胚胎大鼠背根神经节摘取方法的研究
大鼠蛛网膜下腔置管及背根神经节分离方法的改进
【 关键词 】 蛛 网膜 下腔
背根 神经节 大鼠
大 鼠在生物医学实验 中应用广泛 。在疼痛 和镇痛 的动物研究 中， 鼠的给药 途径通 常为腹腔 内注 射 、 大 皮
重 ２０～２ ０ ｇ 清 洁 级 ， ０ ５ ， 由南 方 医 科 大 学 动 物 中心
提供。
１ ２ 实验 方 法 ．
尾 突然出现侧摆及后腿抽动 为成功标 志。向尾侧 置入 Ｐ １ Ｅ一 ０导管 ２ｃ ｍ。 固定导管 ， 于皮下。术后每 天观察 大 埋
鼠有无脊髓神 经损伤 表现 。术后 第 ２天鞘 内注射 ２ 罗哌卡 因４ ｌ观察双 下肢 阻滞效果 。术后 第 ７天， 内注 ％ ０ ， 鞘 射 ２ ｌ 甲蓝标记导管尖端位置 ，％多聚 甲醛灌 注固定后 打开椎 管及椎 间孔 ， ０ 亚 ４ 观察 导管位 置 ， 辨认并 分 离背根 神经 节， 显微 镜下确认 组织结构。结果 术后 每天观察 置管后 的 大鼠 ， 未见明 显脊髓神 经损 伤症状 ，０只均未 出 ２
１ １ １ 实验 试 剂 １％ 水 合 氯 醛、 哌 卡 因 （ ｓ ．． ０ 罗 Ａ．
ｔ ｚｎｃ ， 国， 号 ５ ３８—０ ） ０ ９ 生 理 盐 水 、 ｒ ｅｅａ 英 ａ 批 ９１ ２ 、．％ ７ ％ 乙醇 、 ５ 碘伏 、 青霉素钠 、％多聚 甲醛 、 甲蓝 。 ４ 亚 １１２ 实验 器材 手术 刀、 ．， 眼科剪 、 组织剪、 有齿镊 、 持
全置 于管腔 内 ， 量 不要外 露 ， 尽 以防刺激 、 肉芽 组织增
生， 为下 一步 实 验增 加 难 度 。导 管埋 于皮下 ， 合 切 缝 口。术毕肌 肉注射 青霉 素钠 。台灯 照射保温 １～ 。 ２ ｈ 大鼠单笼饲养 １周 ， 天检 查有无 脊髓神 经损 伤及 局 每
神经病理性痛模型(SNI)大鼠背根神经节P2X3的mRNA和蛋白表达变化
神经病理性痛模型(SNI)大鼠背根神经节P2X3的mRNA和蛋白表达变化江茜;王英;夏阳阳;黄诚【摘要】目的:研究大鼠背根神经节P2X3在保留坐骨神经结扎并剪断(spared nerve iniury,SNI)模型的基因和蛋白表达变化及意义.方法:45只雄性SD大鼠随机分为Ctrl、Sham和SNI组,每组各15只.于SNI术前1天、SNI术后第3、7、14天时间点测定机械痛阈后立即处死大鼠,取术侧腰4～腰5(L4～L5)的背根神经节(DRG),采用qPCR和Western Blot技术检测大鼠P2X3的mRNA和蛋白表达.结果:与Sham组相比,SNI组的术后第7和14天,大鼠术侧足底机械痛阈(PWT)明显降低(P ＜0.001);SNI组的术后第3、7和14天,大鼠术侧L4～L5节段DRGP2X3的mRNA表达明显增加(P＜0.05,P＜0.001);SNI组的术后第7和14天,大鼠术侧L4～L5节段DRGP2X3的蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论:保留坐骨神经结扎并剪断后L4～L5节段DRG的P2X3基因和蛋白表达增加与其机械痛敏的降低相一致,提示在外周神经损伤情况下,P2X3受体可能参与了SNI诱导的神经病理性痛的疼痛信息调控.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2017(037)006【总页数】4页(P844-847)【关键词】神经病理性痛;保留坐骨神经结扎并剪断;背根神经节;P2X3;机械痛敏【作者】江茜;王英;夏阳阳;黄诚【作者单位】赣南医学院,江西赣州341000;赣南医学院,江西赣州341000;赣南医学院,江西赣州341000;赣南医学院生理教研室,江西赣州341000;赣南医学院疼痛医学研究所,江西赣州341000【正文语种】中文【中图分类】R285神经病理性痛(Neuropathic Pain, NP)是由外周或中枢神经系统的疾病或损伤以及功能障碍所导致的疼痛综合症。
阿霉素对原代培养大鼠背根神经节细胞作用机制的研究的开题报告
阿霉素对原代培养大鼠背根神经节细胞作用机制的
研究的开题报告
一、研究背景
阿霉素（Amphotericin B）是一种广谱抗真菌药物，主要用于治疗真菌感染。
近年来发现，阿霉素在治疗神经系统疾病中也具有一定的作用，如多发性硬化、脊髓灰质炎等。
但是，阿霉素对神经元的影响机制还不
是很清楚，因此有必要进行深入的研究。
二、研究目的
本研究旨在探究阿霉素对原代培养大鼠背根神经节细胞的作用机制，为阿霉素在神经系统疾病治疗中的应用提供理论依据。
三、研究内容
1. 实验材料准备：采集大鼠背根神经节细胞进行培养，获取阿霉素
药物。
2. 细胞活性测试：将大鼠背根神经节细胞分为对照组和实验组，实
验组分别加入不同浓度的阿霉素，运用CCK-8法、MTT法、BrdU法等方法检测细胞的存活率、增殖率、凋亡率。
3. 细胞活性相关指标检测：运用Western Blot法检测细胞增殖指标
Ki67、凋亡指标Caspase-3、细胞周期调控蛋白P53、P21的表达。
4. 细胞形态学变化观察：运用光镜和电镜观察细胞形态变化。
四、预期结果
通过实验分析，在不同浓度下，阿霉素对背根神经节细胞存活率、
增殖率和凋亡率的影响；检测阿霉素作用下的细胞增殖和凋亡相对指标
的变化；并通过细胞形态观察观察细胞形态的变化，来探究阿霉素对背
根神经节细胞的影响。
预计将发现阿霉素对神经系统疾病治疗的作用机理。
部分背根切断大鼠脊髓蛋白质组学研究
维普资讯
Байду номын сангаас
第３ ｌ卷第 ３期
Ｖｏ． １， ． １ ３ Ｎｏ ３
济
宁 医 学 院
学
报
２０ ０ ８年 ９月
Ｓ ｐ， ０ ８ ｅ ２ ０
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＪＮＩ Ｉ ＮＧ ＭＥＤＩ ＣＡＬ ＣＯＵ正 ＧＥ
部分 背根切 断大 鼠脊 髓蛋 白质 组学研究
关 的 内在 机 制 。方法
提
Ｔｈｅ Ｅｘ ｅ ｉ ｅ ｔ ｌＳ ｕｄ ｆ ｔ ｅ Ａｎｔ ｅ ｔ ｉｙ ｐ ｒ ｍ ｎ ａ ｔ ｙ ｏ ｈ ｉ ｒｉ ｔ ｆ ｌ Ｅｆｅ ｔ ｏ ｄ ｏ ｒ ｐｈ ｓ Ｐａ ｉ ｕ ａ ａ ｆ ｃ ｆ Ａｎ ｒ ｇ ａ ｉ ｎ ｃ ｌ ｔ
景 爱红
（ 宁医学 院解剖学 教研室 济
王廷 华
昆明 医学 院神经科学研究所 ）
要 目的 比较部分背根节切除 １ｄ 大鼠脊髓蛋 白质与正常组间的表达差异 ， 讨痛觉传入有 ４后 探 取 成年 Ｓ Ｄ雄 性 大鼠 １ ６只 ， 随机 分 为 两组 。 实验组 切 除双侧 Ｌ 一Ｌ 和 Ｌ 背根 节 ， 保 留 ｋ 背根 节 ； 常组 ８只 ｓ 正 Ｄ大 鼠切 开暴 露 背根神 经 节 ， 不 作切 除 处理 。运 用 双 向 电泳和 质 谱 分析 技 术 ， 但 比较部分背根 节切除 １ｄ 大鼠脊髓蛋 白质与正常组 间蛋 白质的肽指纹 图和氨基酸序列组成差异 。结果 ４后 部分 背根 切 断 １ ｄ大 鼠脊 髓 内免 疫球 蛋 白重链 Ｖ 区（ｇｈ ａｙｃ ａ ｅｉｎ（ｌｎ ４ －） 表 达上 调 ， ４ Ｉ ｅｖ ｈ ｉ Ｖ ｒｇ ｎ ｏ ｃ ｅＸ ｌ２ ） ｏ 果糖 二 磷 酸醛 缩 酶 Ａ（ ｒｃｏｅｂｓｈｓｈｔ ａ ｏａｅＡ） 达 下调 。结论 发 现 部 分 去 背根 大 鼠脊 髓 存 在 两个 明 Ｆｕｔｓ—ｉ ｏｐ ａ ｌ ｌｓ 表 ｐ ｅ ｄ 显差异表达的蛋 白质 ， 结果提示 ， 两个差异表达的蛋 白质可能与痛觉传入机制有关。 关 键 词 部 分 背根神 经 节切 除 ； 向 电泳 ； 白质 组 双 蛋 蛋 白质是 一 切 生命 活 动 的物 质 基 础 ， 白质 组 ２０ ２ ｇ清 洁级 ， 蛋 ５ ｇ± ０ ， 由昆 明 医 学 院动 物 实 验 中心 提 学研究 是 生命 科 学 进 入 后 基 因组 时代 的标 志 之一 。 供 。随 机分 为两 组 （ 每组 ８只 ） 手 术 组用 ２ 的戊 ， ％ 研 究正 常 细 胞 和 异 常 细 胞 之 间 蛋 白质 水 平 上 的差 巴 比妥腹 腔注 射 麻 醉 （ Ｄ大 鼠 ） 俯 卧 位 固 定 ， 规 Ｓ ， 常 别 ， 疾病 的治疗 和药物 的筛 选 有 重要 意 义 ， 对 也是 蛋 消毒 备 皮 后 ， 次 切 开皮 肤 、 膜 、 肉 、 上 韧 带 ， 依 筋 肌 棘 白质组 在 应用 上 最 具 前 景 的方 面 。 目前 ， 索 与痛 分 离横 突外 侧 的肌 肉 ， 楚 的暴 露 棘 突 和 横 突 。用 探 清 觉 传导 有 关 的机 制 是 神 经 生 物 学 领 域 研究 的一 止 血 钳小 心 咬去 椎 间孔处 上 、 关 节 突骨 片 ， 下 用虹 膜 个 热点 。以前 的大 多 数研 究 ， 单 因素 角 度分 析 了 剪 剪 除双侧 的 Ｌ一４ Ｌ 背 根 节 ， 留 Ｌ 从 ， 和 Ｌ 保 背根 节 。 部 分 去背 根术 后 脊髓 及其 背 根 神经 节 内神 经 营养 因 对照组手术切开暴露背根神经节 ， 但不作切除处理。 子 及相 关 蛋 白 的表 达 变 化 ｊ 部分 去 背根 损 伤 后 术后 常规 护理 ， 续注射 青霉 素 ３ ，０万 ｕ ｄ 防 止 。 连 ｄ２ ／， 术后 感 染 。 的痛觉 传 导是 一个 复 杂 的 过 程 ， 能 涉 及 多 因素 综 可 合 作用 。本 研 究采 用 双 向 电 泳 和 质 谱 分 析 技 术 ， 探 １ ２ 样 品的制 备 ． 讨 部分 背 根切 断 大 鼠脊 髓 蛋 白质 差 异 表 达 ， 了解 以 部 分背 根 切 除 术 后 １ｄ， 选 手 术 组 和对 照 组 ４ 挑 差 异表 达 的蛋 白质 与 痛 觉 传 人 的关 系 ， 临床 抑 制 状 态好 大 鼠各 ５只 ， ２ 的戊 巴 比妥 腹 腔 注射 麻 为 用 ％ 疼 痛传 人 提供 实验 依据 。 醉后 ， 出 腰 段 脊 髓 （ 当 于 椎 骨 的 Ｔ Ｌ ） 取 相 。用 １ 材料 与 方 法 ４ 预冷 的双蒸 水 漂 洗 脊 髓 组 织 中 的 血 渍 ， ０ ２ ℃ 每 ．ｇ １ １ 部 分 去 背根 大 鼠模 型 的 制作 ． 样 品加 入 ｌ 样 品 裂 解 液 （ ｍ ｌ１ 素 ， ｍｏ １硫 ｍｌ ７ ｏ／ 尿 ２ ｌ ／ 健 康雄 性 Ｓ ｒｇｅＤ ｗｅ（ Ｄ） 鼠 １ ｐａｕ —ａ ｌ Ｓ 大 ｙ ６只 ， 重 脲 ，％ Ｃ Ａ Ｓ Ｐ Ｓ ） 用玻 璃 匀 浆器 手动 研 磨 ， 体 ４ Ｈ Ｐ ，Ｍ Ｆ ， 直
分子生物学实验方法与步骤【可编辑全文】
可编辑修改精选全文完整版分子生物学实验方法与步骤表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析一、原理细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。
强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS 结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。
采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。
因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。
二、试剂准备1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲双丙烯酰胺（Bis）1.0g，混匀后加ddH2O，37O C溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于室温。
2、1.5M Tris-HCl(pH 8.0：Tris 18.17g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至8.0,定容至100ml。
3、1M Tris-HCl(pH 6.8：Tris 12.11 g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至6.8,定容至100ml。
4、10% SDS：电泳级SDS 10.0 g加ddH2O 68℃助溶,浓盐酸调至pH 7.2,定容至100ml。
5、10电泳缓冲液(pH 8.3：Tris 3.02 g，甘氨酸18.8 g，10% SDS 10ml加ddH2O溶解, 定容至100ml。
6、10%过硫酸铵（AP）： 1gAP加ddH2O至10ml。
7、2SDS电泳上样缓冲液：1M Tris-HCl (pH 6.82.5ml，-巯基乙醇1.0ml，SDS 0.6 g，甘油2.0ml，0.1%溴酚兰1.0ml，ddH2O 3.5ml。
8、考马斯亮兰染色液：考马斯亮兰0.25 g，甲醇225ml，冰醋酸 46ml，ddH2O 225ml。
9、脱色液:甲醇、冰醋酸、ddH2O以3∶1∶6配制而成。
二、操作步骤采用垂直式电泳槽装置（一）聚丙烯酰胺凝胶的配制1、分离胶(10%的配制:ddH2O 4.0ml30%储备胶 3.3ml1.5M Tris-HCl2.5ml10% SDS 0.1ml10% AP 0.1ml取1ml上述混合液,加TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺10μl 封底,余加TEMED4μl ,混匀后灌入玻璃板间，以水封顶，注意使液面平。
高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定
高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定韩创业;赵春节;刘锦愉;杨劲松【摘要】目的:建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元(DRGn)的培养模型.方法:在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节(DRG),通过胰蛋白酶消化,使用Neurobasal (NB)培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn.采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法和hoechst染核鉴定并测定DRGn的纯度.结果:原代培养的DRGn在含有神经生长因子(NGF)的NB培养基中生长良好,存活时间可达45 d,纯度可达到95％以上.结论:该培养模型简单易行,培养稳定,可获得大量高纯度和存活时间长的DRGn.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2014(031)003【总页数】4页(P358-361)【关键词】背根神经节神经元;原代培养;大鼠胚胎【作者】韩创业;赵春节;刘锦愉;杨劲松【作者单位】广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021;广西医科大学第一附属医院脊柱骨病科南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R-33体外培养可使相互独立的神经元和神经胶质细胞在与体内环境相似的条件下生长。
随着相对纯化的细胞再次共培养，可进一步研究神经元的生长、神经元——神经胶质细胞的相互作用，特别是髓鞘形成等。
在体内，背根神经节神经元（DRGn）的轴突主要从中枢神经系统（CNS）和外周神经系统（PNS）伸展出来，在中枢（少突胶质细胞）和外周（雪旺细胞）神经胶质细胞的诱导下逐渐形成髓鞘。
与此同时，体外培养的DRGn在加入神经生长因子（NGF）后将会有较长的生命周期。
因此，共同培养纯化的DRGn和成髓鞘细胞（如雪旺氏细胞或少突胶质细胞）是一种较为理想的用于研究髓鞘形成的方法，但神经细胞分化成熟后不再具备分裂能力，其体外培养对培养体系要求较高，培养具有较大的困难。
鼠神经生长因子生物学活性测定方法的研究
鼠神经生长因子生物学活性测定方法的研究目的建立一个简单、稳定、重复性好的鸡胚背根神经节培养法测定mNGF 活性的实验方法。
方法通过对鸡胚运输温度控制、神经节分离和接种时间限制、培养结果观察时间摸索、活性测定的浓度范围、重复性等试验，建立了鼠神经生长因子生物学活性的测定方法。
结果该方法具有操作简便，灵敏度高、重复性好、测试结果准确的特点。
结论采用鸡胚背根神经节培养法可有效测定鼠神经生长因子的生物学活性。
标签：鼠神经生长因子；mNGF；鸡胚背根神经节；生物学活性测定神经生长因子（nerve gowth factor，NGF）是神经系统最重要的生物活性分子之一，能够促进神经元的分化，维持神经元的存活[1]。
鼠神经生长因子mNGF 是一种从小鼠颌下腺分离出来的非共价键连接的多聚体蛋白。
其生物学活性表现在能维持神经节细胞存活、诱导外周神经节外周突起生长[2]。
鼠神经生长因子的生物学活性测定是其结构和功能研究的基础。
目前，国际上用于NGF 活性测定的方法主要有2种，即鸡胚背根神经节培养法和PC12 细胞（Pheochromocytoma cells，大鼠肾上腺嗜铬细胞）培养法[3-4]。
由于细胞培养法对操作人员的经验、细胞库管理、细胞培养环境、检测仪器等方面要求较高且设备设施投入大，故国内神经生长因子生物学活性测定的方法还是主要以鸡胚背根神经节培养法为主。
但是鸡胚背根神经节培养法也存在干扰因素多，实验结果重复性较差的现象，故该文通过对鸡胚运输温度控制、神经节分离和接种时间限制、培养结果观察时间摸索、活性测定的浓度范围、重复性等试验，建立了一个简单、稳定、重复性好的鼠神经生长因子生物学活性的测定方法，有效地为鼠神经生长因子的生产过程监控和产品质量判定提供依据。
1 仪器与试剂1.1 仪器CO2培养箱，解剖显微镜，超净工作台、，倒置显微镜等。
1.2 试剂鸡胚：购于珠海东坑鸡场的石歧鸡种蛋；鼠神经生长因子样品：丽珠集团丽珠制药厂自制；鼠神经生长因子标准品：来自中国药品生物制品检定所，1 000 Au/支；DMEM：购于INVITROGEN 公司；鼠尾胶：丽珠集团丽珠制药厂自制。
新生大鼠背根神经节神经元的分离、培养及鉴定
新生大鼠背根神经节神经元的分离、培养及鉴定摘要】目的：建立一种简单、稳定、高效的新生大鼠背根神经节神经元原代培养方法。
方法：摘取新生24h SD大鼠背根神经节，采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶消化，制成单细胞悬液，接种于Neurobasal/B27无血清培养液中。
将培养3d 的DRGn于倒置相差显微镜下进行形态学观察，扫描电镜行细胞形态学检测，应用β-tubulinⅢ进行免疫细胞化学染色，鉴定细胞纯度。
结果：体外培养的背根神经节神经元生长状态良好，纯度可达到(92±6)%。
结论：本实验方法简单、稳定、高效，可以获得高纯度的背根神经节神经元。
【关键词】背根神经节；动物实验；细胞培养；纯化【中图分类号】R74 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）21-0034-03The dissection, purification and culture of dorsal root ganglion neurons from new born ratsZhang Yuyao1, Liang Chen1, HU Xueyu(corresponding author)21 Fourth Military Medical Un iversity, Xi’an, Shanxi, 710032, China2 Department of orthopaedics, Xijing hospital,Fourth Military Medical University, Xi’an, Shanxi, 710032, China【Abstract】Objective To establish an simple, efficient, reliable method for the purification culture system of dorsal root ganglion neurons derived from new born rats. Methods Dorsal root ganglions harvested from new born SD rats were digested with the mixture of trypsin and collegonease Ⅳ, then turned into single cell suspension and plated in neuralbasal media. The purified rate was evaluated according to cell count and β-tubulinⅢ immunocytochemistry stain. Results Cultured dorsal root ganglion cells could survive healthily. The purification rate of neurons was（92±6）%. Conclusion The method, which is used for culture and purification of DRGn, is a simple, efficient and reliable way. Using it could obtain highly purify neurons.【Key words】Dorsal root ganglion; Animal experimentation;CellCulture;Purification背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）主要由感觉神经元组成，参与脊髓反射与感觉功能的调节，DRG因其细胞种类、生物学特性单一，越来越受到人们的重视。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
神经 节 数 量 相 对 较 少 本 研 究 探 索 了一 种 快 速 简 便 、 用 性 实 更 强 、 果 更佳 的背 根 神 经 节 摘 取 方 法 ， 神 经 元 的 体 外 培 效 为
节 ， 个 神经 节 平 均 用 时 ０ ７ 士０ Ｏ ｎ 两 种 方法 间 的 上 述 各 项 指 标 比较 ， 异 均 有 统 计 学 意 义 （ ＜ ｏ ０ ） 每 ．９ ． １ｍｉ， 差 Ｐ ． １ 。结 论 直 接 固 定 打 开椎 管 法能 在 更 短 时 问 内 获 得 更 多 数 量 的 背根 神经 节 ， 作 简单 ， 为 细胞 培养 奠定 良好 的基 础 。 操 可 【 关键 词 】 背 根 神 经 节 ； 椎 管 ； 摘 取
以传 统 方法 和新 方 法 各 对 ２ ５只胚 胎 大 鼠摘 取 背 根 神 经节 。 １２ ２ 传 统方 法 摘 取 胚 胎 大 鼠背 根 神 经节 ．． 剪 除胚 胎 鼠的
头部 、 四肢 以 及 腹 部 ， 取 胚 胎 鼠的 脊柱 ， 后将 脊 柱 放 入 培 获 然 养 皿 内 ， 体 视 显 微 镜 下 打 开椎 管 及 摘 取 神 经 节 。首 先 去 除 在
＊ 国 家 自然 科 学 基 金项 目（０ ７ ４ ６ ； 家“ 五 ” 技 攻 关 项 目 ３７ ２ ０ ） 国 十 科
（ ０ ４ Ａ７ ０ ８ — ０ ； 国 家 “十 一 五 ” 科 技 支 撑 计 划 ２ ０ Ｂ ２ Ａ１ ２）
（０ ７ ２ ０ ＢＡＩ ８ ２ １ Ｂ１ ）
１ 首 都 医科 大学 附 属 北京 同仁 医 院 北 京 市 耳 鼻 咽 喉 科 研 究 所
５６ ９
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＡｕ ｉ ｌ ｇ ｎ ｐ ｅ ｈ Ｐ ｔ ｏ ｏ ｙ ２ １ ． ｌ１ ． ． ｏ ｒ ａ ｏ ｄ ｏｏ ｙ ａ ｄ Ｓ ｅ ｃ ａ ｈ ｌｇ ０ ０ Ｖｏ ８ Ｎｏ ６
・
技术与方法 ・
胚胎 大 鼠背根神 经 节摘 取方 法 的研究
王 士杰 黄丽 辉 雷雳 王鸿 范尔 钟 李颖
５ Ｏ只 ） 。
一一
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 胚 胎 大 鼠 的获 取 ．．
将怀孕 １～１ ７ ８天 的 Ｗｉｔｒ 鼠 ｓａ 大
放 入装 有 乙醚 的容 器 中进 行麻 醉 ， 麻 醉 成 功后 颈椎 脱 臼 快 待
速 致死 。在 大 鼠下 腹 部 “ 型 剪 开 皮 肤 及 皮 下 组 织 ， 有 胚 Ｔ” 含 胎 的“ 型 子 宫 显 露 ， 开 子 宫 及 胎 膜 ， 出胚 胎 大 鼠 。实 Ｙ” 剪 取 验 分 次进 行 ， 共使 用 ４只孕 鼠 ， 获得 了 ５ ０只胚 胎 大 鼠 。分 别
背 根 神 经 节 （ ｏｓｌｒｏ ａ ｇｉ ，Ｄ Ｇ） 称 脊 神 经 ｄ ｒａ ｏ ｔｇｎ ｌ ｎ Ｒ 又 ｏ 节 ， 躯 体 和 内脏 感 觉 的 初 级 中 枢 ， 含 感 觉 神 经 元 ］ 动 是 富 。 物 实验 研 究 结 果 表 明 ［ ， 背 根 神 经 元 植 入 耳 蜗 后 ， 以 替 ２将 】 可 代 受 损 的感 觉 上 皮并 与螺 旋 神 经 节 细 胞 形 成 连 接 ， 有 初 步 具 的 传导 功 能 ， 为 临床 治 疗 感 音 神 经 性 聋带 来 了 希 望 。但 采 这
± １ １ 神 经 节 ， 分 钟 可 获 得 ０ ６ ±０ ０ 个 神 经 节 ， 个 神 经 节 平 均 用 时 １４ ±０ ０ ｎ 采 用 直 接 固 定 打 开 ．７个 每 ．８ ．２ 每 ．４ ． １ｍｉ；
椎 管 法 ， 只胎 鼠平 均 用 时 ２ ． ０ ． ３ ｍｉ， 均 获 得 ３ ． Ｏ ． ７个 神 经 节 ， 分 钟 可 获 得 １ ２ ±０ ０ 每 ４ １ ￣１ ６ ｎ 平 Ｏ ５ ±０ ９ 每 ． ３ ． ３个 神 经
Ｉ ： ０ ３ ６ ／．ｓ ｎ １ ０ ～ ７ ９ ． ０ ０ ０ ． ２． ６ ０ ２
【 图分 类 号 】 Ｒ７ ４ ４ 中 ６ ．
【 献 标 识 码 】 Ａ 文
【 章 编 号 １ １ ０ —７ ９ （ ０ ０ ０ — ０ ９ —０ 文 ０６ ２９２１）６ ５６ ２
【 要】 目的 摘 探 讨 一 种 简 便 、 速 、 效摘 取胚 胎 大 鼠背 根 神 经 节 的方 法 。方 法 分 别 采 用 先 剪 除头 部 、 快 高 四
肢 、 部 ， 打 开椎 管 的传 统 方 法 和 直 接 固 定 打 开 椎 管 的 方 法摘 取 胚 胎 大 鼠背 根 神 经 节 ， 算 两 种 方法 的 用 时 和 获 腹 后 计 得 的神 经 节 数 量 ， 进 行 统 计 学 比较 。结 果 并 采 用 传 统 方 法 ， 只胎 鼠平 均 用 时 ２ ． ｏ １６ ｎ 平 均 获 得 ２ ．Ｏ 每 ９ ２ ± ． １ｍｉ， ｏ ４
耳 鼻 咽 喉 头 颈 科 学 教 育 部 重 点 实 验 室 （ 都 医 科 大 学 ） 北 京 首 （
１０ ０ ） ０ ０ ５
养 和耳 蜗 移 植 研 究 奠 定 基 础 ， 介 绍 如 下 。 现 ｌ 材 料 与 方 法 １ １ 手术 器械 与 动 物 Ｏｌ ｕ 体 视 显 微 镜 １台 、 织 镊 ． ｙ ｍｐ ｓ 组 １ 、 织剪 １ 、 式钳 １ 、 丝镊 ２ 、 科 剪一把 、 把 组 把 蚊 把 游 把 眼 直 径 １ ｍ 培 养 皿 １ 、 培 养 皿 面 积 相 符 的 硅 胶 ｌ块 、 射 ０ｃ 个 与 注 针 头 ４个 、 孕 １ ～ １ 怀 ７ ８天 的 Ｗ ｉ ａ 大 鼠 ４只 （ 有 胚 胎 大 鼠 ｓ ｒ ｔ 共