大鼠血管内皮细胞培养

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改良的大鼠心肌微血管内皮细胞培养方法

１．２动物和试剂选用６～８周龄Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠（约６０～１００ｇ）
（上海斯莱克实验动物中心）。ＤＭＥＭ高糖培养基
（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，美国）；鼠尾胶（自制）；胰蛋白酶（１：２５０，Ａｍｅｒｅｓｃｏ，美国）；胎牛血清（ＦＢＳ，Ｇｉｂｃｏ，美国）；兔抗鼠ＣＤ３４单克隆抗体、兔抗鼠ＣＤ３１单克隆抗体（ＡｎｔｉｂｏｄｙＤｉａｇｎｏｓｔｉｃａＩｎｃ，美国）；兔抗人
比例：ＣＤ３４、ＣＤ３１为１：５００，ＶＩＩＩ因子为１：２００。
本文２Ｏ１２ —１２一Ｏ８收到，２０１３－０１ —１６修回，２Ｏ１３一Ｏ１ —１８接受
矗曩厦学杂志
２０１３年第２３卷第１期
圜篓一
篓
ＶＩＩＩ因子相关抗原多克隆抗体（ＤＡＫＯ，丹麦）；抗
兔及抗鼠ＡＢＣ试剂盒、ＤＡＢ显色试剂盒、ＦＩＴＣ标记羊抗兔ＩｇＧ（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ，中国）；其余化学试剂为国产分析纯商品。１．３实验用肝素的配制
ｍ饵讲学杂志，２０１３。２３（１）：３９－－－４０
⑥ ２０１３ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＩＣＲＯＣＩＲＣＵＬＡＴＩＯＮ

大鼠肺微血管内皮细胞使用说明

大鼠肺微血管内皮细胞编号名称规格北京派瑞金GK1001大鼠肺微血管内皮细胞5×105cells/瓶为能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的大鼠肺微血管内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。

研发的大鼠肺微血管内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

大鼠肺微血管内皮细胞简介：1、名称：大鼠肺微血管内皮细胞2、组织来源：大鼠肺血管组织3、规格：5×105cells/25cm2培养瓶4、细胞简介：大鼠肺微血管内皮细胞分离自正常大鼠肺血管组织，血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。

细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列。

肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。

本公司生产的大鼠肺微血管内皮细胞总量约为5×105cells/瓶，细胞纯度75%~85%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5、培养基信息：1）培养基类型：1640培养基(GIBCO，添加NaHCO31.5g/L，Sodium Pyruvate0.11g/L) 2）添加因子：优质胎牛血清10%，细胞生长因子等大鼠肺微血管内皮细胞使用方法：收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2.待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

大鼠血管内皮祖细胞培养及鉴定

ｂｎｒｏｉａｓＭｅｈｄＥＰｒｓｌｔｄｆｏｍａｅＳｒｇｅ—ＤａｅａｙＦｉｏｌｄｎｉｒｄｅｔｃｎｒｕａｉｎＤｉｃｏｅｍａｒｗｎｒｔ．ｔｏｓＣｓｗｅｅｉｏａｅｒｍｌｐａｕｗｌｙｒｔｂｃｌｅｓｔｇａｉｎｅｔｉｇｔ．ｓｓｙｆｏ
中西医结合心脑血管病杂志２１００年５月第８第５期卷
・５３６・
大鼠血管内皮祖细胞培养及鉴定Ｄ
朱
摘要：的目
江，煜敏，朝红，文欣刘孔道
探索骨髓来源的血管内皮祖细胞的分离培养方法，缺血性疾病治疗找到新的移植细胞来源。方法采集Ｓ雄为Ｄ
组经过ＣＤ３４免疫荧光、ＣＤ１３、３ＦＬＫ一１免疫组化鉴定呈阳性，能特异性吸ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ附ＦＴＣ—ＵＥ一内吞ＤＩ并ＩＡ和Ｉ一Ａｃ —ＬＤＬ。结论自体
骨髓细胞通过贴壁换液后可以分离培养出内皮祖细胞，贴壁细胞经过体外诱导后大量扩增，通过表面标记物鉴定可以确认为内取并皮祖细胞，非贴壁细胞不能大量增殖，将贴壁分离方法来筛选内皮祖细胞，方法简易，能满足细胞移植的需要，而故此并因而，移植在治疗脑缺血引起的内皮损伤应该有较好的临床应用前景。

新生大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养

＿ｌＪ］．Ｌａｎｃｅｔ，１９９５，３４６（８９６８）：１９３１９４．Ｅ５］ＢｒｉｌｉａＣＧ，ＭａｔｓｕｂａｒａＬＳ，ＷｅｂｅｒＫＴ，ｅｔ“ ｆ．Ａｎｔｉ —ａｌｄｏｓｔｅｒ０ｎｅ
５６３—５７５．
然发生，即使在使用最大剂量的ＡＣＥＩ和联合ＡＣＥＩ与
ＡＲＢＦቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 。。・
Ｌ６ＪｕｎＫ．ＴｏｍｏｍｉＭ，ＨｉｔｏｍｉＳ，ｅｔａ１．Ｃａｒｄｉａｃａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００５，１１１：２１５７ —２１６４．
Ｌ７ＪＳｔａｅｓｓｅｎＪ，ＩｉｊｎｅｎＰ，ＦａｇａｒｄＲ，ｅｔａ１．Ｒｉｓｅｉｎｐｌａｓｍａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅｄｕｒｉｎｇｌｏｎｇ—ｔｅｒｍａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ１１ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ
Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１９８１，９１（３）：４５７—４６５．
ｉｎａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ１Ｉｔｙｐｅ１Ａｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｋｎｏｃｋｏｕｔｍｉｃｅａｆｔｅｒｍｙｏｃａｒｄｉ —

体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立

ＴｈｅＣＭＥＣｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｐｌａｎｔｉｎｇｍｙｏｃａｒｄｉｕｍｔｉｓｓｕｅ．Ｉｔｓｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｇｅｎｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．
ｒａｔｉｏｎｏｆｌｏｗｏｘｙｇｅｎｄａｍａｇｅｍｏｄｅｌ（Ｉ），ｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｓｅｒｕｍｆｒｅｅｏｘｙｇｅｎｔｒａｉｎｉｎｇａｓｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｎ）．Ｉｎｖｅｒｔｅｄｐｈａｓｅｃｏｎｔｒａｓｔｍｉ — ｃｒｏｓｃｏｐｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒｈｙｐｏｘｉａ，ＭＴＴｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅｃｅｌｌｖｉｔａｌｉｔｙ，ＡｎｎｅｘｉｎＶ —ＦＩＴＣａｎｄＰＩｄｏｕｂｌｅｍａｒｋｉｎｇｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅ．ＲｅｓｕｌｔｓＣｕｌｔｕｒｅｄｒａｔＣＭＥＣｓｈａｓｔｈｅｔｙｐｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ

大鼠胸主动脉内皮细胞培养方法的改进

维普资讯
・
１４・６
ＡｔｃｄＭｅｃａＡａｄＮｅｉＭｏｇｌＪｎ２０Ｖ１２Ｎｏ３ｎｏｕ．０７ｏ．９．

大鼠胸主动脉内皮细胞培养方法的改进
瞿海龙，陈晓春
（内蒙古医学院第三附属医院心内科，内蒙古包头０４１）１００
ｒａｈｄｍｏｏａｅｏｆｅｃ．ｅＣｆｐｓａｅ２ｗｅｅｉｅｔｅｙｆｃｏｅａｅｎｇｎｅｃｅｎｌｙｒｃｎｌｎｅＴＥｓｏａｓｇｒｄｎｉｄｂａｔｒＷｒｌｔｄａｔｅｕｈｉｆｉ
摘
要：目的：建立一种简单易行的ｓＤ大鼠胸主动脉的内皮细胞培养方法。方法：离大鼠胸主动脉，分清除
血管外结缔组织，将其剪成厚约１５ｍ的血管环，１２．ｒａ以５— ０个血管环密度接种于２ｃ５ｍ培养瓶中，以含２％胎０
牛血清的ＤＥ液培养，ｈＭＭ６后去掉血管环。待细胞生长达单层融合时，０消化传代。对Ｐ代细胞应用抗Ⅷ 因子２
抗体进行鉴定。结果：０后，６ｈ细胞呈集落样散在分布于瓶底；９７— ｄ细胞汇合成单层，呈销路石状。经Ⅷ 因子相
关抗原免疫组化鉴定，所培养细胞为内皮细胞。结论：管环贴壁法培养ｓ血Ｄ大鼠胸主动脉内皮细胞简易可行。
关键词：鼠；大内皮细胞
中图分类号：３９Ｒ２
ｈｏｇｍｍｕｏｙｏｈｍｉａｔｏｔｒｕｈｉｎｃｔｃｅｃｍｅｄ．ＲｅｕｔＡｆｅ０ｈｕｓｏｕｔｒｎｌｈｓｌｓ：ｔｒ６ｏｒｆｃｌｕｇ，ｔｅｃｌｉｔｉｕｅｎｉｈｅｓｄｓｒｂｔｄｉａｃｕｔｒｏｅｂａｅｎ．Ａｔｒｓｖｎ —ｎｉｅｄａｓｔｅｃｌｅｃｅｎｌｙｒｃｎｌｅｃｓ “ ａｉｇｌｓｅｎｔｓｍｅｔｆｅｅｅｈｎｙ，ｅｓｒａｈｄｍｏｏａｅｏｆｕｎｅａｈｐｖｎ

大鼠血管内皮细胞培养研究

大鼠血管内皮细胞培养研究血管内皮细胞是血管中重要的细胞类型，其在维护血管生理特性以及参与血管病理反应中都具有重要的作用。

大鼠作为实验动物，其血管内皮细胞的研究也是非常重要的。

在这篇文章中，我们将重点介绍大鼠血管内皮细胞的培养技术及其在血管生物学研究中的应用。

一、大鼠血管内皮细胞培养技术1.1 资源准备大鼠动脉、静脉组织、FBS、DMEM/F12、胰酶、胰酶抗性味粉、细胞凝集素、槲皮素、PBS、二氧化碳培养箱、显微镜、离心机、相位对比显微镜、细胞均质器等。

1.2 组织消化将新鲜的大鼠动脉或静脉取出，去除外膜及脂肪组织，用PBS缓冲液清洗数次。

接着，用胰酶液消化组织，割碎后转移到消化液中，37℃孵育1-2小时，直到组织消化完全。

1.3 筛选基质消化完全的组织过筛，筛子孔径为80目。

去掉筛子上的淋渣后，产出的细胞可以用显微镜观察并鉴定是否为血管内皮细胞。

1.4 细胞培养将产出细胞悬浮在完全培养基（DMEM/F12，10% FBS，100ug/mL嘌呤鸟嘌呤，100ug/mL青霉素和50ug/mL链霉素）中，在培养室内孵育。

按细胞密度不同，可选用不同的培养方法，比如单细胞悬浮培养、半贴壁培养和全贴壁培养等。

1.5 纯化细胞如果需要纯化大鼠血管内皮细胞，还需要使用血管壁内形成的凝集素贴壁分离技术，配合药物槲皮素进行消除非内皮细胞。

二、大鼠血管内皮细胞在血管生物学研究中的应用2.1 血管内皮损伤与修复在血管损伤修复研究中，常常会使用拉环法、加热法、切割法、放置血栓等手段产生不同程度的血管内皮损伤模型，进而观察、探究血管内皮细胞的响应和修复机制。

例如研究大鼠颈动脉内皮细胞在内膜损伤后的DNA修复机制是一个非常热门的研究课题。

2.2 血管疾病如高血压、动脉硬化、心血管疾病等，都与血管内皮细胞的损伤和功能异常有关。

通过培养大鼠血管内皮细胞，可以模拟这些血管疾病模型，如在培养基中将NO剂加入，从而模拟高血压或将脂质压入细胞内，模拟动脉硬化等，可以帮助我们更好的探究血管疾病的病理生理机制。

大鼠股动脉血管原代内皮细胞的分离与培养

-596•安徽医科大学学报Ada Unwersitatis Medicinalis Anhut2621Apr；56(4)网络出版时间：2621-3-116：50网络出版地址：https：//k/ki.3W/kcms/dwPH34.1025.R.26216317.1521.html大鼠股动脉血管原代内皮细胞的分离与培养刘倩，韩陈陈,罗婷婷，张雨，李浩，马场，魏伟摘要目的体外分离、培养并鉴定大鼠股动脉血管原代内皮细胞,为相对较小血管来源的原代内皮细胞功能研究提供细胞模型。

方法无菌取大鼠股动脉血管，胶原酶消化大鼠股动脉血管内皮细胞使其分离,流式细胞术检测内皮细胞纯度;流式分选出CD30阳性细胞，并用激光共聚焦鉴定内皮细胞;以CCK-C法、高内涵细胞成像法检测内皮细胞增殖能力，以法、Mv/gW胶法检测其迁移和成管功能。

结果胶原酶消化分离所得股动脉血管原代内皮细胞在2627-29-17接收基金项目：国家自然科学基金（编号：51562123、51330051、51273444）作者单位:安徽医科大学临床药理研究所，合肥230234作者简介:刘倩，女,硕士研究生；魏伟，男，博士，教授，博士生导师，责任作者,E-mVi：wwei@ahmu.efu.ch；马场，女，博士，副教授，责任作者，E-mail:mayane_ahmu@ 14~16d细胞覆盖培养瓶面积的2/3以上，细胞呈现典型铺路石状。

流式检测其纯度为3&34%,分选后利用CD30进行荧光染色鉴定，细胞均为CD30阳性；PGE3可显著上调CD30阳性内皮细胞增殖、迁移、成管功能。

结论该研究采用简便的方法成功分离得到股动脉血管原代内皮细胞,为研究相对较小血管来源的原代内皮细胞功能提供体外细胞模型。

关键词大鼠;股动脉;原代血管内皮细胞;分离培养;鉴定中图分类号R394.26；R322.120文献标志码A文章编号1000-1492（2620）04-0566-05 doi：r6.19465/p cnki.isspl000-0492.2621.04.hl7根据血管的结构、功能和运输方向差异,分为动脉、静脉和毛细血管。

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大鼠血管内皮细胞培养
1、劲椎脱臼处死大鼠，75%酒精中浸泡1分钟，打开胸腔，分离主动脉，放在无菌的D-Hanks 液培养皿中。

2、用眼科剪和镊子出去血管外周的脂肪和纤维组织，用含抗生素的D-hanks冲洗血管内外凝血数次，再放入另一无菌培养皿中。

3、用眼科剪纵向剪开血管，用手术刀将其切成1立方毫米大小的动脉植块，然后种植到培养皿中（培养皿用1%明胶37℃下过夜，使用前2h移入二氧化碳培养箱中，用时可以先经含10%小牛血清的培养液冲洗）。

将动脉植块的内膜面与皿底接触，种植密度约1块/立方厘米。

4、培养皿中静置2h（干贴壁），然后加入0.5ml含25%胎牛血清的培养液，略微盖过动脉植块内膜面。

24h后，更换培养液，加入2-3ml培养液。

5、72h左右，当观察到内皮细胞充分长出，而成纤维细胞刚要长出的时候，将动脉植块除去，刮出成纤维细胞，换培养液1次，以后每两天换液1次，每次换1/2 —1/3的液量。

继续培养8-10d，细胞融合成单层即可传代。