抗氧化实验方法
抗氧化实验方法
抗氧化实验⽅法1还原⼒的测定样品2ml加到2ml 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.6）和2ml 1%的铁氰化钾溶液的混合液中。
混合物在50℃保温20min，然后在反应混合物中加⼊2ml 10%的TCA，混合后以3000rpm 离⼼10min，取上清液2ml与2ml蒸馏⽔以及0.4ml 0.1%氯化铁在反应试管中反应，10min 后测定其在700nm处的吸光值。
吸光值越⼤表明还原⼒越强。
注意：建议蛋⽩浓度以5mg/ml左右变化，例如2.5，5之类变化。
但具体情况应根据吸光值⼤⼩⽽定。
0.2mol/L pH6.6的磷酸盐缓冲液的配制见附表。
铁氰化钾溶液应盛装在棕⾊瓶中。
⽐⾊⽫的⽤法：可见光(>400nm)⽤玻璃⽐⾊⽫（即没有标字母或者标G的⽐⾊⽫），紫外光时（<400nm）⽤⽯英⽐⾊⽫（即标Q字⽐⾊⽫）。
2 DPPH⾃由基清除活性的测定将1.5ml样品液添加到1.5ml含0.1 mmol/L DPPH的95％⼄醇中，混合，振荡，在室温下放置30min，然后在波长517nm处检测（Ai）。
清除率计算公式为：空⽩为1.5 ml 95%的⼄醇加⼊1.5 ml蒸馏⽔调零。
式中：Ac——对照为1.5 ml DPPH溶液加上1.5 ml蒸馏⽔在517nm处的吸光值；Aj——1.5ml样品液加上1.5 ml 95%的⼄醇在517nm处的吸光值；Ai——1.5ml样品液加上1.5 ml DPPH溶液在517nm处的吸光值；注意：建议酶解液蛋⽩浓度以2mg/ml 左右变化，如0.5,1,2,2.5之类变化，但是具体情况应视清除率⽽定，最终结果应有清除率⼤于50%和⼩于50%的情况。
DPPH样品有毒，需戴⼝罩和⼿套进⾏操作。
⽽且DPPH试剂很昂贵，⽤时注意节约。
0.1m mol/L DPPH ⼄醇溶液的配制：准确称取0.00395gDPPH，⽤95%的⼄醇溶液溶解并定容到100ml。
3 在卵黄磷脂体系中抗氧化能⼒的测定以卵黄脂蛋⽩为底物的LPO模型反应体系包括:体积⽐为1:25稀释的卵黄悬液(卵黄⽤等体积的pH7.45，0.lmol/LPBS配成，使⽤前磁⼒搅拌10min)0.2 mL、⼀定浓度的样品溶液0.lmL、25m moll/LFeSO4溶液0.2mL，⽤PBS缓冲液补⾜⾄2.0mL。
抗氧化实验方法二
本公司石墨品抗氧化实验报告（方法2）1、前言碳材料在400℃氧化气氛中开始氧化使得碳材料的力学性能明显下降，所以碳材料在高温下的应用受到一定的限制，如何把在高温下氧化的碳材料与氧化环境隔离是解决碳材料氧化的重要任务也是增加碳材料使用寿命和扩大运用范围的关键，通常提高碳材料抗氧化能力的方法有两种：一种是基体改性法，向碳材料中添加抗氧化剂在碳材料中生成某些类似熔融玻璃的物质而在碳材料表面堵塞或阻隔氧气的浸入；另一种就是涂层法，采用耐高温氧化涂层来保护碳材料表面，减少碳材料与氧气发生反应的面积和几率从而达到抗氧化目的。
技术中心用的是实验方法一：基体改性法（浸渍法）2、实验2.1实验目的：提高碳材料抗氧化性2.2实验材料：1、二化品2 、三聚磷酸钠 3、纯净水 4、四聚磷酸钾5、三氧化二铝6、二氧化钛7、氧化镁8、柠檬酸2.3实验用设备：1、天平2、恒温干燥箱（300℃）3、箱式电阻炉（1000℃）4、烧杯5、玻璃棒2.4实验用浸渍剂：35%三聚磷酸钠、30%四聚磷酸钾、20%三氧化二铝、10%二氧化钛、5%氧化镁混合2小时，将混合粉熔于70℃左右清水中，其粉料占液体总重的20%左右，搅拌10分钟加入1.5%的柠檬酸继续搅拌20分钟制的浸渍剂。
2.5浸渍工艺：用蒸馏水清洗试样三次→将试样加热130℃烘干后称重→将试样再次加热至300℃趁热放入装有浸渍液的烧杯中3小时→将浸渍后的试样加热至130℃烘干称重→将试样加热至500℃排除挥发份。
3、试样失重测试：（表1）常温未浸试样理化指标（表2）试样1 一浸后理化指标（表3）试样1 二浸后理化指标一浸后重（g ） 86.7 增重率（g ） 4.96 体密（g/cm3）1.913气孔率（%）19.98度下做氧化失重实验。
试样1（浸渍） 与试样2（未浸渍）对比照（表4）900℃试验氧化失重后数据 单位：克时间试样3h6h9h12h15h试样1（浸渍） 75 62.2 53.5 42 32.8 试样2（未浸渍）6956.747.335.326.5试样1（浸后照）试样2（未浸照）试样1（浸渍） 与试样2（未浸渍）焙烧后对比照4、实验过程和结果描述：4.1、实验的过程描述：在制作浸渍液体配比时液体呈大白色状态，按照浸渍工艺执行将样品放入盛有件液体的烧杯中液体大约在10秒左右浸渍剂沸腾并伴有刺鼻的气味，待浸渍好的样品放入烘箱中烘干，样品表面有一层白色的物质没有全部覆盖整个样品表面，在做氧化失重的过程中发现，非浸渍的样品表面不断的氧化并伴有粉末脱落随着时间的加长而增多一直到实验结束。
抗氧化实验方法
附录抗衰老实验实验一：对超氧阴离子清除作用的测定（邻苯三酚自氧化法）一实验原理：超氧阴离子自由基产生体系模型:邻苯三酚在弱碱性(Tris-HCl 缓冲液，pH8.2)溶液中自身氧化分解产生超氧阴离子的反应为：在一定条件下，随着反应的进行，生成的超氧阴离子在体系中会不断积累，导致反应液的吸光度(299nm波长)在反应开始后5min之内随时间变化而线性增大。
因此在该时间内，于299nm处测定含被测物反应液的吸光度随时间的变化率, 并与空白液比较便可得出被测物抑制超氧阴离子积累的作用能力。
抑制率可根据下式计算：式中F O和F X分别表示空白液和被测液的吸光度随时间的变化率二实验仪器和试剂：1 主要仪器：紫外可见分光光度计，恒温水浴锅，10mL试管,分析天平。
2 主要试剂：待测液，弱碱性(Tris-HCl)缓冲液，邻苯三酚溶液，HCL溶液。
三试剂配制：1、Tris碱溶液：6.05g定容于500mL水中，形成0.1mol/L的Tris碱溶液。
2、0.1mol/L HCL溶液：1.0mL浓盐酸（36%，11.6mol/L）加入91.4mL水中。
3、Tris-HCL缓冲液（0.05mlo/L,pH8.2）：50mL的0.1mol/L的Tris碱溶液与22.9mL的0.1mol/L HCL溶液混合，定容至100mL。
4、25mmol/L 邻苯三酚溶液（焦性没食子酸）：将0.0315g邻苯三酚定容于10mL水中。
现配现用，4h内有效。
四实验方法：1、取0.05mol/L pH8.2的Tris-HCl缓冲液4.5ml于试管中，置于25℃水浴中预热20min；2、分别加入1ml不同浓度的试样和0.4mL,25mmol/L的邻苯三酚溶液（2.5 mmol/L邻苯三酚(由10 mmol/L HCl配制)0.4 ml），混匀后于25℃水浴中反应5min；3、加入8mol/L 盐酸1.0ml终止反应，以Tris-HCl缓冲液作参比，空白组以0.1 ml蒸馏水代替样品试液，在299nm处测定吸光度，计算清除率。
抗氧化实验方法
1还本力的测定之阳早格格创做样品2ml加到2ml 0.2mol/L磷酸盐慢冲液（pH6.6）战2ml 1%的铁氰化钾溶液的混同液中.混同物正在50℃保温20min，而后正在反应混同物中加进2ml 10%的TCA，混同后以3000rpm离心10min，与上浑液2ml与2ml蒸馏火以及0.4ml 0.1%氯化铁正在反招考管中反应，10min后测定其正在700nm处的吸光值.吸光值越大标明还本力越强.注意：修议蛋黑浓度以5mg/ml安排变更，比圆2.5，5之类变更.然而简曲情况应根据吸光值大小而定.0.2mol/L pH6.6的磷酸盐慢冲液的配制睹附表.铁氰化钾溶液应衰拆正在棕色瓶中.比色皿的用法：可睹光(>400nm)用玻璃比色皿（即不标字母大概者标G的比色皿），紫中光时（<400nm）用石英比色皿（即标Q字比色皿）.2 DPPH自由基扫除活性的测定将1.5ml样品液增加到1.5ml含0.1 mmol/L DPPH的95％乙醇中，混同，振荡，正在室温下搁置30min，而后正在波少517nm处检测（Ai）.扫除率估计公式为：空黑为1.5 ml 95%的乙醇加进1.5 ml蒸馏火调整.式中：Ac——对于照为1.5 ml DPPH溶液加上1.5 ml蒸馏火正在517nm处的吸光值；Aj——1.5ml样品液加上1.5 ml 95%的乙醇正在517nm处的吸光值；Ai——1.5ml样品液加上1.5 ml DPPH溶液正在517nm处的吸光值；注意：修议酶解液蛋黑浓度以2mg/ml 安排变更，如0.5,1,2,2.5之类变更，然而是简曲情况应视扫除率而定，最后截止应有扫除率大于50%战小于50%的情况.DPPH样品有毒，需戴心罩战脚套举止支配.而且DPPH试剂很高贵，用时注意俭朴.0.1m mol/L DPPH 乙醇溶液的配制：准确称与0.00395gDPPH，用95%的乙醇溶液溶解并定容到100ml.3 正在卵黄磷脂体系中抗氧化本领的测定以卵黄脂蛋黑为底物的LPO模型反应体系包罗:体积比为1:25稀释的卵黄悬液(卵黄用等体积的pH7.45，0.lmol/LPBS配成，使用前磁力搅拌10min)0.2 mL、一定浓度的样品溶液0.lmL、25m moll/LFeSO4溶液0.2mL，用PBS慢冲液补脚至2.0mL.对于照管除不加样液中其余试剂共前.将上述2种试管共时置37℃恒温火浴锅中保温培植1h.与出后，加进20%TCA0.5mL，静置10 min后，与对于照管于3500r/min离心10min，与2.0mL上浑液，分别加进品量分数为0.8%硫代巴比妥酸(TBA)溶液 1.0mL，加塞于100℃火浴15min，与出热却.空黑管以 2.0mLPBS溶液代替，正在532nm下测定吸光度，样品对于卵黄脂蛋黑LPO 的压制率表示为:SA(%)=(Ac一AS)/AC×100式中:Ac一不加样品的吸光度As一加进样品的吸光度注意：卵黄溶液不必时应搁置冰箱保存.酶解液蛋黑浓度以5mg/ml安排安排，然而简曲应视扫除率大小而定，对于酶解液蛋黑浓度举止安排.硫代巴比妥酸溶液需搁置于棕色瓶内保存.并以50m mol/L NaOH溶液配制.再正在50℃火浴溶解.FeSO4溶液应以棕色瓶衰拆.4 过氧化值的测定参照本食品教院林华娟等教授主编的食品分解真验道义一书籍.5 超氧阳离子自由基扫除率的测定邻苯三酚自氧化速率（V对于照）：对于照组战空黑对于照组加进4ml 蒸馏火（去离子火）战，0.1 mol/LTris-HCl 慢冲溶液(pH8.2) 4.5ml，正在25℃火浴20min后，样品组加进0.2ml （大概0.3ml）3m Mol/L邻苯三酚溶液，空黑组以相共体积蒸馏火（去离子火）代替.震匀后赶快正在320nm 处测定吸光值.赶快混匀并启初计时，每隔30 s读与吸光值,4 min后中断，以空黑对于照管调整.做吸光度随时间变更的返回圆程，其斜率为邻苯三酚自氧化速率V对于照.（V对于照正在0.05A/min~0.065A/min之间，可则应安排邻苯三酚加进量）样品自氧化速率（V样品）：样品组战空黑组均加进一定浓度的样品溶液4ml，0.1 mol/LTris-HCl慢冲溶液(pH8.2) 4.5ml，正在25℃火浴20min后，样品组加进0.2ml （大概0.3ml）3m Mol/L邻苯三酚溶液，空黑组以相共体积蒸馏火（去离子火）代替.震匀后赶快正在320nm处测定吸光值.赶快混匀并启初计时，每隔30 s读与吸光值,4 min后中断，以空黑管调整.做吸光度随时间变更的返回圆程，其斜率为邻苯三酚自氧化速率V样品，按下式估计样品对于超氧阳离子的压制率：式中：压制率(%)=(V对于照-V样品)/V对于照×100V对于照－对于照组邻苯三酚自氧化速率(ΔA/min)V样品－样品组邻苯三酚自氧化速率(ΔA/min)动物真验资料：戴自鹰嘴豆:抗氧化剂的抗氧化效验受到多种果素的效率，惟有正在死物体内具备抗氧化做用的物量才搞灵验的扫除体内爆收的自由基，才搞表示出一定的死物活性.由于体中抗氧化测定要领简单支配，周期短，果此评介一种物量的抗氧化效验往往最先采与体中抗氧化体系.然而体中抗氧化体系往往与人体内的死理环境出进太大，许多钻研截止标明采与体中要领评介灵验的抗氧化剂加进人体后却表示不出应有的抗氧化效验，果此抗氧化剂的抗氧化效验正在采与体中要领举止收端评介后应采与动物真验举止体内评介.人体正在仄常死理代开历程中会爆收少量的含氧自由基，如超氧阳离子、羟自由基、过氧化氢等，那些自由基通过自然存留于体内的抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶及抗氧化剂如抗坏血酸、维死素E组成的抗氧化系统去与消.果此，正在仄常状态下，体内自由基保护正在一定火仄并处于动向仄稳中，仄常量的自由基对于细胞的死少、团结、解毒等具备有益的效率，正在杀菌、免疫安排等圆里具备主动而要害的意思.然而，随着删龄大概正在某些病理状态下以及肌体受到创伤时，体内抗氧化酶活性下落，进而引导肌体代开非常十分而骤然爆收洪量活性氧自由基；大概由于肌体抗氧化物量缺乏，使促氧化剂与抗氧化剂之间的仄稳得常，以致自由基与机的一些死物大分子，如蛋黑量、核酸、脂量等爆收反应，死成洪量氧化物大概过氧化物，并进一步引起细胞牺牲战构制益伤.业已道明，氧化益伤与衰老、肿瘤、糖尿病、动脉软化、神经退止性病变以及人类免疫缺陷病毒(HIV)熏染等均有稀切闭系.D-半乳糖诱导的亚慢性衰老模型是依照衰老的代开教道修坐的，其体制与糖代开混治[6]、D-半乳糖醇中毒[7]战活性氧自由基过剩有闭；稠稀钻研标明是死物体内含有半乳糖氧化酶，正在催化D-半乳糖时可爆收超氧阳离子自由基(O2·-)战H2O2；如果少久人为天赋予过量D-半乳糖，使肌体战细胞内自由基爆收过量，除了制成构制细胞曲交益伤中，还引导抗氧化酶活力下落战过氧化产品聚集，进而表示出与人类自然衰老相似的死化变更、免疫功能矮下、基果表黑与调控非常十分细胞繁殖力下落及细胞退化性衰变等.有钻研标明，D-半乳糖可落矮人胚肺两倍体成纤维细胞(HBS)，进而使该细胞SOD活力落矮战过氧化产品MDA删加，进而起到加速细胞老化的效率.本文正在前述章节已经标明，鹰嘴豆蛋黑酶解物具备体中抗氧化活性，然而其正在死物体内的效率效验尚不领会.为此本章采与D-半乳糖诱引导衰老小鼠动做模型，分别以小鼠的血浑、肝净战心净构制中的丙两醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苦肽过氧化物酶(GSH-Px)活性动做评介指标，探讨鹰嘴豆蛋黑酶解物正在死物体内的效率，为掀穿鹰嘴豆蛋黑酶解物对于体内过氧化状态的效率，明确其物量前提战相闭体制提供凭证.。
(完整版)抗氧化试验方法
一、试验方法1、DPPH自由基清除率的测定本实验采用1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)法测定样品清除自由基活性。
1.1实验原理1,1-二苯基-2-苦肼基（1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)）是一种稳定的以氮为中心的自由基，其乙醇溶液显紫色，最大吸收波长为517nm。
当DPPH 溶液中加入自由基清除剂时，其孤对电子被配对时，吸收消失或减弱，导致溶液颜色变浅，显黄色或淡黄色，在517nm处的吸光度变小，其变化程度与自由基清除程度呈线性关系，故该法可用清除率表示，清除率越大，表明该物质清除能力越强。
1.2溶液的配制0.08mmol/L DPPH溶液的配制：精密称取DPPH8.0mg，用无水乙醇溶解并定容至200ml棕色容量瓶中，得浓度为0.004%的DPPH溶液，避光保存，备用。
1.3实验步骤：分别取不同浓度的各样品溶液（0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml）1.0ml，置10ml离心管中，加入3.0ml的DPPH溶液，室温避光反应30min，同时以无水乙醇为空白，于517nm波长处测定吸光值。
按下列公式计算DPPH自由基清除率。
DPPH自由基清除率（%）= A0-(A s-A c)/ A0×100%公式中，A0—1.0ml蒸馏水+3.0mlDPPH溶液的吸光度值A s—1.0ml样品溶液+3.0mlDPPH溶液的吸光度值A c—1.0ml样品溶液+3.0ml无水乙醇的吸光度值将实验重复三次，求得清除率的平均值。
2、总的抗氧化活性的测定总的抗氧化活性实验采用改良后的Prieto法。
2.1实验原理：磷钼络合物测定方法的原理是Mo(VI)被抗氧化物质还原成绿色的Mo(V)络合物，其最大吸收波长为695nm。
抗氧化物质活性越强，测定的吸光度值越大。
此方法操作简单，所用试剂低廉、方法重现性好，非常适合抗氧化性的测定。
细胞抗氧化实验报告
一、实验背景随着生活节奏的加快和环境污染的加剧，自由基损伤已成为导致细胞衰老和疾病的重要因素。
因此，研究细胞抗氧化机制对于揭示疾病发生机理和开发新的治疗策略具有重要意义。
本实验旨在探讨细胞抗氧化系统的功能及其调控机制。
二、实验材料与试剂1. 细胞：小鼠成纤维细胞（3T3-L1）2. 试剂：DPPH自由基清除剂、还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）、NADPH、FAD、黄嘌呤、牛血清白蛋白、无水乙醇、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、Tris-HCl缓冲液、考马斯亮蓝G-250等。
三、实验方法1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞（3T3-L1）接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. DPPH自由基清除实验：取对数生长期的细胞，用PBS洗涤后，加入不同浓度的GSH和DPPH自由基清除剂，于37℃孵育30min。
采用分光光度法测定DPPH自由基的吸光度值，计算清除率。
3. GSH含量测定：采用比色法测定细胞中的GSH含量。
4. SOD活性测定：采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞中的SOD活性。
5. CAT活性测定：采用牛血清白蛋白法测定细胞中的CAT活性。
6. GSSG还原实验：取对数生长期的细胞，用PBS洗涤后，加入不同浓度的NADPH和GSSG，于37℃孵育30min。
采用分光光度法测定GSSG的吸光度值，计算还原率。
四、实验结果1. DPPH自由基清除实验：随着GSH浓度的增加，DPPH自由基清除率逐渐升高，表明GSH具有较好的自由基清除能力。
2. GSH含量测定：与空白组相比，抗氧化剂处理组的GSH含量显著升高。
3. SOD活性测定：与空白组相比，抗氧化剂处理组的SOD活性显著升高。
4. CAT活性测定：与空白组相比，抗氧化剂处理组的CAT活性显著升高。
5. GSSG还原实验：随着NADPH浓度的增加，GSSG的还原率逐渐升高，表明NADPH具有较好的抗氧化作用。
abts抗氧化实验流程
abts抗氧化实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!ABTS 抗氧化实验流程。
试剂和仪器：ABTS（2,2'-叠氮苯并咪唑-6-磺酸铵）溶液（7 mM）。
抗氧化能力的测定的实验报告
抗氧化能力的测定的实验报告实验报告：抗氧化能力的测定引言：抗氧化能力是指物质对抗氧化剂的抵抗能力，其重要性在于帮助人体抵御自由基的损害。
本实验旨在通过测定不同样品的抗氧化能力，评估其对人体健康的潜在益处。
材料与方法：1. 样品准备：从市场购买五种常见的食材作为实验样品，包括苹果、橙子、胡萝卜、菠菜和绿茶。
2. 样品提取：将每种食材分别切碎，并用乙醇提取其抗氧化物质。
将每种样品放入研钵中，加入适量的乙醇，搅拌均匀，然后用滤纸过滤提取液。
3. 抗氧化能力测定：采用DPPH（2,2-二苯基-1-苦基肼）自由基清除法测定样品的抗氧化能力。
将每种样品提取液和已知浓度的抗氧化剂（例如维生素C）混合，反应一段时间后，测定混合溶液的吸光度。
4. 对照组设置：同时设置维生素C的对照组，以验证实验方法的准确性。
5. 数据处理：计算每种样品的抗氧化能力，以吸光度测定值的降低程度表示。
使用统计学方法进行数据分析。
结果：根据实验数据统计与分析，不同样品的抗氧化能力有所差异。
其中，绿茶和菠菜表现出较高的抗氧化能力，吸光度的降低程度较大，显示出较强的自由基清除能力。
苹果、橙子和胡萝卜的抗氧化能力较低，吸光度的降低程度较小。
讨论：本实验结果表明，绿茶和菠菜具有较强的抗氧化能力，可能对人体健康具有积极的影响。
然而，需要进一步研究以验证这些食材中的具体抗氧化成分，并了解其作用机制。
此外，实验中使用的DPPH自由基清除法仅是众多测定方法之一，其他方法也可以用于评估样品的抗氧化能力。
结论：本实验通过测定不同样品的抗氧化能力，发现绿茶和菠菜具有较强的抗氧化能力，苹果、橙子和胡萝卜的抗氧化能力较低。
这些结果为人们选择健康食材提供了一定的参考依据，但仍需进一步研究来确认这些食材对人体健康的确切益处。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
附录
抗衰老实验
实验一：对超氧阴离子清除作用的测定（邻苯三酚自氧化法）一实验原理：
超氧阴离子自由基产生体系模型:邻苯三酚在弱碱性(Tris-HCl
缓冲液，pH8.2)溶液中自身氧化分解产生超氧阴离子的反应为：
在一定条件下，随着反应的进行，生成的超氧阴离子在体系中会不断积累，导致反应液的吸光度(299nm波长)在反应开始后5min之内随时间变化而线性增大。
因此在该时间内，于299nm处测定含被测物反应液的吸光度随时间的变化率, 并与空白液比较便可得出被测物抑制
超氧阴离子积累的作用能力。
抑制率可根据下式计算：
式中F O和F X分别表示空白液和被测液的吸光度随时间的变化率
二实验仪器和试剂：
1 主要仪器：
紫外可见分光光度计，恒温水浴锅，10mL试管,分析天平。
2 主要试剂：
待测液，弱碱性(Tris-HCl)缓冲液，邻苯三酚溶液，HCL溶液。
三试剂配制：
1、Tris碱溶液：6.05g定容于500mL水中，形成0.1mol/L的Tris
碱溶液。
2、0.1mol/L HCL溶液：1.0mL浓盐酸（36%，11.6mol/L）加入91.4mL
水中。
3、Tris-HCL缓冲液（0.05mlo/L,pH8.2）：50mL的0.1mol/L的Tris
碱溶液与22.9mL的0.1mol/L HCL溶液混合，定容至100mL。
4、25mmol/L 邻苯三酚溶液（焦性没食子酸）：将0.0315g邻苯三
酚定容于10mL水中。
现配现用，4h内有效。
四实验方法：
1、取0.05mol/L pH8.2的Tris-HCl缓冲液4.5ml于试管中，置于
25℃水浴中预热20min；
2、分别加入1ml不同浓度的试样和0.4mL,25mmol/L的邻苯三酚溶
液（2.5 mmol/L邻苯三酚(由10 mmol/L HCl配制)0.4 ml），混匀后于25℃水浴中反应5min；
3、加入8mol/L 盐酸1.0ml终止反应，以Tris-HCl缓冲液作参比，
空白组以0.1 ml蒸馏水代替样品试液，在299nm处测定吸光度，计算清除率。
空白对照组以1ml试样溶剂代替样品，每个处理均做三个重复。
五数据处理:
超氧阴离子自由基清除率(%)=100%(A1-A2)/A1，
其中A1为空白的平均吸光度，A2为试样的平均吸光度。