎达到很重的程度,牛奶将接近血液成分。
所以,牛奶体细胞数与产奶量是成反比关系,高体细胞数牛奶中脂肪、蛋白、乳糖等成分都将发生变化。
奶牛生产性能测定(DHI)操作流程

生产性能测定流程主要包括牧场的初期工作和实验室分析以及数据处理三部分。
(一)样本采集1、测定牛群要求参加生产性能测定的牛场,应具有一定生产规模,最好采用机械挤奶,并配有流量计或带搅拌和计量功能的采样装置。
生产性能测定采样前必须搅拌,因为乳脂比重较小,一般分布在牛奶的上层,不经过搅拌采集的奶样会导致测出的乳成分偏高或偏低,最终导致生产性能测定报告不准确。
2、测定奶牛条件测定奶牛应是产后一周以后的泌乳牛。
牛场、小区或农户应具备完好的牛只标识(牛籍图和耳号)、系谱和繁殖记录,并保存有牛只的出生日期、父号、母号、外祖父号、外祖母号、近期分娩日期和留犊情况(若留养的还需填写犊牛号,性别,初生重)等信息,在测定前需随样品同时送达测定中心。
牛只编号规则详见附录1。
3、采样对每头泌乳牛一年测定10次,测试奶牛为产后一周这一阶段的泌乳牛,因为奶牛基本上一年一胎,连续泌乳10个月,最后两个月是干奶期。
每头牛每个泌乳月测定一次,两次测定间隔一般为26-33天。
每次测定需对所有泌乳牛逐头取奶样,每头牛的采样量为50mL,一天三次挤奶一般按4:3:3(早:中:晚)比例取样,两次挤奶按早、晚按6:4的比例取样。
测试中心配有专用取样瓶,瓶上有三次取样刻度标记,具体采样操作规范见附录2。
4、样品保存与运输为防止奶样腐败变质,在每份样品中需加入重酪酸钾0.03g,在15℃的条件下可保持4天,在2℃~7℃冷藏条件下可保持一周。
采样结束后,样品应尽快安全送达测定实验室,运输途中需尽量保持低温,不能过度摇晃。
(二)样本测定1、测定设备实验室应配备乳成分测试仪、体细胞计数仪、恒温水浴箱、保鲜柜、采样瓶、样品架等仪器设备。
2、测定原理实验室依据红外原理作乳成份分析(乳脂率、乳蛋白率),体细胞数是将奶样细胞核染色后,通过电子自动计数器测定得到结果。
生产性能测定实验室在接收样品时,应检查采样记录表和各类资料表格是否齐全、样品有无损坏、采样记录表编号与样品箱(筐)是否一致。
原料奶中检测体细胞数的作用和意义

原料奶中检测体细胞数的作用和意义随着对食品安全的重视,多数国家和地区对原料奶都实行了严格的检测标准,其中原料奶中体细胞数的检测是其中之一。
乳中体细胞数(Somatic cell count ,SCC)不仅是衡量奶牛乳房健康状况的一个重要指标,同时也是评判原料奶质量的重要指标。
体细胞数的高低直接影响乳成分的变化和乳制品的品质。
体细胞主要是白细胞和乳房分泌组织的上皮细胞。
白细胞具有抗疾病感染和协助修复损伤组织的防御功能。
健康乳腺奶中不同类型的体细胞的百分比是:1.巨噬细胞60%;2.淋巴细胞25%;3.嗜中性或多型核嗜中性白细胞15%。
感染乳区的乳汁中大约99%的细胞是白细胞,其余少量是乳腺组织上皮细胞,一起组成了牛奶中的SCC,通常以每毫升中的SCC表示。
正常SCC每毫升牛奶中含量为2万~20万。
体细胞的提高会使牛乳中蛋白酶和脂解酶升高,使清蛋白含量升高,酪蛋白含量降低,而乳制品的货架期缩短,乳制品的风味发生改变。
所以,通过体细胞数的降低可以有效降低原料奶中细菌数的含量,并提高乳制品的质量。
体细胞数高说明奶牛乳腺感染了微生物病原菌,通过不同的微生物检测或根据SCC升高状况诊断是否患有隐性乳房炎,一般SCC高感染的是接触传染性病原菌(金黄色葡萄球菌和其它葡萄球菌、链球菌类等)。
此类传染性病原菌能使SCC升高到80万~100万。
同时任何奶牛疾病都会造成奶牛机体应激反应,尤其是引发系统反应的疾病,都是导致乳汁SCC 升高潜在原因。
因此,检测体细胞数是原料奶检测中持之以恒的工作,同时采取各方面措施降低体细胞数也是保证原料奶品质的关键。
(1)奶中SCC高的奶牛应该分群饲养,以减少交叉感染;(2)为确保牛奶质量,SCC高的原料奶要另行存放,不能混入贮奶罐中;(3)在产奶期对SCC高的奶牛进行治疗或淘汰;(4)防止或控制各种应激;。
奶牛乳中体细胞数与产奶性状的相关分析

于乳 房炎症 的发 生 ,乳房 血管 的扩 张及 渗 透压 的改变 , 血 液 成分 中的 白细 胞 、 a C , 蛋 白等 渗 出并 进 入 腺 NH O 和 泡 , 使 乳蛋 白 、 糖 、 脂肪 和非 脂 乳 固体 等乳 成分 发 致 乳 乳 生 变化 , 而影 响生 奶质 量及 乳 制品 风 味 。国际 上在 进 从 行 研究 中 常将体 细胞 数按 高 细胞组 (0万/ )中细胞 组 5 m1; (0 5 2 - 0万/ 1; m )低细 胞组(0万/ 以下) 分 。 实 验利 2 ml 划 本 用 新 疆 维 吾 尔 自治 区 奶 业 办 公 室 D 检 测 中 心 新 疆 地 HI 区荷 斯坦 牛 测 定数 据 , 析 体 细胞 数 与 日产奶 量 、 脂 分 乳
把 测 定 的 数 据 导 人 E c l , 据 实 验 目 的 并 进 行 xe表 依 相应 整理 , S C按 表 l 1 成 四个水 平 。 将 C 一 分
表 1 体 细胞 数 的 水平 划 分
率 、 蛋 白率 、 乳 乳糖 率 等各 性状 问 的相关 性 , 为降 低体 细 胞 数 , 高群体 产奶 量 、 加牧 场经 济效 益提 供参 考 。 提 增
场 牧 三场 、 屯八 场 、 疆天 山畜牧 生物 工程股 份有 限公 司奶 牛 场四 个牛 场 的荷 斯 坦奶 牛 2 1 奎 新 0 0年 1 1月到
21 0 1年 3 月份 5个 月共 2 6 2 8个 D 测 定 记 录 。 用 S S HI 利 P S软 件 对 乳 中 体 细 胞 数 与 产 奶 性 状 间 的 相 关 性 进
3新 疆 呼 图壁 种 牛场 , 疆 . 新
乌鲁木齐
80 1 ; 30 1
乳房炎的检验

朱仙玉(山西,太原,华诚睿光(中国)生物科技有限公司)乳房炎是病原性细菌穿过乳头,侵害乳腺引起的炎症。
乳房炎可分为临床性乳房炎和隐性房炎,临床性乳房炎致使乳房红肿、疼痛发热、奶量聚减,挤出絮状奶,牛也会出现发烧、拒食等症状;隐性乳房炎没有临床症状,但奶量降低,它对牛群的危害甚至超过临床性乳房炎,因为它不易引起人们的注意而暗中为害,多数奶牛饲养者天天与它打交道,但仍没有完全认识到其重要性。
据统计,97%的乳房炎属于隐性乳房炎,并能在一定条件下转发为临床性乳房炎。
1. 乳房炎控制目标1.1 奶缸体细胞数≤20万/ml,一胎母牛(产犊时)小于10万/ml,全部母牛85%以上小于20万/ml,全部母牛95%以上小于50万/ml。
1.2 临床乳房炎发病率≤3%;隐形乳房乳房炎感染率≤17%;每年因乳房炎死淘率≤3%。
2 .乳房炎常规检测方法2.1 如果牧场里没有完善的乳房炎记录,也不进行乳房炎检测,就没有可靠的数据来分析牛群的乳房炎感染程度,也就不能解决好乳房炎问题。
2.2 乳房炎的检测方法:2.2.1 挤奶前头3把奶检查2.2.2 牛奶体细胞计数(SCC法)2.2.3 加利福尼亚乳房炎测定法(CMT)2.2.4 实验室细菌培养。
(略)3 .挤奶前头3把奶检查3. 1 把每个乳区的牛奶挤到奶样杯内或挤到挤奶厅地面上检查。
3. 2这种方法只是检查临床乳房炎。
临床乳房炎奶特点是:牛奶颜色不正常,有可见的凝块或絮片,乳房出现红肿热疼。
3. 3发现临床乳房炎立即隔离处理。
注意卫生问题。
4 牛奶体细胞计数4.1 检测体细胞的作用:用于检测牛群隐形乳房炎的感染率和估计每头奶牛感染的严重程度和经济损失4.2 体细胞计数与产奶量的关系4.2.1 每毫升体细胞超过5万时,线性评分每增加一个单位每日产奶量就损失0.68千克。
或每个分值使体细胞计数增加一倍。
例如,体细胞计数每毫升从20万增加到40万,产奶量每头日损失就从1.36千克增加到2.04千克。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
测定奶体细胞数的方法
1、概述
在原料奶的品质指标中,体细胞数是一个重要的品质和卫生指标。
体细胞数是指每毫升奶中的细胞总数,体细胞中的98%~99%是白细胞(即巨噬细胞、嗜中性白细胞和淋巴细胞),其他1%-2%是乳腺组织脱落的上皮细胞。
牛奶生产中,原料奶中的体细胞数与奶牛感染乳房炎、特别是隐性乳房炎有直接的关系,直接关系到原料奶的品质。
同时,在加工工艺中,处理体细胞数量多的牛奶与处理一般的奶是不一样的。
因此,牛奶中体细胞数是奶牛乳房健康状况和牛奶质量的重要指标,目前世界上大部分国家将牛奶体细胞数作为牛奶收购标准之一。
目前,测定奶体细胞数的方法如下:显微镜镜检法是测定奶体细胞数的标准方法,但制备样品计数和镜检显得费时、费力,不适合于作为现场快速和批量较大时使用;荧光显微镜计数法的制片、镜检要占许多时间,不适合于大量快速检测应用;加利福尼亚乳房炎试验(CMT)是凭经验,不能得到具体的体细胞数,只能划分出一个大致的范围;高速体细胞计数仪售价极贵,不能普及使用。
针对现有技术中存在的不足之处,本项目组研究了一种成本低廉、操作简便易行、能快速准确获知结果的测定奶体细胞数的方法。
2、技术原理
当产奶体的乳腺受伤害或感染时会大量增加体细胞,体细胞与乳中的其它细胞或细菌相比含有大量的脱氧核糖核酸(DNA);因此,选择显色反应试剂在酸性或碱性条件下将体细胞的膜和细胞核壁溶解,就能释放出DNA,大量的DNA与显色剂发生化学反应,生成有色物质,使样品溶液呈现一定的颜色,在一定的光照条件下,获取其反射光的颜色信息,颜色深浅以及由此计算出的颜色平均分量值的大小与体细胞数的数量呈线性关系,因此,测定并计算此奶样品溶液的颜色信息即可准确测定原料奶中体细胞数量。
(a)
(b)
图1-1 (a )~(g )分别是奶体细胞数T 与RGB 颜色系统中平均分量值R 、G 、B ,与CIE
的XYZ 颜色系统中三刺激值X 、Y 、Z ,与L*a*b*颜色系统中L*的关系
采用化学反应试剂与奶中体细胞核的DNA 发生化学反应从而显色的原理测定奶体细胞数,它比公认方法的显微镜镜检法、荧光显微镜计数法的测定速度要快50倍以上,所用的设备和仪器简便易行,价格便宜,便于在收奶站和中小牛奶企业中推广应用。
3、测定方法
1)在原料奶中加入任意投料比的显色试剂,于强酸性条件下在沸水浴中加热使
原料奶呈现颜色,此显色试剂是以DNA 染色剂为基础配制而成的试剂;
2)将上述带色原料奶作为样品置于比色装置中,采用D65作为标准光源,使样
品与标准光源间的距离为45cm ;在上述条件下用图像摄入设备获得所述样品的颜色信息;
3)将上述颜色信息换算成相应的AdobeRGB 颜色系统分量平均值:凡代表红色
分量平均值,G 8代表绿色分量平均值,B 8代表蓝色分量平均值;或者将上述(a)
(c) (f)
(e)
(g)
颜色信息换算成相应的RGB颜色系统分量平均值:R代表红色分量平均值,G 代表绿色分量平均值,B代表蓝色分量平均值;或者将上述颜色信息换算成相应的国际照明委员会(CIE) XYZ颜色系统三刺激值:X代表红原色值,Y代表绿原色值,Z代表蓝原色值;或者将上述颜色信息换算成相应的国际照明委员会(CIE) L*a*b*颜色系统分量平均值:L*代表明度值;
4)每毫升样品的体细胞含量T可采用以下计算公式中的任意一种: T=-2.1299 R8+285.5、T=-2.7935 G8+342.89, T=-3.3999 B8+ 416.14;
T=-647.688+155.74, T=-952.736+187.12, T=-1129B+221.35;
T=-807.55X+170.66, T=-852.99Y+178.16, T=-1010Z+ 216.72;
或者T=-6.2072L*+334.060
实验验证表明,采用此测定方法,在大大提高测定速度的前提下,所得结果基本等同于利用显微镜镜检法所得的结果。
4、应用效果
公司及牧场应用该体细胞检测技术后,能快速测定原料乳中体细胞数,及时发现和判断隐性乳房炎的发病情况,整个检测成本低廉、操作简便,在公司各牧场使用,做到早发现早治疗。
从2009年应用至今,目标牧场的隐性乳房炎发病率从60-70%下降至30-40%,同比增加奶产量近10%,也大大提高原料乳的品质。