大肠杆菌检测方法样本
大肠菌群及检查
一、大肠菌群简介
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域用语，它不代表某一种或某一属细菌，而指是具备某些特性一组与粪便污染关于细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气革兰氏阴性无芽胞杆菌。
普通以为该菌群细菌可涉及大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表白，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动场合以及有粪便污染地方，人、畜粪便对外界环境污染是大肠菌群在自然界存在重要因素。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其她型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来，重要是以该菌群检出状况来表达食品中有否粪便污染。
大肠菌群数高低，表白了粪便污染限度，也反映了对人体健康危害性大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者粪便，因此粪便内除普通正常细菌外，同步也会有某些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染也许性，潜伏着食物中毒和流行病威胁，必要看作对人体健康具备潜在危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量重要指标之一，当前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、大肠菌群检查办法：
由于大肠菌群指是具备某些特性一组与粪便污染关于细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气革兰氏阴性无芽胞杆菌。
因而大肠菌群检测普通都是按照它定义进行。
当前国内采用进出口食品大肠菌群检测办法重要有国标和原国家商检局制定行业原则。
两个原则办法在检测程序上略有不同。
（一）国标：国标采用三步法，即：乳糖发酵实验、分离培养和证明实验。
乳糖发酵实验：样品稀释后，选取三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。
36±1℃培养48±2h，观测与否产气。
分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观测菌落形态。
证明实验：挑取平板上可疑菌落，进行革兰氏染色观测。
同步接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观测产气状况。
报告：依照证明为大肠杆菌阳性管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群MPN 值。
详细操作参见GB4789.3-94 《中华人民共和国国标食品卫生微生物学检查大肠菌群测定》
（二）原国家商检局制定行业原则，等效采用美国FDA原则办法，用于对出口食品中大肠杆菌进行检测。
本办法采用两步法：推测实验：样品稀释后，选取三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。
36±1℃培养48±2h，观测与否产气。
证明实验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观测与否产气。
以BGLB产气为阳性。
查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群MPN值。
详细操作参见SN0169-92 《中华人民共和国进出口商品检查行业原则出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检查办法》
三、阐明：
1．MPN检索表：
MPN 为最大也许数(Most Probable Number)简称。
这种办法，对样品进行持续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定反映呈阳性管数浮现率，用概率论来推算样品中菌数近来似数值。
MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同稀释度，则表内数字应相应减少或增长10倍。
注意国标和行业原则中所附MPN表所用稀释度是不同，并且成果报告单位也不相似。
2．初发酵和证明实验：
无论是国标三步法还是行业原则两步法，都运用了乳糖发酵管进行了两次发酵实验，培养基配制略有不同，但都是为了证明培养物与否符合大肠菌群定义，即“在37℃分解乳糖产
酸产气”。
初发酵阳性管，不能必定就是大肠菌群细菌，通过证明实验后，有时也许成为阴性。
有数据表白，食品中大肠菌群检查环节符合率，初发酵与证明实验相差较大。
因而，在实际检测工作中，证明实验是必须。
3．产气量与倒管：
在乳糖发酵实验工作中，经常可以看到在发酵倒管内极微少气泡（有时比小米粒还小），有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮小气泡。
实验表白，大肠菌群产气量，多者可以使发酵倒管所有布满气体，少者可以产生比小米粒还小气泡。
如果对产酸但未产气乳糖发酵如有疑问时，可以用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑也许有气体产生，而应作进一步实验。
4．挑选菌落：
国标中，需要对初发酵阳性培养物接种伊红美蓝平板分离，对典型和可疑菌落进行观测和证明实验。
由于大肠菌群是一群细菌总称，在平板大肠菌群菌落色泽、形态等方面较大肠菌更为复杂和多样，并且与大肠菌群检出率密切有关。
国标办法规定伊红美蓝平板为分离培养基，在该平板上，大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽时，检出率最高；红色、粉红色菌落检出率较低。
此外，挑取菌落数与大肠菌群检出率有密切关系，只挑取一种菌落，由于机率问题，特别当菌落不典型时，很难避免假阴性浮现。
因此挑菌落一定要挑取典型菌落，如无典型菌落则应多挑几种，以免浮现假阴性。
5．抑菌剂：
大肠菌群检查中惯用抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿
等。
抑菌剂重要作用是抑制其他杂菌，特别是革兰氏阳性菌生长。
国标中乳糖胆盐发酵管运用胆盐作为抑菌剂，行业原则中LST肉汤运用十二烷基硫酸钠作为抑菌剂，BGLB肉汤运用煌绿和胆盐作为抑菌剂。
抑菌剂虽可抑制样品中某些杂菌，而有助于大肠菌群细菌生长和挑选，但对大肠菌群中某些菌株有时也产生某些抑制作用。
有些抑菌剂用量甚微，称量时稍有误差，即可对抑菌作用产生影响，因而抑菌剂添加应严格按照原则办法进行。
大肠杆菌的检测MPN计数法
大肠杆菌的检测(MPN计数法) 大肠杆菌的检测在环境和食品微生物检测中至关重要，因为这些微生物的存在可能指示污染和潜在的健康风险。
MPN计数法是一种常用的检测大肠杆菌的方法，下面将详细介绍这种方法。
一、MPN计数法简介MPN计数法，全称Most Probable Number，即最可能数，是一种通过统计学方法估算微生物数量的方法。
它的基本原理是在一定的稀释度下，通过系列梯度稀释的样本中存在微生物的概率来推算样本中实际的微生物数量。
二、MPN计数法检测大肠杆菌的步骤1.样品采集：采集被检样品，如水、食品等，并按照无菌操作的要求进行处理，以避免污染和交叉感染。
2.制备稀释液：将样品进行一系列的稀释，如10-1、10-2、10-3等。
每个稀释度的样品需要进行三份平行试验，以增加结果的可靠性。
3.选择合适稀释度的样品：根据实验结果，选择适合的稀释度的样品进行MPN计数。
这个稀释度应该是使样品中大肠杆菌的数量落在10~100之间，以提高估算的准确性。
4.培养：将选择的稀释度的样品分别接种到含有特殊培养基的试管中，培养基是为了促进大肠杆菌的生长。
每个试管中接种的样品量为10ml。
5.结果分析：经过一定时间的培养后，观察每个试管中的菌落数并记录。
根据统计学原理，通过这些数据可以得出样本中大肠杆菌的最可能数。
6.结果报告：根据实验数据，计算并报告每100ml（或者每1g）样品中大肠杆菌的最可能数。
三、MPN计数法的优势和局限性优势：1.MPN计数法是一种广泛应用的方法，可用于估计微生物的数量，不仅适用于大肠杆菌，还适用于其他微生物。
2.该方法不需要昂贵的仪器设备，操作相对简单，可用于基层实验室。
3.MPN计数法可以提供微生物数量的范围，而非单一数值，对于初步估计和趋势分析具有一定的参考价值。
局限性：1.MPN计数法的主观性较强，结果会受到操作人员的影响。
因此，需要操作者接受专业培训并遵循严格的操作规程。
2.MPN计数法的准确性相对较低，尤其是在微生物数量较少的情况下，可能存在较大的误差。
大肠杆菌标准检测流程
大肠杆菌标准检测流程一、样品采集。
这可是检测的第一步呢，就像找宝藏得先知道宝藏大概在哪一样。
采集样品的时候得特别小心，要选对地方。
如果是检测食品里有没有大肠杆菌，那就要从食品的不同部位采集，像苹果的话，表面和果肉都得取点样，可不能只取一个地方就完事儿了。
要是检测水呢，那也得取有代表性的水样，比如说从水的表层、中层和底层都取一点混合起来，这样检测出来的结果才更靠谱。
采集样品的时候工具也要干净无菌，不然就把杂菌带进去了，那检测结果可就乱套了。
二、样品处理。
采集好样品就得处理啦。
对于固体的样品，像是食物之类的，得把它弄碎成均匀的小颗粒，就像把一块大蛋糕掰成好多小碎块一样。
然后加入一些特定的液体，这个液体能让大肠杆菌从食物颗粒里跑出来，进入到液体里，方便我们后续检测。
对于液体样品呢，要是比较浑浊的，可能还得过滤一下，把那些大的杂质去掉，留下清澈一点的液体，这样大肠杆菌在里面就更显眼啦。
三、增菌培养。
处理好的样品就可以进行增菌培养喽。
这就像是给大肠杆菌盖个小房子，还提供好多好吃的，让它们快快繁殖。
把样品放到专门的培养基里，这个培养基就像是为大肠杆菌特制的营养大餐，里面有它们生长需要的各种营养成分。
然后把这个放了样品的培养基放到合适的温度下，一般是37摄氏度左右，这个温度对大肠杆菌来说就像春天的阳光一样温暖舒适，它们就会在里面开心地繁殖起来啦。
这个过程可能得持续一段时间，几个小时到一天不等，就看大肠杆菌们的心情啦，哈哈，其实是看它们繁殖的速度啦。
四、分离培养。
等大肠杆菌繁殖得差不多了，就要把它们从一堆细菌里分离出来。
这时候就用到平板啦。
把增菌后的样品接种到平板培养基上，然后用一种特殊的方法把它们均匀地涂开，就像画画一样把细菌均匀地涂在平板上。
然后把平板放到培养箱里继续培养。
在平板上，大肠杆菌会长成一个个小菌落，每个菌落就像是一个小家庭一样，都是由一个大肠杆菌繁殖出来的。
而且大肠杆菌的菌落有它自己的特点，比如说颜色、形状、大小之类的，通过这些特点我们就能初步判断是不是大肠杆菌啦。
大肠杆菌检测实验报告
大肠杆菌检测实验报告大肠杆菌检测实验报告引言：大肠杆菌是一种常见的细菌，存在于人体和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体无害，但某些菌株可能会引起严重的食物中毒。
因此，对食品和饮用水中的大肠杆菌进行检测至关重要。
本实验旨在通过不同的检测方法，了解大肠杆菌的存在和浓度。
材料与方法：1. 食品和饮用水样本：我们选择了市场上常见的食品和饮用水样本，包括蔬菜、水果、肉类和瓶装水。
2. 大肠杆菌培养基：我们使用了含有大肠杆菌特异性营养物质的培养基。
3. 培养皿和培养试管：用于培养大肠杆菌。
4. 显微镜和染色剂：用于观察和鉴定大肠杆菌。
实验步骤：1. 样本准备：我们将食品和饮用水样本分别取样，并放入培养皿或培养试管中。
2. 培养：将样本放入预先准备好的大肠杆菌培养基中，然后将培养皿或培养试管放入恒温培养箱中，以促进大肠杆菌的生长。
3. 观察：在培养一段时间后，我们使用显微镜观察培养皿或培养试管中的样本。
为了更好地观察大肠杆菌，我们使用染色剂对样本进行染色。
4. 记录：记录观察到的大肠杆菌数量和形态特征。
结果与讨论：通过对不同食品和饮用水样本进行大肠杆菌检测，我们观察到了以下结果：1. 蔬菜和水果样本中的大肠杆菌数量较高。
这可能是因为蔬菜和水果在生长和加工过程中接触到了土壤或污染的水源。
2. 肉类样本中的大肠杆菌数量较低。
这可能是因为肉类在加工过程中经过了高温处理，杀死了大部分的细菌。
3. 瓶装水样本中没有观察到大肠杆菌。
这是因为瓶装水在生产和包装过程中经过了严格的卫生控制。
通过本实验，我们可以得出结论：大肠杆菌在食品和饮用水中的存在是普遍的，但其浓度和数量因样本类型而异。
这提醒我们在选择和处理食品和饮用水时要格外注意卫生和安全。
结论：本实验通过采用大肠杆菌检测方法，对不同食品和饮用水样本进行了分析。
结果表明，大肠杆菌在食品和饮用水中存在普遍，但其浓度和数量因样本类型而异。
这对我们提醒了食品安全和卫生的重要性。
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌是一种重要的肠道细菌，对于科学家和医生来说具有重要的研究和治疗价值。
分离和鉴定大肠杆菌的方法有许多种，本篇文章将介绍几种比较常见的方法。
1. 感染部位样本的获得
首先需要获得感染部位的样本，可分为分泌物、血液、尿液、粪便等。
获得样本的方
法可以根据不同部位进行取样，比如粪便可以通过肛门插入取样器进行获取。
2. 抗生素筛选
将样本接种于相应的富营养基质，对其中加入多种抗生素。
根据对应的扩散系数，只
有大肠杆菌具有生长优势，因此只有大肠杆菌能够在抗生素的存在下继续生长。
3. 纯化
从上面的富营养基质中挑选具有脐带颜色和形态特征的菌落，将其在富营养基质上进
行纯化。
纯化后的大肠杆菌能在多种富营养基质上进行生长即可分离。
4. 经典分离法
包括肉汤琼脂平板法、 MacConkey琼脂平板法、格拉莫琼脂平板法、 EMB琼脂平板法等一系列基本细菌检测方法。
1. 化学特性法
常用方法有氧化氨酸特性试验、熏蒸酸特性试验、脱氧氮碱试验、醛类试验等。
通过
观察变化与发色的差异，以及其化学反应程度来判断是否为大肠杆菌。
通过观察菌落形态、革兰染色阳性反应、运动情况、气体代谢情况等特性判断是否为
大肠杆菌。
可采用比色相比法、蛋白溶液胶片法、氧测定法、etc。
3. 抗原性鉴定
通过采用血相似抗原、鞭毛抗原、菌体抗原等抗原进行抗血清试验，来确定是否为大
肠杆菌。
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌检验方法
大肠杆菌(Escherichia coli)是一种革兰氏阴性的厌氧菌，常常被用作指示性微生物来评估食品和水源的卫生质量。
以下是常见的大肠杆菌检验方法：
1. 培养基方法：将样品接种在包含大肠杆菌生长所需营养物质的培养基上，如大肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)和EC培养基等。
大肠杆菌能够利用琼脂中的乳糖发酵产生酸，导致培养基呈现红色或粉红色。
此外，EC 培养基还包含了可以检测大肠杆菌β-葡萄糖苷酶的亚甲基红试剂，如果大肠杆菌存在，则培养基呈现金属光泽。
2. 确认方法：对落有培养基上的鲜艳深色菌落进行进一步确认。
典型的确认方法包括革兰染色、目测观察形态特征、氧化发酵试验和测试产气杆菌酶试验。
3. PCR检测方法：利用聚合酶链反应(PCR)技术，从样品中扩增大肠杆菌特异性基因片段（如16S rRNA基因），然后通过凝胶电泳检测扩增产物。
4. 快速方法：如免疫层析试纸法和光学组织测定法。
免疫层析试纸法利用抗大肠杆菌抗体与大肠杆菌特异性抗原结合生成可视化结果。
光学组织测定法利用大肠杆菌的β-葡萄糖苷酶水解比色底物产生颜色变化。
这些方法都可用于检测大肠杆菌在食品和水源中的存在及其数量。
在进行检验时，应严格遵守相关的操作规程和实验室操作规范，以确保结果的准确性和可靠性。
大肠杆菌的检验注意事项
大肠杆菌的检验注意事项大肠杆菌（Escherichia coli），是一种重要的肠道细菌，在人体的肠道中起着非常重要的作用。
大肠杆菌可以帮助消化食物、合成维生素、抗菌等，但有些菌株也可以引发感染，造成疾病。
因此对大肠杆菌进行检验是非常重要的。
下面我将介绍一下大肠杆菌检验的注意事项。
一、样本采集注意事项1. 样本选择：大肠杆菌感染多与肠道相关，因此常见的样本有粪便、尿液、血液、脑脊液等。
采集时应根据具体的临床情况选择合适的样本进行检测。
2. 无菌操作：采集样本时应注意无菌操作，避免外界细菌的污染。
3. 保存条件：采集的样本在送检前应储存妥善，避免细菌繁殖和样本变质。
二、常见的大肠杆菌检验方法1. 大肠杆菌培养：将样本进行培养，观察并统计培养基上的菌落形成情况，通过菌落的特征可以初步判断大肠杆菌的存在。
2. 酶刨片法：通过将培养出的菌株置于特定的培养基中，观察其对特定酶的产生情况，比如大肠杆菌会产生β-半乳糖苷酶（ONPG酶）和大肠杆菌羧酸酯酶（ESBL酶）等。
3. PCR法：采用聚合酶链式反应（PCR）对样本中的DNA进行扩增，并检测特定的基因片段，如eae基因、stx基因等，来判断大肠杆菌的存在与否。
4. 血清学检验：通过检测患者血清中的特定抗体来诊断大肠杆菌感染，如血清凝集试验、免疫层析试验等。
三、注意事项1. 临床病史：在进行大肠杆菌检验前，应充分了解患者的病史，包括是否有肠道相关症状，如腹泻、腹痛等，是否有与大肠杆菌感染相关的暴露史，如食用不洁食物等。
2. 检验前准备：检验前应进行必要的准备工作，包括样本采集器械的准备、培养基的准备以及仪器设备的校准等。
3. 检验环境：检验操作要求在洁净的实验室环境下进行，注意操作台面、培养箱、离心机等的清洁卫生。
4. 避免交叉感染：在进行培养等操作时，应注意避免菌液和培养物的污染，防止产生误判。
5. 结果解读：要准确解读检验结果，对于阳性结果应结合患者的临床表现及其他检查结果进行综合判断，从而做出准确的诊断。
中国药典大肠杆菌的检测方法
中国药典大肠杆菌的检测方法中国药典中关于大肠杆菌的检测方法主要包括传统培养方法和分子生物学方法。
下面将分别介绍这两种方法。
一、传统培养方法：1.外源菌培养基法：将待检样品接种于含有选择性培养基的平板上，培养一定时间后观察菌落形态。
通过形态特征、气味、色素等来初步判断是否为大肠杆菌。
常用的选择性培养基有VRB和EMB。
2.确认试验法：通过进行染色试验，如革兰氏染色和断杆试验，来判断菌体形态和结构。
可以进一步采用生化试验，如IMVIC试验（亮甲基绿青试验、分解氯化酪蛋白试验、甲酸氧化试验、酒石酸汞试验）来鉴定大肠杆菌。
3.基于生长特性的检测方法：通过观察大肠杆菌在特定培养条件下的生长特性来确定其存在。
如革兰氏正浓度法、大肠杆菌生长阳性试验法等。
二、分子生物学方法：1. PCR方法：通过引物设计，利用PCR扩增大肠杆菌特异性位点的DNA片段，再通过凝胶电泳检测。
PCR方法准确度高、灵敏度强，能够快速、准确地检测大肠杆菌。
2.实时荧光定量PCR法：利用特定引物和探针，对大肠杆菌特异性序列进行定量扩增，并实时监测荧光信号的增加。
这种方法能够自动化操作，结果可靠。
3.基于32P标记的杂交法：通过将亲和探针与32P标记进行杂交，通过放射性自显影来检测标本中特异结构。
该方法精确度高，但操作复杂。
4.基于质谱技术的检测方法：通过质谱技术检测大肠杆菌的代谢产物，如脂肪酸、糖代谢物等，来判断其存在。
该方法准确度高，且对菌落的生长条件要求不高。
以上是中国药典中常用的大肠杆菌检测方法。
根据实际需要，可选择合适的方法进行检测。
每种方法都有其优缺点，因此在应用时需要综合考虑实验条件、检测要求和经济成本，选择最合适的方法进行检测。
提高大肠杆菌检测的准确度和效率，对于保障药品质量和公共健康具有重要意义。
实验七大肠杆菌检测
1
1
750
140
2300
3
1
2
1200
300
3800
3
1
3
1600
3
2
0
930
150
3800
3
2
1
1500
300
4400
3
2
2
2100
350
4700
3
2
3
2900
3
3
0
2400
360
13000
3
3
1
4600
710
24000
3
3
2
11000
1500
48000
3
3
3
≥24000
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色
细菌学检验程序
细菌总数
水样稀释或不稀释
倾注平板培养 37 ℃ 24小时
样品
大肠菌群
水样稀释或不稀释
第一步------ 初步发酵试验 （乳糖发酵）
37℃ 24小时
菌落计数 （取平均数报告）
第二步------ 平板分离培养 （转种鉴别培养基） 37℃ 24小时 革兰染色镜检
第三步------- 乳糖复发酵试验
①以无菌操作将检样1mL放于含有9mL灭菌生理盐水 或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内，经充分振摇或研磨做 成1：10的均匀稀释液。
②用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有 9mL生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀， 做成1：100的稀释液。
③另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释 液。
2
1
大肠杆菌检测步骤
餐饮具用大肠菌群测试片
采样:
（1）随机抽取消毒后准备使用的各类食具（碗、盘、杯等），取样量可根据大、中、小不同饮食行业每次采样6件～10件，每件贴纸片两张，每张纸片面积25cm²
（5cmX5cm）。
（2）用无菌生理盐水湿润大肠菌群检测用纸片后，立即贴于食具内侧表面，30s后取下，置于无菌塑料袋内.
（3）筷子以5只为一件样品，用灭菌1mL吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约5cm）抹试纸片，每件样品抹拭两张，放入无菌塑料袋内。
培养：
将已采样的纸片置于37℃恒温培养箱中培养16h～18h，取出观察结果。
结果判断：
若纸片保持紫蓝色不变，或有红色斑点但斑点周围无黄晕者为大肠菌群阴性；在红色斑点周围有黄晕，或纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。
国家标准规定：在50cm的纸片上（即两片纸片上），大肠菌群不得检出。
大肠杆菌检测实验报告【范本模板】
国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱,10只移液管,1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿,500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒,橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5％NaOH,5%HCl实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶,5只大试管,4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干,完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二:1:用电子天平称取成品LB 3。
1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中,制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口,用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三:1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS2：将1ml样品加入到该锥形瓶中,摇匀制成1：50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5:用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9:取4只平皿,编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中,加入４５—５０摄氏度温度下的培养基,约１５ｍｍ厚度.缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置.11：将培养基在３6摄氏度条件下培养12小时.12：取出培养皿，选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。