谷胱甘肽的简便测定法
谷胱甘肽的制备及含量测定
• 3.谷胱甘肽的主要来源 • 谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重 要的作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很 高，达100～1000mg/100g,在人体血液中含26～ 34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～ 15mg/100g,在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高(12～ 33mg/100g)，而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较 低(0.06～0.7mg/100g)。
谷胱甘肽的制备及含量测定
一、谷胱甘肽的背景知识
• 1.谷胱甘肽是一种什么 样的物质 谷胱甘肽(glutathiose,rglutamyl cysteingl +glycine,GSH)是一种 含γ-酰胺键和巯基的三 肽，由谷氨酸、半胱 氨酸及甘氨酸组成。 谷胱甘肽：还原型谷胱 甘肽、阿拓莫兰、古 拉定
提取工艺
1、取5g干酵母，与15ml蒸馏水充分混合后倒入25ml沸腾的水中。 2、用5ml水洗涤烧杯一并倒入，使混合液保持在95-100℃，沸腾5min。 放置冰水中速冷。 3、在2000rpm速度下离心10min，取上清液，即谷胱甘肽抽提液。 4、谷胱甘肽抽提液，调pH至3.0。 5、上处理好的732阳离子交换吸附柱吸附。 6、用0.25mol/L的NaOH溶液洗脱，洗脱流速10ml/min。收集洗脱液， 洗脱终点用亚硝基氰化钠检测。 7、中和洗脱液至pH6.5。
•
谷胱甘肽还可以保护血红蛋白不受过氧化氢、自由基 等氧化从而使它持续正常发挥运输氧的能力。还原型谷胱 甘肽既能直接与过氧化氢等氧化剂结合，生成水和氧化型 谷胱甘肽，也能够将高铁血红蛋白还原为血红蛋白。 • 谷胱甘肽保护酶分子中-SH基，有利于酶活性的发挥， 并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶 重新恢复活性。 • 谷胱甘肽还可以抑制乙醇侵害肝脏所产生的脂肪肝。 • 谷胱甘肽对于放射线、放射性药物所引起的白细胞减 少等症状，有强有力的保护作用。谷胱甘肽能与进入人体 的有毒化合物、重金属离子或致癌物质等相结合，并促进 其排出体外，起到中和解毒作用 。
谷胱甘肽的实验报告
一、实验背景谷胱甘肽（Glutathione，GSH）是一种非蛋白巯基化合物，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，广泛存在于生物体内。
近年来，研究表明谷胱甘肽具有多种生物学功能，如抗氧化、解毒、免疫调节等。
本实验旨在探究谷胱甘肽的抗氧化活性，为其在医药、食品等领域的应用提供理论依据。
二、实验材料与方法1. 实验材料（1）谷胱甘肽标准品（纯度≥98%）（2）维生素E标准品（纯度≥98%）（3）FeSO4·7H2O（4）EDTA-Na2（5）无水乙醇（6）蒸馏水（7）721分光光度计（8）电子天平2. 实验方法（1）标准曲线绘制①准确称取维生素E标准品10mg，置于100mL容量瓶中，加入无水乙醇溶解，定容至刻度，配制成100μg/mL维生素E标准溶液。
②分别取1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL维生素E标准溶液于10mL容量瓶中，加入0.1mol/L FeSO4·7H2O溶液1.0mL，EDTA-Na2溶液1.0mL，混匀。
室温下放置10min。
③以蒸馏水为空白，于510nm波长处测定吸光度。
④以维生素E浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（2）谷胱甘肽抗氧化活性测定①准确称取一定量的谷胱甘肽标准品，加入无水乙醇溶解，配制成一定浓度的谷胱甘肽溶液。
②取1.0mL谷胱甘肽溶液于10mL容量瓶中，按照维生素E标准曲线绘制方法进行实验。
③以蒸馏水为空白，于510nm波长处测定吸光度。
④根据标准曲线计算谷胱甘肽的抗氧化活性。
三、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以维生素E浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：y=0.066x+0.0015，R²=0.998。
2. 谷胱甘肽抗氧化活性测定取1.0mL谷胱甘肽溶液进行实验，测定吸光度为0.068。
根据标准曲线计算，谷胱甘肽的抗氧化活性为80μg/mL。
四、结论本实验结果表明，谷胱甘肽具有一定的抗氧化活性，其抗氧化活性为80μg/mL。
土壤谷胱甘肽测定
土壤谷胱甘肽测定
土壤谷胱甘肽测定是一种分析土壤中谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量的方法。
谷胱甘肽是一种重要的抗氧化剂，对于维持土壤中微生物代谢活性和土壤生态系统的稳定具有重要作用。
谷胱甘肽测定可以通过不同的方法进行，常用的方法包括光谱法、显色法和高效液相色谱法等。
光谱法是一种简便快捷的方法，通过分析土壤中谷胱甘肽的光吸收特性来测定其含量。
在特定波长下，谷胱甘肽分子会吸收一定量的光线，通过测量吸收光的强度可以间接测定谷胱甘肽的含量。
显色法是一种常用的定性定量方法，通过化学反应使谷胱甘肽与某些试剂形成可见色素，然后通过比色测定色素的强度来判断谷胱甘肽的含量。
高效液相色谱法是一种精确和灵敏度高的测定方法，通过将土壤中的谷胱甘肽提取出来，并使用高效液相色谱仪进行分离和定量分析。
这种方法可以准确测定谷胱甘肽的含量，并且可以同时测定土壤中其他相关成分的含量。
土壤谷胱甘肽测定可以帮助研究者了解土壤中谷胱甘肽的含量和变化情况，进而评估土壤的养分供应能力、抗氧化能力以及土壤生态系统的稳定性。
这对于土壤质量评估、环境保护和农业可持续发展具有重要意义。
一种简便廉价的谷胱甘肽测定法
一种简便廉价的谷胱甘肽测定法
蓝金贵;罗登柏;曹巍
【期刊名称】《化学与生物工程》
【年(卷),期】2004(21)4
【摘要】报道了一种快速、简便和廉价的谷胱甘肽(GSH)含量测定的新方法.利用GSH的还原性将磷钼杂多酸还原成磷钼杂多蓝,在710 nm最大吸收波长处测其吸光度,吸光度与GSH的浓度在3.3×10-7～1.3×10-4mol·L-1范围内呈线性关系,相关系数r=0.9982,方法检测限为1.6×10-7 mol·L-1,相对标准偏差RSD =
1.1 %(n=6),回收率为97.1 %～103.5% .该法应用于药品中GSH含量的直接测定,结果满意.
【总页数】2页(P55-56)
【作者】蓝金贵;罗登柏;曹巍
【作者单位】中南民族大学化学与生命科学学院,湖北,武汉,430074;中南民族大学化学与生命科学学院,湖北,武汉,430074;中南民族大学化学与生命科学学院,湖北,武汉,430074
【正文语种】中文
【中图分类】Q51;Q503
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氧化型谷胱甘肽测定方法
氧化型谷胱甘肽测定方法引言：氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione, GSSG）是一种重要的抗氧化物质，它在细胞内起到清除自由基和保护细胞免受氧化损伤的作用。
因此，准确测定氧化型谷胱甘肽的含量对于了解细胞氧化状态和维持细胞正常功能具有重要意义。
本文将介绍几种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
一、梅尔二硫代苯酚法梅尔二硫代苯酚法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用氧化型谷胱甘肽与2,2'-二硫代苯酚反应生成深黄色化合物，通过比色法测定其吸光度来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。
该方法简单、快速，且具有较高的灵敏度和准确性。
二、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用高效液相色谱仪对氧化型谷胱甘肽进行分离和测定。
首先将样品中的氧化型谷胱甘肽与还原剂还原生成还原型谷胱甘肽，然后通过高效液相色谱仪进行分析。
该方法具有分离效果好、灵敏度高、准确性高的优点，但操作复杂，需要专门的仪器设备。
三、酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法是一种基于酶标记技术的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用特异性抗体与氧化型谷胱甘肽结合，然后通过酶标记的二抗与抗体结合，最后通过底物的酶促反应生成产物，通过测定产物的光吸光度来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。
该方法具有高灵敏度、高特异性和较强的抗干扰能力，但需要较长的操作时间。
四、电化学法电化学法是一种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法。
该方法利用电极对氧化型谷胱甘肽进行氧化还原反应，并通过测定电流的变化来计算氧化型谷胱甘肽的浓度。
该方法具有快速、准确、灵敏度高的优点，但需要专门的电化学仪器设备和操作技术。
结论：氧化型谷胱甘肽测定方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。
选择合适的测定方法需要根据实际需求和条件来决定。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验条件和操作步骤，以确保测定结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的几种常用的氧化型谷胱甘肽测定方法对读者有所帮助。
谷胱甘肽(GSH)含量测定
谷胱甘肽（GSH）含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。
它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。
谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸（DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm 处具有最大光吸收。
因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。
三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号，按如下表格加入各试剂，反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度，制作标准曲线；2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g，加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取，并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml，8000rpm离心10min,取上清液；b、取上述上清液2ml显色，操作同标准曲线。
3.结果计算：GSH含量（ug/Gfw）= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注：Cx---2ml样品中GSH含量（ug），即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml)；Vs----显色时所取样的体积(ml)；FW---样品鲜重（g）。
五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时，视线要垂直于移液管且与液面凹面水平，不能斜视，以免量取试剂不准确。
2.在提取样品时，最好沉淀出去蛋白质，以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。
3.在研磨叶片时，为方便研磨，刚开始时加入少量的提取液。
食用菌中谷胱甘肽的测定
食用菌中谷胱甘肽的测定谷胱甘肽是一种重要的抗氧化物质，被广泛应用于食品工业中。
食用菌是一类含有高丰富谷胱甘肽的食材，因此测定食用菌中谷胱甘肽的含量具有重要的意义。
本文将介绍几种常用的测定食用菌中谷胱甘肽的方法。
一、硫巴比妥酸法测定谷胱甘肽含量硫巴比妥酸法是目前测定谷胱甘肽含量最常用的方法之一。
该方法的原理是谷胱甘肽与硫巴比妥酸在碱性条件下反应生成黄色产物，通过测定产物的吸光度可以间接测定谷胱甘肽的含量。
具体操作步骤如下：1. 将食用菌样品粉碎并称取适量，加入酸性溶液中，破坏细胞结构释放出谷胱甘肽。
2. 加入碱性溶液和硫巴比妥酸，使谷胱甘肽与硫巴比妥酸反应生成黄色产物。
3. 使用分光光度计测定产物的吸光度，利用标准曲线计算样品中谷胱甘肽的含量。
二、高效液相色谱法测定谷胱甘肽含量高效液相色谱法是一种常用的分离和定量化合物的方法。
该方法的原理是利用色谱柱对样品中的谷胱甘肽进行分离，通过检测谷胱甘肽的峰面积或峰高来定量谷胱甘肽的含量。
具体操作步骤如下：1. 将食用菌样品制备成适宜的提取液，经过离心等处理步骤，获得待测样品。
2. 使用高效液相色谱仪，将待测样品注入进样器，经过一定的流动相条件下，在色谱柱中进行分离。
3. 通过检测谷胱甘肽的峰面积或峰高，利用标准曲线计算样品中谷胱甘肽的含量。
三、氧化还原法测定谷胱甘肽含量氧化还原法是一种直接测定谷胱甘肽含量的方法。
该方法的原理是利用谷胱甘肽与还原剂在适宜的条件下发生氧化还原反应，通过测定反应前后还原剂的含量变化来确定谷胱甘肽的含量。
具体操作步骤如下：1. 将食用菌样品制备成适宜的提取液，通过离心等处理步骤，获得待测样品。
2. 将待测样品与还原剂在适宜的条件下反应，使谷胱甘肽发生氧化还原反应。
3. 通过测定反应前后还原剂的含量变化，计算谷胱甘肽的含量。
在测定食用菌中谷胱甘肽的含量时，需要注意样品的制备过程，确保提取到的谷胱甘肽是代表样品中真实含量的。
同时，选择合适的测定方法，准确、快速地测定谷胱甘肽含量，有助于评估食用菌的品质和营养价值。
谷胱甘肽(GSH)含量测定
谷胱甘肽（GSH）含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。
它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。
谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸（DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm 处具有最大光吸收。
因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。
三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号，按如下表格加入各试剂，反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度，制作标准曲线；2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g，加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取，并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml，8000rpm离心10min,取上清液；b、取上述上清液2ml显色，操作同标准曲线。
3.结果计算：GSH含量（ug/Gfw）= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注：Cx---2ml样品中GSH含量（ug），即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml)；Vs----显色时所取样的体积(ml)；FW---样品鲜重（g）。
五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时，视线要垂直于移液管且与液面凹面水平，不能斜视，以免量取试剂不准确。
2.在提取样品时，最好沉淀出去蛋白质，以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。
3.在研磨叶片时，为方便研磨，刚开始时加入少量的提取液。
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谷胱甘肽的简便测定法药物分析杂志 2000年第1期第20卷研究简报作者：赵旭东魏东芝万群俞俊棠单位：赵旭东魏东芝万群俞俊棠（华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237）关键词：谷胱甘肽、甲醛、半胱氨酸、DTNB 摘要：目的：建立一种快速简便测定谷胱甘肽的新方法。
方法：样品1式2份，pH 8.0条件下分别和甲醛反应2 min和60 min，各取1 mL加入5 mL DTNB溶液，25 ℃反应5 min后分别测定在波长412 nm的吸光度，算出2者的差值ΔA，代入标准曲线计算得出谷胱甘肽含量。
结果：谷胱甘肽浓度在0.19～0.95 g·L-1之间线性关系良好，回归方程为：Y=0.715 4X-0.000 4，r=0.999 9，最大误差不超过6%。
结论：方法成本低廉，简单易行，特别适合于有干扰物质存在时还原型谷胱甘肽浓度的分析。
A Simple Method for Rapid Determination of ReducedGlutathioneZhao Xudong Wei Dongzhi Wan Qun Yu Juntang （State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, Institute of Biochemistry,East China University of Science and Technology, Shanghai 200237）Abstract：Objective：A new simple method for rapid determination of reduced glutathione in the presence of other thiols is developed based on the reactions of formaldehyde with glutathione and interefering substances.Method:After each aliquot of two same samples reacts with formaldehyde for 2 and 60 min respectively, 1 mL of each solution is added to 5 mL DTNB and reacts for 5 min at 25 ℃. The absorbance is measured immediately at wavelength 412 nm. The difference between two absorbance(ΔA=A2 min-A60 min)is calculated, concentration of glutathione can be obtained from standard curve.Result:There is a good linearity between 0.19 to 0.95 g·L-1 glutathione. Regression equation:Y=0.715 4X-0.000 4，r=0.999 9，maximum deviation is less than 6%.Conclusion:The method is cheap, simple, practicable and is applicable to assay of reduced glutathione in the presence of other interefering substances.Key words：glutathione, formaldehyde, cysteine, DTNB▲谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸(Cys)和甘氨酸组成的天然三肽，用途广泛。
利用基因工程微生物生物合成方法是生产谷胱甘肽的主要方式。
作为前体之一，半胱氨酸的浓度较高，对谷胱甘肽的测定有干扰。
已有几种方法用于半胱氨酸存在时谷胱甘肽的测定：酶分析方法［1，2］可测高达1 000倍半胱氨酸存在时谷胱甘肽的含量，结果较准确，但需价格昂贵的辅酶Ⅱ和谷胱甘肽还原酶，并且后者活力变化严重影响测量结果；色谱法［3，4］冗长费时；Jocelyn［5］采用将样品在硫酸中煮沸1 h的方法，不太安全；Wronski［6，7］方法效果较好，但需用对羟基汞苯甲酸和萤光黄；荧光法［8］容易受干扰，误差较大；乙二醛酶法［9］需要复杂的技术和设备。
针对上述方法的不足，本文在研究甲醛同谷胱甘肽和常见含巯基物质反应特点的基础上结合巯基的测定方法［10，11］提出一种简单，快速的新方法，应用于生物合成反应溶液中谷胱甘肽含量的分析取得满意结果。
1 仪器和试剂752紫外光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂)，恒温水浴槽(上海医疗器械五厂)。
GSH，Gys，为生化试剂；3%甲醛溶液由分析纯试剂加水配制，用NaOH调节pH为8.0；0.25 mol·L-1 pH 8.0的Tris-HCl缓冲液由生化试剂配制；0.01 mol·L-1DTNB［5，5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)］溶液由生化试剂加0.05 mol·L-1 pH 7.0的磷酸缓冲液配制，存于棕色瓶中，放于低温暗处备用；DTNB分析溶液由1体积0.01 mol·L-1DTNB 溶液加100体积0.25 mol·L-1 pH 8.0的Tris-HCl缓冲液配制而成，现用现配；其它试剂为分析纯；所用水为去离子水。
2 分析方法待分析样品(Cys含量不大于20 mmol·L-1，GSH浓度小于0.9 g·L-1)1 mL 2份，每份加入0.25 mol·L-1 pH 8.0的Tris-HCl缓冲液3 mL，摇匀，再加入3%甲醛1 mL，摇匀，室温下分别准确静置2 min 和60 min后，立刻取1 mL加入预先恒温于25 ℃水浴中的DTNB分析溶液5 mL，摇匀，准确静置5 min后，立刻在波长412 nm处测定吸光度A，算出2者的A值之差ΔA，代入回归方程计算相应谷胱甘肽浓度，最大误差不超过6%。
3 结果3.1 显色溶液的稳定性准确称取GSH溶于pH 6.5去离子水配成0.48 g·L-1的标准溶液，取1 mL按上述方法分析，已知室温为26 ℃，5 mL DTNB溶液预先恒温于25 ℃水浴中，分别加入已与甲醛反应2 min 和60 min的样品溶液1 mL后迅速摇匀，以此刻作为反应开始，于不同时间测定吸光度，见表1。
可知反应开始1.5 min到10 min之间显色溶液保持稳定，考虑到因季节不同，与甲醛反应后的样品溶液温度变化，1 mL该溶液加入5 mL预先恒温于25 ℃水浴中的DTNB溶液后需1～3 min才能恢复到25 ℃，选择5 min为反应时间。
表1 显色溶液在不同反应时间的吸光度3.2 标准曲线的制作谷胱甘肽含有疏基，按照疏基的测定方法［11，12］可求出GSH的含量。
准确称取GSH溶于pH 6.5去离子水配成0.95 g·L-1的标准溶液，分别取该溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，相应加入0.8，0.6，0.4，0.2，0 mL pH 6.5的去离子水，用水代替甲醛作为对照。
按分析方法与甲醛反应2 min和60 min后测定结果见表2。
以Y为纵坐标，表示GSH(g·L-1)浓度，以X为横坐标，表示ΔA，用最小二乘法计算得回归方程和相关系数为：Y=0.715 4X-0.000 4 r=0.999 9说明线性关系良好。
表2 GSH浓度(g·L-1)与ΔA之间的关系3.3 甲醛同Cys和GSH的反应速度配制浓度为0.95 g·L-1的GSH标准溶液和2.6 g·L-1的Cys标准溶液，按分析方法分别与甲醛反应不同时间后测量A值，用水代替甲醛作为对照。
结果表明(表3)：室温下pH 8.0时，和甲醛反应2 min后，98.94%的Cys被掩蔽，而GSH只有3.08%；反应1 h后，97.56%的GSH也被掩蔽，由此可知，甲醛同半胱氨酸的反应更快。
利用这种反应速度的差异，可以分别测定Cys和GSH的浓度；由此启发研究其他含疏基物质与甲醛的反应特性。
表3 甲醛同Cys和GSH的反应速度3.4 多种含疏基物质共存时GSH含量分析生物合成GSH溶液中含有细胞泄漏物如辅酶A、蛋白质等含疏基物质，提取时还用到疏基乙醇和NaHSO3还原氧化型GSH这些物质干扰GSH的分析。
进一步研究甲醛同这些物质的反应性质如表4所示。
表4 各种含疏基物质同甲醛的反应性质及对GSH测定的影响a.这2种酶含有巯基，用来说明甲醛同蛋白质巯基的反应性质b.生物合成GSH的反应系统含有固定化酵母和E.coli细胞，溶液中有这2种细胞的泄漏物如蛋白质、辅酶等含巯基物质，分析这2个样品是为了检验这些含巯基物质对GSH测定的影响c.二硫苏糖醇与巯基乙醇和NaHSO3不同，因为和甲醛反应使它的A值减小许多，给分析带来麻烦；还原反应溶液中的氧化型GSH时只采用巯基乙醇和NaHSO3表4结果表明，除二硫苏糖醇外，与甲醛反应的常见含巯基物质基本上可分为4种，第1种和甲醛反应2 min 后，几乎完全被掩蔽，如半胱氨酸；第2种和甲醛反应的时间越长，被掩蔽的越多，以致最后被掩蔽，如谷胱甘肽、酵母和E.coli细胞裂解液中的未知成分；第3种与甲醛的反应在2 min时就已完成，部分被掩蔽，2 min和60 min时的A值几乎一样，如NaHSO3和木瓜蛋白酶；第4种是基本上不与甲醛反应，如巯基乙醇和半乳糖苷酶。
通过求取和甲醛反应2 min和60 min时的A值之差，可将第1、第3、第4种物质的干扰消除；第2种含巯基物质共存时，可设立不含GSH 的溶液作为对照来消除干扰，如在测量生物合成反应溶液中的GSH浓度时，以不加GSH前体的溶液作为对照。
总之，无论哪一种干扰物质和GSH共存，采用本文的分析方法都可以测定GSH含量。
各种样品按照分析方法测定的GSH含量如表5所示，每种样品测定之前用水补加至体积为1 mL，表中数据为2次分析的平均值。
表5 各种样品的GSH含量分析结果g·L-1g·L-1加入量之比/%1 样品1+样品2 0.1900.280±0.0040.016±0.0040.264 0.188 98.952 样品1+样品3+0.2 mL样品5 0.1900.795±0.0120.533±0.0170.262 0.187 98.423 样品1+0.2mL样品5+0.2 mL样品6 0.1900.308±0.0080.056±0.0140.252 0.180 94.744 样品1+样品8a 0.1900.440±0.0290.130±0.0110.254a0.181 95.265 样品2+0.3mL样品8+0.3 mL样品9a 0.0000.099±0.0100.071±0.0090.0286 样品1+样品2+0.3 mL样品8+0.3 mL样品9 0.1900.382±0.0350.095±0.0130.259a0.185 97.37注：样品编号见表4a.分析样品6必须设立对照，即样品5，原因见文中解释；计算样品6的GSH含量时，应采用样品6的ΔA与样品5的ΔA之差0.280。