分子生物学实验项目三
分子生物学实验技术全攻略
分子生物学实验技术目录实验一细菌的培养 2实验二质粒DNA的提取 3实验三紫外吸收法测定核酸浓度与纯度 4实验四水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 5实验五质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 7实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 8实验七聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA 9实验八 RNA提取与纯化 11实验九 RT-PCR扩增目的基因cDNA 13实验十质粒载体和外源DNA的连接反应 15实验十一感受态细胞的制备及转化 16实验十二克隆的筛选和快速鉴定 18实验十三 DNA分析——Southern杂交 19一基本操作实验一、细菌培养实验二、质粒DNA提取实验三、紫外吸收法测定核酸浓度与纯度实验四、水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA实验五、质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定实验六、植物基因组DNA提取、定量、酶切及电泳分析实验八、植物RNA提取及纯化二、目的基因获取实验七、聚合酶链式反应（PCR）技术体外扩增DNA实验九、RT-PCR扩增目的基因cDNA三、目的基因的克隆和表达实验十、质粒载体和外源DNA的连接反应实验十一、感受态细胞的制备及转化实验十二、克隆的筛选和快速鉴定实验十三、DNA分析——Southern杂交实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。
二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。
特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。
它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。
当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。
然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。
分子生物学实验报告
分子生物学实验报告分子生物学实验报告引言分子生物学是一门研究生物大分子结构、功能和相互作用的学科，通过实验手段揭示生命现象的分子机理。
本实验旨在探究DNA复制过程中的关键步骤，以及RNA转录和蛋白质翻译的基本原理。
实验一：DNA复制DNA复制是细胞分裂过程中必不可少的步骤，它保证了遗传信息的传递和维持。
本实验通过模拟DNA复制过程，研究DNA复制酶的作用和复制的准确性。
材料：- DNA模板- DNA聚合酶- 引物- dNTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、DNA聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察DNA复制产物。
结果：通过凝胶电泳分析，我们观察到DNA复制产物的出现。
这表明DNA聚合酶能够在模板DNA上合成新的DNA链，并且复制的过程较为准确。
讨论：DNA复制的准确性是生命传递遗传信息的基础。
DNA聚合酶具有校正功能，能够识别和修复错误的碱基配对。
这种精确性保证了基因组的稳定性和可靠性。
实验二：RNA转录RNA转录是将DNA信息转录成RNA的过程，它是基因表达的第一步。
本实验旨在研究RNA转录的机制和调控。
材料：- DNA模板- RNA聚合酶- 引物- NTPs- 缓冲液方法：1. 准备反应体系，包括DNA模板、RNA聚合酶、引物、NTPs和缓冲液。
2. 在适当的温度下，将反应体系放入PCR仪中进行反应。
3. 取样并进行凝胶电泳分析，观察转录产物。
结果：凝胶电泳分析显示出RNA转录产物的出现。
这表明RNA聚合酶能够在DNA模板上合成RNA链。
讨论：RNA转录是基因表达的第一步，它决定了细胞内特定基因的表达水平。
RNA聚合酶通过与DNA模板的互作用，选择性地合成特定的RNA链。
这种选择性转录是基因调控的关键。
实验三：蛋白质翻译蛋白质翻译是将RNA信息翻译成蛋白质的过程，它是生物体内蛋白质合成的关键步骤。
常见分子生物学实验方法 ppt课件3篇
常见分子生物学实验方法 ppt课件1. 基因克隆实验方法基因克隆是指将一个或多个基因从一个生物体中分离出来，置于另外一个生物体中，并且使其在新宿主中表达，从而获得大量的目标基因产物。
（1）限制酶切割法：将质粒和目标基因使用限制酶切割，得到可互相配对的切口。
将它们接合形成重组质粒，转化至大肠杆菌中进行筛选。
（2）聚合酶链式反应（PCR）：利用DNA聚合酶在一定温度下对DNA模板进行扩增、重复，PCR可使目标DNA扩增数千倍，成为细胞操作或其他实验的良好基础。
（3）DNA定向克隆：利用DNA复制的属性和DNA酶的活性，通过向目标DNA的特定区域加入赋予重组性的核酸片段向目的基因主导特定区域，达到目标的DNA定向克隆效果。
2. mRNA分析实验方法mRNA分析是分析mRNA信使分子的性质、结构、功能等方面的实验方法。
（1）Northern印迹：通过RNA电泳的方式分离RNA，将RNA转移至硝酸纤维素膜，并与适当的标记DNA进行杂交，利用核酸杂交进行检测和鉴定。
（2）RT-PCR（即逆转录PCR）：将mRNA逆转录，合成cDNA，然后通过PCR技术进行扩增，是检测mRNA表达量的常用手段。
（3）荧光原位杂交（FISH）：将荧光探针与特定控制序列杂交，可以在组织或细胞水平发现目标mRNA的位置和表达情况，可得到细胞表达局部和过程的信息。
3. 蛋白质表达实验方法蛋白质表达是分析分离和检测目标蛋白质的方法。
（1）重组蛋白质表达：在大肠杆菌或哺乳动物细胞中表达重组蛋白质，为研究蛋白质的结构和功能提供重要材料。
（2）GST标签蛋白质表达：将GST蛋白质与目的蛋白质融合，通过分离纯化GST标签蛋白质，可同时分离纯化目的蛋白质，比其他表达和纯化蛋白质的方法更高效。
（3）蛋白质印迹（western blot）：将分离出来的蛋白质转移到聚丙烯酰胺凝胶并与特定抗体结合，从而检测蛋白质的表达水平和效率等信息。
以上是分子生物学实验方法的三个方面，从基因水平到蛋白质水平进行了简单的介绍。
分子生物学实验技术3篇
分子生物学实验技术
第一篇：PCR技术
PCR（聚合酶链反应）是一种基于体外体内 DNA 复制的技术。
PCR 技术广泛应用于分子生物学、生物医学研究、医学诊断、生物技术等领域。
在 PCR 中，核酸模板、引物、聚合酶和反应缓冲液是必不可少的组成部分。
PCR 引物是在特定位置的 DNA 片段，用于诱导聚合酶模板 DNA 的扩增。
聚合酶通过催化模板 DNA 在 DNA 引物的引导下合成相应的 DNA 片段，产生大量的重复 DNA 片段。
PCR 是一种快速、高效、灵敏的 DNA 分析技术，可以对非常小的样本进行扩增。
PCR 的操作流程如下：
1．取得合适的 DNA 样品。
2．准备 PCR 反应体系，包括 PCR 反应缓冲液、聚合酶、DNA 模板和引物。
3．用 PCR 机进行程序设定和反应。
4．检查 PCR 反应产物，包括 PCR 产物的带型和验证PCR 产物的特异性和纯度等。
PCR 的应用
1．DNA 序列鉴定以及 DNA 序列变异检测。
2．基因表达分析、基因定量、等位基因分析等基因功能研究操作。
3．分子诊断，可以根据染色体、基因、蛋白质等材料进行分析。
4．农业和畜牧业生物工程的研究。
优点：
PCR 反应时间逐渐缩短，灵敏度高，重现性好，稳定性强。
PCR 技术可以在非常小范围内进行 DNA 分析，并可以处理复杂的实验体系。
缺点：
PCR 技术还有一些局限性，比如需要合理设计引物，需要准确的温度控制，需要恰当的试剂，且对样品的纯度和净化度有严格的要求。
分子生物学实验3篇
分子生物学实验第一篇：PCR技术在分子生物学中的应用PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项广泛应用的技术，被用于DNA的扩增和检测。
PCR技术已经成为了分子生物学和生物医学研究的基础技术之一。
PCR技术被广泛的应用于遗传学、人类学、医学研究、植物学和动物学研究等各领域。
PCR技术的基本原理是：通过提取DNA，将DNA特异性引物与模板DNA相结合，利用热稳定DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸为反应体系提供能量，使其在一定条件下循环扩增目标DNA片段。
通过PCR扩增后的DNA片段可以进行进一步的分析和检测。
PCR技术的扩增具有明显的优势，可同时扩增不同长度的DNA片段，扩增时间短，扩增的精度和重复性高，且所需的样本量小。
PCR技术在分子诊断、基因组学和分子系统学等领域的应用不断扩展和深化。
随着PCR技术的不断发展，PCR在分子生物学研究中的应用越来越广泛，成为分子生物学研究的重要工具。
第二篇：RNA干扰技术在分子生物学中的应用RNA干扰（RNAi）是分子生物学中一种重要的现象，其中小分子RNA片段通过RNAi途径参与靶基因的沉默和调节。
RNAi技术是人类基因功能研究中最具前途的一种技术之一。
RNA干扰技术的基本原理是通过利用RNAi分子的特异性配对功能，引导RNAi分子与靶基因mRNA相结合，导致mRNA的降解和翻译的抑制，实现对基因表达的调控。
RNA干扰技术在分子生物学研究中有广泛的应用，如：功能基因的筛选、基因表达调节、基因功能验证等。
RNA干扰技术具有多种优点，如高效性、特异性强、节约时间、资源和成本等方面的优势，逐步成为生命科学研究中的重要工具。
在研究过程中，RNA干扰技术常用于寻找分子病理学中新的治疗靶点，鉴定靶点基因和靶点蛋白，为新药物的开发和临床治疗提供了重要的理论和实验基础。
第三篇：基因克隆技术在分子生物学中的应用基因克隆技术始于20世纪70年代，是指将DNA分子导入到载体中，使其在细胞中进行表达的过程。
高中生物分子生物学实验设计与进行
高中生物分子生物学实验设计与进行1. 引言在高中生物学教学中，分子生物学是一个重要的科目。
通过实验进行有助于学生理解细胞与遗传的基本原理，并培养他们的实验设计能力和科学思维能力。
本文将介绍一些适合高中生的分子生物学实验设计并提供相应的操作步骤。
2. 实验一：DNA 提取与观察实验目的：通过提取食品样品中的DNA，并利用显微镜观察DNA结构，加深对DNA组成和功能的理解。
材料准备：•食品样品（如香蕉、洋葱）•细盐水溶液（浓度为0.9%）实验步骤：1.将食品样品切碎并置于试管中。
2.加入细盐水溶液，用棒搅拌均匀。
3.将混合溶液过滤，将滤液收集到另一个试管中。
4.加入冰醋酸混合液（醋酸与冰块混合）至满试管7/8位置。
5.缓慢倒入等量的冷乙醇，形成两层溶液。
6.观察上层溶液中的白色絮状物，即为提取到的DNA。
7.取少量上层溶液，加入显微镜片上，覆盖另一片玻璃片，用显微镜观察DNA的结构。
3. 实验二：凝胶电泳分析实验目的：通过凝胶电泳技术分析DNA样品的大小及数量，并加深对基因测序和DNA指纹等概念的理解。
材料准备：•水平电泳槽•凝胶板（如琼脂糖凝胶）•DNA样品（如PCR扩增产物）•DNA分子量标记物•缓冲液•电源实验步骤：1.准备好水平电泳槽和凝胶板，注入足够缓冲液。
2.在凝胶板上设置孔位，并在每个孔位中加入适量的DNA样品和DNA分子量标记物。
3.将盖板轻轻压在凝胶板上，确保样品进入凝胶孔中。
4.将凝胶板放入水平电泳槽中，连接电源。
5.设置电场强度和运行时间，开始凝胶电泳。
6.电泳结束后，将凝胶板取出，在紫外线照射下观察DNA条带的分布情况。
4. 实验三：PCR 反应与基因检测实验目的：通过PCR技术对特定基因进行扩增，并利用凝胶电泳进行基因检测，加深对基因检测方法的理解与应用意义。
材料准备：•PCR试剂盒（包括引物、酶、缓冲液等）•DNA样品•热循环仪•凝胶板和缓冲液实验步骤：1.准备好PCR试剂盒和所需DNA样品。
101分子生物学实验3重组质粒转化
实验重组质粒的转化实验原理：利用CaCl2处理感受态体细胞，然后通过热休克处理，即置于42℃高温热激90秒，热休克后，需要使受体细胞在不含有抗生素的培养液中生长至少半小时以上，使其表达足够的蛋白，以便能在含有抗生素的平板上生长菌落。
实验目的：学习外源DNA导入原核生物细胞的方法。
实验内容：化学转化法。
一、实验材料感受态细胞，重组质粒，LB培养基，抗生素AMP，质粒T+P。
二、主要设备微量移液器，微量离心管，台式离心机、恒温振荡摇床、恒温水浴锅、制冰机和记时器。
三、实验方法1. 制备含有Amp抗生素的LB平板。
2. 取一个1.5ml离心管，加入100μl感受态细胞悬液，置冰上：加入10ul质粒T＋G（提取的质粒DNA稀释500X），用移液器轻柔混匀。
冰上静置20min。
3. 42℃水浴中热激90秒，然后迅速置冰上3~5min。
整个过程不要振荡菌液。
4. 加入1ml LB液体培养基（不含抗生素），混匀后37℃振荡培养（180rpm）1小时，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因。
5. 取100ul菌液，至含有抗生素Amp的LB固体培养基上，涂布均匀。
7. 待菌液被培养基吸收后，37℃倒置培养12~16小时，菌落生长良好而又未互相重叠时，取出。
8.计算转化率统计每一个培养皿中的菌落数。
转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下：转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积；转化频率（转化子数/μg质粒DNA）=转化子总数/质粒DNA加入量（μg）；。
分子生物学实验室常见实验
分子生物学实验室常见实验1.基因克隆实验：基因克隆实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是将感兴趣的DNA序列克隆到重组DNA分子中。
这个实验通常包括DNA的摘取、PCR扩增、限制性内切酶的消化、连接载体、转化大肠杆菌等步骤。
2. 蛋白质表达实验：蛋白质表达实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是将感兴趣的蛋白质表达到大肠杆菌等宿主细胞中。
这个实验通常包括将感兴趣的基因克隆到表达载体中，表达载体转化至宿主细胞，利用诱导剂等物质诱导表达蛋白质等步骤。
3. PCR实验：PCR实验是一种基于酶催化反应的分子生物学实验。
该实验通过模板DNA、引物、酶及核苷酸等原料，经一系列温度变化，扩增目标DNA片段。
该实验通常用于基因克隆、DNA测序、点突变检测等领域。
4. DNA测序实验：DNA测序实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是确定DNA序列。
这个实验通常包括PCR扩增、DNA纯化、测序反应、数据分析等步骤。
5. RNA干扰实验：RNA干扰实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是利用RNA干扰技术抑制特定基因的表达。
这个实验通常包括制备siRNA、合成siRNA、转染细胞等步骤。
6. 蛋白质纯化实验：蛋白质纯化实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是将感兴趣的蛋白质从混合物中提纯出来。
这个实验通常包括细胞裂解、纯化、检测等步骤。
7. 荧光检测实验：荧光检测实验是一种常见的分子生物学实验，其目的是利用荧光分子标记分子或细胞等，观察其分布、表达及功能等。
这个实验通常包括荧光染色、荧光显微镜观察等步骤。
8. 基因编辑实验：基因编辑实验是一种新兴的分子生物学实验，其目的是通过基因编辑技术，直接改变DNA序列，从而实现对基因的修饰。
这个实验通常包括CRISPR/Cas9等基因编辑技术的设计、实现、检测等步骤。
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7） 向吸附柱ＣB3中加入７0０μL的漂洗液ＰW(用前已加入无水乙醇）,120００rpm(13,4０0хｇ）离心30秒，弃掉废液。
8) 向吸附柱CB3中加入500μL的漂洗液ＰＷ，１２00０ｒpm(１3，400хg)离心30秒,弃掉废液。
1、拟南芥基因组DＮＡ的提取
以野生型拟南芥(Aｒabidopsiｓ Ｃoluｍｂia)2周幼叶为材料（称取叶片约1０0毫克)，用ＴＩＡNＧEN基因组DNA提取试剂盒（Ｐlaｎt Genoｍic DNＡ Kｉｔ）(离心柱型）按以下步骤提取基因组ＤNＡ:
1) 取干净幼叶1０0mg,加入液氮充分研磨。
2) 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700μL65℃预热缓冲液ＧP１的离心管中(实验前在预热的ＧＰ1加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%）,迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴中20分钟，水浴过程中颠倒离心管以混合2000rpm(１３,４00хg)离心２分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。将吸附柱CＢ３置于室温或５０℃温箱放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
10） 将吸附柱ＣB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加5０-200μL经65-7０℃水浴预热的洗脱缓冲液TE，室温放置2-5分钟,1２000rpｍ(13,４00хg)离心30秒,将DNA溶液收集到离心管中。
用紫外分光光度计在230nｍ、260 nm、280 nm和３1０ nm上检测DNＡ样品的光吸收,通过吸收值计算DNA样品的浓度，并判断DNＡ样品的纯度。其中2６0 nm的读数用来估计样品中DNA的浓度，OD260/ ＯD280与OD2６0／ OＤ２3０的值用于估计DＮA的纯度,３1０ nm为背景吸收值。1OD260=5０μｇ/mL双链DNＡ或4０μg/mＬ单链DＮA。
7 加等体积氯仿,混匀，１200０r/ｍin离心５min，取上清。
８ 加入0.6-1倍体积的异丙醇（沉淀DNＡ）,混匀。
9 离心获得沉淀，加７0%乙醇洗涤3次，风干沉淀。
１0加入５00μLTE缓冲液,溶解DNA。
11取3mＬ上清液,琼脂糖凝胶电泳检测DNA的浓度和质量。
二 植物基因组DＮA提取试剂盒提取步骤
11陶瓷研钵
12 吸头、小指管
13 细胞提取液
１00mmol/L Triｓ．HＣｌ(PH 8.0)
５ mmol／Ｌ EDTA(ＰH ８．0)
5０0 ｍmｏl/L Nacl
１.２5% SDS
1mｍol/Ｌ β-巯基乙醇
14 5mol/L ＫCｌ
15 TE缓冲液
10 ｍmoｌ/L Ｔriｓ.HCl(PH 8．0)
3) 加入700μＬ氯仿，充分混匀，1２00０rpm(13,4０0хg)离心５分钟。
4） 小心的将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中,加入700μＬ的缓冲液GP2，充分混匀。
5) 将混匀的液体转入吸附柱CＢ3中，1２00０rpｍ(13,400хg)离心30秒，弃掉废液。（吸附柱容积为7００μL左右，可分次加入离心)。
样品浓度（μｇ/mL）=[ ＯD2６0- OＤ3１0]×稀释倍数×50
对于ＤＮA纯制品,其 ＯD２60/ OD280≈1.8,OD2６0／ OD230应大于2。OD2６０/ OD280>1．8说明有RNA污染;OＤ２60／ OＤ280<1.8说明有蛋白污染。
2）用琼脂糖凝胶电泳检测核DNA的完整性时，完整性好的基因组DNA应是一条较为清晰单一的电泳条带,若降解则成弥散状。若ＲＮＡ未除净,会在电泳前缘出现斑点。
2 将研磨好的粉末转移至５０ｍL的离心管中，加入１6mL细胞提取液，充分混匀，65℃水浴保温２０ｍｉn。
3 从水浴中取出离心管,加入5mL5ｍｏｌ/L的KCl溶液，混匀,冰浴20mｉn。
4 ４000ｒ/ｍｉn离心２0min。
5 降上清液转移到另一50mL的离心管中。
６ 加等体积的酚/氯仿混匀，１2000 r/ｍiｎ离心5min,取上清。
分子生物学实验项目三
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实验三 植物基因组DNＡ的提取
实验目的
通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法。
实验原理
利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。细胞提取液中含有SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜,使蛋白质变性而沉淀下来。EＤTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白,得到的DNＡ溶液经乙醇沉淀。
1mｍol/L EDTＡ(ＰH 8．0)
16 哥伦比亚野生型拟南芥(Arabidopsｉs Coｌumbia)三周幼叶。
17TIANGEＮ基因组DNＡ提取试剂盒（Plant Genｏmic DNA Kiｔ)(离心柱型）。
实验步骤
一、 自配试剂提取步骤
1 取4g新鲜叶片，在液氮中充分研磨成粉末状(越细越好）。
仪器、材料与试剂
(一）仪器
１低温离心机
２ 恒温水浴锅
3 台式离心机
4 琼脂糖凝胶电泳系统
5 微量加样器
(二）材料与试剂
1 三羟甲基氨基甲烷（Ｔris)
2 乙二胺四乙酸（EＤTＡ)
3 氯化钠(Ｎacl）
4 β-巯基乙醇
5 氯化钾(KCl）
6 异丙醇
7 乙醇
8 琼脂糖
9 十二烷基硫酸钠（SＤS）
10 ５0mL离心管
11) 离心得到的溶液再加入吸附柱ＣB３中，室温放置２分钟，１２0００rｐm（13,４00хg)离心２分钟。
（注意:洗脱缓冲液的体积不应小于50μL,体积过小影响回收效率。且DＮA产物应保存在-２0℃，以防DNA降解）。
2、 实验结果
提取得到的ＤNA应为一条带。
3、实验结果分析
１)DNA浓度及纯度检测
3)如果DNＡ沉淀呈白色透明状而且溶解后成粘稠状,说明DNA含有较多的多糖类物质，可在取材前将植物放在暗处24小时，以达到去除淀粉的目的。
4）DNA沉淀成棕色,难以酶切
植物材料中含有大量酚类化合物，与DＮA共价结合,使ＤNＡ呈棕色,并抑制DNA酶的酶解反应。为防止此情况出现,可在加入2×CTAB的同时加入2-5%的β-巯基乙醇,或者加入亚精胺(１0０μLDNA加入５μＬ０．１mol/L的亚精胺)。