常见呼吸道病毒高灵敏度快速检测方法的研究
呼吸道病毒抗原七项检测的临床应用
流感病毒感染四季均可发病，在北半球发病高峰期一般是从11月到次年4 月；通过飞沫、密切接触传播
易感性
人群普遍易感，潜伏期长短取决于侵入的病毒量和机体的免疫状态，一般 为1～4天
主要疾病
可引起急性上呼吸道感染、肺炎
人类副流感病毒（hPIV）
带有包膜的单链RNA病毒，分为4个血清型：Ⅰ型、Ⅱ型 、Ⅲ型和Ⅳ型。
➢明 确 病 原 体 针 对 性 治 疗 ： 呼 吸 道 合 胞 病 毒 — — 利 巴 韦 林 ； 流 感 病
毒——奥司他韦（达菲）；巨细胞病毒——更昔洛韦。
➢早 诊 断 早 治 疗 ： 大 部 分 呼 吸 道 病 毒 越 早 治 疗 效 果 越 好 ， 如 奥 司 他 韦 的
最佳使用时间是在出现流感症状48小时内，过了这个时间段疗效甚微。
➢监 控 疾 病 的 大 规 模 传 染 ： 呼 吸 道 病 毒 相 对 其 它 病 原 体 更 容 易 在 人 群 中
大规模传播，对于危害性大、传播速度快、范围广的病毒要进行监控，从
而防止疾病扩散。
不能仅凭白细胞计数、HCRP和血沉判断细 菌感染还是病毒感染
➢RSV（呼吸道合胞病毒）、FV（甲型流感病毒） 和ADV（腺病毒）等感 染患儿均在不合并细菌感染证据时出现外周血白细胞计数、HCRP和血沉 升高。
➢流 感 病 毒 感 染 病 情 严 重 程 度 与 外 周 白 细 胞 计 数 升 高 程 度 呈 正 相 关 。 对 儿 童FV 肺炎患者的研究也显示，部分患儿在无细菌感染时，可出现外周血白 细胞计数水平升高。这提示，外周血白细胞计数和HCRP、血沉升高，可 能并不是病毒感染肺炎患儿合并细菌感染的标志。对外周血白细胞计数和 HCRP水平升高患者，在考虑细菌感染的同时，应注意病毒感染的可能。
甲型流感的分子诊断技术与实验室检测方法
甲型流感的分子诊断技术与实验室检测方法甲型流感是一种由甲型流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其传播迅速且易感染大量人群。
为了准确诊断和及时干预，科学家们开发出了多种分子诊断技术和实验室检测方法。
本文将介绍几种常用的技术与方法，以提高对甲型流感的检测效率和诊断准确性。
一、聚合酶链式反应（PCR）技术PCR技术是一种灵敏度高、特异性强的分子诊断技术，已被广泛应用于甲型流感的检测中。
该技术通过放大甲型流感病毒基因组中特定的DNA片段，从而使其能够被检测到。
PCR技术可在短时间内，从患者的样本中检测到甲型流感病毒的存在，并确定其亚型。
此外，PCR 技术还能够对病毒的基因组进行序列分析，从而确定其突变情况和传播途径。
二、实时荧光定量PCR（qPCR）技术实时荧光定量PCR技术是PCR技术的一种改进版本，其主要优势在于可实现对病毒数量的精确测量和即时定量。
该技术结合了PCR和荧光探针技术，使得可以在PCR反应过程中实时监测目标序列的扩增情况。
实时荧光定量PCR技术能够快速检测出甲型流感病毒的数量，并对病毒载量进行准确测量，帮助医生判断病情的严重程度，指导治疗决策。
三、免疫荧光技术免疫荧光技术是一种通过特定的抗体和荧光探针对病毒进行检测的技术。
在甲型流感的实验室检测中，科学家们通常采用免疫荧光技术检测病毒的抗原。
该技术的原理是将含有甲型流感病毒的标本与特异性荧光标记的抗体结合，然后通过荧光显微镜观察是否有荧光信号出现。
免疫荧光技术能够准确、快速地检测出甲型流感病毒的存在，并且可以对其亚型进行鉴定。
四、核酸测序技术核酸测序技术是一种可以解析病毒基因组序列的方法，可以帮助科学家们了解甲型流感病毒的基因组结构和功能。
通过高通量测序技术，科学家们可以在较短的时间内获取大量的病毒基因组序列信息。
这些信息有助于了解甲型流感病毒的变异情况，筛选药物治疗靶点，并指导疫苗的设计与开发。
五、免疫学检测方法除了分子诊断技术，免疫学检测方法也发挥着重要作用。
呼吸道感染的病原体检测与筛查方法
呼吸道感染的病原体检测与筛查方法呼吸道感染是指引起鼻咽、喉、气管和肺部炎症的疾病。
病原体多样化，包括病毒、细菌和真菌等。
为了准确诊断和及时采取治疗措施，呼吸道感染的病原体检测与筛查方法至关重要。
本文将介绍几种常用的呼吸道感染的病原体检测与筛查方法。
一、病毒核酸检测法病毒是引起呼吸道感染的主要病原体之一。
核酸检测法可通过提取样本中的病毒核酸，并采用PCR技术进行扩增和分析，从而确定感染的病毒类型。
这种方法检测速度快、敏感性高，能够精确识别呼吸道病毒感染，例如流感病毒、冠状病毒等。
此外，核酸检测法还有助于判断病毒的基因型和耐药性，为治疗提供依据。
二、细菌培养法细菌感染是呼吸道感染的另一个主要原因。
细菌培养法是通过将样本分离培养于不同培养基中，培养出细菌菌落，并通过形态学和生理学特征进行鉴定。
这种方法适用于检测多种呼吸道细菌感染，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。
细菌培养法虽然耗时较长，但结果准确可靠，可用于指导临床合理使用抗生素。
三、快速免疫学检测法快速免疫学检测法是通过检测呼吸道感染病人体液中的特定抗体或抗原，来确定病原体的存在。
这种方法操作简单、迅速，结果可在数分钟内得出。
对于流行病学调查和大规模筛查非常有用。
例如，利用快速免疫学检测法可以检测出呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒等病原体。
四、荧光定量PCR法荧光定量PCR法是在常规PCR技术的基础上发展起来的一种高通量方法。
它采用特定的引物和探针结合荧光信号的定量分析，可同时检测多种呼吸道病原体。
这种方法的优势在于高通量、高效率和高灵敏度，提高了检测效率和准确性，对于大规模筛查和快速诊断非常有意义。
五、新型检测方法的研发随着科学技术的不断进步，新型的呼吸道感染病原体检测方法也在不断研发中。
例如，基因芯片技术可以同时检测数百种病原体，为快速诊断提供有力的支持。
此外，基于质谱技术的代谢组学分析和微生物组学研究也在广泛应用于呼吸道感染的病原体检测与筛查领域。
总结起来，呼吸道感染的病原体检测与筛查方法是非常重要的临床实践，有助于准确诊断、采取针对性的治疗措施，并对疫情的控制和预防起到关键作用。
呼吸道病毒检测方法
呼吸道病毒检测方法
呼吸道病毒是引起呼吸道感染的主要病原体，包括流感病毒、腺病毒、冠状病毒等。
及时准确地检测呼吸道病毒对于临床诊断和治疗具有重要意义。
本文将介绍几种常见的呼吸道病毒检测方法，以供临床工作者参考。
首先，常见的呼吸道病毒检测方法包括核酸检测、抗原检测和病毒分离培养。
核酸检测是目前最常用的方法，其原理是通过提取患者呼吸道样本中的病毒核酸，然后进行PCR扩增和测序分析，以确定病毒的存在和类型。
这种方法的优点是准确性高，灵敏度强，可以检测多种呼吸道病毒，但缺点是需要专业实验室设备和技术支持，且周期较长。
其次，抗原检测是一种快速诊断方法，其原理是通过检测患者呼吸道样本中的病毒抗原，来判断病毒的存在和类型。
这种方法的优点是操作简便，结果快速，适合于临床急诊诊断，但其缺点是灵敏度不如核酸检测高，可能存在假阴性结果。
此外，病毒分离培养是一种传统的检测方法，其原理是将患者呼吸道样本接种到细胞培养物中，观察是否能够分离出病毒。
这种方法的优点是可以获得活病毒，有助于病毒学研究，但其缺点是耗时长，操作复杂，且存在污染和安全隐患。
除了以上几种方法外，近年来还出现了一些新的呼吸道病毒检测技术，如基因芯片技术、质谱技术等。
这些新技术在提高检测效率和灵敏度的同时，也带来了更高的成本和技术门槛，需要在临床实践中不断完善和推广。
总的来说，针对呼吸道病毒的检测方法有多种选择，临床工作者应根据实际情况选择合适的检测方法，并结合临床症状和流行病学史进行综合判断。
未来随着科技的不断进步，相信会有更多更好的呼吸道病毒检测方法出现，为临床诊断和治疗提供更多的选择和支持。
《基于CRISPR-Cas系统建立牛、羊支原体性肺炎主要亚种的快速检测方法》范文
《基于CRISPR-Cas系统建立牛、羊支原体性肺炎主要亚种的快速检测方法》篇一基于CRISPR-Cas系统建立牛、羊支原体性肺炎主要亚种的快速检测方法一、引言牛、羊支原体性肺炎（Mycoplasma pneumoniae，Mp）是一种常见于牛、羊等动物的呼吸道疾病，其感染和传播对畜牧业生产造成严重影响。
由于该病原体的遗传多样性高，传统的检测方法往往存在耗时长、操作复杂等问题。
近年来，随着基因编辑技术的发展，CRISPR/Cas系统作为一种新型的基因编辑工具，在生物医学领域得到了广泛应用。
本文旨在探讨基于CRISPR/Cas系统建立牛、羊支原体性肺炎主要亚种的快速检测方法。
二、材料与方法2.1 材料本实验所使用的牛、羊支原体性肺炎样本均来自当地养殖场。
同时，我们还需准备PCR引物、CRISPR/Cas系统相关试剂、培养基等实验材料。
2.2 方法（1）基因组提取：从牛、羊支原体性肺炎样本中提取基因组DNA。
（2）设计CRISPR/Cas系统靶点：根据牛、羊支原体性肺炎主要亚种的基因序列，设计CRISPR/Cas系统的靶点。
（3）构建CRISPR/Cas检测系统：将设计的靶点与CRISPR/Cas系统相结合，构建出检测系统。
（4）PCR扩增：以提取的基因组DNA为模板，进行PCR 扩增。
（5）CRISPR/Cas检测：将PCR产物与CRISPR/Cas检测系统进行反应，根据反应结果判断是否存在牛、羊支原体性肺炎感染。
三、实验结果3.1 PCR扩增结果通过PCR扩增，我们成功获得了牛、羊支原体性肺炎主要亚种的基因片段。
从扩增结果可以看出，各亚种基因片段的扩增效果良好，无明显的非特异性扩增。
3.2 CRISPR/Cas检测结果将PCR产物与CRISPR/Cas检测系统进行反应，我们得到了清晰的检测结果。
在阳性样本中，CRISPR/Cas系统能够快速、准确地识别出牛、羊支原体性肺炎的感染情况。
而在阴性样本中，系统则无任何反应。
呼吸道病原体核酸检测研究主要内容
呼吸道病原体核酸检测研究主要内容呼吸道病原体核酸检测是研究呼吸道病原体感染的一项关键技术。
它能够快速准确地诊断呼吸道疾病，并指导医疗人员制定有效的治疗方案。
本文将介绍呼吸道病原体核酸检测的主要内容。
1. 检测对象呼吸道病原体核酸检测主要针对呼吸道病原体感染引起的疾病，如流感、肺炎、支气管炎等。
常见的病原体包括病毒、细菌和真菌等。
2. 样本采集样本采集是呼吸道病原体核酸检测的第一步。
常见的样本有鼻咽拭子、咽拭子、口腔拭子和痰液等。
采样时，需注意要用专业的采样工具，避免污染和误差。
3. 核酸提取将样本中的核酸提取出来，是呼吸道病原体核酸检测的关键步骤。
核酸提取的方法有多种，包括磁珠法、酚-氯仿法、离心柱法等。
提取出的核酸要保证纯度和完整性，以确保后续检测的准确性。
4. PCR扩增PCR扩增是呼吸道病原体核酸检测的核心技术。
它能够通过特异性引物，将样本中的目标核酸扩增出来。
PCR扩增方法有多种，比如实时荧光PCR、热循环扩增等。
其中，实时荧光PCR技术具有快速、高灵敏度、高特异性等优点，已成为目前最常用的PCR扩增技术。
5. 检测结果检测结果通过实时荧光PCR仪器读取，通常会给出荧光曲线图和检测结果的判读。
荧光曲线图可以反映出样本中是否存在目标核酸，并可以判定其定量程度。
判读结果则是按照所检病原体的标准，给出阳性或阴性的结果。
6. 临床应用呼吸道病原体核酸检测的临床应用主要体现在对疾病的诊断、治疗和预防方面。
通过检测结果，可以明确确定病原体的种类和定量程度，指导医疗人员制定相应的治疗方案。
对于疫情监测和预防控制，呼吸道病原体核酸检测也具有重要意义。
总之，呼吸道病原体核酸检测是一项十分重要的技术，它可以帮助我们快速准确地检测呼吸道病原体感染，提高疾病的诊断和治疗水平。
随着技术的不断进步和发展，呼吸道病原体核酸检测也将更加深入地应用于临床诊疗和公共卫生领域。
呼吸道合胞病毒感染的研究现状
呼吸道合胞病毒感染的研究现状呼吸道合胞病毒（RSV）是婴幼儿下呼吸道感染最常见的病原。
其感染后常发生毛细支气管炎和肺炎,且与婴幼儿哮喘发病有关。
近年研究发现，其发病机制包括病毒与宿主受累细胞损伤、炎症、体液和局部免疫反应及高反应性之间的相互作用。
免疫荧光检测和PCR技术快速、灵敏性和特异性较高。
利巴韦林、免疫球蛋白及干扰素常能达到早期病因治疗，尚在试制的呼吸道合胞病毒新型疫苗及基因治疗研究为该病的防治提供了良好的前景。
标签：呼吸道合胞病毒；婴幼儿；诊断；治疗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)属副黏病毒科肺炎属，1956年Morris从一只有感冒症状的实验动物黑猩猩的鼻咽分泌物中分离出第一株RSV。
1957年Chanock 先后从Baltimore市2例分别患肺炎和有喘息症状患儿的咽拭子中分离到。
因其在组织培养中能形成特殊的细胞融合病变而得名。
呼吸道合胞病毒是婴幼儿下呼吸道感染最常见的病原，特别是2～6个月小婴儿RSV感染后常发生严重毛细支气管炎和肺炎，且与婴幼儿哮喘关系密切。
通常在冬、春季节流行。
在世界不同地区每年因RSV感染而需住院治疗的患儿为1‰～5‰，住院病人病死率为1‰～3‰。
由此可见RSV感染是严重危害小儿生命健康的一种疾病。
近年来对该病的研究有了较大进展，现综述如下。
1 RVS感染的发病机制及临床特征RSV有2个主要血清型和9个亚型，常常通过托儿机构、家庭和其他公共场所造成传播，亦是引起住院小儿医院内感染的常见原因。
研究证明，病毒传播的方式主要是通过飞沫传播，污染的手指直接将病毒接种到鼻黏膜和眼黏膜也是引起感染的重要传播途径。
RSV下呼吸道感染的发病机制包括病毒与宿主受累细胞损伤、炎症、体液和局部免疫反应及高反应性之间的相互作用。
感染的主要后果是导致呼吸道上皮细胞受损，免疫反应和营养状况在疾病恢复过程中起着至关重要的作用。
体液免疫和呼吸系统的局部免疫反应，包括产生RSV特异性免疫球蛋白，主要系IgG、呼吸道局部分泌的IgA、IgE。
呼吸道病毒检测方法
呼吸道病毒检测方法呼吸道病毒是引起呼吸道感染的主要病原体之一，包括流感病毒、腺病毒、冠状病毒等。
及时准确地检测呼吸道病毒对于诊断和治疗呼吸道感染至关重要。
下面将介绍几种常见的呼吸道病毒检测方法。
1. 核酸扩增技术（PCR）。
PCR技术是目前最常用的呼吸道病毒检测方法之一。
该方法通过扩增病毒核酸，然后利用特异性探针或引物进行检测，能够快速、准确地确定病毒的存在。
PCR技术对呼吸道病毒的检测灵敏度高，特异性强，是临床上常用的检测方法之一。
2. 免疫层析法。
免疫层析法是一种简便、快速的呼吸道病毒检测方法。
该方法通过利用抗体与病毒抗原结合的原理，将样本中的病毒抗原检测出来。
免疫层析法操作简单，结果快速，适用于临床急诊室、门诊等场所的病毒检测。
3. 培养法。
培养法是一种传统的呼吸道病毒检测方法，通过将样本接种到细胞培养物中，观察病毒在细胞中的生长情况来进行检测。
虽然培养法能够检测到一些无法通过其他方法检测到的病毒，但是该方法耗时长，且操作复杂，目前在临床上的应用较少。
4. 全基因组测序。
全基因组测序是一种高通量的呼吸道病毒检测方法，通过对样本中的病毒进行全面测序，可以获得病毒的全基因组信息，包括基因型、亚型等。
全基因组测序技术对于呼吸道病毒的分型、溯源等研究具有重要意义，但是在临床上的应用较为有限。
综上所述，针对不同的临床需求和实验室条件，可以选择合适的呼吸道病毒检测方法。
在进行呼吸道病毒检测时，需要根据临床病情、样本类型等因素综合考虑，选择合适的检测方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。
希望本文所介绍的呼吸道病毒检测方法能够对临床医生和实验室人员有所帮助。
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常见呼吸道病毒高灵敏度快速检测方法的研究
发表时间：2015-12-04T16:27:26.723Z 来源：《航空军医》2015年14期作者：彭丹霞1 张星星2（通讯作者）
[导读] 1.湖南省人民医院 2.中南大学湘雅附二医院儿科医学中心常见的呼吸道病毒有人类偏肺病毒、流感病毒、腺病毒等，这些病毒具有传播速度快、发病急等特性。
1.湖南省人民医院湖南长沙 410005；
2.中南大学湘雅附二医院儿科医学中心
【摘要】经临床证实，当前有90%以上的呼吸道疾病是由细菌以外的病原体引起的，以呼吸道疾病最为常见。
常见的呼吸道病毒有人类偏肺病毒、流感病毒、腺病毒、副流感病毒、呼吸道合胞体病毒等。
呼吸道疾病是临床中最为常见的疾病，通常具有传播速度快、发病急、潜伏期短的特性，并且当前出现了越来越多的致命性呼吸道病毒，如非典型性肺炎、禽流感等。
一旦发生这类病毒，通常会引起大范围的危害，对于呼吸道病毒的检测成为医院工作中的重要事项。
由于呼吸道病毒引起的临床感染症状具有相似性，所以仅靠常规检测方法很难快速的确定病原，需要一种高度灵敏的快速检测方法。
本文针对于此，研究常见呼吸道病毒的高度灵敏快速检验的方法，探究快速确定病原的途径。
全文介绍了常见呼吸道病毒、以及检验病毒的方法。
【关键词】常见呼吸道病毒；高度灵敏快速检验方法；临场研究
常见的呼吸道病毒有人类偏肺病毒、流感病毒、腺病毒等，这些病毒具有传播速度快、发病急等特性。
这些病毒可以通过呼吸道引发感染，爆发疫情。
高度灵敏的快速检验方法可以有效的为患者提供诊断依据，使医师可以及时的对症下药，并且对卫生监督和疫情的防控具有重要的意义。
通常呼吸道疾病通过空气传播，很难有效的预防，单体就能辐射很大的区域。
所以研究出有效的检验方法至关重要。
1 常见呼吸道病毒
呼吸道病毒专指以呼吸道为入侵门户，在呼吸道粘膜上皮细胞组织增生，引起呼吸道局部感染病变或呼吸道以外组织气管病变的病毒。
主要通过呼吸道传播，能反复感染，可在人群中暴发流行。
当前主要的呼吸道病毒有流感病毒、副流感病毒、呼吸道合并胞体病毒、腺病毒四种。
流感病毒就是流行性感冒病毒，属于正粘病毒科，造成人体的上下呼吸道感染。
通过空气传播，能引起大范围的疫情。
具有鼻塞、流涕、咽痛等临床症状，并造成肺炎、支气管炎等下呼吸道疾病。
根据抗原性，流感病毒分为甲型、乙型和丙型三种。
甲型病毒易发生异变，造成大规模的流行，异型会引起肌炎和胃肠反应，较小规模，致死率较低，丙型会造成人类的轻微上呼吸道感染，很少造成流行。
流感病毒的发病率较高，但致死率很低，但容易造成疫情的流行；副流感病毒属于副黏病毒科，能够引起下呼吸道感染，在儿童中较为常见，病死率略高。
可以形成反复感染的肺炎、支气管炎、下呼吸道疾病等。
副流感病毒主要分为四种类型，为Ⅰ型到Ⅳ型病毒。
前两种主要会引起哮喘、喉炎、气管严和支气管炎。
Ⅲ型的流感病毒会造成肺炎和细支气管感染，也能引起哮喘。
Ⅳ型病毒会造成上呼吸道感染，检测率很低，一般会引起上呼吸道感染，不会引起肺炎。
副流感病毒任何季节都可暴发流行，但以局部区域性为主，在儿科病房、小学、幼儿园等场所多见，爆发通常以Ⅲ型为主；呼吸道合胞体病毒属于副黏病毒科，也是常见的病原体，可通亲密接触、空气飞沫传播。
这一病毒可造成任年龄段的人群感染，引起发热、咽炎、支气管炎、中耳炎等呼吸道病症。
引起的流行性喘憋性肺炎是造成婴儿死亡的主要疾病之一。
根据抗原性，可分为A、B两种类型；腺病毒属于腺病毒科，会造成呼吸道、肠粘膜上皮细胞的溶解性感染，淋巴样和腺样细胞的潜伏感染和啮齿动物细胞的转化感染。
能够引起3岁以下儿童的急性咽炎热和较大儿童的咽结膜炎热、病毒性肺炎、急性呼吸道感染等疾病。
还会造成非呼吸道组织的病变，如阑尾炎、急性胃肠炎等。
当前检测到的腺病毒有52种，分A、B、C、D、E、F六个亚群。
除以上几种病毒外，还有偏肺病毒、人冠状病毒、风疹病毒、麻疹病毒、流行腮腺炎病毒等。
呼吸道病毒虽然种类繁多，但引起的症状大同小异，引发的社会危害也不一样。
所以，对于呼吸道病毒有效的甄别能够帮助我们有效的对疫情进行防治。
2 常见呼吸道病毒的高灵敏快速检测方法
当前，具有多种的呼吸道病毒检验技术，如聚合酶链反应技术、DNA探针技术、基因芯片技术以及其他分子生物学检验技术，但是均不能满足目前的需求，所以需要我们探索新型的常见呼吸道病毒检验技术。
2.1试验材料
准备的试验材料有病毒毒株，包括阳性毒株和阴性毒株；细胞培养液；主要的仪器有生物芯片便携式可视化扫描仪、超纯水仪、数显电热水浴箱、琼脂糖电泳仪、芯片杂交盒、精密微量移液器、自动化核酸提取系统等；试剂方面，有病毒基因组提取试剂盒、扩增试剂盒等，化学试剂包括氯化钠、磷酸氢化钠、甲酰胺等。
针对常见病毒，提取六种特异性基因作为检测标靶。
利用信息技术将Gene Bank数据库获取的呼吸道病毒毒株的核苷酸序列进行同源性分析，得到碱基对齐图和聚类分析结果。
使用Primer5.0软件结合碱基对齐图查找相关特异性引物。
根据引物设计原则、PCR扩增物片段对杂交动力学造成的影响，确定扩增物的长度在100~500bp之间。
根据八种呼吸道病毒靶基因对比的结果，呼吸道合胞病毒、腺病毒、偏肺病毒在不同书的病毒之间具有较高的特异性，同属病毒之间的核酸序列进化相似。
所以，探针的设计应可将待测毒株和其它近原属分开，探针的序列能代表本属内不同的毒株。
探针的特性是帮助基因芯片确定假阳性和假阴性的关键，在设计好探针后利用在线Blast对探针进行特异性分析，确定探针和其它病毒和细菌无相似性后，截取最优长度作为备选探针。
然后合成引物和探针，运用标准亚林酰胺化学方法在自动合成仪上进行氨解、过滤、干燥等程序。
可用可视化显色所用的下游引物5’端进行生物素标记。
探针与氨基基团之间可用聚乙二醇磷酰化试连接。
最后进行引物的纯化。
用200μl纯水，溶解粗样，加入200mg的尿素，待充分溶解后，放入16%的聚丙烯酰胺变性凝胶中，用600V的电压电泳2h。
然后将凝胶取出，放在有荧光背景下的硅胶板上，在紫外灯下取出有紫外吸收的条带。
放到试管中捣碎，并用1M的NaCL溶液，用50°C的纯水水浴3h。
水浴后用22ml纯水、1.5ml的20%乙腈溶液过滤，用1.5ml的离心管收集，并用冷冻干燥机抽干。
将制造的引物用毛细管电泳检测，以紫外定量，冷冻保存。
引物制做好后，制造基因芯片，用寡核苷酸探针以去离子水溶液稀释至100μM。
取点样液和制好的寡核苷酸探针各10μL，混合，待用。
进行病毒核酸的提取，以痰液标本13000rpm离心10min，灭菌处理。
用4%的NaOH液化30min，漩涡震荡10min，4°C液化，再行13000rpm离心10min，弃上清，放至200μl的生理盐水保存。
为了提高病毒核酸的提取质量，可用离心柱提取法、磁珠提取法、自动化提取法对比提取。
为了保证试验的质量，可设人核糖核酸酶P基因编码中的Rnase gene作为靶基因，用4条引物和2条内标做对照探针。
为了建立高灵敏度的快速检验方法，可以建立多重的RT-PCR扩增，将八种常见的呼吸道病毒中的6对特异性引物和2对内标引物分至2管，形成多重RT-PCR的组合。
然后行芯片
的杂交和检测。
将芯片放置杂交盒中，在特定环境下杂交1h。
量子电标记银染增强可视化显色，得到对比结果如下：图1 常见呼吸道病毒部分基因序列片段对比
3 小结
通过本次实验得到常见呼吸道病毒的基因序列对比，通过特异性检验可有效的将检测结果准确率提高到96.32%。
以往工作的难点在于快速的辨别各种常见的呼吸道病毒，针对性的采取治理措施，本文介绍的方法实现了快速的辨别，但在准确率和操作上存在一些不足。
希望本文的探索能为卫生监督和防疫工作起到促进作用。
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