月季组培方案
月季的组织培养
思考：3、为什么选单核期花粉？ 思考：4、为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？
3、花药供体植株的 生长条件 和材料 低 温 预处理 及接 种密度也影响诱导成功率。
1、因为早期的花蕾营养状态和生理状态 比较好，能提高花粉诱导成功率。
C、单核期花药
D、双核期
2.关于月季的花药培养技术与菊花的组织培养技术的不同，
下列说法不正确的是
(C )
A．花药培养需发育时期适宜的花蕾
B．花药培养对培养基配方的要求更为严格
C．培养基配制方法完全不同
D．花药裂开后长出的愈伤组织或释放的胚状体要及时换培养
基
3.某高等植物体细胞内假设有6条染色体，它们是AaBbDd，
染色体组数常发生变化的主要原因是：可能是营养核和生殖核的融合。
五、 课课题题成成果评价果评价 课题成果评价
选材是否恰当
选材是否成功是花药培养成功的 课题成果评价
关键。应学会通过显微镜观察处于适 宜发育期的花粉。
五、课题成果评价
无菌技术是否过关
如果出现了污染现象，说明某 些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消 毒或接种等有问题。
经脱分化形成愈
无需加倍。
伤组织，再分化
成丛芽，诱导出
根，然后进行移
栽。
取材为花药，培养的为单倍
体幼苗，植株弱小，高度不
育，必须用秋水仙素处理，
使染色体加倍，恢复正常植
株的染色体数，而且为纯种。
课堂练习
1.在月季花药培养成单倍体植株的过程中，哪个时期最易成
活?
（C ）
A、单核期前的花药
B、单核期后的花药
五、 课题成果评价
月季花的组织培养知识讲解
月季的分类---地被月季
匍匐生长，枝条触地生 根，覆盖率极强（单株 年覆盖面1平方米左右 ，厚度30厘米左右）； 多花（单枝花朵50—— 100朵，单株次开花可 达千朵以上）；耐寒、 抗旱、抗病，是抵御风 沙、水土保持最理想花 卉品种。其中以恋情火 焰、巴西诺、哈德福俊 、梅郎珍珠为佳。
月季的分类---食用月季
（4） 壮苗培养
①对增殖倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行 一次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗 培养的培养基为：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并 不特别强调繁殖速度，也可以一直使用这种培养基，以壮 苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。
（4）消毒与接种 在超净工作台上，用饱和
漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，用无菌水涮洗数次 ，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求接种，从 芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。
•（5）培养 培养温度21℃最
好，最高不超过25℃，有昼夜温差， 光照10～12小时/天，光强800～
1200LX。
（二）继代增殖
（1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到MS+BA12mg/l+IAA0.1-0.3mg/l或MS+BA1-2mg/l+NAA0.010.1mg/l的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段 弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克
（2）5周后 ，所培育的月季成倍的增加。
（3）每5～6周做一次继代增殖，继代前先制备好培养 基，然后在无菌操作条件下，将月季嫩茎切成1～2节一 段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级 数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。
1 ：初代培养 2 ：继代培养
月季组织培养
目录摘要 (4)前言 (4)综述 (5)1．外植体 (5)1.1取材部位1.2取材时间1.3取材大小2. 消毒 (8)3. 接种方式 (8)4.培养基 (9)4.1基本培养基4.2激素4.2.1不同激素对诱导愈伤组织的影响4.2.2不同激素对继代培养的影响4.2.3不同激素对生根培养的影响4.3糖浓度的影响4.4无机盐4.5琼脂5.培养基的配置 (13)6.培养条件 (14)7．防褐化 (14)技术路线与实验设计 (15)参考文献 (17)摘要：为了进行月季组织培养实验，我们查阅了相关文献，从多个方面了解影响月季组织培养的因素，如外植体的取材部位、时间、大小、消毒、接种方式、不同阶段激素的配比、培养基成分、培养条件等，以期在实验中调控月季组培的环境，确保实验顺利进行。
基于我们想探究激素对组织培养中细胞的脱分化和再分化的作用这一想法，我们的设计了以ＮＡＡ浓度、６ＢＡ浓度、外植体部位为影响因素的正交实验（L9（3４）），并考察NAA与6BA的交互作用。
同时，我们还以接种方式作为单因素考察其对愈伤组织诱导的影响。
关键词：组织培养、影响因素、正交前言在阅读了植物组织培养的相关文献资料后，我们设计了此次组织培养实验方案，考察细胞分裂素浓度、生长素浓度、接种方式、取材部位因素对愈伤组织的形成有何影响，期望寻找出诱导月季愈伤组织的最佳条件；同时探究由愈伤组织诱导出芽及生根所需的最佳浓度配比。
并在月季组织培养过程中，掌握外植体消毒方面要注意的事项，整个培养过程中培养条件的选取与控制，实验过程中出现的现象的观察记录以及分析，在这个过程中不断加强理论与实践的联系，深化对理论知识的理解。
对于外植体选择，我们采用了以往研究者的做法，即选用带腋芽的枝条。
但是，我们的不同之处在于，我们还保留了一部分刚好能包裹住腋芽的叶柄。
这样做的目的是为了在消毒时避免芽受到太大损伤。
参考论文中防褐化多用抗氧化剂和其他抑制剂，减轻外植体在组培中的酶促褐变，我们根据生理生化原理，考虑到酶活性与温度有关、以及外植体内的酚类物质含量有关，因此需对外植体做如下处理：接种前先将外植体用低温水流冲洗24小时；选择晴朗天气采摘外植体。
植物的组织培养技术之月季
植物的组织培养技术之⽉季《新教材导学练》（选修1）编写体例专题三植物的组织培养技术【学习导航】利⽤植物的⼀块组织，甚⾄⼀个细胞，就能培养出完整的植株，靠的就是植物组织培养技术。
运⽤这种技术，可以实现优良品种的快速繁殖，保持遗传性状的⼀致；可以培育出⼤量不含病毒的幼苗，提⾼作物产量；可以实现花卉的连续⽣产，不受开花季节的限制……在学习本专题的过程中应引导学⽣联系与微⽣物培养基的对⽐来认识植物组织培养的MS 培养基的特点；学会正确配制MS 培养基的⽅法；与有关植物激素的作⽤、原理等相联系，来正确理解植物组织培养技术的原理、培养基的配制等具体操作过程。
同时还可与单倍体育种常⽤⽅法——花药离体培养相联系，使植物组织培养技术应⽤到⽣产实践中去。
植物的花药培养在育种上有特殊的意义。
育种⼯作者可以采⽤花药培养的⽅法，使花粉粒发育为单倍体植株，再经过⼈⼯诱导使染⾊体数⽬加倍，重新恢复到正常植株的染⾊体数⽬。
这样的植株不仅能够正常⽣殖，⽽且每对染⾊体上的成对的基因都是纯合的，⾃交产⽣的后代不会产⽣性状分离。
单倍体育种不仅缩短了育种周期，也为新品种的培育开辟了新途径。
课题2 ⽉季的花药培养【导学诱思】1．被⼦植物的花粉发育被⼦植物花粉的发育要经历、和等阶段。
花粉是由花粉母细胞经过⽽形成的，因此花粉是。
2．产⽣花粉植物的两种途径通过花药培养产⽣花粉植株的两种途径：①②思考：（1）花药培养产⽣花粉植株的两种途径的差别主要取决于什么？（2）什么是体细胞胚？（3）单倍体性细胞产⽣的花粉胚，也可发育成为单倍体植株，这和植物的体细胞克隆有区别吗？3．影响花药培养的因素诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的⾼低，受多种因素影响，其中与是主要的影响因素；也是提⾼诱导成功率的重要因素；另外亲本植株的⽣长条件、以及等对诱导成功率都有⼀定影响。
思考：（1）为什么选择合适的花粉发育期是诱导花药培养成功率的重要因素？（2）为什么花药的培养要选择完全未开放的花蕾？4．实验操作（1）材料的选取选择花药时，⼀般要通过来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。
月季的组织培养
外植体的取材部位对芽的萌发也有影响，“Gold Glow”和“Improved fire”月季的侧芽如果在不 同激素的培养基上进行组培，可发现在枝条顶部 和基部的芽发育慢，而枝条中部的芽发育快。在 研究中发现靠近外植体顶端的芽较其他部位芽的 发育慢，在茎尖脱毒培养时，由嫩茎的顶芽得到 的外植体成活率高于腋芽。在实际工作中由于顶 芽数量少，故月季的组培依旧常常使用腋芽作为 外植体，这时一般需要进行茎切除顶芽（摘心） 以打破顶端优势、促使腋芽健壮生长，以促进嫩 茎的增殖。 此外，外植体的取材时间及培养所需时间对月季 嫩茎的发育和增殖也有影响。对于“Bulgarian rose”而言，选取外植体的最佳时间是冬季 （1～3月），而“Improved fire”月季的培养时 间以28d继代一次较好，超过 28d，茎的数目就 不再增加了。
诱导培养基以MS为基本培养基（硝酸 盐、钾和铵的含量高），附加适量的 细胞分裂素6-卞氨基嘌呤（6-BA）0.53.0mg/L和生长素萘乙酸（NAA） 0.01-1.0mg/L,且培养基中添加蔗糖有 增加丛生芽数量的作用。
壮苗培养与生根
1、壮苗培养 在继代培养过程中，细胞分裂素浓度的增加有助于增殖系 数的提高。但伴随着增殖系数的提高，增殖的芽往往出现 生长势减弱，不定芽短小、细弱，无法进行生根培养的现 象；即使能够生根，移栽成活率也不高，必须经过壮苗培 养。壮苗培养时，可将生长较好的芽分成单株培养，而将 一些尚未成型的芽分成几个芽丛培养。 通过选择适宜的细胞分裂素和生长素的种类及不同浓度配 比，可以同时满足增殖和壮苗的不同要求。高浓度的生长 素和低浓度的细胞分裂素的组合有利于形成壮苗。因此， 在以丛生芽方式进行增殖时，适当降低培养基中BA等细胞 分裂素的浓度，并增加NAA等生长素的浓度，就能达到壮 苗培养的目的。在实际生产中，我们一般用较低浓度的细 胞分裂素与生长素组成合理的比列，将有效增殖系数控制 在3.0-5.0，以实现增殖和壮苗的双重目的。
月季的植物组织培养
月季的植物组织培养一．实验目的1．掌握蔷薇科月季的组织培养技术2．熟悉、巩固无菌操作技术二．实验器皿及试剂1.仪器及用品：超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、电热炉酒精灯、镊子、解剖刀、解剖剪、烧杯、三角瓶、培养皿、滤纸、封口膜2.试剂：MS+6BA1+NAA1（诱导）培养基、MS+6BA2+NAA2（继代）培养基、70%酒精、3%次氯酸钠、无菌水3.材料：月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药。
三．实验步骤配制诱导培养基：MS+6BA1+NAA1，1升，灭菌后分装到35个培养1.皿中。
2.取材：将采集的月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药冲洗干净，按不同部位分装到3个500烧杯中，放入超净工作台；先用70%酒精浸没并轻摇10秒进行预消毒；倒出酒精，加入3%次氯酸钠浸没，轻摇11分钟；倒净次氯酸钠，用无菌水冲洗5遍以上，倒出无菌水。
3.将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中，用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm2大小、茎段长2—3cm每段至少有1 个侧芽、将花苞打开取花药，分别接种到带有培养基的平皿中并封口（每皿3—5个）。
4.标记好后，放入培养室中培养（2周左右）。
5.配制分化培养基：MS+6BA2+NAA2培养基，配制1升，灭菌后分装到35个100ml的三角瓶中。
6.挑选长有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。
在超净工作台中，将培养皿封口膜在酒精灯旁打开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出，转移到带有分化培养基三角瓶中（每瓶最多）并封口。
7.标记好后，放入培养室培养。
继续观察愈伤组织的生长情况。
四．实验结果茎段出愈率=25根出愈/总接种40根*100%=63%叶片出愈率=5片出愈／总接种30片*100%=17%花药及萼片出愈率=1片出愈/总接种20片*100%=5%通过实验得出月季茎段的出愈率最高，其次是叶片及花药。
接种过程中有三个平皿出现污染现象。
五．问题分析及解决1.三个污染的外植体，两个是叶片内延至周围。
微型月季组培快繁技术
表 1 培养基中添加不同浓度 6 - BA 和 NAA 对 微型月季诱导分化的影响
培养基中添加的 培养基中添加的 6 - BA (mg/ L) NAA (mg/ L)
萌发芽数 (个)
芽平均生长量 (cm)
0. 5
0. 1
11
1. 1
0. 5
0. 3
15
0. 7
0. 5
0. 5
17
0. 8
0. 3
0. 1
收稿日期 :2006 - 01 - 10
微型月季组培快繁技术
蒲建霞
(甘肃省天水市果树研究所 ,741002)
中图分类号 : S685. 12 文献标识码 :B 文章编号 :1001 - 0009 (2006) 04 - 0156 - 01
和平均根长均较小 。而在只加有 IBA0. 1gm/ L 的培养基中 , 增殖系数较大 ,生根率 ,平均生根数和平均根长最大 。因此 , 1/ 2MS + IBA0. 1mg/ L 最适合增殖和生根 (表 2) 。
1995 (5) :355 - 361. [ 4 ] 官本馥. 罗珍珍. 唐坚志. 丰花月季的组织培养和快速繁殖[J ] . 植物生理学通讯 ,1992 (2) :129 - 134.
651
1 材料与方法
1. 1 选材处理 春季剪取微型月季当年生健壮嫩枝 ,去掉叶片 ,自来水 冲洗干净 ,切成 1. 5～2cm 左右带腋芽的茎段 ,用洗洁精稀释 溶液浸泡 5～10min ,然后用流动的清水冲洗至无泡沫为止 。 将冲洗干净的茎段在无菌条件下置于 0. 1 %的升汞液中处 理 3～5min ,将升汞液倒出 ,缓缓加入无菌水 ,轻轻摇荡 ,反 复冲洗 4～5 遍后 ,接入诱导分化培养基中 。当萌发的芽长 到 1. 5～2cm 时 ,接入筛选出的增殖生根培养基中进行继代 培养 。 1. 2 培养基和培养条件 1. 2. 1 培养基 诱导分化培养基用 MS 做基本培养基分别 添加 0. 5 、0. 3 、0. 1mg/ L 6 - BA 和 0. 1 、0. 3 、0. 5mg/ L NAA 、 蔗糖 30g/ L 、琼脂 5g/ L ,p H5. 8 ,进行激素配比试验 ,筛选出 适合外植体诱导分化的培养基 。增殖生根培养基用 1/ 2MS 为基本培养基 ,分别配加 6 - BA0. 5mg/ L + IBA0. 1mg/ L ,6 - BA1. 0mg/ L + IBA0. 1mg/ L , 以 及 IBA0. 1mg/ L , 蔗 糖 10g/ L ,琼脂 4. 5g/ L ,p H5. 8 ,制成增殖生根培养基 ,比较对 增殖生根的影响 。 1. 2. 2 培养条件 光照强度为 2 000L x ,24h 光照 ,培养温 度为 25 ±2 ℃,相对湿度保持在 60 %以上 。 1. 3 试管苗的移栽 当试管苗根长达 1. 5～3cm 时 ,打开瓶塞 ,注入 1. 5cm 左右深的清水 ,光培炼苗一个星期 。用镊子轻轻夹取小苗 , 洗净根部培养基 ,掐去基部叶片 ,移栽到装有蛭石的小营养 钵中 ,水浇透 、罩上小拱棚保湿 ,保持相对湿度 80 %～90 %。 天阴时可揭开 ,一周以后划棚膜 ,逐渐通风 ,直到最后揭掉棚 膜 (注意 :在初移栽高温天气必须罩遮阳网) 。待长出新根 后 ,及时移栽到细沙 ∶有机肥 ∶园 ±为 1 ∶1 ∶1 的花盆中 。
月季组织培养
有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等
植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
不同植物激素使用顺序和使用量
使用顺序 实验结果
先生长素， 有利于分裂但 后细胞分裂素 不分化 先细胞分裂素， 细胞既分裂也 分化 后生长素 同时使用 分化频率提高
生长素细胞 结果 分裂素比值 比值高时 促根分化， 抑芽形成 比值低时 促芽分化， 抑根形成 比值适中 促进愈伤组 织生长
3 .培养基
• 用于月季的基本培养基种类很多，如 B5、N6、WPM和 MS 培养基等。众多培养基中以 MS 培养 基的效果为最好，广泛用于月季的离体快速繁殖中。培养基的培养成分（主要是各类无机盐浓度） 及物理性能（pH 值、糖分以及固化支持物）会影响月季的组培。对 MS 培养基的成分及物理性能 进行合理的选择会提高月季组织培养的成功率。 MS 培养基中无机盐离子浓度因月季培养阶段的不同而有不同： 1）茎段培养阶段，将带有腋芽的嫩茎接种到不添加任何激素类物质的 MS 和 1/2MS 培养基上，两 周后，MS 培养基上的腋芽生长，而在 1/2MS 培养基上的腋芽几乎不萌发或发育不良。通过提高 MS 培养基中氯化钴的浓度，并用硫酸铵代替硝酸铵培养“Bulgarian rose”，可使其茎的生长状况 得到改善。同时有报道认为在 MS 培养基中添加硝酸银可以缓解叶片衰败并提高茎段侧芽的生长。 2）诱导生根阶段，一般要求较低的 MS 培养基无机盐离子浓度。Skirvin 等在用（Forever Yours ）月季做生根试验时发现，采用1/4MS 培养基，不加生长素即可以促进生根。
外植体消毒
接种
冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌 水冲洗至少三次之上
培
养
栽
培
移
栽
有菌条件下月季组织培养技术
有菌条件下月季组织培养技术摘要介绍有菌环境条件下月季组织培养技术，包括培养基组成、培养瓶灭菌、灭菌培养基的制作、取材、材料处理、接种、培养、继代增值培养、生根培养、炼苗等方面内容，以为月季无性繁殖提供参考。
关键词月季；组织培养；有菌环境月季属蔷薇科蔷薇属花卉，品种繁多，近100年来累计的品种数以万计，目前流行的有数千个品种，而且每年许多国家仍在不断选育新品种。
现在许多国家都在用组织培养技术来繁殖月季的优良品种，目前这种快速繁殖方法技术成熟，已进行工厂化生产，对加速老品种的更新换代，迅速普及月季名优新特品种将起到重要的作用。
月季常规组培技术报道很多，但在有菌环境条件下的月季组织培养技术未见报道。
1培养基组成诱导萌芽培养基：MS+BA 0.5-1.0 mg/L+S106杀菌剂0.3 mL/L；增殖培养基：MS+BA 1-2 mg/L+NAA 0.1-0.2 mg/L+S106杀菌剂0.3 mL/L；生根培养基：1/2 MS+NAA 0.1-0.2 mg/L+IAA 1.0 mg/L（或NAA 0.5 mg/L）+S106杀菌剂0.3 mL/L。
2培养瓶灭菌根据培养瓶的大小、数量，以浸没培养瓶及瓶盖为度，在水池或容器中量取适度的自来水，然后加入S105杀菌剂0.2 mL/L，搅拌均匀，放入洗净的培养瓶及盖浸泡2 h以上。
然后捞取培养瓶及盖，将其倒扣在干净的工作台面上滤干水，待用。
3灭菌培养基的制作以制取1 L培养基为例：量取1 L自来水放在电饭煲内加热（因加热蒸发加入母液后到分装时煮沸刚好是定容要求的1 100 mL，冷却后就是1 L，故配1 L 培养基量取1 L自来水），称取白糖30 g、琼脂4 g，加入电饭煲锅水中，待全部溶解，再加入100倍MS母液（其中：大量元素A 10 mL、大量元素B 10 mL、铁盐10 mL、微量元素10 mL、有机物10 mL、1 mg/mL BA 0.5-1.0 mL），煮沸。
月季组培实验报告(3篇)
第1篇一、实验简介实验名称：月季组培实验实验目的：通过组培技术，了解月季组织培养的原理和方法，掌握无菌操作技术，提高植物繁殖效率，为月季的快速繁殖和遗传改良提供技术支持。
实验时间：2023年X月X日至X月X日实验地点：XX大学园艺实验室实验材料：月季植株（品种：XX）实验设备：超净工作台、无菌操作箱、高温高压灭菌器、移液枪、解剖刀、培养皿、试管、滤纸、镊子、剪刀、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅等。
二、实验方法1. 外植体选取与消毒：- 选择生长健壮的月季植株，取其茎尖作为外植体。
- 使用无菌水清洗外植体，然后用75%酒精浸泡30秒，再用无菌水冲洗3次。
- 将外植体置于0.1%的氯化汞溶液中消毒5分钟，再用无菌水冲洗5次。
2. 诱导生根：- 将消毒后的外植体切成1-2厘米的小段，接种到含有不同激素比例的MS培养基中。
- 将接种后的培养皿放入培养箱中，培养温度为25℃，光照时间为12小时/天。
3. 生根培养：- 当外植体开始生根时，将培养基更换为含有较低激素浓度的MS培养基。
- 继续培养至生根率达到80%以上。
4. 炼苗与移栽：- 将生根的植株从培养皿中取出，置于温室中炼苗。
- 炼苗成功后，将植株移栽到花盆中，进行正常的养护管理。
三、实验结果与分析1. 外植体消毒效果：- 通过显微镜观察，发现消毒后的外植体表面无细菌污染，说明消毒效果良好。
2. 诱导生根效果：- 在不同激素比例的培养基中，生根效果最好的培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L IBA。
- 在此培养基中，生根率达到90%，平均根长为3.5厘米。
3. 炼苗与移栽效果：- 炼苗过程中，植株生长良好，无病虫害发生。
- 移栽后的植株成活率达到了95%。
四、实验讨论1. 外植体选取：- 本实验选择茎尖作为外植体，主要是因为茎尖细胞分裂旺盛，易于诱导生根。
2. 消毒方法：- 消毒是组培实验的关键步骤，本实验采用氯化汞溶液消毒，效果良好。
3. 激素配比：- 激素配比对生根效果有显著影响，本实验通过优化激素配比，提高了生根率。
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月季的组培
一、工作目标
通过此项工作掌握植物组织培养的基本知识，并掌握月季的组培技术
二、材料用具
超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、无菌培养皿、酒精灯、接种工具、无菌瓶、烧杯
三、工作过程
1.培养基的配置
初代培养基：MS+6-BA0.5~3.0mg/L+NAA0.01~1.0mg/L
继代培养基：MS+BA0.5~2.0mg/L+NAA0.01~0.05mg/L
生根培养基：1/2MS+IBA 0.2mg/L+活性炭
2.培养过程
（1）外植体的选择一般选取生长健壮的带腋芽的枝条是较适宜的外植体，选芽以茎段中芽为最好，采样成活率较高，枝条须保留一部分包裹住腋芽的叶柄，避免在消毒时芽受到太大损伤
（2）外植体的消菌灭毒接种材料为当年抽生侧芽饱满的幼嫩茎段，自来水冲洗10-20min；75%或70%乙醇浸泡30s,0.1%升汞表面消毒3min,无菌水冲洗4-5次，将侧芽切下接种到MS培养基上，获得无菌苗备用。
取回枝条用自来水冲洗干净，无菌条件下用70%酒精表面消毒30-40s，再用0.1%Hgcl2溶液灭菌5-10min，最后用无菌水冲洗3-5次（3）初代培养
将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中，用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm大小、茎段长2~3cm，每段至少有一个侧芽、将花苞打开取花药，分别接种到带有培养基的培养皿中并封口（每皿3~5个），标记好后，放入培养室中培养2周左右
（4）继代培养
挑选长有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。
在超净工作台中，将培养皿封口膜在酒精灯旁打开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出，转移到带有分化培养基三角瓶中（每瓶最多）并封口。
（5）生根培养
苗高2~3cm,茎粗0.1cm左右，苗开始木质化，此时进行生根培养，把苗转移到生根培养基上。
观察它生长情况。
（6）驯化
小苗接到生根培养基上后，14d可见基部分化出根点，20d则长出许多白根。
此时
组培阶段结束，进入试管苗移栽成活阶段。
所有试管苗移栽前都应先将生根苗移至室温进行移栽前的锻炼。
锻炼时问与移栽成活率有关，练苗7d以上，成活率达到95％。
（7）移栽
移栽时应保持90％以上湿度，18～25℃的环境温度，基质用0.2 ％的高锰酸钾或其他灭菌剂进行消毒灭菌。
而基质的选择上，以蛭石和珍珠岩的栽培效果较好。
移栽成活后喷极稀的营养液，使小苗得到营养补充。
l0～15d即长出新叶，且根系快速生长，可适时进行大田移栽。