HDN的血清学实验室检测-4页精选文档
200例新生儿ABO溶血病血清学检测结果分析
200例新生儿ABO溶血病血清学检测结果分析冯雪银【摘要】目的探讨本地区由母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病(HDN)的血型分布规律及溶血三项试验(包括直接抗人球蛋白试验、红细胞抗体释放试验、血清游离抗体试验)的重要性,为临床提供ABO HDN 的诊断依据.方法应用微柱凝胶技术对在2008年7月～2010年3月间收集的200份新生儿溶血病患儿血样进行溶血三项试验.结果在200份新生儿溶血病标本中总阳性率为62.5% (125/200),其中A型118例,阳性率为62.7%(74/118),B型82例,阳性率为62.2%(51/82),二者差异无统计学意义(p>0.05);溶血三项试验中直接抗人球蛋白试验阳性88例,阳性率为44%(88/200),血清游离抗体试验阳性56例,阳性率为28%(56/200),抗体释放试验阳性125例,阳性率为62.5%(125/200).结论由母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病(HDN)的血型分布差异无统计学意义(p>0.05);抗体释放试验和直接抗人球蛋白试验,可为母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病提供更有力的早期诊断依据.【期刊名称】《现代医院》【年(卷),期】2011(011)005【总页数】2页(P66-67)【关键词】新生儿ABO溶血病;直接抗人球蛋白试验;抗体释放试验;血清游离抗体试验【作者】冯雪银【作者单位】河源市妇幼保健院,广东河源,517000【正文语种】中文新生儿ABO溶血病是指母婴因ABO血型不合而引起的同族免疫性溶血，在新生儿血型不合溶血病中发病率最高，多发生于母亲血型为“O”型，婴儿血型为“A”或“B”型［1］。
ABO HDN的诊断除了临床表现外，实验室血清学检测也很重要。
本实验室为了探讨本地区由母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病(HDN)的血型分布规律及溶血三项试验在新生儿溶血病诊断中的作用，我们对200份新生儿ABO溶血病患儿血样的溶血三项试验结果进行了统计分析，现将分析结果报道如下。
新生儿溶血病(HDN)的免疫血液学实验
3.与产前HDN检查有关的几个临床问题
妊期抗体突然猛升、猛降 ABO,Rh不合同时存在, ABO不合有”保护”作用, “外祖母” 效应, Rh HDN 可第一胎发病
二.产后检查
#2022
放散试验 热放散
注意:
对临床,三项试验(直抗,游离,放散)只报告结果(阴/阳性),但要按上面格式记录存底 三项试验(直抗,游离,放散)均可用 卡 操做,
中和血清100ul, 加夫红细胞悬液50ul: 作聚凝胺 如果有凝集, 妻中和血清倍比稀释, 加夫红细胞悬液, 作聚凝胺或AHG试验,测IgG ABO 抗体效价
(四) 注意:
夫未来检查, 或夫为AB型, 怎么办? 可用试管法, 也可用 HDN 卡 试验
01
第一章
3.HDN 产前检查不属急诊 4.IgG ABO 抗体太高者,慎报!:
1.ABO HDN
单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。您的内容已经简明扼要，字字珠玑，但信息却千丝万缕、错综复杂，需要用更多的文字来表述；但请您尽可能提炼思想的精髓，否则容易造成观者的阅读压力，适得其反。正如我们都希望改变世界，希望给别人带去光明，但更多时候我们只需要播下一颗种子，自然有微风吹拂，雨露滋养。恰如其分地表达观点，往往事半功倍。当您的内容到达这个限度时，或许已经不纯粹作用于演示，极大可能运用于阅读领域；无论是传播观点、知识分享还是汇报工作，内容的详尽固然重要，但请一定注意信息框架的清晰，这样才能使内容层次分明，页面简洁易读。如果您的内容确实非常重要又难以精简，也请使用分段处理，对内容进行简单的梳理和提炼，这样会使逻辑框架相对清晰。
五.临床特点
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新生儿溶血病血清学检查
1、直接抗球蛋白试验
阳性结果表示患儿红细胞已被血型抗体致敏。
2、检查婴儿血清中游离抗体
将婴儿血清与标准A(B)细胞作间接抗人球蛋白试验，阳性结果，则表示有抗体存在。
3、抗体释放试验
致敏的红细胞所结合的抗体，可通过改变某些因素释放出来。然后再与标准A(B)细胞作间接抗人球蛋白试验。这对于ABO溶血症有诊断价值。
4、ABO系统外抗体筛查
阳性表示患儿血清存在ABO系统外的不规则抗体。
附表：新生儿ABO HDN四项试验结果分析
直抗试验
游离试验
释放试验
抗筛
结果判定
意义
+
+
+
-/+
确诊
ABO HDN，抗筛(+)存在ABO以外抗体
+
-
+
-/+
确诊
ABO HDN，抗筛(+)存在ABO以外抗体
-
-
+
-/+
确诊
ABO HDN，抗筛(+)存在ABO以外抗体
+
-
--Leabharlann 可疑可疑ABO HDN
-
+
-
-
可疑
可疑ABO HDN
-
-
-
-
否定
血清学试验未能证实
新生儿溶血病血清学检查
新生儿溶血病血清学检查其目的是诊断由于母婴血型不合引起的新生儿溶血病(Haemolytic Disease of the Newborn,HDN)。
ABO系HDN是由于母婴ABO血型不合，母体的IgG抗A或抗B经过胎盘进入胎儿血循环破坏胎儿红细胞所引起。此病多见于O型母亲所生A型或B型婴儿，与O型母亲血清中所含IgG抗A（B）抗体有关。
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程一、目的为规范新生儿溶血性疾病（HDN）产前血型血清学检测的技术操作，准确评估胎儿发生HDN 的危险程度，从而辅助临床正确的诊断和治疗。
二、适用范围输血科进行新生儿HDN产前血型血清学检测。
三、原理通过鉴定孕妇及其胎儿父亲的血型，推测胎儿可能的血型，进一步检测孕妇体内是否有针对胎儿红细胞血型抗原的抗体及其效价来评估胎儿发生HDN的危险程度。
四、步骤和方法1、检测孕妇ABO、RhD血型，红细胞不规则抗体及其丈夫ABO、RhD血型。
根据夫妇ABO 血型组合来推测母婴ABO血型是否相合：如果母婴血型配合则不需检测孕妇ABO血型IgG 抗体效价；如果母婴血型不配合（可能不配合）则需检测孕妇可能致敏胎儿红细胞的ABO 血型IgG抗体效价。
2、由于抗-A或者抗-B主要为IgM类，ABO血型不合极少发生胎儿HDN，故除有死胎史或者新生儿黄疸史的孕妇外，不需检测IgG抗-B及抗-A的效价。
3、如果孕妇为RhD阴性，丈夫RhD为阳性，孕妇不规则抗体阴性，建议孕妇以后每个月复检不规则抗体直至分娩。
4、如果孕妇不规则抗体为阳性，则需鉴定其特异性、Ig类型、37℃反应情况及其效价和丈夫红细胞是否表达对应的抗原，来评估抗体引起的HDN危险程度。
5、结果判定：效价>143有临床意义。
五、质量控制1、用于试验的试剂都在有效期内使用。
2、严格试验操作，设置阴、阳对照，结果符合预期才可判定试验结果。
六、注意事项1、HDN产前血型血清学检测结果只能为评估胎儿发生HDN的风险提供依据，并不能确定HDN 。
母婴ABO血型不合且孕妇IgG类ABO血型抗体效价在妊娠期持续升高或者检出了IgG类红细胞不规则抗体都是HDN的风险因素。
2、传统认为ABO血型系统IgG抗体效价高于64具有临床意义。
随着检测水平得的提高，其作为临床参考意义不大。
3、抗体效价与HDN的发生有一定的相关性，但是抗体效价的高低与HDN的严重程度并不完全一致，可能与IgG抗体亚类不同有关。
HDN实验设计
二、实验设计 （一）标本、试剂及器材 1.标本：患儿 EDTA-K2 抗凝全血 母亲 EDTA-K2 抗凝全血 父亲 EDTA-K2 抗凝全血 2.试剂： （1）直接抗人球试验：抗人球蛋白凝胶微柱卡（含有 IgG 类不完全抗体或补体致 敏红细胞 （2）抗体释放试验：乙醚、标准红细胞 3.器材:BTX-1800 全自动血液分析仪 、微柱凝胶卡专用水平离心机、专用孵育器、 离心机、微量加样枪、一次性吸头、试管及试管架、标记笔 （二）主要实验 1.常规检查 （1）血常规 2．血型鉴定 3.溶血病特异性检查【2】 （1）直接抗人球蛋白试验：凝胶具有分子筛效应和亲和效应，在微柱凝胶介质中 红细胞抗原与相应抗体结合，经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶上层，而未与抗体 结合的红细胞则沉于凝胶底部。 （2）抗体释放试验：红细胞上的抗原与血清中抗体在适合条件下发生凝集或致敏， 这种结合是可逆的。如改变某些物理条件，抗体又可从结合的细胞上放散，再以相应的 红细胞鉴定放散液内抗体的种类并测定其强度，用以判定原来红细胞上抗原的型别。Rh 血型 IgG 抗体以乙醚放散法为常用。 （三）辅助实验 超声检查 （2）胆红素测定
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—1—
一、发病机制 新生儿溶血病(HDN)是由于母婴血型不合而引起的同族血型免疫性疾病，可发生于 胎儿和新生儿早期。Rh 血型不合多数是母亲为 RhD 抗原阴性，但 RhD 抗原阳性母亲的 婴儿也可以发病。 第一胎发病率很低， 因为初次免疫反应产生 IgM 抗体需要 2 到 6 个月， 且较弱，不能通过胎盘进入胎儿体内，而胎儿红细胞进入母体多数发生在妊娠末期或临 产时，故第一胎常处于初次免疫反应的潜伏阶段。当再次妊娠发生免疫反应，只需要几 天就可以出现，主要为 IgG 能通过胎盘的抗体，并能迅速增多故往往第二胎发病。大多 数病例出生时与正常新生儿相似，并无明显的贫血水肿和肝脾肿大，在 l～2 天后逐渐
HDN产前血型血清学检验操作规程
HDN产前血型血清学检验操作规程 SXYJ-GZ-02181目的辅助临床诊断母婴血型不合而引发的新生儿溶血病的预测。
2适用范围既往患有新生儿溶血病病史、不明原因流产或死胎史的孕妇；夫妇ABO血型不相容的孕妇；Rh阴性并有过流产史、输血史的孕妇。
3职责检测者负责依据此程序进行HDN产前血型血清学检验操作。
4材料与设备抗-A、抗-B血清、反定型试剂红细胞、血型物质或二硫苏糖醇（DTT）；实验室常规应用的耗材备品准备充分、仪器设备运行状态正常5操作方法5.1ABO血型鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0202）5.1.1ABO血型不合可致ABO溶血：例如，孕妇O型，丈夫A型/B型/AB型；5.1.2ABO系统以外溶血：孕妇可以是A、B、O、AB型，丈夫ABO血型可以是和孕妇同型，也可以不同型。
5.2RhD抗原鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0205）。
5.3免疫性抗体检查5.3.1IgM抗A(B)破坏：夫妇ABO血型不合；5.3.1.1血型物质中和法：以孕妇为O型，丈夫为A型为例：取孕妇血清0.15ml或0.05ml加A型血型物质0.15ml，混匀→置室温15分钟→得到中和后血清、若孕妇为O 型，丈夫为AB型，可分别用A型、B型血型物质中和；5.3.1.2二硫苏糖醇法(DTT)：取0.1ml孕妇血清加0.7ml DTT做1:8稀释， 37℃水浴30分钟；5.3.2ABO以内免疫性抗体（IgG性质的抗A或/和抗B）检测：用中和或处理后血清2d加入相应的Ac或/和Bc（或用丈夫细胞）悬液1d，离心，检测是否中和彻底，若仍有凝集，可加大中和液的比例至中和后血清为理想血清。
5.3.3检出免疫性抗体者同时报效价，抗-A（B）抗体效价参考值为8-64。
ABO以外红细胞血型抗体的筛选和鉴定：方法参见SXYJ-GZ-0216。
5.3.4效价的检测：IgG抗A（B）用中和或处理后血清、ABO以外抗体用女血清分别加相应的红细胞悬液测定（方法参见SXYJ-GZ-0217）。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程
HDN产前免疫血液学试验检测标准
⒊ 第二次检测时可以使用第一次的 冻存标本做平行对照，有助于排除 实验技术和试剂红细胞的干扰。
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ 三、标本要求
❖ ⒈ 第一次检查：采集夫妇双方EDTA抗 凝血各3-5毫升。
❖ ⒉ 复查检查：采集夫妇双方EDTA抗凝 血3-5毫升。
❖ ⒊ 如果无配偶的血液标本，则无法检 测孕妇是否有针对其配偶特有的、低 频率抗原所产生的免疫性抗体。
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ （5）试验方法； ❖ （6）试验结果； ❖ （7）实验者、复核者签名； ❖ （8）如需复查，复查时间需注明； ❖ （9）参考值范围。 ❖ 七、试验报告参考格式（查看Word文
件）
HDN产后免疫血液学试验检测标准
新生儿溶血病产后血清学检测的目的
❖ 一、确定新生儿血型是否与母亲不 合；
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
❖ 四、交叉配血 ❖ ⒈ 推荐使用抗人球蛋白法做交叉配血，
试管法和微柱凝胶法均可。 ❖ ⒉ 按新生儿溶血病换血治疗血液的选
择原则，选择适合的血液成分。 ❖ ⒊ 母子ABO血型相同或选用O型洗涤红
细胞时，用母亲血浆做主侧交叉配血。
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
新生儿溶血三项试验结果分析及提示临床意义
DAT 游离试验 放散试验
结果分析
提示临床意义
++ +– –+ ++ –+ –– +– ––
+
有游离抗体，红细胞致敏 具备发生ABO系统HDN的条件
+
红细胞致敏
具备发生ABO系统HDN的条件
+
新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程1、目的为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、试验方法及原理4.1试验方法：微柱凝胶卡式法4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。
当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。
离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。
5、样本采集和处理取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3～4ml,24小时内送检。
将不抗凝血离心分离出血清备用。
6、试剂：5.1 0.9%的生理盐水；5.2戴安娜合血卡；5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；5.4 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；7、仪器：1)XTL-4.7细胞洗涤离心机；2)DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器；3)DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ7.5操作程序：7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。
7.5.2如母子ABO不合（母O子A、B，母A子B、AB，母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）1)取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细胞悬液。
2)在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50μl。
3)将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。
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HDN的血清学实验室检测
结果：383例新生儿溶血病患者中，直接抗人球蛋白试验阳性率为53.12%，游离抗体试验阳性率为71.54%，抗体释放试验阳性率为83.29%。
结论：释放试验敏感度最高，是判定新生儿溶血病最有力的实验室证据。
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.538
新生儿溶血症（hemolytic disease of the newborn，HDN）是指母婴血型不合，母体血液中针对胎儿红细胞的免疫抗体IgG通过胎盘进入胎儿循环，发生同种免疫而引起的溶血。
在人类已发现的血型系统中，以ABO 血型系统不合引起的新生儿溶血病最常见，其次为Rh血型系统。
新生儿溶血病的临床表现轻重不一，取决于抗原性的强弱、个体的免疫反应、胎儿的代偿能力和产前的干预措施等因素。
Rh溶血病临床表现较为严重，进展快，而ABO溶血病的临床表现多数较轻。
Rh溶血病一般不发生在第一胎，而ABO溶血病可发生在第一胎。
HDN的血清学检测对该疾病的临床诊断具有重要的价值。
笔者就我市近年来发生的383例HDN的血清学检测结果分析报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源。
2010年1月～2013年1月本市4家医院送检的临床高胆红素血症或母亲血型为Rh阴性的HDN患儿383例，标本为患儿及母亲血液。
1.2 试剂。
抗-A（B）血清（长春生物制品研究所）；抗-D、抗人球蛋白试剂（广谱）、单克隆IgG、单抗C3（上海市血液中心）；ABO标准红细
胞（本站自制）。
2 结果
383例新生儿溶血病患者中，直接抗人球蛋白试验阳性率为53.12%，游离抗体试验阳性率为71.54%，抗体释放试验阳性率为83.29%。
3 讨论
3.1 发病原因。
由于母亲的血型与胎儿（或婴儿）的血型不合，如Rh 血型不合或ABO血型不合引起同族免疫性溶血病，Rh血型不合所致溶血常较ABO血型不合为严重。
3.1.1 Rh血型不合。
Rh血型不合引起的新生儿溶血症在中国的发病率较低。
通常是母亲为Rh阴性，胎儿为Rh阳性而血型不合，并引起溶血，一般第一胎不发病，而从第二胎起发病，但如果Rh阴性的母亲在第一胎前曾接受过Rh阳性的输血，则第一胎也可发病。
3.1.2 ABO血型不合。
该病以ABO血型不合最常见，其中最多见的是母亲为O型，胎儿（或婴儿）为A型或B型。
第一胎即可发病，分娩次数越多，发病率越高，且一次比一次严重。
尚可见于母亲为A型，胎儿（或婴儿）为B型或AB型，或母亲为B型，胎儿（或婴儿）为A型或AB型，但少见。
胎儿（或婴儿）为O型者，可排除该病。
3.2 发病机制。
胎儿由父亲方面遗传来的显性抗原恰为母亲所缺少，胎儿血因某种原因进入母体，母体产生相应的IgM抗体，当胎儿血再次进入母体，母体发生次发免疫反应，产生大量IgG抗体，通过胎盘进入胎儿，使胎儿、新生儿发生溶血。
只要0.1～0.2ml的胎儿红细胞进入母体循环就足以使母亲致敏。
3.2.1 Rh血型不合溶血病。
多数是母亲为Rh阴性，但Rh阳性母亲的婴儿同样也可以发病。
第一胎发病率很低，因为初次免疫反应产生IgM抗体需要2～6个月，且较弱，不能通过胎盘进入胎儿体内，而胎儿红细胞进入母体多数发生在妊娠末期或临产时，故第一胎常处于初次免疫反应的潜伏阶段。
当再次妊娠第2次发生免疫反应时，仅需数天就可出现，主要为IgG能通过胎盘的抗体，并能迅速增多，故往往第二胎才发病。
Rh系统的抗体只能由人类红细胞引起，若母亲有过输血史，且Rh血型又不合，则第一胎也可发病。
母亲的母亲（外祖母）为Rh阳性，母亲出生前已被致敏，则第一胎也可发病，此即外祖母学说。
3.2.2 ABO血型不合溶血病。
多数是母亲O型、胎儿A型或B型；少数为母亲A型、胎儿B型或AB型，或母亲B型、胎儿A型或AB型时发病。
因为A或B型母亲的天然抗A或抗B抗体主要为不能通过胎盘的IgM抗体，而存在于O型母亲中的同种抗体以IgG为主，因此ABO溶血病主要见于O 型母亲、A或B型胎儿。
ABO溶血病可发生在第一胎，这是因为食物、革兰阴性细菌、肠道寄生虫、疫苗等也具有A或B血型物质，持续的免疫刺激可使机体产生IgG抗A或抗B抗体，怀孕后这类抗体通过胎盘进入胎儿体内可引起溶血。
由于A和B抗原也存在于红细胞外的许多组织中，通过胎盘的抗A或抗B抗体仅少量与红细胞结合，其余都被其他组织和血浆中的可溶性A和B血型物质的中和和吸收，因此虽然母婴ABO血型不合很常见，但发病者仅占少数。
在383例新生儿溶血病患者中，抗体释放试验阳性率（83.29%）、游离抗体试验阳性率（71.54%）与文献报道的释放试验阳性率为88.0%、游
离试验阳性率为69.16%大致相同，但直接抗人球蛋白试验阳性率（53.12%）高于文献报道（39.12%），可能与所用试剂、仪器及血样采集时机和来源不同有关[1]。
研究结果证实释放试验是“三项试验”中敏感度最高，也是判定HDN 最有力的证据[2]。
抗体释放试验操作比较繁琐，耗时较长，在实际工作中应仔细认真，否则可能得到错误的结论。
研究结果还表明，直接抗人球蛋白试验比游离抗体试验更具有诊断价值，因为，直接抗人球蛋白试验阳性说明红细胞已经被血清中的游离抗体致敏。
在383例的HND 患者中，“三项试验”结果分布规律为直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验同时呈阳性所占比例较低；游离抗体试验、抗体释放试验均阳性所占比例次之，抗体释放试验阳性者占比例最高。
单是直接抗人球蛋白试验阳性者，就可以确认HDN。
如果单是直接抗人球蛋白试验阴性，还需要做游离试验或者释放试验进一步确诊。
希望以上资料对你有所帮助，附励志名言3条：
1、生命对某些人来说是美丽的，这些人的一生都为某个目标而奋斗。
2、推销产品要针对顾客的心，不要针对顾客的头。
3、不同的信念，决定不同的命运。