金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)介绍
金色葡萄菌培养
由于病原性球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌（pyogenic coccus）。
化脓性球菌分为G+球菌和G-球菌。
前者有葡萄球菌、链球菌和肺炎球菌；后者有淋球菌和脑膜炎球菌等。
葡萄球菌属（Staphylococcus）至少包括有20个种。
其中金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，引起许多严重感染。
表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是人体正常菌群。
三种葡萄球菌的主要性状区别—————————————————————————————————主要性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生性葡萄球菌—————————————————————————————————色素金黄色白色白色或柠檬色血浆凝固酶+(-) - -甘露醇发酵+ - -溶血+ - -耐热核酸酶活性+ - -磷壁酸核糖醇型+ - +磷壁酸甘油型- + +蛋白A（SPA）+ - -致病性强弱或无无—————————————————————————————————一、生物学性状（一）形态与染色葡萄球菌直径约0.8～1.0μm，呈葡萄串状排列，革兰染色阳性。
（二）培养和生化反应普通培养基上生长良好，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色。
表皮葡萄球菌呈白色。
腐生性葡萄球菌呈白色或柠檬色。
于血液琼脂平板上培养，致病性葡萄球菌菌落周围可形成完全透明溶血环（β溶血），在液体培养基中呈混浊生长。
葡萄球菌分解甘露醇产酸在鉴定葡萄球菌致病性方面有一定意义。
（三）抗原构造1．葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A, SPA）：SPA是存在于90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁表面的一种蛋白质，为完全抗原，能与人及多种哺乳动物的IgG1、IgG2和IgG4分子的Fc段非特异性结合，而结合后的IgG分子的Fab段仍能与抗原特异性结合。
利用这种结合建立的协同凝集试验已广泛应用于多种微生物抗原的检测。
此外，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有多种生物学活性，如激活补体、抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等。
金黄色葡萄球菌蛋白a（spa）介绍[新版]
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金黄色葡萄球菌A蛋白百科内容来自于：金黄色葡萄球菌A蛋白（Staphylococal Protein A，SPA）是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。
早在1940年，Vevwey发现在某些金黄色葡萄球菌中，含有一种物质，在双向扩散试验中能与正常人血清形成沉淀。
Jensen也发现类似现象，并将其命名为A抗原。
直到1963年Lofkvist等分离了该抗原，并证明它是一种蛋白质。
为与A与糖相区别，Grov将其命名为金黄色葡萄球菌A蛋白，简称SPA或蛋白A。
由于SPA的一些免疫特性，它已引起广大免疫学者的兴趣，并发展成为免疫学上一种极为有用的工具。
研究概述金黄色葡萄球菌A蛋白分析：金黄色葡萄球菌A蛋白胶体金（SPA-CG）分子的特征性构象特点，探讨其作为原子力显微镜观测原位标记物的可行性。
方法：应用原子力显微镜扫描生理状态下分布在云母表面的金黄色葡萄球菌A蛋白胶体金分子，并进行结构分析及理论计算。
结果：极少数平卧的SPA-CG呈中部球形隆起，两端长短不一的弯曲棒状肽链环抱球形隆起的独特结构，形成反“C”字形结构，球形隆起直径为单个胶体金直径的3～4倍；极少数SPA-CG呈逗号样；绝大多数SPA-CG呈一侧面稍凹的椭球形结构，结构稳定、均一，长径为（40．88±1．58）nm，宽径为（20．82±0．68）n，高度（Z 轴）为（10．51±0．28）nm。
结论：单个胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白分子具有独特、稳定、均一的特征性构象，可作为原子力显微术观测的原位标记物。
性质特点临床常见葡萄球菌菌种(1)SPA存在于大多数金黄色葡萄球菌中，而不存在于表皮葡萄球菌中。
并且主要存在于血浆凝固酶阳性菌株，而不存在于阴性菌株中。
前者是致病的，后者是非致病的，但在体内研究中尚未发现SPA和菌株致病性之间有任何肯定的关系。
不同菌株间的SPA含量有明显差异，以I株金黄色葡萄球菌含SPA量最高，SPA和细胞壁的肽聚糖呈共价结合。
金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A、简称SPA)
金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A、简称SPA)SPA是细胞壁抗原的主要成分，几乎90%以上的菌株均含有这种成分，但不同的菌株含量差别十分悬殊。
SPA占整个细胞壁蛋白成分的6.7%，通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合。
其它葡萄球菌如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌不含SPA。
该的重组金黄色葡萄球菌蛋白A是大肠杆菌生产的基因工程产品，具有极高Fc段结合活性,性能稳定，易于纯化等优点。
重组蛋白A还可与多种报告分子（荧光染料、酶标记、生物素、胶体金、放射性标记等）偶联并不影响其与抗体结合的活性。
这些偶联反应可用于组织化学、Western杂交、ELISA试验等的抗体检测。
另外，重组蛋白A还可固定于固体支持物上用于单克隆抗体或多克隆抗体的纯化。
SPA的免疫学性质(见表1. 对Protein A和Protein G的相对结合强度)金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)能与人及多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合，结合的亲和性次序依次是猪、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛；对大白鼠、绵羊的亲和力差；对马、犊牛、山羊等无亲和力；对所有的鱼类、两栖类、爬行类、鸟类（除少数例外）均不能与之结合。
鸡的IgG必须与相应的抗原形成复合物才能与SPA结合，原因可能是Ag－Ab复合物改变了IgG的Fc片段的构象。
SPA与IgG结合的亚类主要是IgG1、IgG2和IgG4。
SPA除与IgG结合外，还能与血清中少量的IgM和IgA结合，SPA菌对各类免疫球蛋白的吸附率：IgG为90%～98%，IgM为2%～30%，IgA为1.5%～20%。
出现共沉反应的SPA与IgG必须有两个结合部位，它们分别在Fc和Fab段上,缺一虽能与SPA结合，但不出现共沉反应，这种Fab的参与并非SPA－抗体反应。
现已研究表明，IgG与SPA的结合部位是CH2和CH3的交界处。
SPA的理化性质SPA是一种蛋白质,由亮、缬、脯、丙、苏、甘、丝、谷丙、天门冬及赖氨酸等十种氨基酸组成。
重组蛋白A-25使用说明
重组蛋白A-25使用说明
货号：P6860
规格：1mg/10mg
保存：2℃~8℃保存
别名：金黄色葡萄球菌蛋白A（简称为重组蛋白A或rSPA）
来源：重组蛋白A为重组大肠杆菌表达，经HPLC纯化。
产品说明：
形式冻干粉
成分重组蛋白A PBS溶液直接冻干，无任何其它添加剂。
纯度(SDS-PAGE检测)>95%
分子量25kD
核酸（UV检测）检测不到DNA,RNA
Triton含量无Triton污染
pH稳定范围1-13
1、非抗体柱纯化，产品中无任何其它抗体如IgG等的污染。
2、SPA-25pH耐受范围广，可耐受0.5M NaOH和0.5M HCl处理，不降解，抗体结合能力不变。
3、产品有特为抗体纯化柱设计的连接基团，可直接用于蛋白A柱的制备。
4、本公司的重组蛋白A产品具有生产规模大，质量稳定，纯度高等优点。
5、直接用无菌水将冻干粉溶解成相应浓度即可。
产品用途：
重组蛋白A可偶联到固体分离介质（如agarose）上，用于单克隆抗体或多克隆抗体的纯化。
重组蛋白A可与多种报告分子（荧光染料、酶标记、生物素、胶体金、放射性标记等）偶联并不影响其与抗体结合的活性。
这些偶联后的蛋白A衍生物可用于Western-blot、ELISA、免疫组化等的抗体检测。
病原生物学检验习题集
病原生物学检验习题集一、名词解释1.L型细菌：是指在某情况下，（如受溶菌酶或青霉素作用），细菌细胞壁中肽聚糖结构可遭破坏，或其合成受到抑制，当菌细胞壁受损后细菌并不一定死亡而成为细胞壁缺陷的细菌，称L型细菌。
2.转化：是指受体菌直接摄取供体菌的游离DNA片段，并正整合到自己的基因组中，从而获得新的遗传性状叫转化。
3.SPA：葡萄球菌A蛋白（SPA）是绝大多数金黄色葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白。
SPA可与除IgG3外的IgG分子的Fc段发生非特异性结合，二者结合后，IgG的Fab段仍然可以与特异性抗原结合，实验室常利用SPA这种特性进行协同凝集试验，广泛应用于多种微生物抗原的检测。
4.抗原性漂移：通常认为流感病毒基因发生了点突变，变异幅度小或连续变异，部分人群对新毒株没有免疫力，引起小规模流行。
一般认为是属于量变，即亚型变异。
5.AIDS：人类获得性免疫缺陷综合征。
病原体为HIV。
传播途径主要为性传播、血液传播和垂直传播。
临床表现经过原发感染急性期、无症状潜伏期、AIDS相关综合征及典型AIDS四阶段，最后常死于感染和相关肿瘤。
6.KIA: 克氏双糖实验，可检测出细菌是否能够分解乳糖、葡萄糖，7.串珠试验：将待检菌接种于含青霉素0.05-0.5U/ml培养基上，经37℃培养6小时后，炭疽杆菌可发生形态变化，显微镜下可见大而均匀的圆球状菌体，成串珠样排列，为串珠试验阳性。
8.卫星现象：流感嗜血杆菌章节9.汹涌发酵：将产气荚膜梭菌接种于牛乳培养基中，该菌能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，称为汹涌发酵。
10.转导：是以温和噬菌体为媒介，将供体菌DNA片段转移到受体菌，使受体菌获得新的遗传性状，称转导。
11.溶原性转换：是指细菌因染色体上整合有前噬菌体，从而获得新的遗传性状。
如产气白喉杆菌的形成。
12.接合：是指两个细菌直接接触，供体菌通过性菌毛将DNA转入受体菌，使受体菌获得新的遗传性状，称接合。
讲稿
3病理特征是患者由于免疫系统紊乱，导致体内蓄积自身抗体和免疫复合物，作为致病因子会破坏正常的细胞和组织，重度发病会导致多器官功能衰竭，是致残率致死率较高的一类疾病。
目前，临床上对这一类疾病的治疗主要采用蛋白A免疫吸附剂对患者血液进行净化。
利用金黄色葡萄球菌蛋白A与抗体之间的特异性相互作用，将其固定于固相载体制成吸附剂，通过一个体外循环，高选择性地清除患者血液中的致病因子。
4蛋白A（Staphylococal Protein A ,SPA）是金黄色葡萄球菌细胞壁相关蛋白5SPG与IgG结合谱较SPA广，可以结合人IgG3。
但对人IgM，IgA，IgE和IgD则无亲和力。
SPA和SPG的作用具有互补性。
7由于SPA和SPG的作用具有互补性，所以本课题的研究目标是11翻译为氨基酸序列后有一个氨基酸突变位点，在后续的实验中可以证明，突变并不影响融合蛋白CPAG的活性14含有克隆载体的菌株均可以表达融合蛋白CPAG，大小与预期结果一致，分别为54.5 kD。
随着IPTG浓度的增加，表达量并没有明显提高，但是相比于没有进行诱导的菌体，表达量明显增大，所以初步确定诱导浓度为0.2 mmol/L。
15诱导后培养3h，表达量基本相同，培养7h、8h后诱导，蛋白表达量有所减少，可能是因为菌体活性有所下降导致。
从电泳图中可以看出，培养3h后进行诱导，蛋白表达量较大，所以初步定为菌体培养3h后进行诱导表达。
16从图中可以看出，IPTG进行诱导后，表达量随着时间的推移而增加，当诱导后4-6h，表达量基本不再变化，当诱导后8h，表达量稍有减少，可能与菌体活性有关。
所以初步确定诱导后在继续培养4h已获得最大的蛋白表达量。
20使用50×M和20×P在表达量上有一定的差距，使用20×P作为微量培养基更有利于大肠杆菌表达融合蛋白。
在菌体的生长上，2种培养基差异不大，培养12h后，OD600nm均可达到20-30。
金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A、简称SPA)
金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A、简称SPA)SPA是细胞壁抗原的主要成分，几乎90%以上的菌株均含有这种成分，但不同的菌株含量差别十分悬殊。
SPA占整个细胞壁蛋白成分的6.7%，通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合。
其它葡萄球菌如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌不含SPA。
该的重组金黄色葡萄球菌蛋白A是大肠杆菌生产的基因工程产品，具有极高Fc段结合活性,性能稳定，易于纯化等优点。
重组蛋白A还可与多种报告分子（荧光染料、酶标记、生物素、胶体金、放射性标记等）偶联并不影响其与抗体结合的活性。
这些偶联反应可用于组织化学、Western杂交、ELISA试验等的抗体检测。
另外，重组蛋白A还可固定于固体支持物上用于单克隆抗体或多克隆抗体的纯化。
SPA的免疫学性质(见表1. 对Protein A和Protein G的相对结合强度)金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)能与人及多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合，结合的亲和性次序依次是猪、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛；对大白鼠、绵羊的亲和力差；对马、犊牛、山羊等无亲和力；对所有的鱼类、两栖类、爬行类、鸟类（除少数例外）均不能与之结合。
鸡的IgG必须与相应的抗原形成复合物才能与SPA结合，原因可能是Ag－Ab复合物改变了IgG的Fc片段的构象。
SPA与IgG结合的亚类主要是IgG1、IgG2和IgG4。
SPA除与IgG结合外，还能与血清中少量的IgM和IgA结合，SPA菌对各类免疫球蛋白的吸附率：IgG为90%～98%，IgM为2%～30%，IgA为1.5%～20%。
出现共沉反应的SPA与IgG必须有两个结合部位，它们分别在Fc和Fab段上,缺一虽能与SPA结合，但不出现共沉反应，这种Fab的参与并非SPA－抗体反应。
现已研究表明，IgG与SPA的结合部位是CH2和CH3的交界处。
SPA的理化性质SPA是一种蛋白质,由亮、缬、脯、丙、苏、甘、丝、谷丙、天门冬及赖氨酸等十种氨基酸组成。
金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌生物学性状1、形态与染色革兰阳性，球形，呈葡萄串状排列。
无芽孢、无鞭毛，体外培养时一般不形成荚膜，少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样黏液物质。
在某些化学物质（如青霉素）作用下，可裂解或变成L型。
2、培养特性需氧或兼性厌氧。
营养要求不高，在普通培养基中，37℃生长良好。
属内不同菌种可产生金黄色、白色或柠檬色等不同颜色的脂溶性色素并使菌落着色。
致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血琼脂平板上生长后，在菌落周围还可见完全透明溶血环（β溶血环）。
3、生化反应多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。
致病性菌株能分解甘露醇，产酸。
触酶阳性，可与链球菌相区分。
4、抗原种类多，结构复杂，以葡萄球菌A蛋白较为重要。
（1）葡萄球菌A蛋白（SPA）：90%以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面存在SPA 蛋白。
在体内，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。
（2）荚膜多糖：利于细菌黏附道细胞或生物合成材料表面（如生物性瓣膜、导管、人工关节等）。
（3）多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁。
金黄色葡萄球菌中可提出A 群的多种抗原，其化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇残基。
5、分类（1）按色素、生化反应等表型分类，分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌三类。
（2）根据有无凝固酶分型：可分为凝固酶阳性菌株和凝固酶阴性菌株。
6、抵抗力葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强。
在干燥的脓汁或痰液中科存活2～3个月；加热60℃1小时或80℃30分钟才能将其杀死；耐盐，于100～150g/LNaCl 培养基中仍能繁殖。
对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对磺胺、氯霉素敏感性差。
该菌易产生耐药性，对青霉素G的耐药菌株已达90%以上，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），已成为医院感染最常见的致病菌。
耐药性的产生机制与细菌的质粒或与细菌细胞壁成分改变和合成的量有关。
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金黄色葡萄球菌A蛋白百科内容来自于：金黄色葡萄球菌A蛋白（Staphylococal Protein A，SPA）是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。
早在1940年，Vevwey发现在某些金黄色葡萄球菌中，含有一种物质，在双向扩散试验中能与正常人血清形成沉淀。
Jensen也发现类似现象，并将其命名为A抗原。
直到1963年Lofkvist等分离了该抗原，并证明它是一种蛋白质。
为与A与糖相区别，Grov将其命名为金黄色葡萄球菌A蛋白，简称SPA或蛋白A。
由于SPA的一些免疫特性，它已引起广大免疫学者的兴趣，并发展成为免疫学上一种极为有用的工具。
研究概述金黄色葡萄球菌A蛋白分析：金黄色葡萄球菌A蛋白胶体金（SPA-CG）分子的特征性构象特点，探讨其作为原子力显微镜观测原位标记物的可行性。
方法：应用原子力显微镜扫描生理状态下分布在云母表面的金黄色葡萄球菌A蛋白胶体金分子，并进行结构分析及理论计算。
结果：极少数平卧的SPA-CG呈中部球形隆起，两端长短不一的弯曲棒状肽链环抱球形隆起的独特结构，形成反“C”字形结构，球形隆起直径为单个胶体金直径的3～4倍；极少数SPA-CG呈逗号样；绝大多数SPA-CG呈一侧面稍凹的椭球形结构，结构稳定、均一，长径为（40．88±1．58）nm，宽径为（20．82±0．68）n，高度（Z 轴）为（10．51±0．28）nm。
结论：单个胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白分子具有独特、稳定、均一的特征性构象，可作为原子力显微术观测的原位标记物。
性质特点临床常见葡萄球菌菌种(1)SPA存在于大多数金黄色葡萄球菌中，而不存在于表皮葡萄球菌中。
并且主要存在于血浆凝固酶阳性菌株，而不存在于阴性菌株中。
前者是致病的，后者是非致病的，但在体内研究中尚未发现SPA和菌株致病性之间有任何肯定的关系。
不同菌株间的SPA含量有明显差异，以I株金黄色葡萄球菌含SPA量最高，SPA和细胞壁的肽聚糖呈共价结合。
抗二甲氧基苯青霉素突变株能产生分泌性SPA，它较之细胞壁所含的SPA在免疫学性质上相似，但易分离，损失少。
(2)SPA为蛋白质成分，仅含少量或不含碳水化合物，其分子量因提取方法不同而异，用脱氧核糖核酸酶消化细胞壁后超速离心或用加热油提法，所测分子量为12000～15000。
用沉淀平衡分析和在6mol/L 鸟嘌呤盐酸盐中凝胶过滤，测出分子量为42000。
SPA为多肽单链，内含3个高度相似的Fc段结合区，每区由50个以上的氨基酸组成，不含色氨酸和半胱氨酸。
其羧基末端是赖氨酸，氨基末端结构尚未肯定。
SPA粘度高于球蛋白，等电点为pH5.1，其天然结构十分稳定，在应用6mol/L鸟嘌呤盐酸盐变性剂的条件下，尚能保存某些三级结构，如将此变性剂除去，则能自然矫正而恢复原有结构。
(3)SPA之所以引起免疫学家的重视，是因为它具有的免疫学特性。
SPA具有和人与许多动物如豚鼠、猪、小鼠、猴等IgG结合的能力。
SPA结合部位是Fc段而不是Fab段，这种结合不会影响抗体的活性。
SPA具有的结合力是双价的，每个SPA分子可以同时结合两个IgG 分子，也可一方面同IgG相结合，一方面与标记物如荧光素、过氧化物酶、胶体金和铁蛋白等相结合。
还有一个饶有兴趣的事实是，和SPA结合后的IgG可用4mol/L鸟嘌呤盐酸盐等使之解离。
SPA对IgG 免疫球蛋白亚型的结合有选择性，如SPA与人IgG亚型：IgG1、IgG2、和IgG4有结合力，唯独不结合IgG3。
只结合IgA2，而不结合IgA1。
SPA和禽类血清IgG不结合。
(4)SPA具有多种生物学作用，如引起豚鼠解离体回肠和收缩，在吞噬反应中抑制IgG调理素吞噬和杀菌作用，SPA—Igg 复合物能固定人的补体和人、狗、猪的新鲜补体，对人类B细胞具有促有丝分裂因子的作用等。
应用介绍凝固酶阴性葡萄球菌应用SPA建立了许多敏感、特异性强、快速和简易的实验方法，并在许多方面的应用中积累了实际应用的材料，现已广泛应用到免疫学及其相关科学如细胞学、细菌学和病毒学等。
其可能应用的范围可归纳为以下四个方面：1.应用于免疫球蛋白的制备和分析SPA是一种比较理想的提纯和分析免疫球蛋白的试剂。
由于SPA与IgG及其某些亚型的Fc段有较强的结合力，可利用来提纯、分析免疫球蛋白制剂，结合后的PSA—IgG可再用解离剂如4mol/L尿素、4mol/L，硫氰酸盐或6mol/L 的鸟嘌呤盐酸盐使之解离，多用SPA—Sepharose 层析柱分离IgG 或其亚型及断片如Fc、Fab等。
2.应用于免疫细胞化学由于SPA具有双价结合力，在免疫细胞化学技术中可作为桥抗体或标记抗体。
由于SPA能与多种动物的IgG的Fc段结合，因此，作为第二抗体或标记抗体，SPA的最大优点是不受种属特异性的限制，故在目前各种免疫细胞化学技术中已得到广泛的应用。
除不受种属限制这一特点外，SPA法还具有染色时间短、灵敏性高和背景染色淡等优点。
据报告用国产酶联SPA代替酶标记抗体，应用间接染色，时间较PAP法省时一半。
SPA分子量小，易于穿透组织，而免疫球蛋白酶标记抗体为200000，PAP复合物为430000，均较SPA分子量大。
3.应用于多种细菌、支原体和病毒等病原体的简易快速诊断可应用SPA菌体作为载体，结合特异性抗体成为一种吸附原，作协同凝集剂，用于某些细菌和病毒的定群和分型。
4.可作为一种研究免疫复合物、膜抗原、膜受体和膜Ig的固相吸附剂Hallgsen用同位素标记SPA测定血IgG的凝集物，发现85%全身性红斑狼疮和42%类风湿病人血清中凝集物增高。
SPA用于细胞膜抗原、表面IgG和Fc受体的研究最大特点是能研究活细菌。
Ghetie 用SPA致敏绵羊红血球，与经IgG处理的细胞形成玫瑰花环，来鉴定带Fc受体的细胞，反之，如用SPA抑制玫瑰花环形成，则可定量测定细胞表面的IgG。
应用SPA与胶体金或铁蛋白相结合，可在电镜水平检查抗原抗体反应的定位。
特别是蛋白A—胶体金技术自Pomano和Romano首次报告用于标记细胞表面抗原、包括淋巴细胞、血小板、大鼠肾脏细胞及感染的病毒细胞获得成功以后，已得到愈来愈广泛的应用，是一种较为理想的免疫电镜技术。
SPA在免疫细胞化学染色中的应用葡萄球菌（革兰染色片）SPA可为多种示踪物如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白等所标记，应用较广的为酶标记SPA和金标记SPA技术，后者将在第七章中叙述。
标记SPA常用的酶为HRP。
可应用于间接法。
SPA在PAP法中可代替桥抗体。
1.SPA—HRP用于间接法的操作步骤(1)切片经脱蜡后用0.5%H2O2—纯甲醇液处理5min以抑制内源性过氧化物酶活性。
(2)用Tris盐酸缓冲液洗2次，每次3min。
(3)以第一抗体血清覆盖处理切片，37℃，孵育30min，或4℃24～48h。
(4)用Tris-HCl缓冲液洗3次，每次5min。
(5)加SPA-HRP处理30min。
(6)Tris-HCl缓冲液洗3次，每次5min。
(7)DAB-H2O2显色。
(8)复染、脱水、透明、封固。
反应物为棕色。
2.SPA用于PAP法的操作步骤从动物分离的葡萄球菌扫描电子镜下的结构(1)切片脱蜡至水洗。
(2)80%甲醇(含0.6%H2O2)封闭内源酶活性5min。
(3)10%卵白蛋白Tris缓冲液，20min。
(4)第一抗体作用37℃，30min或4℃，16～48h。
(5)0.05mol/l pH7.6 Tris-HCl缓冲盐液洗片5min。
(6)SPA(1μg/ml)5min。
(7)Tris-HCl盐液洗5min。
(8)PAP复合物(无种属限制)，5min。
(9)Tris-HCl盐液洗切片5min。
(10)DAB(0.6mg/ml)，加0.01%H2O2反应5min，然后水洗。
(11)复染：常用Mayer’s苏木精液数秒至1min，水洗。
(12)脱水、透明、封固、镜检。
3.SPA-HRP的制备应用Nakane和Kawaoi1974年建立的过碘酸法，酶：SPA=2：1，即HRP10mg，SPA5mg。
(1)10mg 溶于新鲜配制的pH8.1、0.3mol/L碳酸氢钠溶液1ml，加入0.1ml 1%二硝基氟苯无水乙醇溶液以封闭酶分子中的氨基，使不发生酶的自身聚合，室温轻轻搅拌1h。
(2)加入1ml0.04～0.08mol/L的NaIO4，室温搅拌30min。
(3)加入1ml0.16mol/L乙二醇，室温轻搅1h。
(4)对1000ml 0.01mol/L pH95 碳酸盐缓冲液充分透析，换缓冲液3次。
(5)加入5mg SPA的0.1mol/l pH7.4碳酸钠缓冲液1ml，室温轻搅2～3h。
(6)加5mg硼氢化钠终止氧化，置4℃冰箱3h或过夜。
(7)对PBS透析24h，4℃离心去沉淀，半饱和硫酸铵洗沉淀结合物3次，溶于1ml 0.02mol/L pH7.4的PBS中。
(8)对PBS充分透析，经测定后分装，贮于-20℃冰箱中保存备用。
用过碘酸钠法可以得到很高标记率的HRP-SPA标记物，而且保存了抗体的全部活性，敏感度高，稳定性强，大大优于戊二醛标记抗体法，现在也有HRP-SPA的标记物供应，但要注意由于各家所用的SPA 可能来源于不同菌株，在性质上可能存在一些差异。
注意事项葡萄球菌属①在使用二硝基氟苯后，会产生氟化氢，应充分透析除净，否则抑制酶活性。
②标记时过碘酸浓度不宜过高，氧化时间不宜过长，否则会产生过度标记，即多个酶分子结合到一个蛋白A分子上。
这些过度标记蛋白A 的免疫反应性很差，容易产生非特异性染色。
③标记时加入酶与SPA的比例应适合，比值过大易产生过度标记，比值小则标记蛋白A产率低。
④过碘酸氧化结果能使酶具有多个醛基，从而能与多个蛋白分子的氨基相结合，成为一些大分子的聚合物。
因此，有作者强调指出，对要求具有较强的细胞穿透力的免疫细胞化学实验时应予以考虑是否适用。
但有实验室应用上海生物制品所产生的应用过碘酸氧化法制备的HRP-SPA于免疫电镜研究仍获得了较为满意的结果。
对应药品重组金黄色金黄色葡萄球菌A 蛋白(SPA)产品名称：重组金黄色金黄色葡萄球菌A蛋白（缩写为proteinA，SPA，蛋白A）英文名称：proteinA，SPA，蛋白A产品包装：5mg/支，10mg/支，20mg/支产品产地：国产纯度：>95%（HPLC检测）活性：>95%人IgG结合活性成分：液体，含20mm浓度PBS Ph7.4。
分子量：35kDpH值范围：pH 2.0-11.0特异性：重组蛋白A与人IgG1、IgG2、IgG4，小鼠IgG2a、IgG2b、IgG3有较强结合活性；与人IgG3，小鼠IgG1有较弱结合活性。