细胞破碎方法对几丁质脱乙酰酶活力的影响

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几丁质脱乙酰酶菌株的选育

几丁质脱乙酰酶菌株的选育几丁质脱乙酰酶菌株的选育几丁质是一种来源于甲壳动物外骨骼和真菌细胞壁的重要生物材料，具有生物可降解、生物相容性和生物活性等特点，因此在医药、农业、水产等领域有广泛的应用前景。

然而，由于几丁质的结构复杂，传统的化学方法生产几丁质的成本较高，且对环境造成了一定的污染。

因此，寻找一种高效、低成本的几丁质脱乙酰酶（chitinase）菌株成为了当前研究的热点之一。

几丁质脱乙酰酶是一种可以将几丁质分解为N-乙酰葡萄糖胺和几丁二糖的酶，广泛存在于微生物中，可通过筛选适应环境的菌株来获得高效的几丁质脱乙酰酶。

在几丁质脱乙酰酶菌株的选育过程中，主要包括菌种收集、分离、筛选和鉴定等环节。

首先，菌种收集是选育几丁质脱乙酰酶菌株的第一步。

可以从各种自然环境中收集土壤、水体、河流等样品，也可以从已知具有几丁质脱乙酰酶活性的菌株中进行分离。

采集的样品需要在恰当的温度和潮湿环境下进行保存和传递，以确保菌株的存活。

其次，菌种分离是选育几丁质脱乙酰酶菌株的关键环节。

样品收集后，应该在适宜的富含几丁质的培养基上进行菌种的分离。

分离方法主要有稀释板法、半固体划线法和滴法等。

采用不同的分离方法可以获得不同的菌落型，可以提高菌种的多样性。

接下来，菌种筛选是选育几丁质脱乙酰酶菌株的重要环节。

首先将菌落转移到含有几丁质的培养基上进行预筛选。

经过一段时间后，观察培养物上是否出现了透明圈附近的菌落，透明圈往往表示该菌株产生了几丁质脱乙酰酶。

然后通过测定菌株的酶活性和菌株的几丁质分解效果等指标，筛选出具有较高几丁质脱乙酰酶活性的菌株。

最后，通过鉴定确定几丁质脱乙酰酶菌株的分类和特性。

可以通过形态学观察、生理生化指标检测、分子生物学方法等来鉴定菌株的分类和特性。

鉴定的结果可以用于评估菌株的应用潜力和确定菌株是否适合于大规模生产。

综上所述，几丁质脱乙酰酶菌株的选育是一个复杂的过程，需要从环境样品中筛选适用的菌种，进一步分离、筛选和鉴定，最终得到高效的几丁质脱乙酰酶菌株。

几丁质和脱乙酰几丁质的吸附特性及其用于水中痕量铜的测定

几丁质和脱乙酰几丁质的吸附特性及其用于水中痕量铜的测定赵旌旌;王隆华;张志良【期刊名称】《海洋科学》【年(卷),期】2000(024)001【摘要】@@ 测定铜含量的方法有多种,如二乙氨基二硫代甲酸钠,原子吸收分光光度法等.几丁质(缩写为CT)广泛地存在于动植物中,它是一种天然的大分子含氮多糖化合物,是β-1,4连接的乙酰氨基葡聚糖,它具有吸附离子的能力,能富集金属离子,故对水的净化具有应用潜力[1].近年来国人对CT的研究日渐增多,在食品、医药、环保、农业、造纸、印染、日用化工以及酶制剂等方面,已陆续见诸报道.自然界甲壳质产量达100×108t,但实际用量仅2000t[2],因而尚需深入开发研究.作者利用CT和CTS(脱乙酰几丁质)的吸附特性,将溶液中微量铜离子富集之后,使得原来不能用一般分析方法检测的样品,用通常的比色方法即可测定,用该法测定水中的铜离子含量,简单方便,具有实际应用价值.【总页数】3页(P10-12)【作者】赵旌旌;王隆华;张志良【作者单位】华东师范大学生物系,上海,200062;华东师范大学生物系,上海,200062;华东师范大学生物系,上海,200062【正文语种】中文【中图分类】P7【相关文献】1.美国白蛾几丁质脱乙酰酶1(HcCDA1)的克隆表达与酶活测定 [J], 闫晓平;赵丹;孙晓彤;郭巍;李少雅;李景2.美国白蛾几丁质脱乙酰酶1(HcCDA1)的克隆表达与酶活测定 [J], 闫晓平;赵丹;孙晓彤;郭巍;李少雅;李景;3.甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶1(SeCDA1)在毕赤酵母中的表达与活性测定 [J], 孙晓彤;赵丹;闫晓平;郭巍;徐大庆;李少雅;李景4.甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶1（SeCDA1）在毕赤酵母中的表达与活性测定 [J], 孙晓彤;赵丹;闫晓平;郭巍;徐大庆;李少雅;李景;5.甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA2a的外源表达及酶活力测定 [J], 陈祎;张伟;赵丹;郭巍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

几丁质脱乙酰酶的研究进展

1 CDA 的研究概况 1.1 CDA 的酶学性质
由于 CDA 的来源不同，其酶学性质也存在差异性。到目前为止，自然界所发现的 CDA 都是糖蛋白。 CDA 热稳定性良好，大多数 CDA 的最适温度为 50 ℃~ 60 ℃。而最适 pH 差异较大，一般胞外酶的最适 pH 为 7~12，胞内酶最适 pH 为 4.5~6。大部分 CDA 的等电点（isoelectric point，pI）都在酸性范围内[3-4]。影响 CDA 酶学性质的因素主要有温度、pH、底物状态及浓度、相对分子质量和金属离子等。不同金属离子对 CDA 酶学性质的影响不同，同种金属离子也可能因其浓度不同而
产酶菌属红球菌[5] 毛霉（Mucor）[6] 卷柄根霉（Rhizopus circinans）[7] 短杆菌（Brevibacterium）[8] 菜豆炭疽菌（Colletotrichum lindemuthianum）[9] 蓝色犁头霉（Absidia coerulea）[10] 草酸青霉（Penicillium oxalicum）[11]
Research Advance of Chitin Deacetylase YANG Qian1，LIU Jian-hui1，JIANG Tong1，DONG Li-li1，DUAN Hong-yu1，SUN Ji-lu2，* （1. College of Science and Technology，Hebei Agricultural University，Cangzhou 061100，Hebei，China； 2. College of Food Science and Technology，Hebei Agricultural University，Baoding 071001，Hebei，China） Abstract：Chitin deacetylase（CDA）is an enzyme which can catalyze deacetylase reaction in chitin generating chitosan. Chitosan has several excellent properties，such as antibacterial，anticancer，and antiviral，with wide application prospect in the medicine，chemical，and food industries. The research situation of CDA was re－ viewed，including enzymatic properties，catalytic mechanism，the method of separation and purification，etc. Furthermore，the screening methods and process of CDA producing strains were briefly introduced，and the fu－ ture research direction of CDA was prospected. Key words：chitin deacetylase；chitin；chitosan；deacetylation

脱乙酰几丁质和几丁质脱乙酰酶

脱乙酰几丁质和几丁质脱乙酰酶脱乙酰几丁质和几丁质脱乙酰酶是两个紧密相关的概念，它们在生物学、医学等领域具有重要的研究价值和应用前景。

本文将分别从两个概念的定义、分子结构、生理作用、应用领域等方面进行介绍。

一、脱乙酰几丁质1.定义：脱乙酰几丁质（N-acetylglucosamine，简称GlcNAc）是一种常见的多糖，由N-乙酰葡萄糖胺和葡萄糖组成，广泛存在于动物、植物和微生物中，是细胞壁、细胞外基质、软骨等组织的重要成分之一。

2.分子结构：脱乙酰几丁质的化学式为C8H13NO5，其分子结构中含有氨基、羟基、醛基等官能团，可与其他分子发生多种反应。

3.生理作用：脱乙酰几丁质在生物体内具有多种生理功能，如参与糖代谢、免疫调节、信号传递等作用，在疾病的发生和治疗方面也发挥着重要作用。

4.应用领域：脱乙酰几丁质在医药、生物技术等领域有广泛应用，如用于细胞培养、生物传感器的制备、组织修复等。

二、几丁质脱乙酰酶1.定义：几丁质脱乙酰酶（chitinase，简称CHT）是一类水解酶，主要作用是水解几丁质中的N-乙酰葡萄糖胺结构，将其转化为低聚糖和单体糖。

2.分子结构：几丁质脱乙酰酶的分子结构包括信号肽、保守区和多个保守催化位点等，是一种高度复杂的蛋白质。

3.生理作用：几丁质脱乙酰酶在生物体内具有重要生理作用，如参与几丁质代谢、免疫调节、解毒等，还被发现与肿瘤发生、先天性免疫缺陷病等多种疾病相关。

4.应用领域：几丁质脱乙酰酶在生物技术、农业等领域有广泛应用，如可用于食品加工、畜禽饲料添加剂、生物农药等。

总结起来，脱乙酰几丁质和几丁质脱乙酰酶是两个相互关联的概念，它们在生物体内具有复杂而重要的生理功能和广泛的应用前景。

深入研究它们的分子结构、生理作用及其应用，对于探索生命的奥秘，促进科学技术的发展都具有重要意义。

蛋白质结构中的去乙酰化修饰

蛋白质结构中的去乙酰化修饰蛋白质是细胞中最为重要的宏分子之一，在细胞内具有各种功能。

一些细胞活性酶在生理状态下会进行去乙酰化修饰，这种修饰能够对酶的活性产生影响，也就是说蛋白质结构中的去乙酰化修饰是一个非常重要的问题。

1.定位去乙酰化修饰通常发生在腺苷酸酰化酶（histone deacetylases，HDACs）失败的情况下，一些酶会通过翻译后修饰的方式进行去乙酰化修饰，其中最为重要的是SIRT修饰酶，这些修饰酶大部分都是在细胞核内活动的。

2.去乙酰化修饰在蛋白质结构中的影响去乙酰化修饰能够对蛋白质结构产生深远的影响，这一修饰作用主要通过控制蛋白质带电状态来实现。

SIRT7修饰酶对机器复制元件活性有着重要的调控作用，SIRT3修饰酶则是对四氧化锇损伤引起的oksidatif stres（氧化应激反应）有着保护作用。

SIRT1修饰酶能够对ATP合成产生影响，也就是能够对细胞内部的能量代谢起到影响作用。

这一修饰作用还能够对其他生理过程产生调控作用，包括organel regülasyonu（细胞器调控）和DNA新生作用。

3. 蛋白质结构的去乙酰化修饰与肿瘤在肿瘤细胞中，随着糖酵解的启动，SIRT3修饰酶非常重要，因为这一修饰作用能够对大量ROS产生的细胞环境起到一定的保护作用。

此外，去乙酰化修饰还能够协助细胞适应一些和肿瘤相关的突变、环境刺激或药物治疗等条件。

SIRT6修饰酶在肿瘤细胞中的表达受到限制，这一修饰作用能够控制非编码RNA的生产，并使得哺乳动物细胞对葡萄糖的代谢保持稳定。

4.其他研究进展近年来，人们对去乙酰化修饰的研究不断深入，有许多研究者主要关注如何阻止蛋白质去乙酰化修饰对肿瘤细胞的影响。

另外还有一些学术论文重点研究了如何提高去乙酰化修饰酶的生理活性。

总之，蛋白质结构中的去乙酰化修饰对于细胞功能维护和疾病治疗有着广泛的作用，并且对于肿瘤的治疗和预防也具有非常重要的意义。

因此，人们对这一领域的研究将会不断深入，未来必将取得更多的进展。

几丁质脱乙酰酶产

本文献研究的不足之处
数据可靠性不够充分：碱量法测脱乙酰度时没有重复取平均值，数据缺乏波动区间

本文献研究的不足之处

仰振球,李巧霞,樊红雷,宋宝珍. NMR、FTIR及电位滴定法测定壳聚糖脱乙酰度[J]. 功能高分子学报, 2003,(03) . 中指出在采用酸碱滴定法测定壳聚糖脱乙酰度的过程中，一方面，由于接近终点时碱的局部浓度较高，会有壳聚糖沉淀析出，影响点击pH或电位的测定另一方面，壳聚糖十大分子，其酸性溶液成胶体状态，在采用一般的（如甲基橙）指示剂是，很难判断终点。前者和赵颖,杨琰,卢实,张红菱. 壳聚糖脱乙酰度两种测定方法的比较 [J]. 武汉工业学院学报, 2009,(02) .实验中均指出线性电位滴定法比酸碱指示剂法能更好地避免人为误差，具有较高的准确性和精密度，而且操作简单。

据查证，有多种脱乙酰基的酶，本实验中缺乏酶的提纯本小组认为，实验中脱乙酰酶的筛选和测定采用壳聚糖，而题目命名为几丁质脱乙酰酶，由于结构不同两者的脱乙酰酶活力和种类也会不同，所以不够准确

几丁质分子中的糖残基部分脱去乙酰基就转变成壳聚糖
材料与方法

实验仪器及材料
1.仪器与试剂：PSH-2C精密型酸度计（上海伟业仪器厂），万分之一分析天平，电子天平，循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司），磁力搅拌器。几丁质、壳聚糖（济南海得贝生物有限公司），新华滤纸，浓HCl（分析纯）， NaOH（分析纯），指示剂甲基橙，对硝基乙酰苯胺分析纯（分析纯），三羟甲基氨基甲烷（Tris） 2.培养基富集培养基：壳聚糖2.5g，K2HPO4 0.7g，KH2PO4 0.3g，MgSO4 0.5g，NaCl 0.1g，pH值为7.2~7.5，定容至1L。平板筛选培养基：胶体几丁质200g，K2HPO4 0.7g，KH2PO4 0.3g，MgSO4 0.5g，NaCl 0.1g，对硝基-N-乙酰苯胺0.2g，琼脂20g，定容至1L。复筛发酵培养基：壳聚糖7.5g，K2HPO4 1g，KH2PO4 1g，NaNO3 2g，玉米浆5g，定容至1L。产酶发酵培养基：蛋白胨2.5g，蔗糖5g，（NH4） 2SO4 2.5g，KH2PO4 1g， K2HPO4 1g 乙酸钠3g，玉米浆5mL，定容至1L。 3.土样来源浅海土样，埋有蟹壳的花园土样，腐败蝉蜕，虾蟹养殖场土样，湖水水样。

几丁质脱乙酰酶(CDA)的研究进展

壳聚糖（ｈｔｓｎｃｉａ）是几丁质的Ｎ一乙酰基形ｏ脱式，是自然界中数量最大的天然碱性多糖。壳聚糖
早在１７９３年，ＡｒｋａｉＹ等就从接合菌纲（ｙｏｙｅｓＺｇｍｃｔ）的双相型真菌Ｍｕｏｕｉ中发现ｅｃｒｏｘｒｉ了ＣＡ，这是从微生物中分离得到ＣＡ的最早报ＤＤ
≯ 拳拳 ≥
表１产ＣＡ的微生物Ｄ
产酶微生物
Ｍ．ＯＸ＂ＦＵｆｌ
Ｍ．ｍｉｌｌｅｅ７＂
酶活比细胞抽提物中高出６２倍， —５利于酶的纯化，而最具工业应用价值的是此酶活力不受乙酸的抑制。
自此之后，研究者对Ｍｕｏｕｉ的ＣＤｃｒｏｘｉｒＡ和
菌体的酶活力明显高于发酵液，研究了金属离子并
对酶活的影响。
工、印染、环保和生物医药等领域具有更加广泛的
应用。
１８年，ａｓＨ从植物病原体Ｃｌｔｒｈｍ９２Ｋｕ等ｓｏｅｔｃｕｌｏｉｌｄｍｔａｕｉｅｕｉｍ中提取到ＣＡ并进行了部分纯化，ｎｈｎＤ这是从非结合菌中发现该酶的最早报道，此酶与Ｍｕｏｒｕｉ中ＣＡ的差别较大，ｃｒｏｘｉＤ首先是发酵液中
组成部分。壳聚糖分子中由于存在大量游离氨基＿，３】
化学性质比较活泼，易于进行多种化学修饰，并且
溶于酸性及中性水溶液，具有良好的生物相容性和生物可降解性。壳聚糖可用作膜材料、螯合剂、吸
附剂等，相比几丁质而言，它在食品、化妆品、轻

羧甲基几丁质的体外降解研究

羧甲基几丁质的体外降解研究蒋丽霞;郭盼盼;赵淑英【摘要】研究了溶菌酶对羧甲基几丁质的降解条件.通过检测降解产物的分子量,考察了不同的缓冲液及pH值、酶浓度、温度和时间对溶菌酶降解羧甲基几丁质的影响.结果表明,在pH值较低的醋酸盐缓冲液中,羧甲基几丁质具有较高的降解效率,更有利于溶菌酶活力的发挥;羧甲基几丁质的降解速率随着酶浓度的增加以及时间的延长而加快,但当酶浓度超过一定值时,降解产物分子量下降的趋势逐步减缓;且在55℃、pH值4.5的条件下,降解速率最快,并在降解48 h后趋于降解平衡.作为羧甲基几丁质非专一性的溶菌酶,在适当的条件下,较专一性的壳聚糖酶对羧甲基几丁质的降解作用更加有效,为羧甲基几丁质这一生物可降解材料提供了更多的研究依据.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2018(035)009【总页数】5页(P60-64)【关键词】羧甲基几丁质;溶菌酶;降解【作者】蒋丽霞;郭盼盼;赵淑英【作者单位】上海其胜生物制剂有限公司,上海201106;上海其胜生物制剂有限公司,上海201106;上海其胜生物制剂有限公司,上海201106【正文语种】中文【中图分类】Q5-33几丁质、壳聚糖及其衍生物在生物医药领域得到越来越广泛的应用。

目前，在中国CFDA注册的几丁质及壳聚糖类二类医疗器械产品接近上百个，而作为三类植入性医疗器械产品获得批准的亦有10多个，且几丁质、壳聚糖及其衍生物作为组织工程支架材料或载体材料的应用也越来越多[1-2]。

羧甲基几丁质作为一种可降解的生物材料，有必要对其体内外的降解性进行研究。

已有研究报道动物体内的溶菌酶能够有效降解壳聚糖[3-5]。

邓倩莹等[6]研究发现，壳聚糖在含溶菌酶的醋酸溶液中降解23 d后，其相对分子质量下降50%；并且壳聚糖在相同的pH值条件下，在含溶菌酶的醋酸溶液中比在醋酸中的降解速率快，因为在含溶菌酶的醋酸溶液中存在溶菌酶和醋酸的双重催化降解作用。

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ｃｒｉｅｎｄｎｙｍｅ．ｎｏｒｒｔｒｆｈｅｔｆｄｅｏｅｚｉＩｄｅｏｐｕｉｙｔｅＣＤＡ，ｗｅｎｅｄｔｕｕｅｔｅ１ｎｈｉａｒｗｅｃｍｐａｅｅｏｒｐｔｒｈｅｃｌ．Ｉｔｓｐｐｅ，ｏｒｄ
ｔｍｅｖｅｈｏｎｒｓ．ｉｓｏｒｔｅｃｔａｔ
Ｋｅｒｓｃｉｉｅｃｔｓ（ｙｗｏｄ：ｈｔｎｄａｅｙａｅＣＤＡ）；ｃｌｄｓｐｉｎｇａｓｈｍｏｅｉｅ；ｍｕｔｇｌｔｏｌｅｌｉｒｔｏｌｓｏｇｎｚｒｕｌｅａｉｎ：ｓｐｒｏｉｉｕｅｓｎｃ
（．ｈｎｏｇＬｉｈｄｓｒｎｔｕｅＪｎｎ２０１）１ＳａｄｎｇｔｎｕｔＩｓｉｔｉａ５０３Ｉｙｔ
（．ｈｎｏｇＦｏ＆ＦｅｍｅｔｔｎＩｄｓｓ＆Ｄｅ．ｎｔｔ）２ＳａｄｎｏｄｒｎａｉｕｔＲｅ．ｏｎｙｒｓＩｓｉｅｕｔＡｂｔｃ：ＴｅｓｒｉｓＫｅｔｉｕａｏａｏａｂｅｔｒｄｃｈｔｅｃｔｌｓ（ｓｒｔｈｔａｎｐｎｏｒｌｂｒｔｒｗｓａｌｏｐｏｕｅｃｉｎｄａｅｙａｅＣＤＡ），ｗｈｃｗａａｙｉｉｈｓ
几丁质主要存在于低等植物菌类、藻类的细胞，甲壳动物虾、蟹、昆虫的外壳，高等植物的细胞壁中，是世界上储量仅次于纤维素的第二大天然有机化合物。自然界中每年生物合成的几
ｓｖｒｌｃｍｍｏｌｅｈｄｆｃｌｄｓｕｔｏｎｅｅｍｉｅｈｅｔｗａｏｅｔａｔＣＤＡ．ｅｏｔｍｕｅｅａｏｎｙｍｔｏｓｏｅｌｉｒｐｉｎａｄｄｔｒｎｄｔｅｂｓｙｔｘｒｃＴｈｐｉｍｍｅｈｄｉａｏｌｗｓｆｒｅｔｎｉｕｒｗａｓｅｒｅｔｅ，ａｄｔｅｔａｌｓｗａｕｐｎｅｔｒｓｔｏＳｓｆｌｏ：ｅｍｎｉｇｌｑｏｓｗａｈｄｔｅｉｓｈｍｎｈｌｓｓｓｅｄｄｗｉＴｉ — ｈｕｈＨＣ１ｂｆｅＨ８０Ｔｈｏｕｉｎｗａｅｅｔｄ￣ｅｚｄａｄｔｅｒａｅｉｙｇａｓｈｍｏｅｉｅ．ｉａｌｕｆｒｐ．．ｅｓｌｔｏｓｒｐａｅｅｅｎｈｎｔｅｔｄ６ｍｎｂｌｓｏｇｎｚｒＦｎｌｙｔｅｓｐｒａａｔｗａｂａｎｄｂｅｔｉｇ．ｄｔｅｅｚｍｅａｔｖｔｆｔｅｓｐｒａａｔａｎｒｖｄ５５ｈｕｅｎｔｎｓｏｔｉｅｙｃｎｒｆｅＡｎｈｎｙｃｉｉｙｏｕｅｎｔｎｓｉｐｏｅ．８ｕｈｈ
ＴｈｆｃｆｌＤｉｒｐｉｎｏｉｎＤｅｃｔｌｓｔｉｅＥｆｔｌｓｕｔｎＣｈｔａｅｙａｅＡｃｉｔｅｏＣｅｏｉｖｙ
ＹｅＨｎｘａｈｏＸａｇｉｇｉｎＹｎｕＺａｇＪａｉｎＹｎｉｉｇｕｏｇｉ’ＺａｉｎｙｎＴａａｊｎｈｎｉａｇａｇＬｐｎ。ｘＨｎＹｎｅＬｕＪｎｕ ’ ａａｌｉｉｉｊｎ・ａ
２１．（第１６）００１总期５
山食晶发酵
细胞破碎方法对
几丁质脱乙酰酶活力的影响
岳洪霞赵祥颖田延军张家祥杨丽萍韩延磊刘建军 ’
（．１山东轻工业学院济南２０５）５３３（．２山东省食品发酵工业研究设计院济南２０１）５０３
ｗａｅｙｏｙｅｖｌｓｚｍ
１概述
丁质远远超过其它氨基多糖，是一种丰富的自然资源。几丁质是白色或灰白色、半透明、片状固体，其不溶性限制了应用范围，所以大多加工成
１１几丁质、壳聚糖．
发酵液洗涤三次，用ｐ８０ｒ — ｃ冲液悬浮茵体，先进行反复冻融，然后再用玻璃匀浆器处理６ｌ离心测上清液酶Ｈ．ＴｉＨｌｓ缓ｍｎ，活，比破碎前上清液酶活提高了５５倍。．８关键词几丁质脱乙酰酶（Ｄ）细胞破碎ＣＡ玻璃匀浆反复冻融超声波溶茵酶
２
摘
要实验室保藏一株产几丁质脱乙酰酶（Ｄ）的菌种，经过验证该酶属于胞内酶，为进一步分离纯化，需对细胞进行ＣＡ
破碎。本文以细胞破碎后上清液酶活为指标，通过比较几种常用细胞破碎方法，最终确定破碎该细胞提取ｃＡ最佳方法：Ｄ的