NLRX1基因在调控顺铂耳毒性中的机制研究
siRNA沉默Livin基因对顺铂诱导LiBr细胞凋亡及增殖抑制敏感性的影响
siRNA沉默Livin基因对顺铂诱导LiBr细胞凋亡及增殖抑制敏感性的影响王昊;肖生祥;王新阳;刘栋华;贺大林;赵军【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2009(029)010【摘要】目的为探索沉默Livin基因联合化疗药物提高恶性黑素瘤疗效的可能性和初步机制.方法在体外以恶性黑素瘤LiBr细胞为研究对象.以低剂量顺铂作用于siRNA沉默Livin后的LiBr细胞.观察沉默Livin基因后LiBr细胞对顺铂诱导的凋亡及增殖抑制敏感性的影响.结果经TUNEL法和Annexin V-FITC/PI双标法检测凋亡、Western blot检测caspase-3蛋白表达和MTT检测细胞增殖.结果显示,与单独应用siRNA-3、顺铂相比,siRNA-3联合顺铂可显著诱导细胞凋亡、提高caspase-3活化、抑制细胞增殖.结论 siRNA沉默Livin基因后可明显增加LiBr细胞对顺铂诱导凋亡及增殖抑制的敏感性,恶性黑素瘤的化疗耐药与Livin高表达引起的凋亡抑制密切相关.【总页数】4页(P2098-2101)【作者】王昊;肖生祥;王新阳;刘栋华;贺大林;赵军【作者单位】西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】Q254【相关文献】1.siRNA沉默K-Cl协同转运子1基因的表达对肺腺癌细胞顺铂敏感性的影响 [J], 徐然;赵俊刚;石文君2.siRNA沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响 [J], 王昊;谭升顺;王新阳;刘栋华;于春水;白转丽3.siRNA沉默livin基因对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶和奥沙利铂药物敏感性的影响[J], 元建华;李建旺;张曙波;毛山山;崔荣花4.siRNA沉默livin基因对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶和奥沙利铂药物敏感性的影响[J], 元建华;李建旺;张曙波;毛山山;崔荣花;5.Livin基因沉默对人喉癌Hep2细胞凋亡和增殖及化疗敏感性的影响 [J], 何盛梅;李昌亚;孟令辉;赵厚育因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
抗癌药顺铂对小鼠的耳、肾和肝毒性及其机制的研究
抗癌药顺铂对小鼠的耳、肾和肝毒性及其机制的研究廖英俊;汤浩;金亚平【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2004(20)1【摘要】目的以小鼠为实验对象建立抗癌药顺铂毒性研究的实验动物模型,并探讨其毒性作用产生的可能机制,为进一步对顺铂毒性作用的防治研究提供科学参考资料.方法选择♂昆明种小鼠,经腹腔连续注射顺铂5 d,观察不同剂量顺铂对小鼠的听力、肾脏和肝脏的毒性作用及肝和肾组织抗氧化系统各指标的变化.结果顺铂可引起小鼠体重明显下降、全频率的听力阈值升高,肝和肾的脏器系数、血清尿素氮(BUN)含量和丙氨酸氨基转换酶(ALT)活性等指标的异常,并呈剂量依赖关系.此外,顺铂还可引起肝和肾抗氧化及氧化损伤指标的异常.结论 3.0～4.0 mg*kg-1 b.w 的顺铂可引起小鼠出现明显的听力、肾和肝组织的损伤.氧化损伤是抗癌药顺铂产生其毒性作用的可能机制之一,但对于不同的脏器和在不同的给药时期,其发挥的作用不同.【总页数】4页(P82-85)【作者】廖英俊;汤浩;金亚平【作者单位】中国医科大学基础医学院生理教研室,沈阳,110001;中国医科大学基础医学院生理教研室,沈阳,110001;中国医科大学公共卫生学院劳动卫生教研室,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.47;R322.61;R322.92;R979.19【相关文献】1.抗癌药顺铂耳毒性机制及防治方法的研究进展 [J], 廖英俊;汤浩2.维生素E对顺铂所致的小鼠肾毒性的影响及其机制研究 [J], 张林;刘伏友;彭佑铭;李大伟;曾妮;武蓉;刘沧桑3.富氢盐水拮抗顺铂对小鼠耳毒性的作用研究 [J], 卢燕;林信衡;蔡友铮;徐浩;王宏波;吴小波;林昶;钟秀荣;孙丽清4.熊果酸对顺铂所致小鼠耳毒性的防护作用研究 [J], 孙美玲;沈天骄;邸阳;田原;王爱梅5.艾叶挥发油致小鼠急性肝毒性作用及其机制研究 [J], 刘红杰;李天昊;詹莎;陈亮;陈灵修;唐树杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用
腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用田丽娜;瞿全新;盛晓滨;徐福强【摘要】目的探讨腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用.方法采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流失细胞仪检测等方法,绘制SKOV3细胞生长曲线及倍增时间,检测SKOV3细胞感染重组病毒前后其顺铂的IC50值、细胞凋亡形态及细胞各周期的分布.结果 (1)顺铂浓度与SKOV3细胞抑制率呈线性正相关,相关系数r =0.9905 (P ＜0.05),顺铂IC50值为(7.76 ±0.37) μg/ml;腺病毒载体介导的RNA干扰ERCC1基因表达后,SKOV3细胞的生长受到一定程度的抑制;(2)与对照组相比,梯度浓度的重组腺病毒感染后,SKOV3细胞对顺铂的敏感性分别增加了9.4％、16.4％、23.2％、33.5％,呈剂量依懒性;(3)梯度滴度重组腺病毒表达载体联合顺铂作用于SKOV3细胞株,细胞凋亡显著增高;(4)重组腺病毒表达载体感染并联合顺铂用药,G1期细胞比例减小,S期细胞比例增大,细胞凋亡率进一步增高.结论重组腺病毒表达载体可以通过诱导肿瘤细胞凋亡、调节肿瘤细胞周期分布等途径增加SKOV3细胞对顺铂的敏感性.【期刊名称】《武警医学》【年(卷),期】2018(029)004【总页数】6页(P361-366)【关键词】卵巢癌;ERCC1基因;RNA干扰;重组腺病毒表达载体【作者】田丽娜;瞿全新;盛晓滨;徐福强【作者单位】100000,北京市石景山医院妇产科;300052,天津医科大学总医院妇科;100000,北京市石景山医院妇产科;100000,北京市石景山医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R731.31卵巢癌在所有妇科肿瘤中发病率最高，危害较大。
顺铂是卵巢癌化疗的一线药物，在卵巢癌综合治疗中占有重要地位。
目前普遍认为，DNA损伤是癌症发病的重要机制，顺铂细胞毒作用主要是形成铂-DNA加合物，ERCCl基因是DNA损伤修复途径的关键基因，其表达升高与卵巢癌顺铂耐药的发生密切相关。
丹参在防治顺铂耳毒性中对豚鼠耳蜗血管纹的作用
丹参在防治顺铂耳毒性中对豚鼠耳蜗血管纹的作用路虹;李凤玲;徐鸥;杨逸;刘砚星【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2004(025)004【摘要】目的探讨丹参在防治顺铂耳毒性中对豚鼠血管纹的作用.方法将18只豚鼠随机分成3组,对照组连续5 d腹腔注射生理盐水2ml/(kg·d),丹参组连续7 d肌注丹参8 g/(kg·d),第3 d时加腹腔注射顺铂2ml/(kg·d),观察豚鼠的一般状况和耳廓反应.应用电反应测听仪测试听觉阈值,应用激光多普勒探测耳蜗血流的变化,并铺片观察血管纹的改变,统计学处理.结果丹参组豚鼠实验后一般情况较顺铂组明显减轻,除3只豚鼠耳廓反应迟缓外,余反应灵敏,听觉阈值为(32.5±7.5)dB,耳蜗底转血流测试为155.8 mV,与对照组相比均无显著性改变(P＜0.01).耳蜗铺片显示红细胞聚集及血管扩张程度较轻,偶尔可见到细胞碎片及溶解,未见血池现象.结论丹参通过改善血管纹功能,对顺铂内耳毒性可起到一定的防治作用.【总页数】3页(P206-208)【作者】路虹;李凤玲;徐鸥;杨逸;刘砚星【作者单位】河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000【正文语种】中文【中图分类】R764.35【相关文献】1.小鼠耳蜗血管纹Na-K-2Cl联合转运子1在顺铂耳毒性发生时的改变 [J], 吴振恭;褚汉启;黄孝文;崔永华2.连翘酯苷对豚鼠顺铂耳毒性损伤的防护作用及机制探讨 [J], 赵安未;侯学东;富公弼3.顺铂致豚鼠耳毒性作用中细胞凋亡及caspase-3表达的研究 [J], 张量;孙大宇;杨志航;江敏4.顺铂对耳蜗血管纹毒性作用的研究 [J], 李轶;刘会占;何志洲5.川芎嗪抗链霉素耳毒性作用及其对豚鼠耳蜗外毛细胞钾通道的影响(英文) [J], 汤浩;崔桂英;石丽娟;高青华;曹宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血红素加氧酶-1在硫化氢对抗顺铂诱导的听细胞毒性损伤中的作用
国误诊学杂志 ，２ ０ ，５（ ７） ３ ４ ３ ７ ． ０５ １ ：３ ７ — ３ ５
诱导 的听细胞毒性损伤 中的作用
曹磊 张世平 胡亿 文
【 摘要 】 目的 探讨 血红素加氧酶 一 ＨＯ １ １（ 一 ）在硫化氢 （ Ｓ）对抗顺铂 （ ｉ ｌ ｉ 诱 Ｈ２ Ｃｓ ａ ｎ） ｐｔ 导的听细胞损伤 中的作用 。方法 应 用顺 铂处理听细胞 ， 建立化疗药 物耳毒性的体外模型 。硫 化氢的供体硫氢化钠 （ ａ Ｓ） Ｈ 一 抑制剂锌 原卟啉Ⅸ （ ｎ ＰＩ 先于顺铂加入培养基 中 ， ＮＨ 及 Ｏ １ ＺＰ Ｘ） 作为预处理 。 检测细胞存活率 、 内丙二醛 （ Ａ） 胞 ＭＤ 的含量 、 一 的表达 。 ＨＯ １ 结果 顺铂在 １ ～ ０ ０ ８ ￣ ｏ／ ｔ ｌ ｍ Ｌ浓度范围 内处理 听细胞 ２ 可浓度依赖 性地降低细胞存活率 。４ ｔｏ／ ４ｈ ０￣ ｌ ｍ Ｌ顺铂处理 ２ ４ｈ 可增加听细胞 内 ＭＤ Ａ的含量 。Ｎ Ｈ 处理可上调 Ｈ 一 的表达 ， 制顺铂引起 的胞 内 Ｍ 含 量 ａＳ Ｏ１ 抑 ＤＡ
（８） ８ — ８ ． ：６ ６ ６ ９
１４ ． ３ ４
［ 沙立 民 ， ９ 】 胡秀娟． 癌症患者生存质量与社 会支持 因素 的调查分析【 ． Ｊ齐齐哈尔 医学 院学报 ，０ ３ ２ （ Ｊ ２ ０ ，４ １
６． ４
『 张从军 ， 勇 ， ５ １ 钱 朱学庆 ， Ｅ Ｒ ＣＱ Ｑ量表评估 等．Ｏ Ｔ Ｌ
（ ａ Ｓ ａ ２ ｄ ｎ ｒ ｗ ｓ ｄ ｅ ｉｔ ｍ ｄ ｍ｛ １ ｅ ｒ ｃ ｐａ ｎ ｒａ ｎ． ｏ ｎ ｉ ｔｈ ｌ ｏ Ｈ 一 ， Ｎ Ｈ 。 Ｈ Ｓ ｏ ｏ ） ａ ａ ｄ ｄ ｎ ｅ ｉ ｆ ｅ ｉ ｌ ｉ ｔ ｔ ｔ ｉ ｂ ｔｅ ｏ ｆ Ｏ １ ｏ ｕ ｒ ｈｂ ｏ ｓ ｔ ｅ ｍｅ Ｔ ｈ ｉ ｒ ｅ
顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspase_3表达的影响_孙伟霞
第30卷第5期2009年10月西安交通大学学报(医学版)Jour nal of Xi an Jiaotong University (Medical Scie nces )Vol .30No .5Oct .2009顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspase -3表达的影响孙伟霞1,王爱梅1,包翠芬2,惠丽杰1,常志杰1(1.辽宁医学院生理学教研室;2.辽宁医学院科学实验中心,辽宁锦州 121001)摘要:目的 建立小鼠顺铂耳毒性模型,研究不同剂量顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspa se -3表达的影响。
方法 69只昆明小鼠随机分成对照组、顺铂2.5mg /(kg ·d )组、顺铂3.5mg /(kg ·d )组和顺铂4.5mg /(kg ·d )组,腹腔连续注射5d 。
通过听脑干反应(audito ry brainstem respo nse ,A BR )测试观察用药前后小鼠听力的变化;应用免疫组织化学Envision 法检测半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase -3)在耳蜗中的表达。
结果 不同剂量顺铂组小鼠体重和听力明显下降,与对照组比较均有显著性差异(P <0.05,P <0.01);并且随着顺铂给药剂量的增加,小鼠耳蜗中caspase -3表达亦明显增强。
结论 应用顺铂可建立小鼠耳毒性模型;caspase -3参与了顺铂致小鼠耳蜗细胞损伤的过程,提示内耳细胞凋亡可能是顺铂的耳毒性机制之一。
关键词:顺铂;耳蜗;caspase -3;免疫组织化学中图分类号:R764.43 文献标志码:A 文章编号:1671-8259(2009)05-0616-04Effect of cisplatin on ototoxicity and expression ofcaspase -3in mouse cochleaSUN Wei -xia 1,WANG Ai -mei 1,BAO Cui -fen 2,H UI Li -jie 1,CH ANG Zhi -jie1(1.Department of Physiology ;2.Scientific Labo rato rial Cente r ,Liaoning M edical Co lleg e ,Jinzhou 121001,China )ABSTRAC T :Objective To establi sh a m ice m odel of cispla tin -induce d ototoxicity and to investigate the ef fectof cisplatin on the expression of caspase -3in mouse cochle a .Methods Totally 69Kunm ing mice were r andomly divide d into contr ol gr oup ,cisplatin 2.5mg /(kg ·d )group ,c i splatin 3.5mg /(kg ·d )gr oup and cisplatin 4.5mg /(kg ·d )group .Mice wer e injected intr aper itoneally f or 5days .Auditor y br ainstem r esponse (ABR )was m easure d to obser ve the change of he aring .Envi sion me thod of immunohistochemistr y was applie d to de tect the expr ession of caspase -3in cochle a .Results The we igh t and hear ing of mice in dif fer ent dose cisplatin groups were decline dsignif icantly as com pa red with those in contr ol gr oup (P <0.05,P <0.01),and the expression of caspase -3was gr eater r emar kably with m or e cisplatin injected .Conclusion A mouse model of cisplatin -induced ototoxicity could be establi shed .C aspase -3is involved in cisplatin -induced cochlear injur y .I t suggests that apoptosis m ay be one of the mechanisms of cispla tin ototoxicity .KEY WORDS :cisplatin ;cochle a ;caspase -3;immunohistochem istr y 收稿日期:2008-11-05 修回日期:2009-01-06通讯作者:王爱梅,教授,硕士研究生导师.E -mail :aim eiw ang @yah oo .com .cn作者简介:孙伟霞(1981-),女(汉族),在读硕士研究生.研究方向:听觉生理与病理.E -m ail :soffeesw x @ 顺铂(cisplatin ,CDDP )作为一种抗癌药,被广泛用于治疗各种恶性肿瘤。
细胞焦亡在胃癌中的生物学作用研究进展
细胞焦亡在胃癌中的生物学作用研究进展细胞焦亡是由Gasdermin（GSDM）家族蛋白诱导的程序性细胞死亡，表现为细胞质膜形成膜孔，细胞膜破裂，内容物释放。
在形态学特征上，发生焦亡的细胞和凋亡一样可出现DNA 损伤、核固缩，但细胞核较凋亡保持完整，DNA 损伤程度较凋亡低，TUNEL 染色呈阳性。
其次，细胞焦亡过程中会形成质膜孔隙，导致细胞肿胀和渗透溶解，大量炎症因子释放。
随着研究的深入，细胞焦亡在癌症中的生物学作用日益凸显。
本文基于细胞焦亡的分子机制及胃癌与细胞焦亡的相关研究探讨该生物学过程在胃癌中的作用，为胃癌的治疗提供新的思路。
一、细胞焦亡定义及机制细胞焦亡的定义从发现至今经过了多次变化。
细胞死亡命名委员会（NCCD）在2018 年将其修正为：一种依赖于Gasdermin 家族蛋白诱导细胞质膜形成膜孔的可调控的细胞死亡，通常但不总因炎症性Caspase 的活化而完成。
细胞焦亡涉及几个关键组分：炎症小体、Caspase 家族、Gasdermin 家族。
炎症小体是一种细胞内多蛋白信号复合物，通常围绕模式识别受体（pattern-recognition receptors，PRR）组装完成。
PRR 可识别胞内病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）、损伤信号（damage-associated molecular patterns，DAMPs）从而激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡。
PRR 家族通常包括Toll 样受体（Toll-like receptors，TLRs）、NOD 样受体（NOD-like receptors，NLRs）等，受体激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡，但若受体上不含Caspase 招募结构域（Caspase activation and recruitment domain，CARD），则另需通过（pyrin-like domain，PYD）结构域与含有CARD 结构域的凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain，ASC）结合，最终通过CARD 结构域激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡。
顺铂致豚鼠耳毒性作用中细胞凋亡及caspase-3表达的研究
制 ， 能参 与 了 Ｃ Ｄ 可 Ｄ Ｐ所 致 的耳 蜗细 胞凋 亡 过程 ， 致耳 毒性 的发生 。 导 【 关键 词】 顺铂 ； 毒 性 ； 耳 细胞 凋 亡 ；ａｐｓ－ ｃｓａｅ ３
［ 图分类 号］ ７ ４４ 中 Ｒ ６ ．３
【 献标 识码］Ａ 文
【 文章 编号］ １ ７ — ２ ０（ ０ ）２（ 一 ２ — ３ ６ ３ ７ １ ２ １ ０ ａ） ０ ４ ０ １
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【 ｂ ｔａ ｔ Ａ ｓ ｃ】Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｘ ｌｒ ｈ ｔｔ ｉ ｔ ｍ ｃ ａ ｉ ｏ ｉ ｌｔ ｙｉｖｓ ｇｔ ｇｔｅｅｐｅｓ ｎ ｏ ａ ｏ ｔｓ ｎ ｒ ｊｃｉ ： ｏｅ ｐｏｅｔｅｏｏ ｘｃ ｙ ｅ ｈ ｎｓ ｆｃｓ ａｉ ｂ ｎ ｅｔ ａｉ ｈ ｘ ｒｓｉ ｆ ｐ ｐｏｉ ａ ｄ ｖ ｏ ｉ ｍ ｐ ｎ ｉ ｎ ｏ ｓ
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NLRX1基因在调控顺铂耳毒性中的机制研究第一部分NLRX1调控顺铂耳毒性与ROS/JNK信号关系的研究Study on the relatiohship of NLRX1 and ROS/JNK Signaling in Regulating
Cisplatin-induced Ototoxity目的:顺铂是常用于癌症治疗的有效化疗药物,但由于其严重的耳毒性而限于使用,目前认为活性氧(ROS),线粒体损伤,细胞凋亡和炎症损伤参与顺铂耳毒性的发病机理,但确切机制尚不明了。
含核苷酸结合结构域和富亮氨酸重复序列的蛋白家族成员X1(NLRX1)位于细胞线粒体,可识别胞浆模式识别受体,与ROS产生、线粒体功能、细胞凋亡以及炎症反应密切相关。
本研究旨在探索NLRX1在顺铂耳毒性中是否存在调控作用及其调控机制,为阐明顺铂耳毒性机制和预防顺铂耳毒性的发生提供新思路和理论基础。
方法:(1)通过免疫荧光,实时荧光定量聚合酶联反应(qRT-PCR)及Western-blot方法检测NLRX1在HEI-OC1听细胞系内的定位及表达。
(2)TT法结合TUNEL、流式细胞术检测顺铂对HEI-OC1细胞活力的影响以及细胞凋亡变化。
(3)qRT-PCR及Western-blot方法检测顺铂刺激下NLRX1在
HEI-OC1细胞中的表达变化,免疫荧光检测顺铂刺激下ROS产生水平。
(4)通过细胞转染技术构建NLRX1过表达及NLRX1沉默细胞,通过小鼠内耳基底膜原代培养建立小鼠顺铂内耳损伤的体外模型。
(5)利用流式细胞术检测顺铂在NLRX1沉默及其过表达的细胞中诱导的细胞凋亡情况,Western-blot技术检测NLRX1沉默及其过表达细胞中顺铂诱导的凋亡相关因子 cleaved caspase3,bax 及bcl-2的表达变化,评估线粒体凋亡信号。
(6)利用流式细胞术检测NLRX1沉默及其过表达细胞中顺铂诱导的ROS产生水平,Western-blot技术检测NLRX1沉默及其过表达细胞中顺铂刺激对JNK磷酸
化水平的影响,检测JNK信号激活情况。
(7)阻滞ROS/JNK信号,Western-blot检测NLRX1过表达细胞中顺铂诱导的线粒体凋亡相关因子cleaved caspase3,bax
及bcl-2的表达变化。
(8)通过免疫荧光及Western-blot技术检测顺铂刺激下耳蜗基底膜中NLRX1、ROS/JNK及凋亡信号变化。
结果:(1)NLRX1在HEI-OC1细胞中的表达:NLRX1在HEI-OC1细胞中呈点状表达,并且与线粒体标记物Mitotraker共染,表明NLRX1
表达于HEI-OC1细胞线粒体。
(2)顺铂诱导HEI-OC1细胞凋亡及细胞损伤:随着顺铂作用浓度以及时间的
增加,HEI-OC1的细胞活力逐渐下降,并呈现出时间和浓度依赖性的特点,顺铂可
以通过诱导HEI-OC1细胞凋亡引起细胞死亡。
(3)顺铂促进HEI-OC1细胞NLRX1
表达和ROS产生:在顺铂刺激下,NLRX1表达升高,并在24小时达到峰值,ROS随着顺铂作用时间延长而升高并于24小时达到峰值。
(4)NLRX1增加顺铂诱导的HEI-OC1细胞凋亡:NLRX1通过影响cleaved caspase3,bax及bcl-2凋亡相关因子表达激活线粒体途径细胞凋亡。
(5)NLRX1
沉默下调顺铂引起的的ROS产生及JNK信号激活,NLRX1过表达上调顺铂引起的
的ROS产生及JNK信号激活。
(6)NLRX1促进顺铂诱导的细胞凋亡与ROS/JNK信号通路活化有关:抑制ROS 过量生成或者JNK信号激活,显著减弱了 NLRX1引起的线粒体途径细胞凋亡。
(7)顺铂刺激下小鼠耳蜗基底膜毛细胞明显损伤,NLRX1表达增加、ROS/JNK信号及线粒体途径细胞凋亡信号激活。
结论:首次在HEI-OC1听细胞揭示了 NLRX1通过激活ROS/JNK信号启动内源性细胞凋亡途径,增加顺铂对内耳听细胞的毒性作用,阐明了 NLRX1在顺铂耳毒
性发生机制中的调控作用。
第二部分NLRX1介导的自噬在顺铂致耳毒性中的作用机制研究Study on the mechanism underlying the action of NLRX1-mediated autophagy in cisplatin-induced Ototoxity目的:NLRX1与活性氧产生、线粒体功能、自噬反应密切相关。
本研究旨在探索NLRX1介导的自噬在顺铂耳毒性中的作用机制,为阐明顺铂耳毒性机制和预防顺铂耳毒性的发生提供新思路。
方法:(1)通过免疫荧光、Western-blot检测不同剂量顺铂处理组HEI-OC1细胞中NLRX1、LC3-Ⅱ的表达变化。
(2)利用MTT方法检测不同剂量顺铂处理的HEI-OC1细胞活力。
(3)利用透射电子显微镜技术(TEM)检测不同处理组HEI-OC1细胞超微结构变化,自噬小体形成状况。
(4)利用质粒转染法构建NLRX1过表达HEI-OC1细胞,western-blot检测NLRX1及LC3-Ⅱ表达,透射电镜观察NLRX1表达组及转染对照组细胞内自噬小体形成情况。
(5)免疫荧光及western-blot检测NLRX1沉默组(siRNA-nlrxl)及转染对照组(SC)HEI-OC1细胞在顺铂处理后NLRX1、LC3-Ⅱ的表达变化,MTT方法检测相应不同处理组的细胞活力。
(6)免疫荧光及western-blot检测NLRX1过表达组(nlrxl-KI)及转染对照组(vector-control)HEI-OC1细胞在顺铂处理后NLRX1、LC3-Ⅱ的表达变化,MTT方法检测相应不同处理组的细胞活力。
(7)透射电镜观察NLRX1过表达组及转染对照组细胞线粒体形态及数量变化,免疫荧光及流式细胞术检测不同转染组在顺铂刺激下线粒体ROS水平。
(8)抑制ROS产生或者自噬,检测顺铂处理后自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及凋亡相
关因子cleaved-caspase3变化趋势。
(9)利用免疫荧光及western-blot等技术在不同处理的体外培养的小鼠耳蜗基底膜检测NLRX1表达,ROS水平,自噬活性及cleaved caspase3表达情况。
结果(1)顺铂促进HEI-OC1细胞LC3-Ⅱ及NLRX1表达:顺铂促进LC3-Ⅱ表达并呈现浓度依赖性特点,与NLRX1表达成正相关关系,与细胞活力成负相关关系。
(2)NLRX1促进HEI-OC1细胞自噬小体聚集:免疫荧光及透射电镜结果显示NLRX1过表达促进HEI-OC1细胞中自噬小体聚集。
(3)NLRX1对顺铂诱导HEI-OC1细胞自噬和细胞毒性的作用:NLRX1沉默减弱顺铂诱导的自噬小体聚集及细胞毒性,NLRX1过表达促进顺铂诱导的自噬小体聚
集及加剧顺铂细胞毒性。
(4)NLRX1过度表达改变线粒体形态,并促进顺铂诱导的细胞内ROS的产生:NLRX1过表达导致线粒体肿胀,线粒体嵴减少及断裂,增加顺
铂诱导的ROS产生。
(5)抑制ROS可以明显减弱顺铂诱导的HEI-OC1细胞自噬和凋亡,减轻顺铂诱导的细胞毒性。
(6)顺铂促进体外培养耳蜗基底膜中NLRX1表达及ROS产生,抑制ROS减轻顺铂引起的听细胞损伤。
(7)抑制ROS明显减弱顺怕处理的基底膜中的细胞自噬和细胞凋广。
结论:
本研究表明NLRX1活性的增强促进HEI-OC1细胞自噬发生,导致线粒体异常并促进顺铂诱导的ROS生成,NLRX1介导的自噬可能通过促进顺铂引起自噬性死亡加
剧耳毒性,本研究为拓宽我们对药物引起的毒性机制的认识提供了新的理论基础。