月季组织培养技术研究
月季花的组织培养知识讲解
月季的分类---地被月季
匍匐生长，枝条触地生 根，覆盖率极强（单株 年覆盖面1平方米左右 ，厚度30厘米左右）； 多花（单枝花朵50—— 100朵，单株次开花可 达千朵以上）；耐寒、 抗旱、抗病，是抵御风 沙、水土保持最理想花 卉品种。其中以恋情火 焰、巴西诺、哈德福俊 、梅郎珍珠为佳。
月季的分类---食用月季
（4） 壮苗培养
①对增殖倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行 一次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗 培养的培养基为：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并 不特别强调繁殖速度，也可以一直使用这种培养基，以壮 苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。
（4）消毒与接种 在超净工作台上，用饱和
漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，用无菌水涮洗数次 ，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求接种，从 芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。
•（5）培养 培养温度21℃最
好，最高不超过25℃，有昼夜温差， 光照10～12小时/天，光强800～
1200LX。
（二）继代增殖
（1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到MS+BA12mg/l+IAA0.1-0.3mg/l或MS+BA1-2mg/l+NAA0.010.1mg/l的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段 弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克
（2）5周后 ，所培育的月季成倍的增加。
（3）每5～6周做一次继代增殖，继代前先制备好培养 基，然后在无菌操作条件下，将月季嫩茎切成1～2节一 段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级 数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。
1 ：初代培养 2 ：继代培养
月季花的快速繁育研究
１ ／ ２ ＭＳ ＋ Ｎ ＡＡ ０ ． ５ ￣ １ ． ０ ｍｇ ／ Ｌ ， 或 ＭＳ ＋ ６ 一 Ｂ Ａ １ ． ５ ～ ２ ． ０ ａ ｒ ｇ ／ Ｌ ＋
比例混 合 ） 锯末 与培 养 土基 质上 ， 移 栽 幼苗 逐 步进行 Ｉ Ａ Ａ １ ． ０ ～ １ ． ５ ｍｇ ／ Ｌ的生根 培 养 基 上 １ ５ ｄ后 ，绝 大多
练苗 １ ４ ｄ 后， 即可进入苗期 的普通栽培管理 。
２ 结果 与分析
数 的 月 季小 苗 均 可 长 出根 ， 且 地 上 部 分 的苗 和 地下
部 分 的根长 势较 好 。
２ ． １芽的诱 导 、 增殖 与 生长
从 试 验 观察 结 果 来 看 ， 将 要 生 根 的月 季 小 苗 放 在黑暗处 ７ ｄ后 ， 再 放人 光 照 处 ， 其生根较快 ， 黑 暗 般均 生根 且生 根快 。将 已形 成根 原 基 的试管 苗 取
１ ： ３体 积混合 的营养钵 中 ， 浇 透水 ， 用 玻 璃罩 罩 住 ； 初
将 带有腋 芽 的嫩 芽节段 ， 接种 于 ＭＳ ＋ ６ 一 Ｂ Ａ（ １ ． ５ 基上 ， 培养 ２ ～ ４ ｄ后 都 可 以使 腋 芽萌 动 ， １ ０ ｄ 后 腋 芽
月后 ， 腋 芽 生 长健 壮 ， 并 形成 大 量 的丛 生芽 ， 但 苗 生 长缓 慢 ， 且在 芽基 部 形成 大量 的愈伤组 织 ， 将 其 愈 伤
在健 康 的优 良月季 母 株上 ， 取 腋 芽 的幼茎 ， 剥 去 组织切割再接种 于该培养基 中 ， 可进行扩繁增殖 ， 另外 ， 腋芽 的 嫩 叶 ， 用 自来水 进行 冲洗 ， 然 后 在无 菌 超净 工 根 据 观察 发 现 ，有 一 愈 伤 组 织在 ＭＳ ＋ ６ 一 Ｂ Ａ １ ． ５ ～ ３ ． ０ 作 台上 进 行 消 毒 ， 即把 幼茎 浸 入 ７ ０ ％酒 精 中 １ ～ ２ Ｓ ， ｍｇ ／ Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ４ ． ０ ～ ５ ． ０ ｍ ｇ ／ Ｌ ＋ Ｇ Ａ １ ． ５ ～ ３ ． ０ ｍ ｇ ／ Ｌ培 养 基 上 并用 无 菌水 冲洗 ， 再放 人 ０ ． １ ％氯化 汞 （ Ｈ ｇ Ｃ １ ： ） 中消毒 诱 导 出苗 ， 其他 培养 基 中 的愈伤组 织 还没 有此情 况 。 ５ ｍ ｉ ｎ左 右 。 接着 ， 用无 菌水 反 复冲洗 ４ ～ ５次 ， 再 将幼 ２ ． ３ 不 同培 养基 对 芽生长 的 影响
浅谈月季组织培养技术研究
高校 图书馆创新服务建设进 行 了探讨 。 关键词 ： 高校 图书馆 ； 新 内容； 创 动脑动手； 益智 室
师生 ， 包括 学院行政领导干部在 内的各项服务 。图书馆服务 内容也 １高职 院校 图书馆基本服务现状 ２１ ０ ０以来 ， 高校都大大改善 了教学和 实验 等条件 ， 也有力地推 从馆藏 资源发展到 网络 资源 ， 服务 的手段也 向现代化 发展 ， 为读者 还包 括多媒体 、 图像 、 字化文献 等 ， 数 它 动 了高校 图书馆事业的发展 。近年来 ， 各高校校逐步加大 了对 图书 提供 的不仅仅是纸质 文献 ， 馆建设的投入力度。 目前 ， 高校图书馆 已全部实现 了计算机集成化 使传统 图书馆以书 目为中心的内务管理 ， 发展到现在 的面 向公众 的 管理 ， 数字化 、 网络化建设也 已开始运转 。 但在读者服务方 面还是 图 信 息服务 ， 并且 通过网络 ， 图书馆馆藏资 源与服务可 以无 障碍地走 书借 阅 、 刊阅览及 电子 阅览 室的数字文献 、 网服务 。随着互联 向世界 ， 强社会效益 。读者 可以预先通过 电脑输 入书名 、 期 上 增 作者姓 Ｓ Ｎ号等多种途径查询所需 的图 网、 手机移号、图书的 ＴＢ 通 然后进 入书库 中取书 ； 还可以通过网络查询多个馆的馆藏情况 ， 过互联网终端、 手机获得大量信息， 对图书馆的需求度大为下降。 例 书 ， 如图书馆的装帧精美字词典 已经成 了摆设 ， 人们 已经 习惯在 随身 电 直接在 网上进行预借 、 续借 和享受数 字图书馆 的全套 服务 ， 轻松地 建立个人 图书馆 、 联网 、 将所需资料下载到 自己的硬 盘上 ， 手机看 电影 、 看小说等愈来愈普及。 来图书馆的读者也愈来愈少 。 通 建立特色服务。有学者将图书馆特色服务定义为“ 以某种特 凡 某种 ＇Ｊ －ｌ ］￣ 过我们来图书馆读 者的分析统计 ， 借阅现代小说类和上 网的读者最 色藏书， 特色服务内容和某一特定读者群为专 Ｉ ／ 务对象 的服 多 ， 阅与 自已专业相关书籍的也不多 ， 网看 数字图书几乎没有 。 务就是特色服务” 这一定义准确地概括了图书馆特色服务 的内涵 、 借 上 。 因此 ， 图书馆在 全球 网络化 、 信息化 的大 环境 下 ， 图书馆 的功 能、 信 特征与服务对象 ， 从概念上将图书馆特色服务 与图书馆传统常规服 息用户的需求特征等都将发生 了很大 的变化 。读者 获取 知识 、 信息 务予以区分。图书馆特色服务通 常有 三种 表现形式 ： 第一， 以特色 是 之 目的， 以及获取渠道与要求等也与以往有很大 的不 同。以及读者 馆藏为基础而提供的特色服务。由于地域 、 历史及特定 的历史 文化 服务的个性化 ， 都要求图书馆进行服务创新 。 背景等原 因而形成 的特色馆藏 资源， 针对某一领域 的读者开展专 门 ２ 创 新 图书 馆 服 务 内容 化服务 。第二， 开展有别于传统 内容的具有特色的服务， 或运用新颖 ２１ ．服务理念创新 。经济学家约瑟夫 ・ 熊彼特于 １ １ ９ ２年首次提 的手段开展服务， 如视频点播 、 专家讲座 、 上门服务等 。第三， 针对某 出了“ 创新 ” 的概念 。 创新是指 以独特的方式综合 各种思想或在各种 特定读者群和 目标读者而定制 的个性化服务。 思想之 间建立起独特 的联 系的这样 一种能力 。能 激发创 造力的组 图书馆特色服务的特点 。 其一 ， 要有独特性。 独特性是相对 于图 织， 以不断地 开发出做事的新 方式 以及解决 问题 的新 办法。管理 书馆传 统服务 而言所表现 出来的特色 ，这些特色 可表现为 藏书结 可 创新 则是 指组织形成一创造性思想并将其转换为有用 的产 品、 服务 构 、 务内容 、 服 服务方式， 也可表现为针对特殊群体 的特殊 服务 。强 或作业方法的过程 。 创新必须在 以人为本思想指 导下对管理 中存在 调独特性并非刻意追求标新立异 ， 蹊径， 独辟 而是要 以需求作为 出发 的问题进行改革 。高校 图书馆 目前存在 的问题 很多， 最为关键 的 点， 但 以特色满足需求。其二 ， 要有针对性 。特色服务必须具有针对性， 是管理的封闭性 以及基础建设和人才缺乏 。 这主要是 由于各高职院 重点针对服务 对象 而展开 。 如根据辖 区丰富的旅游资源而设立旅游 校在图书馆管理上缺乏有效 的协调， 自为政 的分散 型管理使得宏 图书馆， 区域人才济济的优势开办专家论坛等。其三 ， 各 利用 要有创新 观规划 、 管理 、 调控 的能力丧失， 加之严格的行政监控使 图书馆缺乏 性。从某 种意义上来说， 色服务是在传统服务基础上 的创新 。 特 必要的管理 自主权 ， 活性 、 其灵 积极性 、 创新性都受 到限制， 图书馆管 ２ ． ３增加图书馆创新服务 。高职院校是培养高素质高技能 的实 理模 式趋 于僵化 。 先进 的服务理念是公共 图书馆服务创新 的思想基 用人才为 目地 ， 也是 高等职业教育体 现办学特色 、 把握教育 属性 的 础。应从传统 图书馆服务观念的禁锢 中走 出来 ， 确立新时期图书馆 重要 任务 。针对当前“ 高素质 、 高技能 ” 才培育 的实践， 人 高等职业院 服务的新 理念 。 一是 以人 为本理念 。 就是要 以读者为本 ， 把满足读者 校 图书馆应 当从 教育教学观念 转变 、 文教育专业渗透 、 师职业 人 教
有菌条件下月季组织培养技术
加热 （ 因加 热蒸 发加 入母液 后到分 装时煮 沸刚好 是定 容要 求
的 １１０ Ｌ 冷却 后就 是 １ ， ０ ， ｍ 故配 １ Ｌ Ｌ培养 基量 取 １ Ｌ自来
水 ） 称 取 白糖 ３ 、 脂 ４ｇ 加 入 电饭 煲 锅水 中 ， 全 部 溶 ， ０ｇ 琼 ， 待 解 ， 加 入 １ ０倍 ＭＳ母 液 （ 中 ： 量 元 素 Ａ １ 大 量 再 ０ 其 大 ０ｍＬ、
瓶 中 水 ， 倒 入 自来 水 冲洗 １ 。 出 并滤 干 瓶 中 自来水 ， 再 次 倒
诱 导萌 芽培 养基 ： ＋ Ａ ０５ １ ＃Ｌ Ｓ ０ ＭＳ Ｂ ．～ ． ｍ ＋ １６杀 菌剂 ０３ ０ ．
ｍＵＬ 增殖 培养 基 ： ＋ Ａ １ ２ｍｇ ＋ Ａ ．～ ． ／＋ １６ ： ＭＳ Ｂ ￣ ／ Ｎ Ａ０１０２ｍｇＬ Ｓ ０ Ｌ 杀 菌 剂 ０３ｍＬＬ： 根 培 养基 ： ／ ＋ Ａ ．￣ ． ｒｇＬ ． ， 生 １２ＭＳ Ｎ Ａ ０ １ ０２ａ ／ ＋ Ｉ Ａ １ ／ （ Ｎ Ａ ０５ｍｇＬ ＋ １ ６杀菌 剂 ０３Ｉ【 。 Ａ ． ｍｇＬ 或 Ａ ． ， ） Ｓ ０ ０ － ｎ儿
冲洗 至 无泡沫 为止 。
普 及 月季名 优 新 特 品种 将 起 到重 要 的作 用 。 月季 常 规 组 培
技 术 报 道很 多 ， 但在 有 菌 环境 条 件 下 的 月季 组织 培 养 技 术 未 见报 道 。 １ 培 养基 组成
倒去 自来 水 ， 茎段 转移 到 一个 经 Ｓ ０ 把 １５杀 菌液 处理 过 的瓶 中 ， 入 ７ ％酒 精 浸 泡 ８ １ ， 入 自来 水 ， 即倒 出 倒 ５ ～ ０Ｓ倒 立
中图分 类号 ￥ ８ ．２ ６ ５１ 文献 标识 码 Ｂ 文章编 号 １０ — ７ ９ ２ １ ０ — ２ ６ ０ ０ ７ ５ ３ （０ ２）８ ０ １— １
月季组织培养
有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等
植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
不同植物激素使用顺序和使用量
使用顺序 实验结果
先生长素， 有利于分裂但 后细胞分裂素 不分化 先细胞分裂素， 细胞既分裂也 分化 后生长素 同时使用 分化频率提高
生长素细胞 结果 分裂素比值 比值高时 促根分化， 抑芽形成 比值低时 促芽分化， 抑根形成 比值适中 促进愈伤组 织生长
3 .培养基
• 用于月季的基本培养基种类很多，如 B5、N6、WPM和 MS 培养基等。众多培养基中以 MS 培养 基的效果为最好，广泛用于月季的离体快速繁殖中。培养基的培养成分（主要是各类无机盐浓度） 及物理性能（pH 值、糖分以及固化支持物）会影响月季的组培。对 MS 培养基的成分及物理性能 进行合理的选择会提高月季组织培养的成功率。 MS 培养基中无机盐离子浓度因月季培养阶段的不同而有不同： 1）茎段培养阶段，将带有腋芽的嫩茎接种到不添加任何激素类物质的 MS 和 1/2MS 培养基上，两 周后，MS 培养基上的腋芽生长，而在 1/2MS 培养基上的腋芽几乎不萌发或发育不良。通过提高 MS 培养基中氯化钴的浓度，并用硫酸铵代替硝酸铵培养“Bulgarian rose”，可使其茎的生长状况 得到改善。同时有报道认为在 MS 培养基中添加硝酸银可以缓解叶片衰败并提高茎段侧芽的生长。 2）诱导生根阶段，一般要求较低的 MS 培养基无机盐离子浓度。Skirvin 等在用（Forever Yours ）月季做生根试验时发现，采用1/4MS 培养基，不加生长素即可以促进生根。
外植体消毒
接种
冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌 水冲洗至少三次之上
培
养
栽
培
移
栽
3个传统月季品种的组织培养研究
１ 材 料 与 方 法
以中 国传 统 月 季 品种 “ 品朱 衣 ” “ 香 红 ” 一 、软 及
“ 水绿 波 ” 长 势 和 年 龄 相 近 的带 单 芽 茎 段 为外 植 春 生 体 。流水 冲 洗 １ｈ后 ， 入 已 灭 菌 的 三 角 瓶 内。 用 转 ７ ％ 酒精 浸泡 灭 菌 ６～ ｉ， 不 断轻 轻 摇 晃 。再用 ５ ８ｍｎ 并 无 菌水 冲 洗 ３遍 ， 种 到 培 养 基 中 ， 瓶 ５段 。３周 接 每 后， 再将 健壮 程度 较 为 一致 的芽 切 下 ， 离 ， 掉 枯 萎 分 去 叶 片 ， 入增值 培养 基 （ ＭＳ培 养基 配方 的基 础 上 ， 转 在 添加 激素 的种 类及 浓度 见表 １ 。每瓶 接 种 ３个 单芽 。 ） 每 个配方 接种 ８瓶 ， 复 ３次 。３周 后 ， 重 观察 并 记 录 芽 的增 值 系数 、 高度 、 长势等 。培养室 的温 度为 ２ 生 ０℃ ，
缩 ； ： 片 颜 色 绿 ， 面 积 较 大 ， 问发 育 正 常 ； ２级 叶 叶 节 ３ 级： 叶片颜 色浓 绿 ， 间粗 壮 。 （ 体 生 长势 级 别 的 划 节 具
分见 图 １ 。 ）
表 １ 传统月季 品种不定芽增值培养基配方表
品朱衣”、春 水绿波” 软 香红” “ 及“ 的腋 芽增值诱 导的影响 。结
所示 。
通讯作者 ： 张启翔 ， 教授 ， 主要研究 方向为 园林植物 生物技 术与遗 传育
种 ： 。 ｉ： ｑ＠ ｂｆ．ｄ ． ｎ Ｅｍａ ｚｘ ｊ ｅｕ ｃ 。 ｌ ｕ
・
方差 分析 （ ３ 表 明 ， 表 ） 在不定 芽 的增值 系数 、 高度
丰花月季‘美神’组织培养研究
关键词 ： 丰花 月季 ； 茎段培养 ； Ａ ＮＡ
’
中图分类号 ： ８ ． ２ 文献标识码 ： 文 章编号 ：０ １ ００ （０ ０ ０ －０ ４ － ０ Ｓ６ ５ １ Ａ １０ － ０ ９ ２ １ ）５ １３ ３ 月季是蔷薇科 蔷薇属木本 植物 ， 又名 四季 蔷薇 ， 原 产于 中国口 ， 近代风靡 世界 的名花 ， ］是 素有 “ 中皇后” 花 之美誉 ， 受 人 们 的喜 爱 ， 为 切 花 的 四大 支 柱 之 ］深 成
ｃｌ ｏ ａ，ｕｔａ ｏ ｉ ｅ ｈ ｄ ｗａ ｏ ｎｄ ｔ ｅｓ ｐ ｒｏ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉｅ ｆｅ ｚｎ －ｈ ｗｉ ｇ ｍ ｅｈ ｄ Ｔｈ ｌｒ ｓ ｎｃ ｔｏ ｏｎ ｉｉｎ ｌｒ ｓ ｎ ｃｍ ｔ ｏ ｓ ｆ ｕ ｏ ｂ ｕ ｅ ｉｒ ｔ ｅ ｅｉ ｖ ｒ ｅ ｉ ｇ ｔ ａ ｎ ｔ ｏ ． ｔ ｅ ｕｔａ ｏ ｉａ ｉｎ ｃ ｄ ｔ ｓ ｏ
选 自湛江师 范 学 院植物 园 内当年生 丰 花月 季 ‘ 美
神 ’ 壮 优 良母 株 上 未 开 花 枝 条 。 健 １ ２ 试 验 方 法 ．
１ ２ １ 不 同茎段 腋 芽诱 导 ．．
将 选 取 的外 植 体剪 去 叶
片 、叶柄 ， 自来 水冲洗 干净 ， 用 将其剪成 ３段 ： 顶端 １ ～
ｃ ｍｐ ｉｅ ｕｔａ ｏ ｉ ｆ３ Ｓ ｎ ｅ ｖ ｌｏ ，ｆｅ ｕ ｎ ｙ ｏ ９ ｔｍｅ ，ｐ ｗｅ ｆ５ ０ Ｗ ，ａ ｄ ｔｅ ｔｄ ｔ ｃ ． Ｔ ，ｅ ｔａ ｐ ｏ ｏ ｒｓ ｌｒ ｓ ｎｃ ｏ ，ｉ ｔｒ ａ ｆ２ Ｓ ｒ ｑ ｅ ｃ ｆ９ ｉ ｓ ｏ ｒｏ ０ ｎ ｒ ａ ｅ ｗｉｅ ｃ ｑ ｅ ｐ ｒ — ｐ ｉｔ ｔ ｏ ｓｆ ｒｅ ｔａ ｔｎ ｎ ｍｉ ｒａ ｅｍｅ ｈ ｄ ｏ ｘ ｒ ｃｉ ｇｇｅ ｏ ｃＤＮＡ ，ｗｅｃ ｍｐ ｒ ｄ ｂ ｎ ｙ ｈ ｏ ｉｅｍｅ ｈ ｄ，ｌ ｕｄ ｎ ｔｏ ｅ ｅｒｇｅ：’ ａ ｄ ｇ ａ ｓ ｏ ａ ｅ ｅ ｚ ｌｃ ｌｒｄ ｔ ｏ ｉ ｉ ｉｒ ｇ ｎｒ ｆｉ ｒ ｍ ｎ ｌｓ ｑ
月季“卡罗拉”组培快繁研究
养技术研究 ， 以期建 立该 品种快繁体系 ， 同时为完善月 季组培快繁技术
１ 材 料 ． １
以上所 有培养 基均添加 ３ｇ￣蔗糖 ，ｇＬ ｏ／ ６， 琼脂 ，Ｈ ｐ 值调 至 ５ 左 右 。 有瓶苗在培养室 中培养 ， ． ８ 所 培养条件
不易成活 。朱鹿 鸣 ４ 认为具根 原基的试管苗 比根系 已长 出的试管苗移栽成活率高 ，并且耐贮藏 ，不易烂 苗， 相关机理有待进一步研究 。 本研 究初步建立 月季 “ 罗拉” 培快繁体 系 ， 卡 组 为
大规模推广应用该 品种提供 了基础 。江西省近年来大 量 引进名优月季 品种 ， 但一直未建立相应 的快繁体 系 ，
目套用 。
到添加不 同浓 度 的 Ｎ Ａ或 ＩＡ的 １ ＭＳ培养基 中进 Ａ Ｂ ／ ２
行生根 培养 。结果 发现 ， １ Ｍ ＋ Ａ ０１ ０ ｍ ｍ） 在 ／ Ｓ Ｎ Ａ（． ． ｇ ２ —６
的培养 基 中培养 的植 株基部 均产生许 多愈 伤组织 ， 培 养 １ｄ后才有部分植株在愈伤组织周 围长 出根 ，根短 ７
在试验 的 Ｂ Ａ浓度 范 围内，嫩芽 的增殖倍 数开始 随着 Ｂ Ａ浓度 的增加而增加 ， Ｂ 当 Ａ达 １ ｍ ／ ． ｇ ５ Ｌ后增殖
倍数无 明显变化 。 在相同浓度的 Ｂ Ａ条件下 ， Ａ Ｎ Ａ浓度 对增殖倍数影 响不大 ， 响增殖苗长 势。 但影 从增殖倍数 和 增 殖 苗 长 势等 综 合 因素 看 ， ＋ Ａ ２ ｍ ／＋ Ａ ＭＳ Ｂ ． ｇ Ｎ Ａ ０ Ｌ
２３ 生根 培 养 ．
２ ． 同激 素浓度对生根 的影响 。 ． １不 ３ 将月季 幼嫩植 株接
体上看 ，本研究结 果与其 它月季组织培养研究 在某些 结果方面具有一定 的差异 ，这可能与其基因型差异有 关 】 。在进行 其它 品种月季组 培快 繁时 ， 进行 培养基 及各种激素 的适宜浓度配 比的探讨是必要 的，不能盲
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月季组织培养技术研究摘要：以MS为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素（6-BA）和生长素(NAA)，以及用不同外植体部位筛选出最适合月季腋芽萌发的培养基和最佳外植体部位。
实验结果表明：诱导侧芽萌发以MS+6-BA2.0mg/L培养基效果最好，外植体部位以中部枝条发芽率最佳,为80%。
关键词：月季；组织培养；快速繁殖Abstract: Use MS as basic medium ,with different concentration of cytokinin and auxin,and use different part of the stem as explant for tissue culture to select the suitable mediumand best explants site for the induction of Rosa chinensis. The results showed that MS +6BA2.0mg / L is the suitable medium for bud germination, and the middle part of the stem isthe best explant.Keywords: Rosa chinensis, tissue culture, rapid propagation月季（Rosa chinensis）是蔷薇科落叶或半长绿灌木，其花色艳丽、香味浓郁，是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。
由于其分布极广、适应性良好、栽培容易等优点，加之月季四季常青、花期长、花色多等特点，使得在园林和路带绿化以及庭院居室的盆栽美化和切花等方面都得到广泛的应用。
月季在观赏植物中具有很高的地位。
月季花型大、美丽、幽雅、高贵，深爱各国人民喜爱，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。
被誉为“花中皇后”之美称，深受人们喜爱。
月季通常采用扦插和嫁接繁殖，一些名贵品种扦插不易生根，主要是靠芽接繁殖[1]。
而芽接速度慢，因而造成优良品种苗木供不应求。
应用组织培养技术可以大大缩短其增殖周期，达到快速繁殖优良品种的目的。
近年来随着生物技术的不断发展与更新，用植物组织培养的方法快速繁殖各种花木技术得到了普遍重视和广泛应用，关于月季的离体培养、根诱导及移栽问题，以有了不少报道[1、2、8、9、10]。
由于受基因影响，不同品种之间的组织培养特性表现出一定的差异[2]。
因此讨论不同品种组培快繁的培养条件，特别是培养基中适宜的不同激素配比仍具有重要价值，另外选择适合接种的外植体不同部位也会影响其发芽率。
本实验以月月红月季品种为材料进行了侧芽的诱导和筛选出适合月季组织培养最佳外植体部位的组织培养特性研究，试图找出适合月季品种的组培快繁的最佳激素配比的培养基和最适合培养的外植体部位。
1 材料与方法1.1 实验材料及采样地生境条件1.1.1 实验材料供试材料取自都江堰市中国科学院华西亚高山植物园月月红月季当年生无花蕾嫩茎。
1.1.2 采样地生境条件采样地位于成都平原与川西北山地之间，地理坐标：东经103°，北纬31°，海拔700 m左右，为浅切割低山地貌类型。
土壤为黄壤，质地为重壤质，PH值4.5～5.5，由于多雨，在沉积层与母质层之间有明显潜育现象，土壤肥力中等，保肥保水性好。
采样地属于亚热带气候类型，年平均气温15.2 ℃，极端最高、最底温度分别为38 ℃和～-10 ℃，年平均相对湿度81%，年平均降雨量1243 mm，无霜期269 d。
1.2 技术路线培养基的配制→培养基灭菌→外植体采集→外植体预处理→外植体表面灭菌→外植体接种→培养→试验结果统计与分析1.3 实验仪器与试剂仪器用品：高压灭菌锅、超净工作台、试管、电子天平、烧杯、微波炉、酒精灯、镊子试剂：75%酒精、琼脂、蔗糖、蒸馏水、6-BA、MS储备液、NAA1.4 培养基配方表1 培养基中6-BA和NAA的组成及配比处理号 6-BA NAA(mg/L) (mg/L)A1 2.0 ---A2 2.5 ---A3 2.0 0.1A4 2.0 0.51.5 培养基的配置称琼脂7.5 g→蒸溜水400～500mL →微波加热5 min →蔗糖30 g →微波加热5 min →大量元素母液→微量元素母液→有机物母液→铁盐母液→定容至1L →调pH至5.8～6.0 →分装→高温灭菌1.6 外植体采集与灭菌1.6.1 外植体采集在晴朗的清晨采集生长健壮，无病虫害母株上的当年生枝条。
1.6.2 外植体灭菌与接种采集回的外植体剪去顶部和基部并去叶，用洗衣粉水溶液轻轻洗涤30 min，自来水冲洗30 min后，用滤纸吸干，剪成约2 cm长带侧芽茎段。
在超净工作台上用70％的酒精消毒30 s，无菌水洗3次，再用0．1%升汞溶液消毒10 min，然后用无菌水冲洗5次，在无菌滤纸吸干后，将灭菌好的外植体接种于培养基上。
1.7 培养培养条件：培养温度25±1℃；光照强度1 800～2 000 1x；光照时间12 h／d。
1.8 数据统计培养30 d后统计外植体的污染率、发芽率。
污染率（%）=污染的外植体数/接种外植体总数×100发芽率（%）=发生芽的外植体数/无菌外植体总数×1002 结果与分析培养30 d后对6-BA、NAA浓度组合外植体的发芽率、污染率以及不同外植体部位的发芽率、污染率进行统计。
结果见表2、表3：表2 不同6-BA、NAA浓度组合外植体的发芽率、污染率处理号接种数(瓶) 培养基发芽率(%) 污染率(%)B1 20 MS+6-BA2.0mg/L 85 40B2 20 MS+6-BA2.5mg/L 30 20B3 20 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L 65 40B4 20 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L 40 352.1 6-BA浓度对外植体生长的影响从表2可见，处理号B1、B2中随着6-BA的浓度变化，相应的发芽率与污染率也随之发生了变化。
6-BA的浓度为2.0mg/L时发芽率为85%；6-BA浓度为2.5mg/L时发芽率为30%，。
这说明随着6-BA浓度的增高其发芽率下降，因为植物激素对外植体的生理作用与其使用浓度密切相关，浓度过高或过低都不能有效的诱导芽的萌发。
2.0mg/L是6-BA诱导月季芽萌发的适宜浓度。
2.2 6-BA与NAA组合对外植体生长的影响从表2中可见，处理号B3、B4中6-BA与NAA组合随着NAA浓度的增加其发芽率也随着增高， 6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L时，发芽率为65%；当6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L时，其发芽率为40%。
这说明给培养基中加入适量的NAA对外植体的萌发、生长有一定的促进作用。
因为外植体腋芽的萌发并不只是要求较高的细胞分裂素，而是要求在体内建立一个适宜的细胞分裂素与生长素的平衡[5]。
所以培养基要求有一定的细胞分裂素与生长素的配比。
从表2可以看出，6-BA2.0mg/L时的发芽率为85%，6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L时的发芽率为65%。
因此单独使用6-BA的发芽率效果比6-BA与NAA组合的培养基效果要好得多，说明了生长素浓度较高时抑制了细胞分裂，从而降低了形成芽细胞的生理活性，使某些芽的萌发受到了明显的抑制[4、6 ]。
实验得出最适合月季诱导侧芽萌发的培养基为：MS+6-BA2.0mg/L。
表3 不同部位外植体的发芽率、污染率外植体部位接种数发芽率污染率(个) (%) (%)茎段上部 10 40 50茎段中部 10 80 50茎段基部 10 50 602.3 不同外植体部位对发芽率的影响从表3可见，中部茎段外植体发芽率最好，为80%；这有可能是枝条中部较之上部和基部，营养状况好，营养物质积累丰富，外植体的生活力强，萌发力强，所以其发芽率就很高。
而上部枝条由于枝条幼嫩，营养物质积累有限，且本身的失水快，所以其萌芽率就会下降。
茎段下部由于木质化程度较高，所以发芽率比较低。
2.4 月季组织培养中的污染从实验结果可以看出，外植体平均污染率为42.2%。
本次试验中造成污染率过高的原因很多，（1）操作员出入多，造成接种室环境杂菌含量过高；（2）接种时，接种工具灭菌不彻底，操作没有严格按照要求进行；（3）接种人员操作熟练程度不够；（4）外植体消毒处理不完善等等。
3 结论（1）以月月红月季为品种，诱导侧芽萌发最适培养基为：MS+6-BA2.0mg/L。
发芽率为85%。
在培养基中加入一定量的NAA时，发芽率明显下降。
（2）以月月红月季为品种，实验筛选出最适外植体部位为：茎段中部，发芽率为80%。
4 讨论4.1 最适6-BA浓度的进一步筛选实验结果表明，诱导侧芽萌发的最佳培养基为：MS+6-BA2.0mg/L。
当6-BA的浓度增加到2.5mg/L时，外植体发芽率明显下降，因此6-BA浓度不可继续增加；如果将6-BA的浓度降低到2.0mg/L以下，较低的6-BA浓度对外植体的发芽率的影响有待进一步研究。
4.2 NAA的浓度对芽萌发的影响作用从实验中可看出，6-BA与NAA组合的培养基是随着NAA浓度的升高，发芽率也随着增高。
当培养基为：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L，发芽率为65%。
培养基为：MS+6-BA2.0m g/L+NAA0.1mg/L，发芽率为40%。
进一步试验中可将NAA浓度继续升高，以确定NAA的浓度对芽萌发会有影响。
生长素的作用主要是促进细胞伸长和细胞分裂，诱导受伤的组织表面至数层细胞恢复分裂能力，形成愈伤组织，促进生根等，因此过高或过低的生长素都会抑制芽的萌发。
在培养基配制中适量的生长素浓度对芽的萌发有促进作用[3]。
4.3 月季组织培养中污染的控制针对此次月季组织培养实验污染率较高的问题，为完善月季组织培养技术，对常见的污染采取一些必要的控制措施。
(1)经常对接种室进行空间消毒；(2)对超净工作台仔细灭菌；(3) 工具用后及时灭菌，避免交叉污染； (4) 进一步筛选外植体材料灭菌的适宜方法；（5）接种人员加强培训，提高操作的熟练程度和规范程度；（6）培养过程中及时去除污染瓶。
一旦发现培养瓶内有污染产生，应立即采取合适的方法进行处理，如用高压蒸气灭菌。
本试验只是对月月红这一品种进行的研究，总体上看与他人关于月季的组织培养研究在某些结果方面具有一致性，但也有一定的差异[7]，这可能与其基因型差异有关，还需进一步研究。
因此在进行其它品种月季组培快繁时，进行培养基及各种激素的适宜浓度配比的探讨和筛选最佳外植体是必要的，不能盲目套用。
对实验中出现新问题进行更深入的科学研究，对完善月季组织培养技术有着重要的科学意义。