瑞氏染液
瑞氏吉姆萨复合染色液
外周血涂片的制作方法1、采血：胶头滴管吸取血液，血液直接滴加到洗净烘干并且硅化过的载玻片的一头。
2、推片：将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略向后移使与血液相接触，血液遂于推片与载玻片的夹角间散开。
以约30度的夹角向前均匀地推动推片即可制成血涂片。
其薄厚度要适中，分布均匀而无空泡，边缘整齐。
3、固定：推片做好后，涂片后潮干固定，以免细胞漂落太多，影响制片质量，甲醇固定液固定：涂片直接浸入固定液内，因固定液充足，固定效果较好。
但细胞易脱落而发生交叉污染，因此应该分瓶固定，固定液回收时应过滤。
多数标本用此法固定，固定时间15-30分钟。
4、染色：瑞氏-基姆萨双染1）从固定缸里取出载片后，在室温下通风晾干。
将载片平放在玻璃板上准备染色。
2）所用的两种染料事先过滤好（染料中有颗粒物，会沉淀在载玻片上影响载片的质量）3）将染料滴加到载玻片上以后，让其均匀覆盖住载片上的血细胞，染色时间约为2到3分钟。
等瑞氏染液有变红的趋势时，迅速滴加与瑞氏染液等量的PBS溶液。
继续染色2到3分钟。
4）染色时间到后，用PBS溶液冲片，小股水流，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。
冲片结束后将载片放到阴凉处风干。
5）在玻璃板上放好牙签，将风干的载片倒扣在一根牙签上，从背面滴加基姆萨染液进行扣染。
染色时间约为10分钟。
时间到后用蒸馏水冲片，洗净染液后常温下风干。
5、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。
6、显微观察：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。
用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。
在显微镜下，成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。
所需材料：硅化过的载玻片，推片，甲醇瑞氏-基姆萨双染，过滤，PBS，牙签，蒸馏水，中性树胶，显微镜，吸耳球1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。
瑞氏染液的原理
瑞氏染液的原理瑞氏染液是一种常用的组织学染色技术，其原理基于生物分子的亲和性差异。
瑞氏染液是由Hans and Edith Ruyš斯博士于1946年首次提出的，它是组织学染色中的一种综合性染色方法，可用于染色人类和动物的组织以及植物花瓣等。
瑞氏染液由靛蓝（hematoxylin）和伊红（eosin）两种染色剂组成，其中靛蓝染色剂是一种天然产物，源于橡树和栎树中的一种物质。
它具有强大的亲和力，可与部分细胞和组织结构中的酸性成分（如DNA、RNA、核蛋白等）结合，并使其呈现紫色或蓝色。
因此，靛蓝可用于染色细胞核、嗜酸性粒细胞、肾小球、胃黏膜、脑组织等。
另一种染色剂伊红，则是一种酸性染色剂，具有与碱性成分（如细胞质、胶原蛋白等）结合的亲和力。
伊红有着明亮的红色或橙色染色效果，可用于染色胶原纤维、细胞质、肌肉纤维等组织结构。
瑞氏染液的使用步骤通常包括以下几个步骤：1. 取一块活体组织固定在甲醛、乙醇等保存剂中。
2. 组织切片后，先将切片放入靛蓝染液中浸泡。
3. 将切片从靛蓝染液中取出，并用自来水将多余的染料流走。
4. 将切片放入95%乙醇中，再将其放入5%的醋酸中浸泡一定时间。
5. 将切片放入伊红染液中浸泡。
6. 将切片从伊红染液中取出，并用自来水将多余的染料流走。
7. 使用差显镜观察样品。
与其他染色法相比，瑞氏染液具有优点是不但染色强度高、染色时间短，而且还能同时染色细胞核和细胞质。
同时，瑞氏染液染色效果稳定，且长期保存不受到太多的影响。
使用瑞氏染液进行组织学染色是一项良好的科研技术，可以对各种组织就进行颜色标识，方便研究者观察和分析细胞或组织中的形态和结构特征，对于发现及解决医学问题有重要的帮助。
瑞氏-姬姆萨染液使用说明书
4、显微观察：将干燥后的载片被染成红色。
注意事项
1. 染色时间与室温及细胞多少有关。室温低、细胞多则染色时间要长；反之，可减少染色
时间。必要时可增加染液量或延长时间。冲洗前，应先在低倍镜下观察有核细胞是否染色清
楚，核质是否分明。应该在具体实践中摸索合适的时间，特别是在更换染液时。每批染色液，
100mL
/
说明书
1份
1
均需试染，以便掌握染色时间。
2. 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲洗，否则会使染料沉着在载片上。
3. 冲洗完的载片应立放于支架上，防止剩余水分浸泡而导致脱色。
温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。
储存温度
避光储存于室温。
包装清单
货号
品名
包装
HCY115
瑞氏-姬姆萨染液
2）将瑞氏-吉姆萨染液倒入染缸内，使染液覆盖载片上的细胞。具体染色时间视细胞而定，
一般 3~30min，染色时最好在镜下观察；
3）染色后水洗，先用 PBS 溶液漂洗载片，再用小股水流冲洗，防止将大量的细胞从载片上
冲落下来而影响后续观察。冲片结束后将载片放到阴凉处风干。
3、封片：中性树胶封片，制作成永久涂片。
对胞质和中性颗粒则着色较差。
为兼顾二者之长，选用复合染色法。即瑞氏-吉姆萨染液。
染色步骤
1、涂片并固定：将细胞均匀的涂布于洁净的载玻片上，待其干燥后进行固定。
固定液的选择视具体情况而定，多数细胞可用甲醇固定。甲醇固定：涂片干燥后浸入甲醇内，
固定时间 15-30min。
2、染色：
1）固定后，室温下通风晾干。将载片置于染缸内准备染色；
瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料，血红蛋白，嗜酸性颗粒
瑞氏染色原理
瑞氏染色原理
瑞氏染色原理是一种常用的细胞染色技术，在生物学研究和临床实验中广泛应用。
瑞氏染色原理的基本思想是利用瑞氏染色液中的染料与细胞中的某些成分发生特定的化学反应，从而使细胞染上不同的颜色，以便观察和分析细胞的形态和结构。
瑞氏染色原理的关键步骤是将待染细胞置于瑞氏染色液中，染色液中的染料会与细胞中的核酸分子反应生成染色复合物。
这一反应是通过染料中的染色基团与细胞中的亲核或亲电子位点发生结合而实现的。
瑞氏染色原理中的染料主要是亚甲基蓝、水溶性瑞氏蓝和瑞氏和甲蓝等。
这些染料在瑞氏染色液中呈离子态，能与细胞中的核酸发生电吸引作用，使染料进入细胞内部。
其中亚甲基蓝在碱性条件下能够与DNA中的负电荷反应，形成亮蓝色的染色
复合物。
而水溶性瑞氏蓝则与DNA中的酸性功能基团发生离
子键结合，形成绿色到蓝紫色的染色复合物。
瑞氏染色原理对细胞染色的选择性较强，可以使细胞核染上浅蓝色、嗜伊红小体染上红色、嗜碱性粒细胞颗粒染上紫蓝色等。
这些不同颜色的染色复合物对应着细胞中不同的结构和成分，通过观察和分析这些染色复合物，可以对细胞的形态、组织结构和功能进行研究。
总之，瑞氏染色原理通过使用特定的染料与细胞中的成分发生反应，达到对细胞进行染色和分析的目的。
这一原理在生物学研究和临床实验中有着广泛的应用价值。
瑞氏染液配制、使用方法及注意事项
瑞氏染液配制、使用方法及注意事项南宁市二医院检验科马升俊1.瑞氏染色的原理：瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。
瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成,其深于甲醇后,解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。
2.试剂的配制：2.1 瑞氏染液的配制：2.1.1 自配染液:瑞氏染粉0.1g，甲醇（AR）60ml。
将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将巳溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。
染液配好后放于室温下，一周后即可使用。
新配制染液效果较差，放置时间延长，染色效果越好。
久置应密封，以免甲醇挥发或氧化成甲酸。
染液中也可加中性甘油2～3ml，除可防止甲醇过早挥发外，也可使细胞着色清晰。
2.1.2 成品瑞氏染液:现巳有成品瑞氏染液，如四川迈克科技公司出的快速瑞氏染色试剂（500ml/瓶）其只需室温密闭储存，可长期稳定，染色效果好。
2.2 缓冲液的配制: 称取磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水）0.2 g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。
配好后磷酸盐缓冲溶液应校正PH值，其范围在PH6.4～6.8即可，后塞紧瓶口备用。
3. 瑞氏染色的使用方法：（以血涂片为例）：3.1把制好的血涂片编好号，然后将血片平放在染色架上；3.2加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定细胞约1分钟；3.3滴加等量或稍多的缓冲液（可按1：2滴加），使染液充分混匀，染色5～10分钟；3.4用流水冲洗去染液,待干后镜检。
4.染色结果判断：在正常情况下，血膜外观染成淡紫红色。
显微镜下，红细胞呈粉红色，在厚薄均匀处，略有碟状感。
白细胞浆中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩。
细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
5.注意事项:5.1 PH对细胞染色有影响。
检验中常用染色镜检方式方法的总结
检验中常用染色镜检方式方法的总结1.革兰染色●鉴别革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，指导临床用药等。
●革兰染色一般步骤：1）初染：滴加结晶紫染色液于涂片上1min，水洗。
2）媒染：滴加碘液媒染1min，水洗。
3）脱色：将涂片浸入95%酒精，轻摇玻片，脱去染液后，水洗。
4）复染：滴加番红于涂片上复染1min，水洗，吸水纸吸干，油镜观察。
●革兰染色结果判读：革兰阳性菌为紫色，革兰阴性菌为红色。
2.瑞氏染色●瑞氏染液配制：1）瑞氏染液配制：瑞氏染料830mg 或1g甲醇（AR ）500ml 或600ml先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3 个月以上为佳。
2）缓冲液：缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。
缓冲液须保持一定的pH 使染色稳定，PBS 的pH 一般在 6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH 恒定。
缓冲液配制（pH6.4~6.8 ，弱酸性）：配方1 ：1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml配方2 ：1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5mlH 2 O( 新鲜) 加至1000ml置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。
●瑞氏染色一般步骤：1）取病料涂片、自然干燥2）滴加瑞氏染液染3分钟,使标本被其中甲醛所固定;3）加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5分钟;4）水洗、吸干、镜检●瑞氏染色结果判读：细菌染成蓝色，组织细胞胞浆红色，细胞核蓝色或紫色。
瑞氏染液
3.pH的影响 （pH6.4～pH6.8）
细胞各种成分均属蛋白质，因蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，医.学教.育网整.中性颗粒偏粗，呈紫黑色。稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致细胞染色呈色异常，形态难以识别，甚至错定，否则细胞在染色过程中容易脱落。
（2）冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以医.学教.育网整.防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过久，以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。
（3）染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。
瑞氏染色法是临床上最常用的染色方法。
1.瑞氏染料
由酸性染料伊红（E-）和碱性染料亚甲蓝（M+）组成。伊红通常为钠盐，有色部分为阴离子。亚甲蓝（又名美蓝）为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝，有色部分为阳离子。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料（即天青）。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红；二是固定细胞形态。
2.染色原理
既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质、原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。
瑞氏染液中甲醇的作用
瑞氏染液中甲醇的作用
瑞氏染液是一种常用的染色剂，其中含有甲醇成分。
甲醇在瑞氏染液
中具有多种作用，下面将从以下几个方面详细介绍。
一、甲醇的物理作用
1. 溶解性：甲醇是一种极性溶剂，可以溶解许多有机化合物和染料。
在瑞氏染液中，甲醇可以促进其他成分的溶解，使得染色效果更加均匀。
2. 揮發性：甲醇具有较高的挥发性，在制备瑞氏染液时可以快速挥发，加快制备速度。
3. 稀释性：由于甲醇具有较好的稀释性，可以调整瑞氏染液的浓度和
黏度。
这样就能够满足不同材质和要求的织物进行适当的调整。
二、甲醇的化学作用
1. 氧化还原反应：在瑞氏染液中，甲醇可以参与氧化还原反应。
例如，在铁离子存在下，甲醇会被氧化为甲醛和水。
这种反应可以促进染料
的还原和染色效果的提高。
2. 稳定性：甲醇可以增加瑞氏染液的稳定性。
当其他成分发生变化时，甲醇可以起到稳定作用，避免瑞氏染液发生不必要的变化。
三、甲醇的安全作用
1. 消毒杀菌：甲醇具有消毒杀菌作用，在制备瑞氏染液时可以起到杀
灭细菌和病毒的作用。
2. 防止污染：由于甲醇具有较好的挥发性，可以避免细菌、霉菌等微
生物在瑞氏染液中滋生和繁殖，从而保证了产品质量与安全性。
总结：
综上所述，甲醇在瑞氏染液中具有多种作用。
它既能够促进其他成分
的溶解和稳定性，又能够参与化学反应和消毒杀菌，同时还能够防止
污染。
因此，在制备瑞氏染液时需要注意合理使用甲醇，并且注意安
全使用。
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新离解。 ○缓冲液须保持一定的 pH 使染色稳定，PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8， ○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使
pH 恒定。 缓冲液配制
（pH6.4~6.8，弱酸性）： 配方 1 ： 配方 2： 1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml H2O(新鲜) 加至 1000ml 置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。 姬姆萨（Giemsa's stain；天青-伊红）染色 1．姬姆萨染料是伊红(AzurII Eqsin)和天青（蓝）2 号合成的。 2．姬姆萨染料（ Giemsa, 天青-伊红）染液配制： 姬姆萨染料（粉末） 0.5g 或 7.5g 甲醇（AR） 33ml 或 500ml 甘油（AR） 33ml 或 500ml ●先将姬姆萨染料放入乳钵中，逐渐倒甘油研磨溶于甘油中，置于 56℃水温箱内，90～120 分 钟，然后加入甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处，时间越 长越好。 ●使用染液可临时配置）：姬姆萨染液 1ml，加 DDH2O10ml 混匀。即可使用。 染色步骤 （1）先用甲醇固定 2～3 分钟。 （2）将血或骨髓涂片放置姬姆萨使用液 15～30 分钟。 （3）涂片用自来水冲洗，在室温中干燥待查。 染液鉴定 瑞氏或姬姆萨染色液鉴定：刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定： 1．取 1 滴染液于乳白玻板上，自行迅速扩散开，其颜色变紫红色，且有伪足形成。 2．取 1 滴染液加 1 滴缓冲液，染液由深蓝色立即变为紫红色。 3．取血片或骨髓片进行试染检查，观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况，pH 是 否合适及染色合适时间。如有上述变化，表明染液合格，可供使用。 混合染色 瑞氏染色(Wright's)-姬姆萨（Giemsa's）混合染色： ●瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识 别较佳,但对胞浆着色偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。 ●姬姆萨染色对胞浆着色能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特别对嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗 粒着色较清晰, 色泽纯正,而对胞核着色偏深,核结构显示较差。 ●故采用以瑞氏染液为主，姬姆萨染液为辅的混合染色。 染色步骤： 1. 先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖； 2. 稍等片刻再加姬姆萨染液 2-3 滴加减(根据涂片上细胞多少及增升程度酌情而定)； 3. 稍等 1-2 分钟后,再加磷酸盐缓冲液,加时应缓慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上染色液 形成表面张力而终止染色液加入； 4. 染色 30-40 分钟； 5. 分色：用自来水缓缓冲洗至少 3 分钟以上,待干，勿用滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。
瑞氏染液
由酸性染料伊 缓冲液配制 染色步骤 染液鉴定 混合染色
简介 英文拼写 Wright's stain 是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇 。后解离为带正电的美蓝和带
负电的伊红离子。 使用方法
瑞氏（Wright's staim；美蓝－伊红Ｙ）染色： 1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美 蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Ｙ）染料。 2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用： （1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中 的有色物质而着色。 甲醇 ME（瑞氏染料）----→M+ + E在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成 紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子 彼此结合的反应。 （2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞 对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。 编辑本段染液配制 (1) 瑞氏染液配制： 瑞氏染料 830gm 或 1g 甲醇（AR） 500ml 或 600ml ○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再 行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜” 光泽，而无染料粉粒沉着。 ○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲 醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。 ○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存 3 个月以上为佳。 (2) 缓冲液： ●缓冲液作用： ○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重