总谷胱甘肽检测试剂盒(DTNB速率比色法)
氧化型谷胱甘肽检测试剂盒（DTNB速率比色法）
氧化型谷胱甘肽检测试剂盒（DTNB速率比色法）氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)简介：谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH 减去GSH 即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
通过分光光度法(酶标仪)检测410nm 处吸光度，与相应处理的GSH 标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH 即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
该试剂盒仅用于科研，不用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、配制50×GSH 还原酶：按GSH 还原酶原液：GSH assay buffer =1:49的比例混合，即为50×GSH 还原酶。
3、配制GSH 检测工作液：按下表配制GSH 检测工作液。
1个样品10个样品50个样品编号名称TO1043 100T Storage试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准10mg 4℃ 避光试剂(D): 蛋白沉淀剂2g RT 避光试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光试剂(F): DMSO 3ml RT 避光试剂(G): ddH 2O 100mlRT 避光使用说明书1份GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80mlDTNB储存液5μl 50μl 250μl4、配制T-GSH检测工作液：按下表配制T-GSH检测工作液。
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。
细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。
本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。
本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。
细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。
在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。
但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件：-20ºC保存，一年有效。
还原型谷胱甘肽靶向氧化应激对肝癌干细胞的作用
网络出版时间：２０２０－８－２５１４：１９ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０２００８２４．１６０６．００２．ｈｔｍｌ还原型谷胱甘肽靶向氧化应激对肝癌干细胞的作用高 兰１，龙世棋２，陈博鑫１，章 俊１摘要：目的 探讨还原型谷胱甘肽（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）对肝细胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）干细胞性的作用。
方法 采用总谷胱甘肽／氧化型谷胱甘肽（Ｔ ＧＳＨ／ＧＳＳＧ）测试盒检测细胞内Ｔ ＧＳＨ／ＧＳＳＧ水平；应用ＣＣＫ ８实验评估细胞活力及干细胞培养基培养干细胞球（ＨＣＣｓｐｈｅｒｅ）；运用流式细胞技术分析ＣＤ１３３阳性细胞亚群比例。
结果 ＨＣＣ细胞中内源性Ｔ ＧＳＨ／ＧＳＳＧ水平比正常细胞显著升高。
外源性补充ＧＳＨ减少胞内活性氧物质（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）并抑制ＨＣＣ细胞活力及ＨＣＣｓｐｈｅｒｅ形成。
进一步分析发现ＧＳＨ显著降低ＣＤ１３３＋肝癌干细胞（ｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＬＣＳＣ）的亚群比例。
结论 ＨＣＣ细胞中ＲＯＳ水平及抗氧化防御能力增强。
外源性ＧＳＨ能够降低胞内的ＲＯＳ水平，并抑制ＨＣＣ细胞活力及干细胞性，降低ＬＣＳＣ在ＨＣＣ细胞中的亚群比例。
为靶向异常氧化应激（ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ＯＳ）及肿瘤干细胞（ｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＣＳＣ）治疗ＨＣＣ提供了新靶点。
关键词：肝肿瘤；肝细胞癌；肿瘤干细胞；还原型谷胱甘肽；氧化应激中图分类号：Ｒ７３５ ７ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－７３９９（２０２０）０８－０８８７－０６ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０２０．０８．００２接受日期：２０２０－０５－２７基金项目：国家自然科学基金（８１８６０５４４）、贵州省教育厅青年科技人才成长项目［黔科合ＫＹ字（２０１７）１６８］作者单位：贵州医科大学１病理教研室、２免疫学教研室，贵阳 ５５０００４作者简介：高 兰，女，硕士研究生。
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
组成：
编号 名称 试剂(A): 样品匀浆液 试剂(B): GSH 试剂(C): GSH 配制液 试剂(D): 氧化剂 试剂(E): 酸性沉淀剂 试剂(F): GSH-Px assay buffer 试剂(H): ddH2O 使用说明书
TO1033 50T 50ml
15.4mg 10ml 2×1ml 100ml 62.5ml 50ml
北京雷根生物技术有限公司
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
简介：
谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSH-Px)是一种含硒的水溶性四聚体 蛋白酶。几乎在所有组织中都有分布，在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发 生明显的变化，该酶可以清除活细胞内过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着 关键作用。
Leagene 谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(Glutathione Peroxidase Assay Kit)是一种 以过氧化氢为底物，通过比色法检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶活性的 试剂盒。绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中性组成 部分。细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。其检测原理是：GSH-Px 可催化谷胱甘肽(GSH)与苯甲酸显色液发生氧化反应，使之生成黄色阴离子，通过分光光度 计或酶标仪检测 422nm 处吸光度值测定该阴离子的浓度，间接推算 GSH 减少的量。本试 剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
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0.1ml
2ml
1ml
4、 GSH-Px 显色反应: 可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：
Hale Waihona Puke 加入物质空白对照管 本底对照管 测定管
总抗氧化能力(T-AOC)比色法测试盒(ABTS酶催化法)
用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、尿液、动植物组织、细胞等样本中总抗氧化能力。
检测范围及灵敏度检测范围：0.047-1.50 mmol/L灵敏度：0.047 mmol/L背景介绍机体存在两类抗氧化系统，一类是酶抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px）；另一类是非酶抗氧化系统，包括尿酸、维生素C、维生素E、谷胱甘肽、胆红素、α-硫辛酸、类胡萝卜素[1-3]。
抗氧化能力被认为是血液和体液中所有抗氧化剂的累积效应[3]。
检测原理ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS●+，在抗氧化物存在时ABTS●+的产生会被抑制，在414 nm测定ABTS●+的吸光度即可测定并计算出样本中的总抗氧化能力。
Trolox是一种维生素E的类似物，具有和维生素E相近的抗氧化能力，用作其他抗氧化物总抗氧化能力的参考。
例如，Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其他物质的总抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相应的倍数来表示。
本试剂盒测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。
提供试剂和物品注：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同批次试剂盒中的试剂不能混用。
Focus on your research Service for life science 耗材：枪头（1000 μL ，200 μL ，10 μL ）。
仪器：酶标仪（405-425 nm ）、微量移液器（1000 μL ，200 μL ，100 μL ，10 μL ）。
所需自备物品配制试剂之前，请穿戴好防护装备。
试剂盒中部分试剂含有危险性物质。
禁止食入，吸入，直接接触眼睛、皮肤和衣物。
使用完后的试剂瓶经彻底清洗后再处理。
安全提示试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl ）、PBS （0.01 M，pH 7.4）、80%乙醇。
实验关键点ABTS工作液配制完成后，室温避光保存，在30 min内使用完毕。
s-乙酰-l-谷胱甘肽酶法合成
s-乙酰-l-谷胱甘肽酶法合成下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽的测定方法主要有以下几种：
1. 埃尔曼（Ellman）法：这是最常用的谷胱甘肽测定方法，其原理是谷胱甘肽在DTNB（二硝基苯磺酸）的作用下，生成具有黄色的DTNB-SH，通过测定其吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
2. 弗斯特（Foster）法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2-硝基-5-苯甲酸的还原能力，通过测定其产物2-氨基-5-苯甲酸的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
3. 比色法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2,4-二硝基苯酚的还原能力，通过测定其产物2,4-二氨基苯酚的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。
4. 高效液相色谱法（HPLC）：这种方法是通过分离、定量样品中的谷胱甘肽，通过比较其峰面积与已知浓度的谷胱甘肽峰面积来定量谷胱甘肽的含量。
5. 荧光光谱法：这种方法是通过测量谷胱甘肽的荧光光谱，通过比较其荧光强度与已知浓度的谷胱甘肽荧光强度来定量谷胱甘肽的含量。
以上方法都有其优点和缺点，选择哪种方法主要取决
于实验的目的和条件。
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总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)
简介：
谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB 速率微板法)(T otal Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测总谷胱甘肽(T-GSH)的试剂盒，其检测原理是谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG 还原成的GSH 和样品本身含有的GSH 都与发色底物DTNB 反应，生成黄色的TNB 和GSSG 。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
该试剂盒仅用于科研，不用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶
解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、 配制50×GSH 还原酶：按GSH 还原酶原液：GSH assay buffer =1:49的比例混合，
即为50×GSH 还原酶。
-20℃保存，3个月有效。
3、 配制T-GSH 检测工作液：按下表配制T-GSH 检测工作液。
1个样品 10个样品 50个样品 GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml DTNB 储存液
5μl
50μl
250μl
编号 名称
TO1049 100T Storage
试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准 10mg 4℃ 避光 试剂(B): GSH assay buffer 250ml RT 试剂(D): 蛋白沉淀剂 4g RT 避光 试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光 试剂(F): DMSO 1.5ml RT 避光 试剂(G): ddH 2O 50ml
RT 避光 使用说明书
1份
50×GSH还原酶43.2μl 432μl 2160μl
4、配制蛋白沉淀工作液：在本试剂盒提供的4g蛋白沉淀剂中加入80ml ddH2O，配制成
10ml 5%的水溶液，即为蛋白沉淀工作液，4℃保存。
5、配制标准品：把还原型GSH标准储存液(10mM)用蛋白沉淀工作液稀释成50μM标准
溶液。
然后依次稀释成6个点做标准曲线。
6、准备样品：
①红细胞或血浆样品的制备：请尽量使用新鲜的血液进行测定。
离心，沉淀为红细胞，上
清为血浆。
对于红细胞，用PBS洗涤两次。
取约5红细胞沉淀或血浆，加入蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。
4℃或冰浴放置，4℃离心，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定，样品需暂时4℃保存备用。
②组织样品的制备：取组织用液氮速冻，迅速研磨，按每50mg加入150μl蛋白沉淀工
作液，充分Vortex振匀，再加入350μl蛋白沉淀工作液，用匀浆器充分匀浆。
4℃孵育，离心，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
③细胞样品的制备：PBS洗涤细胞1次，离心收集细胞，吸尽上清。
加入细胞沉淀3倍
体积的蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。
(收集细胞前后分别对离心管进行称重，从而就可以计算出细胞沉淀的重量，10mg细胞沉淀的体积可以粗略地看做10ml。
)对样品进行快速的冻融后，4℃或冰上孵育5min。
离心取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
7、T-GSH加样操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，
并注意避免产生气泡。
如果样品中的T-GSH浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物(ml) 空白管标准管测定管蛋白沉淀工作液0.08 ——
系列标准品(2～50μM) —0.08 —
待测样品——0.08
GSH检测工作液 1.6 1.6 1.6
室温或25℃孵育。
NADPH工作液(0.12mg/ml) 0.4 0.4 0.4
9、T-GSH检测：立即用酶标仪或自动生化分析仪于410nm处每隔2min检测一次，空白管调零，共检测6min(亦可加入NADPH工作液反应6min后检测，只检测1次)，以检测其反应速率ΔA/min。
如果酶标仪不能检测410nm，可测定405～420nm处吸光度。
计算：
①动力学测定法：根据不同时间点测定得到的吸光度值计算出ΔA410/min，以GSH标准
的浓度为横坐标，以ΔA410/min为纵坐标，做出标准曲线。
根据待测的ΔA410/min，对照标准曲线就可以计算出测定时样品还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)的含量。
GSSG含量=总谷胱甘肽(T-GSH)的含量-还原型谷胱甘肽(GSH)含量
②终点测定法：即反应6min仅测定1次吸光度。
以GSH标准的浓度(50、25、15、10、
5、2μM)为横坐标，以ΔA410/min为纵坐标，做出标准曲线。
样品对照标准曲线即可
计算出总谷胱甘肽的含量。
终点测定法比动力学法快捷。
GSSG含量=总谷胱甘肽(T-GSH)的含量-还原型谷胱甘肽(GSH)含量
参考区间：
成年全血GSH 1.02～mmol/L
注意事项：
1、请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定，避免使酶活性下
降。
2、全血GSH与吸烟和锻炼成正比。
3、测定各孔时，各孔温度均需达到室温或25℃，否则影响结果。
4、轻度溶血样本对GSH测定无影响。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。