微生物-金黄色葡萄球菌 PPT

生理盐水
方法二：玻片法 在一张洁净玻片中央加1滴生理盐水，用接种环取
待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液， 若经10~20s内无自凝现象发生，则加入人或兔新鲜血浆 1环（不用稀释），与菌悬液混合，观察结果 。
兔血浆制备 成分：柠檬酸钠0.106 mol/L （31.3g Na3C6H5O7·2H2O溶于1L蒸馏水中） 制法：一份加兔血9份混合后离心2000rpm，
当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品， 如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经810小时即可相当数量的肠毒素。
二、检验程序与操作方法
根据中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准： 《食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验》 GB 4789.10-94
金黄色葡萄球菌检验
国标：金黄色葡 萄球菌检验程序
所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌 株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和 溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放 脂肪酸。在BP平板产生磷脂环。
生物学特性 ——致 病 性
金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主 要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 d.脱氧核糖核酸酶（DNA酶） e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
25g样品+ 225ml 生理盐水
5mL样品匀液（1:10）+ 50mL胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 24hr
定性 检测
血平板
BP平板
36± 1℃ 24hr 镜检与 肉浸液肉汤培养
36± 1℃ 24hr
血浆凝固酶 试验
36± 1℃ 6hr
报告结果
定量
25g样品+ 225ml 生理盐水
梯度稀释
检测
（平板法）
养24h的金黄色葡萄球肉浸液肉汤培养物0.5mL，振荡摇 匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观 察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者， 被认为阳性结果。
试管法
阴性反应
阳性反应
不凝固
少量、 零散凝
固
明显的块 状凝固
巨大块 凝固
完全凝固， 倒置不流动
有凝块
均匀混浊
血浆
检样 25g(ml)+225ml灭菌生理盐水
直接计数方法
增菌培养方法
Baird-parker（贝尔德- 帕克） 0.3ml、0.3ml、0.4ml
36± 1℃ 24hr
血平板
36± 1℃ 24hr
7．5％氯化钠肉汤或 胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 24hr
血平板 ，Baird-parker
涂片染色
观察溶血
微生物-金黄色葡萄球菌
大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌。
大多数菌株最适生长温度30-37℃，最适pH为7.0-7.5； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。
一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或7.5% 氯化钠肉汤增菌。
10min吸取上清液即为兔血浆。
葡萄糖肉浸液肉汤的制备
成分：绞碎牛肉500g，氯化钠5g，蛋白胨10g，磷酸氢二 钾2g，葡萄糖10g，蒸馏水1000mL，pH7.4～7.6。
制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g，与蒸馏水混合后 放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣 完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水 补足原量。加入蛋白胨、葡萄糖，氯化钠和磷酸盐，溶解 后校正pH，煮沸并过滤、分装，121℃30min高压灭菌。
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌， 临床表现多种多样，可引起局部化脓感染，也可引起肺 炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
葡萄球菌皮肤感染
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾 病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最 为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
✓ 丙酮酸钠是一种生长促进剂 ✓ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有
毒性，并使菌落产生黑色 ✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 ✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制
作用。
在BP平板上典型菌落为：灰色到黑玉色，圆形，光 滑突起，湿润，直径2-3mm，边缘常为淡色（米黄色或 灰色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用 接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。
选三个连续梯度，每个梯度分别取1mL接种之至表面 干燥的BP平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL）
36± 1℃ 48hr
适用于检测金黄色葡萄球菌 数不小于10/g（mL）的食品
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落，其黑 色常较典型菌落淡些，且外观可能粗燥，质地较干燥。
B-P平板
பைடு நூலகம்
检验程序 ——鉴定之革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，组成葡萄状
检验程序 ——鉴定之凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
方法一：试管法 吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培
大而突起，圆形，不透明， 表面光滑，有溶血环
血平板制作
成分：豆粉琼脂（或营养琼脂）100mL，脱纤维 羊血（或兔血）5-10mL。
制法：加热融化琼脂，冷至50℃，以无菌操作加 入脱纤维羊血或兔血，摇匀，倾注平板。或分装 灭菌试管，摆成斜面。
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
✓ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
血浆凝固酶试验
报告
检验程序 ——增菌培养
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%的 氯化钠），用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤或7.5% 氯化钠肉汤增菌。
置37摄氏度培养箱培养24小时。
检验程序 ——分离培养
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血 平板上产生明显的溶血环。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆 形，不透明，表面光滑，有溶血环。