分子生物学实验报告(模板)

分子生物学

实验报告

200X级生物XX专业XX班

实验X组

组长: XX 22200731724XX

组员: XX 222007317242XX

XX 222007317242XX

XX 222007317242XX

XX 222007317242XX

XXX年X月

从基因组中获得甘薯ADK基因

XX,XX,XX,XX,XX

(西南大学,生命科学学院,重庆400715)

摘要：从甘薯的新品种渝苏303中提取基因组DNA。先以此DNA片段为模板使用

PCR技术在体外扩增扩增获得 adk 基因核心片段，再扩增目的基因片段通过琼

脂糖凝胶电泳并回收，在16℃与T载体连接30min以上用于转化DH5α感受态。

-----------。

关键词：甘薯；PCR技术；基因克隆；转化

To Obtained the ADK gene from the genome of sweet potato Xiong Chun-Qing, Zhang Li, Huang Jia, Jiang Yue, Li Wen (College of Life Sciences,Southwest University,Chongqing 400715) Abstract: The new varieties of sweet potato, 303 Yusu extracted genomic DNA.

Adenylate kinase gene of potato extract (ADK) and antisense expression vector

construct. To make use of this DNA fragment amplified by PCR, in vitro, and then the

initial or the target gene fragment was amplified by low-melting-point agarose

recovery in more than 16 ℃ for 30min to connect feelings into DH5α state. State will

be felt into DH5α E. coli DH5α competence, plasmid DNA in a large number of

receptor cells and then choose to copy the positive transformation of body, to carry

out gene extraction. Bioinformatics analysis showed that the highest level of starch

synthesis in the plants, adenylate kinase and the molecular evolution of the highest

genetic similarity. Access to the engineering bacteria strain can be used for genetic

transformation of potato, sweet potato and cassava starch and other important crops,

for the realization of starch laid the foundation for metabolic engineering.

Key words: sweet potato; PCR technologies; gene cloning; transformation

1 综述：

甘薯学名：Ipomoea batatas Lam. 英文名：Sweet Morningglory旋花科

(Convolvulaceae) 属一年生或多年生蔓生草本，又名山芋、红芋、番薯、红薯、

白薯、地瓜、红苕等，因地区不同而有不同的名称。块根可作粮食、饲料和工业原料。是我国的主要栽培作物, 常年种植面积6×106hm2左右, 栽培面积和总产量均居世界首位,它所富含的淀粉是重要的轻化工和食品加工原料。

“渝苏303”是西南师范大学在育成“渝苏1号”、“渝薯34”、“渝薯20”之后,于1991年从江苏省农科院提供的"B58-5 X苏薯1号"组合的杂交种籽中选育而成，原系91-31-303。“渝苏303”具有较好的丰产性和适应性, 在试验中其藤叶、薯干、生物鲜产、生物干产、淀粉产量和在生产试验、台位试验中的鲜薯产量均增产,尤以淀粉、藤叶产量增产幅度最大并且, 该品种具有萌芽性较好, 结薯习性好, 大中薯率高, 薯块烘干率和出粉率高, 抗黑斑病和根腐病, 高抗茎线虫病, 贮藏性好的区试结果。

ADK即腺苷酸激酶(EC.2.7.4.3，adenylate kinaSe，ADK)，它是平衡腺苷酸代谢库的关键酶, 能够催化AMP+ATP 形成2 分子ADP 的可逆反应, 是调控这三种前体分子在淀粉代谢库和核酸代谢库中分配的关键酶，其表达量直接影响腺苷酸在糖类代谢库和核酸代谢库中的分配。生物信息学分析表明, 在淀粉合成水平最高的植物中, 腺苷酸激酶的分子进化水平和遗传相似性也最高，因此, 作为腺苷酸代谢库调节中枢的ADK 基因( adk) 是淀粉代谢工程的重要候选基因, 将该基因表达量控制在较低水平就可打破腺苷酸代谢库的平衡, 使腺苷酸代谢流向淀粉合成的方向流动。用基因工程技术获得的含有ADK基因工程菌菌株可用于遗传转化马铃薯、甘薯和木薯等重要的淀粉作物, 为实现淀粉代谢工程奠定了基础。

本次试验就是利用从甘薯“渝苏303”中提取ADK目的基因，通过连接制备重组DNA，然后导入到大肠杆菌细胞中，通过筛选检测目的基因是否转化成功。本次实验涉及DNA的提取，PCR扩增目的基因及检测，目的基因回收与连接，大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备，连接产物的转化筛选和PCR检测，以及选做实验质粒DNA的抽提与酶切，原理上根据目的基因的制备，重组DNA分子的构建，重组DNA 分子转移到受体细胞，转化子的筛选，和目的基因表达与功能的鉴定的操作步骤，从分子层面直观的告诉我们了基因工程技术中的操作方法和实现手段。