实验室血清学常用检测方法
(完整版)动物免疫抗体血清学检测技术
2019.5.10
内容
一、血清学检测的意义 二、血清学检测内容和方法 三、血凝和血凝抑制实验 四、酶联免疫吸附实验 五、虎红平板凝集实验（初筛）
一、血清学检测的意义
动物免疫接种已经成为目前防御疫病传播的首选措施，只有给动 物进行有效的免疫接种后，才能产生一定的保护力，从而防止疫 病的侵入和蔓延。因此在群体接种疫苗前后对抗体水平进行检测， 准确了解动物疫病发生、传播和流行情况，掌握畜禽免疫抗体水 平和动物疫病保护情况， 从而更有效地采取综合防控措施。因此， 做好动物免疫抗体检测工作有着十分重要的临床意义和经济意义。
血凝素（HA） 柱状
血凝试验（HA)原理：
血凝抑制试验：
当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或 其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。 这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制反应，也称血凝抑 制反应，利用这种特性设计的试验称血凝抑制试验 (HI) 。 该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。 目的：检测有无病毒感染和免疫状态。
注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。 加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易 导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。
ELISA的比色测定主要由酶标仪进行。此处强调以下 几点：
（1）酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，室温宜 在15－30℃，使用前先预热仪器15－30分钟，测读 结果更稳定。各种酶标仪性能不同，使用前应详细 阅读说明书。
血凝试验操作步骤
4个100%血凝单位（即4HA100） 抗原的稀释倍数=使100%红细胞凝集的抗原最高稀释倍数/4
梅毒螺旋体血清学试验常用方法
梅毒螺旋体血清学试验常用方法梅毒螺旋体血清学试验常用方法梅毒是一种由梅毒螺旋体感染引起的性传播疾病，其在世界范围内广泛存在。
为了准确诊断梅毒，血清学检测是一种常用的方法。
本文将介绍梅毒螺旋体血清学试验的常用方法，旨在帮助读者更全面、深入地了解这一主题。
1. 微量血试验微量血试验是常用的梅毒螺旋体血清学试验之一。
它的优势在于只需要很少的血液样本，却能提供准确可靠的结果。
该试验通过检测患者血液中的抗梅毒螺旋体抗体来诊断梅毒。
这些抗体在感染后数周内开始产生，并持续存在于血液中。
微量血试验通常采用凝集试验、免疫层析试验或酶联免疫吸附试验等方法进行。
2. 血清螺旋体沉降率试验血清螺旋体沉降率试验是另一种常用的梅毒螺旋体血清学试验。
该试验可以评估患者血清中的梅毒螺旋体抗体的水平。
试验原理是将患者血清与一定量的抗原（梅毒螺旋体）混合，并在一定时间内观察螺旋体与血清中的抗体结合沉降形成的沉降率。
沉降率越高，说明血清中的抗体水平越高，暗示患者可能存在梅毒感染。
3. 链球菌溶血试验链球菌溶血试验是一种常见的反应型血清学试验，也可用于梅毒的检测。
该试验基于患者血清中的抗链球菌溶血素抗体与试剂中的链球菌溶血素结合的反应。
通过测定溶血素结合率，可以评估患者血清中的抗体水平。
一旦患者感染了梅毒螺旋体，抗链球菌溶血素抗体的水平会升高，从而反映出可能存在梅毒感染。
总结回顾：梅毒螺旋体血清学试验是诊断梅毒的常用方法。
微量血试验、血清螺旋体沉降率试验和链球菌溶血试验是其中常见的三种方法。
微量血试验通过检测患者血液中的抗梅毒螺旋体抗体来诊断梅毒；血清螺旋体沉降率试验通过观察螺旋体与血清中的抗体结合沉降形成的沉降率评估抗体水平；链球菌溶血试验则是通过测定抗链球菌溶血素抗体的结合率进行评估。
这些试验的目的都是为了准确诊断梅毒感染，帮助患者尽早接受治疗以防止疾病的进展和传播。
个人观点和理解：虽然梅毒螺旋体血清学试验在梅毒的诊断中发挥着重要的作用，但我们也需要意识到这些试验对梅毒感染的早期诊断有一定的局限性。
抗原检测使用方法
抗原检测使用方法抗原检测，又称血清学抗原检测，是一项常见的实验室检查，主要用于诊断和评价疾病，特别是那些波动性表现且没有特异性抗体的疾病。
抗原检测能够直接反映患者体内抗原水平，还可以用来筛查有无抗体，为临床治疗提供可靠的诊断依据和治疗路径，也可以用来评估患者对治疗的反应情况。
本文主要就抗原检测的使用方法进行详细的说明。
首先，要想做抗原检测，必须要有一个具体的目的。
抗原检测可以采用多种方法，其中最常用的方法是流式细胞术、抗原印迹技术（ELISA）、以及Western blot等。
经常使用的抗原检测物包括DC-SIGN、IFN-γ、IL-2、TGF-β、CXCL9等等。
抗原检测的前期准备工作包括对被检样本的采集、运输、保存等方面的工作。
此外，在试剂中添加所需的抗原检测物，以及试剂的稳定性和有效性也是必不可少的。
其次，在抗原检测期间，还需要考虑抗原的采集、检测方式以及抗原的检测精度等。
抗原的采集也是在抗原检测中非常重要的一环，通常采用血清或血浆进行采样，且每次采样的量要求是精准而安全的。
而抗原的检测方式也是多种多样的，常见的有抗原抗体定性分析、抗体定量分析、免疫磁珠法、抗原聚合物技术等。
最后，由于抗原检测是一个精细的过程，因此研究抗原检测的精度是非常重要的。
幸好，开发出了高精度的系统，例如细胞检测、免疫曲线实验、免疫薄层沉淀实验等，可以有效提高抗原检测的准确性和精度。
最后，为了保证抗原检测的精确性和准确性，一定要注重抗原检测过程中的仪器质量和抗原检测使用方法。
常见的仪器有酶标仪、血液分析仪、光学显微镜、荧光免疫检测仪等。
仪器的质量是至关重要的，如果考虑购买仪器，一定要在性价比和实用性中做选择，保证最大限度的性能和可靠性。
此外，在抗原检测过程中，还要注意抗原检测使用的步骤，确保能精确检测出指定抗原，以得到准确的结果。
以上就是有关抗原检测使用方法的简要介绍，从采样到仪器质量，以及抗原检测使用的步骤，都需要注意。
公卫医师考试辅导：血清学诊断
公卫医师考试辅导：血清学诊断
血清学诊断是公卫医师考试大纲所包含的内容，我们搜集整理相关内容供大家学习参考。
（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫试验（RIA）及免疫荧光试验（IF）
ELISA、RIA及IF均为用于检测感染者血清中特异性抗体或抗原的方法，均为应用标记的抗原检测血清中抗异性抗体，或应用标记的抗体检测血清中特异性抗原。
（2）蛋白印迹试验（Westernblot，WB）
蛋白印迹试验（WB）是在ELISA应用原理基础上发展的一项新技术，用于检测微生物的特异性蛋白抗原或患者相对应的蛋白抗体的实验室诊断方法。
若用此试验检测患者血清特异性抗体，可用已知微生物蛋白抗原捕捉患者血清中特异性抗体，再结合酶标记抗人抗体并观察结果。
我们搜集整理。
（3）中和试验（NT）
中和试验（NT）为在检测病原微生物（病毒、细菌等）的血清学试验过程中，先在被检血清或其他液体标本中加人已知的特异性抗体或抗原，使其发生中和反应后，再检测被检血清中其特异性抗原或抗体。
（4）试管凝集试验
肥达氏试验是辅助诊断伤寒或副伤寒病常用的一种血清学
试验，即用已知伤寒沙门氏菌的菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）及甲型或乙型副伤寒杆菌的鞭毛抗原（PA或PB抗原），
测定人血清中相应抗体效价。
5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的评价
5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的评价摘要目的评价分析5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果。
方法基于本次研究需求，分别采取梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、化学发光法（CLIA）、甲苯胺红不加热血清试验（Trust）、酶联免疫吸附试验（ELISA）以及免疫印迹法（WB）对120例标本实施梅毒螺旋体抗体检测，对比分析5种检测法阳性率，将WB作为参照分析其他4种检测法的总符合率、特异度以及敏感度。
结果经分析，TPPA法、CLIA法、ELISA法以及Trust法和WB法阳性率对比差异无统计学意义（P>0.05）；将WB检测法当作确认试验，TPPA 法、CLIA法、ELISA法特异度、敏感度和总符合率均比较高。
结论经研究结果分析可知，TPPA法、CLIA法、ELISA法不管是敏感度，还是特异度均比较高，实际应用中可根据梅毒螺旋体抗体实际情况合理选用检测法。
关键词血清学；梅毒螺旋体抗体；检测在临床中梅毒作为常见性传播疾病之一，传染性非常高，目前在献血员以及临床患者输血之前、各种创伤性检验中梅毒血清学检验已成为常规检测中一项基本项目，基于该形势下，选用快捷、灵敏度和特异度均比较高以及操作便捷的检测法对于正确筛查与诊断梅毒也变得尤为重要[1，2]。
本次研究就5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果进行评价。
现报告如下。
1 资料与方法1. 1 一般资料本次研究所用标本来自2012年7月～2015年5月到本院诊治患者120例，全部标本均实施梅毒螺旋体抗体检测，其中男50例，女70例，年龄32～56岁，平均年龄（45.26±4.9）岁。
1. 2 方法于空腹状态下采集3 ml静脉血，以3000 r/min进行离心，离心时间一般为10 min，经血清分离实施检测。
5种血清检测法所用仪器如下：洗板机、水浴箱、Clem Clin化学发光免疫分析仪、振荡器、Roto-2600c酶标仪以及离心器等；所用试剂有CLIA试剂、ELISA试剂、TPPA试剂、WB试剂以及Trust试剂。
细菌的血清学鉴定
细菌的血清学鉴定
细菌的血清学鉴定是一种基于抗原-抗体反应的实验室诊断方法，用于准确识别和区分不同种类的细菌。
这种方法依赖于细菌表面或内部的特异性抗原，这些抗原可以与相应的抗体发生反应，从而产生可见的沉淀、凝集或溶血等现象，从而实现对细菌的鉴定。
在血清学鉴定中，常用的技术包括凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等。
凝集试验，如玻片凝集试验和试管凝集试验，通过观察细菌与特异性抗体结合后形成的凝集现象来鉴定细菌。
沉淀试验则是利用抗原-抗体复合物在凝胶或液体介质中形成沉淀的原理，通过检测沉淀的形成来鉴定细菌。
补体结合试验则是一种更为敏感的血清学鉴定方法，它利用补体系统来放大抗原-抗体反应，从而提高检测的灵敏度和特异性。
在进行细菌血清学鉴定时，需要使用标准化的抗原和抗体试剂，并严格控制实验条件，以确保结果的准确性和可靠性。
此外，由于不同细菌之间可能存在交叉反应，因此在进行血清学鉴定时还需要结合其他实验方法，如细菌培养、生化试验和分子生物学方法等，以实现对细菌的准确鉴定。
总之，细菌的血清学鉴定是一种重要的实验室诊断方法，它具有高度的特异性和灵敏度，可以用于快速准确地识别和区分不同种类的细菌。
在临床医学、公共卫生和食品安全等领域中，细菌的血清学鉴定发挥着重要的作用，为疾病的预防和控制提供了有力的支持。
血清学试验方法
血清学试验方法
血清学试验是检测正常与异常血清中各种物质含量的一种快速、有效、简便可靠的实
验技术。
该技术应用于实验室免疫学、血液学诊断等多个领域，提供了有效的检测方法。
下面就血清学实验方法给出介绍。
血清学实验的基本步骤是以下几方面：
1.采集样本。
血清的实验首先要求从血液或淋巴液中采集标本，以获得质量合格的血清。
2.血液凝固剂的使用。
凝固剂的选择主要有EDTA，但也可以使用不同的凝固剂，以获得有效的凝固液。
3.血清分离。
血清分离可以使用重力离心分离法，也可以以压力法等不同方法进行。
4.血清实验。
血清学实验检测方法有标准曲线法、测定法、免疫分析仪等。
5.结果分析。
完成实验后应对结果进行批判性评价，以确定是否有致病和疾病发生的
可能性，并给出临床决策的依据。
1.标本的正确采集。
准确的标本采集，是影响血清实验结果真实性的关键因素。
2.标本有效保存和运输。
标本在运输过程中未受到影响，实验结果才是可靠的。
3.标本清洗。
标本清洗是影响分离血清中固体颗粒和杂质的关键步骤。
4.分离血清。
血清的有效分离是血清学实验的基础。
5.实验检测方法的确定。
选择正确的实验检测方法，是保证实验质量可靠的关键因素。
6.实验结果的数据处理。
对实验结果的数据处理是对实验结果的成败关键。
7.结果报告的审核签发。
审核签发表明结果的可信度，保障研究成果的准确性。
检验科常见传染病检测方法与解读
检验科常见传染病检测方法与解读一、引言在当今社会，传染病的防控成为一项重要任务。
传染病的快速检测和准确解读是及时采取有效措施的基础。
本文将介绍检验科常见的传染病检测方法及其解读过程。
二、血清学检测传染病的血清学检测是一种常见且有效的检测方法。
常见的血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光法（IFA）、中和试验等。
这些方法通过检测患者血液中的特定抗体或病毒抗原来判断是否感染某种传染病。
三、核酸检测核酸检测是一种准确性较高的传染病检测方法。
常用的核酸检测技术包括聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR等。
这些方法通过检测患者体液中的病原体核酸来判断是否感染病毒，并可以定量病毒载量。
四、细菌培养及药敏试验对于一些细菌性传染病，如肺结核等，细菌培养及药敏试验是一种常用的诊断方法。
通过将患者样本（如痰液、尿液等）接种到含有特定培养基的培养皿中，并进行恰当的培养条件，可以培养出致病菌并进行药敏试验，以确定感染菌株的药物敏感性。
五、病毒分离及鉴定对于病毒性传染病，病毒分离及鉴定是一种重要的检测方法。
通过对患者体液或组织样本进行病毒分离、培养及鉴定，可以确定感染的病毒种类，并进一步研究其生物学性质及传播途径。
六、检测结果解读在进行传染病检测后，接下来需要对检测结果进行解读。
血清学检测中的抗体滴度、核酸检测中的阳性与阴性结果、细菌培养中的菌落形态等都需要经过专业人员的解读。
解读结果需要结合患者临床信息和流行病学调查等综合判断，才能给出准确的诊断和建议。
七、实验室质控为确保传染病检测结果的准确性和可靠性，实验室必须进行严格的质控。
质控包括内部质控和外部质控，通过参加质控项目、使用标准品和进行平行试验等方式来保证检测结果的准确性。
八、结论传染病的检测方法与解读是保障公共卫生的关键环节。
血清学检测、核酸检测、细菌培养和病毒分离及鉴定等方法的应用可以快速准确地判断是否感染某种传染病。
然而，解读结果的准确性需要结合临床信息和质量控制的要求。
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实验室血清学常用
检测方法
常见血清学检测方法介绍
一、酶联免疫吸附试验诊断技术
当前，该项技术已在兽医学上得到广泛的应用，大多数动物传染病都已经研制成ELISA检测方法。
1、酶联免疫吸附试验的原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其它物质分开。
再加入酶标记的抗原或抗体，也经过反应而结合在固相载体上。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
2、ELISA的类型
根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型：
①.双抗体夹心法测抗原
双抗体夹心法是检测抗原最常见的方法。
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA，就是根据这种原理设计的。
②.双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。
用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。
与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。
乙肝HBs的检测常采用本法。
本法关键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。
此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于于间接法。
另外，该方法不受被检动物种属差异的限制。
③.间接法测抗体
间接法是检测抗体常见的方法。
其原理为利用酶标记的抗体（抗免疫球蛋白抗体），检测与固相抗原结合的受检抗体（见图1）。
操作步骤如下：
（1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。
洗涤除去未结合的抗原及杂质。
（2）加稀释的受检血清，保温反应。
血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。
经洗涤后，固相载体上
只留下特异性抗体，血清中的其它成份在洗涤过程中被洗去。
（3）加酶标抗抗体可用酶标抗人Ig以检测总抗体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。
固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。
洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
（4）加底物显色
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。
间接法的优点是变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法在动物疫病抗体检测中应用广泛，例如禽流感的间接ELISA，用禽流感病毒NP蛋白包被成抗原板，待检血清中的抗体与之结合，再加酶标二抗反应，能够检测所有A型禽流感病毒抗体。
④.竞争法测抗体
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。
其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争固相抗原。
标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。
⑤.竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，能够采用竞争法模式。
其原理是标本中的抗原和固相抗原共同竞争一定量的酶标抗体。
标本中抗原量含量愈多，结合到固相上的酶标抗体愈少，最后的显色也愈浅。
小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
例如，猪瘦肉精的检测，多用瘦肉精抗原包被反应板，让样品中的瘦肉精抗原和板上的抗原共同竞争酶标单克隆抗体。
当前，已有商品化、标准化的试剂盒，可检测猪瘟、猪伪狂犬、猪蓝耳病、猪乙型脑炎、猪细小病毒、猪圆环病毒、猪弓形虫、猪喘气病等各种抗体。
（二）琼脂扩散试验
1、基本概念
沉淀反应：是利用可溶性抗原与抗体结合，形成肉眼可见的沉淀的一类血清学免疫反应。
抗原能够是多糖、蛋白质、类脂等。
如细菌内毒素、外毒素、菌体裂解物，病毒悬液、病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等。
沉淀试验包括絮状沉淀试验、琼脂扩散试验、免疫电泳。