综合性实验三、抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定

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抗血清制备及抗体效价测定

摘要 (4)【实验过程】 (3)PartⅠ. NDV 抗血清制备 (3)一、实验原理 (3)二、实验仪器、材料和试剂 (4)1. 仪器 (4)2. 材料 (4)3. 试剂 (4)三、方法和步骤 (4)（一）NDV 兔抗血清制备 (4)1. 家兔捉拿方法 (4)2. 家兔固定方法 (4)3. 初次免疫 (5)4. 二次免疫 (5)5. 终末免疫 (6)6. 试血 (6)7. 颈动脉放血 (6)8. 血清分离 (6)9. 抗血清保存 (7)（二）NDV 鼠抗血清制备 (7)1. 小白鼠的捉拿和固定 (7)2. 初次免疫 (7)3. 二次免疫 (8)4. 终末免疫 (8)5. 试血 (8)6．放血 (9)7．血清分离 (10)8．抗血清保存 (10)Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价 (10)一、基本原理 (10)二、实验仪器、材料和试剂 (10)1. 仪器 (10)2. 材料 (10)3. 试剂 (10)三、方法和步骤 (10)1. 灭活鸡新城疫病毒Ulster 2C 株抗原提取 (10)2. 1%琼脂糖配制 (10)3. 倒平板 (10)4. 打孔 (10)5. 稀释抗血清 (11)6. 加样 (11)7. 孵育 (11)8. 结果观察 (11)Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定NDV 抗血清效价 (12)一、基本原理 (12)二、实验仪器、材料和试剂 (12)1. 仪器 (12)2. 材料 (12)3. 试剂 (12)三、方法和步骤 (12)1. 鸡新城疫病毒Ulster 2C 株灭活抗原提取 (12)2、抗原包被 (13)3. 封闭 (13)4. 洗板 (13)5. 稀释抗血清 (13)6. 加抗血清 (13)7. 洗板 (13)8. 加酶标二抗 (13)9. 洗板 (13)10. 显色 (13)11. 终止 (13)12. 读数 (14)13. 结果判定 (14)Part Ⅳ. 免疫印迹实验鉴定抗体的特异性 (14)一、基本原理 (14)二、实验仪器、材料和试剂 (14)1. 仪器 (14)2. 材料 (14)3. 试剂 (14)（1）SDS-PAGE 相关试剂： (14)（2）Western blotting 相关试剂： (15)三、方法和步骤 (15)1. SDS-PAGE (15)2. 转膜 (16)3. 免疫检测 (16)（1）膜的封闭 (16)（2）洗膜 (16)（3）加入一抗 (17)（4）洗膜 (17)（5）与二级抗体作用： (17)（6）洗膜 (17)（7）Odessey 近红外成像仪扫描成像 (17)【实验结果及分析】 (17)NDV 抗血清制备及抗体效价测定摘要：抗血清，新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。

免疫血清的制备实验报告

2.颈动脉放血
1）取一只接种过的大白兔固定于兔笼，耳缘静脉注射合适剂量的麻醉剂麻醉。将麻醉后的大白兔固定于兔台，用棉线固定四肢，细线固定门牙于铁柱，使颈部完全暴露。
2）用剃毛剪贴着皮肤减去颈部的毛，手术刀在颈部中央切开皮肤约3-4cm，纱布吸去多余的血液。用止血钳提拉住两边的皮毛，组织剪将切口扩大至7-8cm。分别剪开黏膜层、肌肉层，用止血钳扩大开口使之与皮肤一致，游离出颈动脉约2-3cm。
实验报告
实验名称
多克隆抗体的制备一（抗
班级
姓名
学号
一、实验目的
了解免疫的原理，掌握免疫方法和抗血清的制备技术。
二、实验器材
试剂：
酒精棉球、NDV灭活油乳剂疫苗、麻醉剂
器材：
兔笼、注射器、剃毛剪、手术刀、止血钳、手术剪（组织剪、眼科剪）、动脉夹、眼科剪、动脉导管、纱布、棉线、细线、培养箱、冰箱、结扎细线、离心机、温箱
3.由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体。
4.多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原（如蛋白质类抗原）要加入佐剂，以增强免疫性。
四、实验过程及步骤
1.免疫接种
1）取一只健康大白兔固定在兔笼中
2）酒精消毒大白兔皮肤后，通过皮下或皮内注射方式接种大白兔，共计注射8-10个位置，每一处约0.1ml。
3）为提高免疫血清效价，通常需要进行2-3次加强免疫，每次免疫间隔10-15天。然后再接免疫结束后的血清采集过程。

抗血清制备原理、步骤及应用

抗血清制备原理、步骤及应用抗血清是一种含有高效价特异性抗体的血清，一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。

通过注射抗血清可以传递被动免疫治疗许多疾病。

一、抗血清制备原理：将抗原注射于动物体，将引起免疫应答。

可刺激动物的淋巴细胞转化为浆细胞并产生特异性抗体，待血清中积累大量抗体时，采集动物血液并分离析出血清，此即含抗体的免疫血清（抗血清）。

抗血清包括抗细菌、抗毒素、抗病毒血清。

二、抗血清制备步骤：1、选择免疫动物➢免疫动物一般选择青壮年期、健壮雌性个体。

➢抗原与免疫动物的种属差异越远越好。

➢针对不同性质的免疫原选择相应的动物。

➢制备H血清用马，制备R血清用兔，制备补体用豚鼠血清。

２、抗原制备➢抗原剂量：用灭菌生理盐水将抗原稀释为2mg/mL，与佐剂混合制成乳剂后用于动物免疫。

➢免疫原的注射剂量应考虑其抗原性的强弱、分子量大小、动物的个体状态和免疫时间。

通常小鼠首次抗原剂量为50～100μg/次，大鼠为100～200μg/次，兔为100～1mg/次，合成免疫原为2mg（半抗原约为20～200μg），一般需要与等量的福氏完全佐剂混合。

加强免疫原与福氏不完全佐剂混合或不用免疫佐剂，剂量为首次计量的1/2。

➢抗原乳剂的配制：将等量的佐剂与抗原溶液倒入钵内，经过反复碾磨，形成油包水乳剂。

制成的油包水乳剂直接影响免疫效果，因此使用前需进行质量检查。

检查方法是将制成的乳剂滴一滴在自来水表面，质量合格的乳剂滴入水面保持滴珠完整不分散，不合格的乳剂立即扩散，水面油亦逐渐扩大。

若检查不合格，则须继续操作至质量合格为止。

３、确定免疫方案➢根据免疫目的的要求、抗原性质、佐剂种类来制定免疫方案。

可采用全量免疫法、微量免疫法或混合免疫法。

免疫接种途径通常有静脉、腹腔、肌肉、皮下、淋巴结等接种途径，对抗原的吸收速度为静脉=腹腔=淋巴结＞肌肉＞皮下＞皮内。

若抗原宝贵可采用淋巴结内微量注射法；半抗原宜皮内多点注射。

免疫接种剂量应根据分子量大小、免疫原性强弱、动物个体状态和免疫时间决定。

血清抗体效价的测定

实验报告
10.选择波长630nm，将酶标板置于载板台上，开始扫描，测定OD值。

结果如下所示：
思考题：
1.查阅资料，了解共有哪些类型的ELISA实验，以及本实验中所用ELISA属于哪一类？答：本实验中所用ELISA属于间接法ELISA。

①直接ELISA
原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。

加酶标抗体进行孵育。

固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。

彻底洗涤未结合的酶标抗体。

此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

加底物反应。

直接法主要用于测定抗原。

②间接法ELISA
原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。

洗涤除去未结合的抗原及杂质。

加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。

经洗涤后，加酶标二抗。

固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。

洗涤后，加底物显色。

③双抗夹心法ELISA
原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。

将特异。

生化免疫技术----免疫血清的制备及效价测定

免疫血清的制备及效价测定制备免疫血清的传统方法是将抗原注入动物体内，由动物体内 B 细胞增殖分化成浆细胞产生抗体。

由于抗原分子（完全抗原）具有多种抗原决定簇，每一种抗原决定簇可以激活具有相应抗原受体的 B 细胞系产生该决定簇的抗体，因此用抗原免疫机体获得的免疫血清一般均为多克隆抗体。

制备的免疫血清的质量（特异性、亲和力及效价高低）受多种因素的影响，主要包括抗原的性质、免疫动物的种类及状态、免疫剂量、免疫途径及免疫方案（加强免疫次数，间隔时间，佐剂的使用等）等。

因此要获得高质量的免疫血清需先通过预实验摸索确定最佳免疫方法。

测定免疫血清中抗体效价的方法很多，如凝集实验，沉淀实验、溶血实验， ELISA 等均可用于对抗体效价的测定。

第一部分、免疫血清的制备我们要制备的是多克隆抗体----抗IgG抗体的制备。

Ig是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良好的抗原物质。

可以刺激异种动物产生抗Ig血清，经适当提取后，产生抗Ig抗体，又叫第二抗体或抗抗体。

在多数的间接标记反应中，均需制备抗Ig抗体。

【实验材料】1．动物IgG（兔源的，购买）2．弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂3．青霉素和链霉素4．实验动物： BALB/c小鼠5．无菌 1ml 注射器6. 生理盐水，酒精棉等【实验步骤】1. 免疫程序：40 ug+弗氏佐剂+青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml+生理盐水混悬液背部皮下多点注射，隔10天加强免疫2次，腹腔注射20ug+不完全弗氏佐剂，一周后收血清。

一般在末次免疫结束后的第7 天,自鼠尾取少量血,分离血清,采用间接法ELISA 分析血清中抗体的效价，达到效价即可收取。

2. 获得免疫血清：小鼠摘眼球取血,收入小试管中,3000转/分离心5分钟,上清即为免疫血清。

第二部分、免疫血清质量评价一、效价测定抗体效价测定方法很多，本实验采用琼脂扩散法，ELISA法—）、琼脂扩散法1.操作步骤（具体见附注）⑴ 做琼脂板，打梅花孔。

抗血清的制备

抗血清的制备有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。

用于免疫的动物作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。

动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。

若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。

免疫途径免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1ml左右。

途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。

佐剂由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。

佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。

常用的佐剂是福氏佐剂（Freund adjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全佐剂。

配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。

免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。

免疫学实验论文——抗血清的制备及效价测定

免疫学实验抗血清的制备及其效价测定班级：生物技术1401小组：11姓名：2016年11月抗血清的制备及免疫小鼠效价检测摘要：本试验以牛血清白蛋白为抗原，对小鼠和家兔进行免疫，以制备高效价抗血清。

采用多次中程免疫使产生免疫应答小鼠的血清中抗体达到实验所需的要求，然后采集小鼠血液，从中分离出血清，从而获得抗血清。

利用间接ELISA 方法测得抗血清效价。

关键词：抗血清；间接法ELISA ；抗体效价前言：用具有抗原性的物质（牛血清白蛋白BSA ）注入到健康小鼠的机体后，将引起免疫应答，并会形成浆细胞，分泌抗体。

抗体主要存在于血清中，经三次免疫，使血清中的抗体量达到要求浓度，然后采集小鼠血液，再从血液中分离析出血清，从而获得抗血清。

酶联免疫吸附实验（ELISA ）是一种新型的免疫测定技术，利用间接ELISA 法，将抗原BSA 包被在酶标板上，加入待测的抗体，再加相应的二抗，生成复合物后再加入底物显色，借助仪器测得的光吸收值计算抗体效价。

材料与方法：实验主线：实验材料：包被缓冲液（0.05M pH 9.6碳酸盐缓冲液）、10ug/ml 抗原（牛血清白蛋白）、0.01M PBS 溶液、5%（w/v ）脱脂奶粉、PBST 洗涤液（含0.05%Tween 20的0.01M 的PBS ）、2M H2SO4、待测抗体、HRP 标记的羊抗小鼠IgG （二抗）、底物溶液TMB 、健康小鼠酶标板、酶标仪、保鲜膜、排枪、离心管、玻璃棒、烧杯、离心机、恒温箱动物免疫抗血清的采集与分离中程免疫3次间隔一周间接法ELISA 测定抗血清的效多克隆抗体实验内容与方法：一．动物的免疫：1.1实验动物的选择选择实验动物应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及动物个体等因素。

选择与抗原亲缘关系远的动物，尤其在制备抗免疫球蛋白（Ig）抗体时；根据抗体的需要量选择动物，制备一抗常用动物为小鼠和家兔，制备二抗常用动物为羊和马；常用青壮年期的雄性动物。

免疫学实验抗血清制备及抗体效价检测华中农业大学免疫学基础及免疫学技术

v 10月14日 2.0ml 耳静脉
v 10月25日 2.5mL 耳静脉
一、采血
（一）心脏抽血
v 家兔固定（仰卧）---准确找到心脏部位---剪毛（心脏部位）---消毒---进针（50ml注射器接带硅胶管的 12号针头）抽血，抽至50ml，从硅胶管接头处取下注射器，拔针头，将血液注入100ml无菌空三角瓶，再重复上述操作继续抽血，直至抽完。
v 将双扩实验结果用铅笔绘图并分析判断：（1）待测Ag中至少有几种组分？（2）待测Ag各组分相对应的Ab的效价？
如：待测抗原组分一相对应的抗体的效价为1：X。
v 注意沉淀线的数量、部位、走向、粗细、清晰度等。
★结果分析
v 1、本实验采用的是什么Ag、Ab？
v 2、 Ag、Ab为什么要设置一系列的浓度 (方阵排列) ？ “效价”是指Ag的、还是Ab的？与Ag、Ab的浓度有何关系？
本次实验目的
1、分析待测抗原的组分数量； 2、测定各组分相应抗血清的效价。
以出现沉淀线抗体的最高稀释倍数为该抗体效价。
1、融化凝胶、倒胶制备凝胶板（每人1板）。 2、Ag、Ab稀释（见图、4人1套）。 3、打孔、点样（加Ag、Ab，每孔8ul）。 4、37℃保温保湿扩散1d，结果观察。
记号：学号
四、免疫途径
五、免疫时间间隔
v 羊、马、鸡、猴、豚鼠、兔都是常用的免疫动物，在实验中，选择动物时应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及动物个体等因素。
v 免疫用动物应选适龄、健壮．最好为雄性。
v 最常用的实验动物是家兔，一般选择选择年龄在 6个月以上当年繁殖的♂性，体重2 ～3公斤，健康家兔三只，免疫前用金属编号牌固定兔耳，或用染料涂沫在动物的背部，作出明确的标记。

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西安医学院教案
（专业课程）
课程名称临床免疫学
与检验
班级检本1008 专业，层次检验，本科
教师武永红专业技
术职务
讲师
授课方式
（大，小班，
实习）
实验学时9学时
授课题目（章，节）抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定
基本教材或主要参考书王兰兰，许化溪主编.临床免疫学检验.第5版：人民卫生出版社，2012 刘辉．临床免疫学与检验实验指导第3版：人民卫生出版社，2009 曹励民．免疫学检验实验指导．自编教材，2011
教学目的：
1.掌握：细菌接种培养的操作能力，加强细菌性抗原免疫动物的实验操作能力，肥达氏反应的模拟操作及间接血凝实验测定细菌性抗体的效价，
2.熟悉：临床用于诊断细菌或病毒感染的凝集反应测定效价试验的原理。

教学内容：
1.细菌培养与免疫原的制备
2.“O”和抗“H”血清的制备
3.试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价
4.间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价
教学方法：启发式教学；讲授重点内容。

教具：板书示教
教学重点、难点：
1. 间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价
教研室审阅意见
（教研室主任签名）
年月日
教学内容教学手段
时间分配
抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定
（一）细菌培养与免疫原的制备
（二）“O”和抗“H”血清的制备
（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价
（四）间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价
（一）细菌培养与免疫原的制备
伤寒沙门菌标准菌株干粉→生理盐水溶解→接种肉汤培养基→接种普通平板→生理盐水菌液（100℃水浴制备O抗原，甲醛处理制备H抗原）
（二）“O”和抗“H”血清的制备
Ag伤寒沙门菌O和H抗原→分别免疫两组家兔→抗O血清和抗H血清
O/H抗原的免疫程序：
日序（天）免疫剂量（ml）免疫途径
1 1 皮内五点注射
8 1.5 耳静脉注射
15 1.5 耳静脉注射
22 1.5 耳静脉注射
放血方法：颈动脉采血
试血方法：试管凝集试验
（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价
试管凝集试验的原理：在试管内，用已知颗粒性抗原作为诊断试剂，与一系列倍比稀释的待检血清混合反应，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集现象。

步骤和方法：
1．试管编号标记。

2．试管凝集操作程序（单位：ml）
管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9（对照）
生理盐水0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1：10血清0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃
0.5 诊断菌液0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 终稀释度1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 -＃讲解
20分
学生操作160分
讲解
20分
学生操作160分
摇匀置37℃2~4h，取出置室温过夜后观察结果。

结果和评价
判断凝集试验结果，要有良好的光源和黑暗的背景，先不振摇，观察试管底部凝集物和上清的浊度。

然后轻轻摇动试管，逐一观察凝集颗粒的松软度、大小、均匀度等性状及液体的混浊程度。

1．先观察盐水对照管凝集现象，轻轻摇动试管，细菌分散均匀混浊。

2．伤寒沙门菌O抗原凝集物呈颗粒状沉于管底，轻摇时不易散开（H抗原凝集物呈絮状，疏松而大块地沉于管底，轻摇易离散）。

凝集程度通常以“+”表示强弱。

“4+”很强，细菌全部凝集，凝块全沉于管底，液体澄清，凝块全沉于管底。

“3+”强，细菌大部分凝集，液体稍混浊。

“2+”中等强度，细菌约50%凝集沉于管底，液体较混浊。

“+”弱，仅少量细菌凝集，液体混浊。

“—”不凝集，液体混浊度与对照管相同。

3．只要待测血清管出现“2+”以上的反应现象，就可判断为阳性；以出现“2+”凝集的最大血清稀释度为待检血清的抗体效价。

4．本试验是一经典的定量凝集试验，敏感性不高，但操作方法简单，至今仍在使用。

注意事项
1．试管凝集试验只有在抗原抗体比例适当时才能出现肉眼可见的反应，一般情况下，随着血清浓度的逐渐稀释，凝集反应越来越弱，但在抗体浓度过高时，反无凝集现象出现，此为前带反应现象。

出现该情况时，需加大抗体稀释度重新试验。

2．注意温度、电解质、振摇对实验结果的影响。

抗原抗体加入后，要充分混匀，以增加抗原抗体的接触。

临床意义、方法评价：
外斐反应——斑疹伤寒立克次体
肥达试验——诊断伤寒、副伤寒
交叉配血
既能定性又能半定量，但特异性、敏感性不高。

（四）间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价
原理:
将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关、大小均匀的载体颗粒表面，再与相应抗体在适宜条件下相互作用，可发生抗原抗体反应而使颗粒被动的凝集，出现肉眼可见的凝集现象，这种方法称间接凝集试验。

如将抗体吸附于颗粒表面用以检测抗原，则称为反向间接凝集试验，方法和原理与前者相同。

实验室常用的载体有红细胞、胶乳颗粒等。

以红细胞为载体颗粒的间接凝集试验称为间接血凝试验。

‘
‘
讲解
20分
学生操作160分
技术要点：
1．致敏SRBC的制备取2%SRBC悬液（1滴压积SRBC+2ml生理盐水）与等量1：10伤寒沙门菌O（H）菌液混合，置37℃水浴2小时，其间应该每隔15分钟摇动一次，取出后离心，弃上清液，用生理盐水洗涤3次，最后用生理盐水配成2%的致敏SRBC悬液。

2．间接血凝试验操作程序（单位：ul）
管号 1 2 3 4 5 6 7
生理盐水25 25 25 25 25 25 25 1：10O(H)血清25 25 25 25 25 25 25 致敏SRBC 25 25 25 25 25 25 25 终血清稀释度1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 1：1280 1：2560 3.结果观察：
-：细胞沉积于孔底。

+ ：细胞沉积于孔底，周围有少量散在凝集。

++：细胞形成片层凝集，面积较小，边缘较松散。

+++：细胞形成片层凝集，面积略大于2+ 。

++++：细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘皱缩如花边状。

4．方法评价：快速、敏感、操作简便且无需特殊实验设备。

临床应用：间接凝集试验在临床检验中应用广泛，
（1）检测抗原
（2）检测抗体，如抗-HIV抗体、抗溶血素“O”抗体等，类风湿因子、抗DNA抗体等自身免疫性疾病的抗体和青霉素抗体等变态反应的抗体，主要用于检测抗病原生物抗体，如抗脑膜炎球菌、沙门菌、志贺菌、结核杆菌、肝炎病毒、流感病毒、血吸虫等病原体的抗体。

课程小结
颗粒性抗原与相应抗体在适当条件下发生反应，出现肉眼可见的凝集小块，称为直接凝集反应。

在操作方法上有玻片法和试管法两种。

玻片法以已知诊断血清检测未知细菌颗粒性抗原为例；试管法以检测抗体效价为例。

试管法倍比稀释，使抗血清浓度呈倍数关系逐步降低。

将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关、大小均匀的载体颗粒表面，再与相应抗体在适宜条件下相互作用，可发生抗原抗体反应而使颗粒被动的凝集，出现肉眼可见的凝集现象，这种方法称间接凝集试验。