小鼠胎肝基质细胞体外扩增骨髓来源的LTC-IC
的支持造血的功能。 造血微环境与造血干 @ 祖细胞的相互作用是通 过细胞间的直接接触和基质细胞分泌的造血相关因 子的影响实现的。因此研究胎肝造血早期微环境中 不同基质细胞和某些造血相关因子对骨髓源 F5H0 IH 维 持 和 扩 增 的 影 响 有 助 于 了 解 基 质 细 胞 在 7!$B2D 胎肝造血微环境中的功能。
收稿日期： 修回日期： $%%$0!$0!1， $%%&0%$0$2。
资助项目 （ ,)+ $%%!44$!’!&!） 。 基金项目： 本课题为国家高技术研究发展计划 “13&” 89);:;<= ;:>+ ?8: + 9>+ >; " 通讯作者。 56*：130!%033"&!&!1；7089:*：
*
计数无集落形成的负孔数。检测第 + 周 3@&$I& 频 率： 方 法 同 上。使 用 T;:FF;? 统 计 和 UA:6PDAM$8A>?
［+］ 法 估计 3@&$I& 频率。
3@&$I& 的绝对数用第 - 周或第 + 周测算的全部 单个核细胞分别与第 - 周和第 + 周 3@&$I& 频率相 乘计算。 !"5 资料分析 实验 数 据 用 平 均 值 V 标 准 误 差 表 述， 用双侧 =DCMA?DF’D$DAFD 检测显著性水平。
图% 9:6J %
检测 &9&F 和 3@&$I& 的实验设计
"KLAB:8A?D>< MAF:6? N;B &9&F >?M 3@&$I& MADAB8:?>D:;?
!"4
$*$0 和 12$)3$ 检测 将 % O %-, 个骨髓单个核细胞接种到上述预先
分为无因子组和有因子 铺有滋养层的 (+ 孔板中， 组， 后 者 3@& 培 养 基 中 含 有 B8$=&9 （ %-?6483 ） ， （(?6483） ， （ (?6483 ） ， （ %C483 ） 。 B8$I3$* BP$I3$. BP$"L; 饱和湿度培养， 每周半量换液； 至+周 *1Q ， ,E &R( ， 时收集 所 有 贴 壁 和 非 贴 壁 细 胞， 一部分用于检测 一部分用于 3’# 实验。 &9&F， 第 - 周和第 + 周时将待检测细胞接 &9&F 检测：
!" 卷 # 期 $%%& 年 ’ 月
生 物 工 程 学 报 !"#$%&% ’()*$+, (- .#(/%0"$(,(12
()*+ !" ,)+ # -.*/ $%%&
! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! !
+期
苑春慧等： 小鼠胎肝基质细胞体外扩增骨髓来源的 3@&$I&
+,%
个克隆并扩增。流式细胞术检测 !"#$% 结合情况 以及 &’()、 &’*%、 &’*+、 &’++、 &’+,、 &’%-,、 &’%++ 的表达。 （ $%&%’()*%+,-’. $/&&0， !"# 集落形成细胞 $*$0） 和 12$)3$ 检测 收 取 . / 0 周龄的 &,1234. 雌性小鼠双侧股骨， 获骨髓细胞后， 用密度 %5-0*6478 的 9:7;<< 分 离 液 （=:68>） 分离单个核细胞。骨髓单个核细胞用体外
中图分类号
胎肝是小鼠胚胎期的主要造血器官。自 7"D 胚胎循环建立到 7!$D 卵黄囊和 @ 或 4OP 区的造血 干细胞 （ Q689G)L):6G:> MG68 >6**M，QAHM） 移居胎肝之 前， 小 鼠 胎 肝 中 就 能 检 测 到 造 血 祖 细 胞， 但没有 此时胎肝的功能主要是产生成熟的造血细 QAHM ! ， 胞以满足胚胎快速生长的需要。自 7!$D 起， 胎肝中 的 QAHM 开始扩增， 7!3D 时扩增下降直至出生时终
%$0
生
物
工
程
学
报ห้องสมุดไป่ตู้
’& 卷
有显著性差异 （ ! ! "#"$） 。而经过 % 周培养后第 " 周时接种的 &’ （ ( )） *+,-.,/’"$ 骨髓单个核细胞分 别扩增至 ’01"#12 （ ( 0)%#%1） （ 31 4 因子） ， ’%’"#’2 （ ( 02"#01 ） （ 31 ） ， （ ( 1%#$& ） （ 5% 4 因 子） 和 ’2$#% （ ( 06#$2） （ 5%） 个 （ 789#$ 5） ； 但是在第 % 周时 ’%$#$
&
&’&
材料与方法
抗体、 细胞因子与质粒 本实 验 所 使 用 的 JI5H0R740!、 JI5H09;G:0HS$"、
JI5H09;G:0HS&!、 JI5H09;G:0HS&# 、T709;G:0HS## 、 JI5H09;G:0HS#2、JI5H09;G:0HS!%2 和 JI5H09;G:0HS!## 抗体购自 EUS 公司。重组鼠干细胞因子 （ N6>)8?:0
［$］ 止 。因此， 7!$07!3D 的胎肝造血微环境具有强大 ［ ］
、 重组鼠白细胞 ;9;G 8).M60AG68 H6** J9>G)C，C80AHJ） 、 重组人白细胞介素 3 介素 （ & C80I;G6C*6.V:;，C80IF0&） （N6>)8?:;9;G W.89;0IF03，CW0IF03） 重组人粒细胞 @ 巨 噬细胞集落刺激因子 （ CW0OC9;.*)>/G6@P9>C)LW9<60H)*0 和重组人红细胞生 );/ AG:8.*9G6D J9>G)C，CW0OP0HAJ） 等细胞因子购自 T6L0 成素 （ CW07C/GWC)L):6G:;，CW07L)） C)56>W 公司。 LA(& ;6) 质粒由军事医学科学院基础 医学研究所郭子宽提供。 &’( 动物与胚胎 H2’EF@3 小鼠购自军事医学科学院实验动物中 心。雌 雄 小 鼠 $ X ! 合 笼， 次晨发现阴栓者记为 7%B2D， 7!$B2D 时剥离胚胎。 &’) 胎肝基质细胞系的建立与鉴定 用 %B%2Y 胶原酶 （ A:<0 充分剪碎 7!$B2D 胎肝， 吹打成单个细胞。细胞悬浮在 89） &’Z 孵育 $%8:;， （ Q/>*);6） 的 IPSP （ Q/>*);6） 中， 按$[ 含 !%Y JEA （ H)MG9C） 中， &’Z ， 2Y H\$ 培 !%3 @8F 接种在 3 孔板 养， 隔天换液， 充分去除非贴壁细胞。培养至 2%Y 以上培养面积时以脂质体 （ O:?>)） 介导转染 LA(& ;6) 质粒。细胞进一步培养 ! 周， 用含有 #%% <@8F O#!1 ! （A:<89） 的培养基筛选抗性克隆。& ] # 周后分离单
［*］
6
6"!
结
果
建立与鉴定胎肝基质细胞系 以携带 =W+- 大 @ 抗原的 L=W* ?A; 质粒转染原
代培养的 "%(5,M 胎肝基质细胞，经 G+%0 筛选获得 从中挑选两个细胞形态不同的克隆， 即 ) 个克隆， #+ 和 2* 进行扩增培养及鉴定。其中 #+ 为成纤维 样细胞， 传代超过 (- 代， 群体倍增时间为 (,P； 2* 为 上皮样细胞， 传代超过 (, 代， 群体倍增时间为 *1P。 二者在培养过程中均未出现增殖危机现象。流式细 胞术检测结果表明： 均 #+、 2* 均高表达 &’++、 &’()， 低或不表达 &’*%、 、 、 ； 与 &’*+ &’+, &’%++ #+ !"#$% 结合 率 高， 不 表 达 &’%-,； 而 2* 高 表 达 &’%-,， 与 。上述结果说明， !"#$% 结合率很低（ 9:65(） #+、 2* 为形态特征、 生长行为、 表面分子表达不同的细胞 系。 6"6 检测 $*$0 和 12$)3$ 采用密度为 %5-0*6478* 的 9:7;<< 分离液分离骨 髓单个核细胞， 分离比例为 (,5*)E 。将分离获得 的骨髓单个核细胞接种在经照射的基质细胞层上， * 随着培养时间的延 / 1M 后出现明显的造血集落， 长， 可观察到造血细胞的扩增 （ 9:65*） 。 &9&F 检测结 果表明， 骨髓单个核细胞在 2* 滋养层上培养 + 周， （ V -5*+ &9&= 的绝对数比第 - 周分别扩增了 %%51, 倍） （无因子组） 和 %,5+. （ V -5** 倍） （ 因子组） ； 而在 （%5() V -5-* 倍） （ 无因 #+ 滋养层上， &9&F 仅扩增了 子组） 和 (5,( （ V -5-*） 倍 （因子组） （ 9:65+） 。同时第 （V - 周 时 %-+ 个 有 核 细 胞 中 &9&F 含 量 为 ,*5. + ， 而第 + 周时 %- 个有核细胞中 &9&F 含量分别 *5,+） 为 (*5+ （ V %5(.） （ #+ X 因子） ， （ V %5(-） （ #+） ， (%51. （ V -5.0） （ 2* X 因子） ， （ V -510） （ 2*） 。 %,5%(%5-( 即第 - 周和第 + 3’# 实验分别在两个时间点， 周， 检测 3@&$I& 的频 率 并 计 算 3@&$I& 含 量。 3’# 和 3@& 实验结果表明第 - 周 + 个实验组中 %-, 新分 选的骨髓单个核细胞中含有的 3@&$I& 数目之间没
体外扩增造血干细胞的基础研究郑大中科博生
体外扩增造血干细胞的基础研究郑大中科博生具中科博生研究表明，近年来,不同实验小组采用不同来源（包括骨髓、外周血和脐血)的造血干/祖细胞在不同细胞因子组合下的扩增进行了大量的实验研究。
结果表明,骨髓或外周血来源的LTC-IC在SCF、IL-3和IL-6因子的支持下只能维持或少量扩增;相反,脐血或胎肝来源的 CD34细胞在含有FL和（或）Tpo 的培养基中可获得几倍的扩增;Petzer 等(1996）研究表明,在SCF、IL-3、IL-6和FL因子组合的支持下,成人骨髓来源的CD34"CD38-细胞可扩增出约50倍的LTC。
中科博生。
当然,由于扩增的CD34+细胞的来源和亚群不同,以及细胞动力学和检测方法的区别,很难对不同研究小组的扩增策略和效果进行直接的比较。
造血生长因子是否能启动造血干细胞的细胞周期运行,以及这些细胞的增殖是否直接与细胞分化相关尚不得而知。
理论上讲,细胞因子在体外刺激CD34+细胞不会影响干细胞的自我复制潜能,因而就不会扩增这些细胞,而是刺激那些造血干细胞分化的更成熟的造血细胞的大量增殖。
中科博生。
研究表明,原始的造血干细的对细胞因子的反应取决于细胞所处的细胞周期状态。
经动员的外周血CD34+细煦在 SCF、IL3和FL组合下培养48h 后观察到,停留在G。
期的细胞保留了在NOD/SCID小鼠体内重建造血的能力,而那些由 G期进人G,期尚未进行细购分裂的细胞则失去了重建造血的潜能。
此外,有实验证明,端粒酶活性较高的,（即更静止的）造血干细胞具有更强的造血重建潜能。
中科博生。
为了证明与新鲜分离的 CD34"细胞相比,体外扩增的 CD34细胞是否失去了造血干细胞原有的长期稳定植入能力,人们建立了人和动物的体内重建模型。
研究显示,尽管小鼠造血干/祖细胞在SCF、IL-3、IL6、IL-11 因子组合条件下能维持较短期的造血重建能力,但不能长期植入,提示 IL.3和1L1 的加入减弱了体外扩增的造血干/祖细胞的长期造血潜能。
小鼠骨髓来源巨噬细胞的SILAC代谢标记及生物质谱分析
小鼠骨髓来源巨噬细胞的SILAC代谢标记及生物质谱分析王通;郭嘉慧;陈智鹏;银兴峰;马文心;崔毅峙【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(28)6【摘要】目的作为模型细胞之一,小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)是药理学、药效学研究的重要工具和对象.然而,由于巨噬细胞增殖能力较弱,代谢标记细胞内蛋白一直是巨噬细胞生物学中的一个难题.因此,本研究以SILAC(stable isotope labeling with amino acids in cell culture)方法标记BMM.方法小鼠骨髓细胞的分离,以M-CSF诱导6 d并制备BMM,同时,SILAC标记细胞内蛋白;进而,裂解细胞并收集蛋白质,以SDS-PAGE进行初步分离,经胶内酶解成肽段,再通过质谱分析测定,统计得其标记效率.结果小鼠骨髓细胞在分化6 d时点成熟BMM可占细胞总数的0.965.以70 ku条带为研究对象,d 6、8和d 10鉴定到重链赖氨酸标记蛋白数分别为18、12和13个.其中,有8个蛋白在该3个时点中均被检出.统计结果表明3个时点的重链赖氨酸蛋白标记效率分别为(90.62±0.03)%、(90.23±0.03)%和(90.40±0.02)%,达到了SILAC研究的要求.结论该方法解决了BMM的SILAC标记问题,可为以巨噬细胞为研究对象的药理学研究提供有效的研究手段.%Aim Mouse bone marrow-derived macrophages (BMM) are recognized as standard model cells of macrophages, thus serving as a key tool and objective cell type in pharmacology. Due to limited proliferation capacity of macrophages, meta-bolically labeling BMM remains as a challenge in macrophage biological investigations. Therefore, the focus of this study was to label BMM with stable isotope labeling with amino acids in cellculture (SILAC). Methods Methods include: mouse bone marrow isolation, 6-day differentiation with M-CSF to prepare BMM; meanwhile, to use SILAC to label global proteins, followed by cell lysis, SDS-PAGE separation, in-gel digestion, mass spectrometry and bioinformatics. Results On Day 6 post-differentiation, 96. 5% of total mouse bone marrow cells wereobserved to become mature BMM. 70 ku band in SDS-PAGE separation was adopted to test the labeling efficiencies. The number of heavy lysine labeled proteins were 18, 12 and 13 for the time points of Day 6, 8 10 post-differentiation. Eight proteins were repeatedly identified in all time points. Statistically, the labeling efficiencies of the three time points were (90. 62 ± 0. 03)% , (90. 23 ±0. 03)% and (90. 40 ± 0. 02)% , respectively. Conclusion These results ensure the feasibility of employing SILAC-based proteomics in macrophage-relevant pharmacological investigations.【总页数】4页(P881-884)【作者】王通;郭嘉慧;陈智鹏;银兴峰;马文心;崔毅峙【作者单位】暨南大学生命与健康工程研究院,广东,广州,510632;暨南大学生命与健康工程研究院,广东,广州,510632;暨南大学生命与健康工程研究院,广东,广州,510632;暨南大学生命与健康工程研究院,广东,广州,510632;暨南大学生命与健康工程研究院,广东,广州,510632;暨南大学生命与健康工程研究院,广东,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】R-332;R329.24;R341;R394.2;R977.6【相关文献】1.小鼠骨髓来源巨噬细胞内多肽的分离鉴定 [J], 李阜烁;汪超;林文珍;范梦珠;Yacine Hemar;洪志骏;陈平;张少辉2.牙龈卟啉单胞菌对db/db小鼠骨髓来源巨噬细胞极化作用的初步探究 [J], 杨亚楠; 于时卉; 闫香珍; 罗礼君3.棕榈酸诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞M1型极化 [J], 张焱皓;刘芊伊;冯继红;李茂;刘利萍;秦欢;罗军敏4.巨噬细胞来源的TGF-β对小鼠骨髓成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原表达的影响 [J], 王胜;陈永平;吕敬龙;李颖;刘林5.磨损颗粒刺激下小鼠骨髓来源巨噬细胞调控白细胞介素-34表达的实验研究 [J], 刘子歌;今出真司;张晨;宋国瑞;陈德胜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
间充质干细胞和单个核细胞异种移植治疗小鼠肝损伤的研究
首 次换液 ， 以后 每隔 ２— ３ｄ换液 １ ， 次 去除悬浮生长的 细胞 。待贴壁细胞 生长 占瓶底 面积 的 ８ ％ ～ ０ ０ ９ ％时 ，
用 ０ ２ ％胰酶／ ．２ Ｄ Ａ（ ： ） ．５ ０ ０ ％Ｅ Ｔ １ １ 消化 并 以 １ ２比例 ：
传代 。取生长 良好 、 形态 上呈 较为 均一梭 形 的第 ３代 培养细胞 ， 消化 后配 成 １×１ － Ｌ 的单 细胞 悬 液 ， ０ ｍ 加入 ＦＴ ＩＣ标记 的 Ｃ ４ Ｄ ４抗 体 、 Ｄ ０抗 体和 Ｐ Ｃ９ Ｅ标记 的 Ｃ４ Ｄ ５抗 体 染 色 ， 流 式 细 胞 仪 检 测 ， 取 表 型 为 以 选
ＭＳ ｓＣ ４ 、 Ｄ ０均表达 阳性 ， Ｃ ４ Ｃ Ｄ ４ Ｃ ９ 而 Ｄ ５表 达阴性 ； ２个细胞移植组在 Ｔ ～ 时点 Ａ Ｔ和 Ａ Ｔ浓度差异 有统计 ｌ Ｌ Ｓ
学意义 （ ０ ０ ） 与肝损伤 对照组比较 ， Ｃ 移植 组 Ａ＿ 和 Ａ Ｔ浓度在 Ｔ 一Ｂ 时点均 降低 ；ＭＳ ｓ Ｐ＜ ． １ ； ＭＳ ｓ Ｉ Ｔ Ｉ Ｓ １ Ｃ 移植 组肝 损
目前 ， 治疗肝 损伤引起 的肝纤 维化及 各种终 末期
肝 病主要 方法有肝 脏移植 、 肝细胞 移植 和干细胞 移植
ＭＮ ｓ细胞 悬液 按 ４ ｍ
等， 但都 面临供体来源 困难 和免疫排 斥等 问题 。为此 ， 人们一直努力 寻求一种 理想 的生物人 工肝或新 型种子 细胞。研究显示 ， 具有 多 向分 化潜 能 的问充 质干 细胞 （ Ｃ） ＭＳ ｓ 有体外 易获得 、 源可靠 、 疫原 性很 弱且 异 来 免 体移植不 易发生免疫排斥 等优 点 Ｊ异体 Ｍ Ｃ 有望 ， Ｓｓ 成 为一种新 型的种 子细胞 ， 为治疗 各种终末 期肝病 提 供新策 略。 自２０ ０ ９年 １ 至 ２ １ 月 ０ ０年 ２月 ， 研究拟 比 本 较大 鼠骨髓 ＭＳ ｓ Ｃ 和单 个核 细胞 （ Ｃ ） 四氯化 碳 ＭＮ ｓ 在 （ Ｃ 诱 导性小 鼠肝损 伤治疗 中的作用 。 ＣＩ ）
体外培养单个造血干细胞实验方法的建立
体外培养单个造血干细胞实验方法的建立李乔;高瀛岱;纪庆;王金宏;许静;田晨;程辉;刘延风;张娜;程涛【摘要】Aim To explore the effect of nomegestrol acetate ( NOMAc ) on the apoptosis of endometriosis ( Ems ) in rat models and its mechanism. Methods The rat models of NOMAc were established by surgical operation method; histopathologic changes of ectopic endometrium were tested by HE staining; the level of antiendometrium antibody ( EMAb ) was tested by Elisa; the expression levels of apoptosis factors were tested by Western blot. Results NOMAc ( 0. 5,1. 5, 15 mg ·kg-1 ) shriveled ectopic endometrium; the number of endometrial gland was fewer; glandular cavity was smaller in NOMAc groups than those of modelgroups. NOMAc reduced dose-dependently the endometrial thickness and the level of EMAb. NOMAc( 0. 5, 1.5,15 mg · kg-1 ) increased Caspase-9, Caspase-3 and Bax protein expression and reduced Bcl-2 protein expression. Conclusion The inhibitory effect of NOMAc on ectopic endometrium of rat models may be related to reducing the level of EMAb, increasing Bax, reducing Bcl-2 protein expression, and activating Caspase-9 and Caspase-3 protein expression in endogenous apoptosis pathway.%目的通过建立一种体外稳定培养单个造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的实验方法,在未来筛选可以促进HSC体外扩增的化合物.方法通过配制HSCs体外培养液并结合流式分选技术,我们建立了一种在体外不需要基质细胞支持的,稳定的,高通量培养单个HSC形成一个血细胞集落的实验方法.结果只需培养10~14 d即可观察到化合物对HSC的作用,并结合流式细胞分析技术替代人工计数血细胞分化情况,进一步节省人力,具有客观、重复性强的特点,满足了高通量筛选药物的要求,为后续的研究和化合物筛选工作打下基础.为了验证此方法的可靠性,使用BIO(一种通过抑制糖原合成酶激酶-3,进而可以促进HSC自我更新的化合物)时,实验结果与文献报道的研究结果一致.结论该实验方法在有关造血干细胞体外扩增的药物筛选方面具有很好的应用价值.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(028)003【总页数】4页(P435-438)【关键词】单个HSC培养;流式细胞分选与分析;血细胞涂片;p18;小分子;干细胞扩增【作者】李乔;高瀛岱;纪庆;王金宏;许静;田晨;程辉;刘延风;张娜;程涛【作者单位】中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020【正文语种】中文【中图分类】R329.24;R329.28;R341;R965.1造血干细胞一直是成体干细胞研究中的热点。
小鼠骨髓来源树突状细胞的分离与扩增培养
小鼠骨髓来源树突状细胞的分离与扩增培养罗建飞;陈必成;陈忠华【期刊名称】《微循环学杂志》【年(卷),期】2005(015)001【摘要】目的:探讨树突状细胞(DC)分离纯化及其体外扩增的方法.方法:无菌制备C57BL/6小鼠骨髓;依次用红细胞裂解液去除红细胞,通过半粘附法去除T、B细胞,又在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)协同诱导下培育,DC前体分化发育成DC并扩增.在第7天用脂多糖(LPS) 和肿瘤坏死因子-a (TNF-a)刺激48h,检测细胞因子白介素-12(IL-12)浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86和MHCⅡ.结果:DC细胞数增加,其形态在光镜下多为特征性星形,也有梭形和多角形; 至培养第9天DC细胞表面标志CD11c、CD80、CD86、MHCⅡ阳性率分别为86.32±12.14%、76.42±8.45%、77.12±9.05%、68.45±6.84%,IL-12浓度较未用LPS 和TNF-a组明显增加(P<0.01).结论:①结果所得细胞的形态和功能符合DC;②用LPS 和TNF-a刺激可以获得成熟DC.【总页数】3页(P29-31)【作者】罗建飞;陈必成;陈忠华【作者单位】教育部器官移植重点实验室,卫生部器官移植重点实验室,华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,武汉,430030;教育部器官移植重点实验室,卫生部器官移植重点实验室,华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,武汉,430030;教育部器官移植重点实验室,卫生部器官移植重点实验室,华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R392.12;Q28【相关文献】1.小鼠脾脏来源树突状细胞的体外扩增培养 [J], 李宗辉;黄军华;刘俊峰;赵要顺2.小鼠脾脏来源树突状细胞的体外扩增培养 [J], 黎辉;曹宇皎;黄军华;刘俊峰3.小鼠骨髓来源树突状细胞的体外分离、扩增方法的建立 [J], 周军;吴雨岗;王昭昕;汪瑞4.小鼠骨髓和脾来源树突状细胞的分离与扩增培养 [J], 杨洪艳;吴皓5.小鼠骨髓来源的树突状细胞体外扩增与鉴定 [J], 夏俊波;吴奎;孙鲲;王长征因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠再生肝浸出液体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞样分化的研究
小鼠再生肝浸出液体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞样分化的研究于俊兰;李荣;王文杰;李力;刘巨超;王金晶;徐迎新【期刊名称】《中国康复理论与实践》【年(卷),期】2006(012)012【摘要】目的应用小鼠再生肝浸出液体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞样分化.方法利用2/3肝部分切除术后36 h小鼠再生肝组织浸出液定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞,在倒置显微镜下观察细胞形态,应用免疫荧光法鉴定细胞性质.结果骨髓间充质干细胞经小鼠再生肝浸出液诱导7 d后,呈肝细胞样圆形,1～2周后免疫荧光染色可见细胞表达肝细胞标记物CK8、CK18和清蛋白.结论小鼠再生肝浸出液可诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞方向分化.【总页数】3页(P1056-1057,封3)【作者】于俊兰;李荣;王文杰;李力;刘巨超;王金晶;徐迎新【作者单位】解放军总医院普通外科研究所,北京市,100853;解放军291医院,内蒙古包头市,014040;解放军总医院普通外科研究所,北京市,100853;清华大学材料系生物材料实验室,北京市,100084;解放军总医院普通外科研究所,北京市,100853;解放军总医院普通外科研究所,北京市,100853;解放军总医院普通外科研究所,北京市,100853;解放军总医院普通外科研究所,北京市,100853【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.虫草多糖体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞样细胞 [J], 刘江凯;宋雅芳;刘友章;杨谕晨;张久梅;2.虫草多糖体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞样细胞☆ [J], 刘江凯;宋雅芳;刘友章;杨谕晨;张久梅3.川芎嗪体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究 [J], 刘云云;赵兴绪;赵红斌;葛宝丰;刘兴炎;陈克明4.体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞样细胞方向分化 [J], 胡晶;牟玲;罗恩杰5.小鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的实验研究 [J], 朱小虎;陈霞平;阮绪芝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
关于造血干细胞的几个概念和常用检测方法
关于造血干细胞的几个概念和常用检测方法造血干细胞的检测方法：由于具有自我更新和多向分化这两个基本特点，所以在判定时必须同时满足这两个条件，需要所用的方法能够同时反映这两个指标。
体内长期多系重建造血研究噬判断造血干细胞最直接、最可靠的方法，对动物较为方便，而对人造血干细胞的研究则在很大程度上需要通过体外测试间接反映。
目前主要通过功能实验来检测造血干细胞。
脾结节形成单位（CFU-S）测定法只适用于啮齿类动物。
是检测小鼠造血干细胞的经典方法。
其测定小鼠造血干细胞在脾脏定居和形成集落的能力。
给受致死剂量照射的小鼠输入同种骨髓细胞，在第8天和第14天计数小鼠脾脏表面的集落。
每一个集落均是由一个造血干细胞增殖分化来的，而且输入的骨髓细胞数与生成的脾结节具有良好的线性关系。
通常第14天的CFU-S比第8天更原始。
长期重建实验和骨髓再植测试长期重建实验（long-term trpopulating/reconstituting assay，LTRA）和骨髓再植测试（marrow repopulating assay，MRA）是将造血干细胞输注给受致死剂量照射的小鼠或SCID小鼠，观察各系的长期造血重建或骨髓再植重建髓系造血的情况。
具有长期多系造血重建能力的细胞成为长期重建细胞LTRC，而具有定居于受照小鼠骨髓并重建髓系造血能力的细胞称为骨髓再植能力细胞，其比LTRC 成熟但早于12天的CFU-S。
有实验证实，LTRC是一种比CFU-S更早的造血干细胞。
由于人的造血干细胞可植入SCID小鼠，所以用SCID小鼠移植通常用来检测人的造血干细胞。
但其对检测人的造血干细胞活性存在一些限制，因这些小鼠在12个月内死亡而是长期观察及次级移植实验有一定难度。
另外，其淋巴器官缺陷，在SCID小鼠体内人造血细胞向淋巴系分化受到影响。
由于这些限制，确切地将这种细胞称为SCID小鼠再植细胞（SCID repopulating cell，SRC）。
小鼠骨髓衍生肝干细胞体外扩增及体内分化的实验研究的开题报告
小鼠骨髓衍生肝干细胞体外扩增及体内分化的实验研究的开题报告一、研究背景肝脏在人体内具有重要的生理功能，包括代谢、解毒、贮藏等。
但现有的治疗肝脏疾病的方法并不理想，例如移植等治疗方法存在着供体不足、术后反应等问题。
因此，寻找新的治疗方法具有重要意义。
干细胞可以分化为多种细胞类型，具有广泛的应用前景。
其中，体内分化为肝细胞的能力尤其引人注目。
小鼠骨髓衍生肝干细胞可以在体内定植，并分化为肝细胞。
因此，研究小鼠骨髓衍生肝干细胞的体外扩增及体内分化，对于肝脏疾病的治疗具有重要的意义。
二、研究目的本研究旨在探讨小鼠骨髓衍生肝干细胞的体外扩增及其在体内分化为肝细胞的能力，并初步评估其在肝脏疾病治疗中的应用潜力。
三、研究内容及方法本研究计划通过以下步骤来实现研究目的：1. 骨髓细胞的分离与培养。
将小鼠骨髓细胞通过Ficoll法分离，并在培养液中进行培养。
2. 干细胞的筛选与鉴定。
利用萃取法、形态学观察及流式细胞术等方法，筛选并鉴定具有干细胞特性的细胞。
3. 干细胞的体外扩增。
通过培养液中添加多种生长因子及细胞因子等方法，促进干细胞的体外扩增。
4. 干细胞的体内移植。
将体外扩增后的干细胞移植到小鼠肝脏中，观察其能否定植及分化为肝细胞。
5. 肝细胞的鉴定与评估。
通过免疫组化、PCR等方法，鉴定移植成功的干细胞是否分化为肝细胞，并评估其分化效果。
四、研究意义及预期结果本研究将为肝脏疾病的治疗提供一种新的方法。
通过探究小鼠骨髓衍生肝干细胞的体外扩增及体内分化能力，可以为肝脏疾病的治疗提供一种新的思路。
预期结果是成功筛选并体外扩增出具有干细胞特性的细胞，并成功将其移植到小鼠肝脏中，并且能够分化为肝细胞。
此外，初步评估其在肝脏疾病治疗中的应用潜力。
肝细胞生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化的实验研究
肝细胞生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化的实验研究傅玉如;陈玥;方天翎;闵军【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2005(30)10【摘要】目的探讨肝细胞生长因子(HGF)诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)体外定向分化为肝细胞的能力.方法对ESC体外悬浮培养5～7天形成的拟胚体,观察ESC自主分化、HGF诱导分化的情况.观察和检测经诱导4周的细胞的HE染色,糖原染色,尿素氮及甘油三酯合成,心肌MHC、白蛋白、AFP、CK18的表达,以及吲哚氰绿(ICG)染色情况.结果 ESC自主分化难以控制.HGF可促进ESC向内胚层进一步分化,但更可能诱导其向心肌分化.表达白蛋白、AFP、CK18、ICG和FDA染色阳性.结论HGF可诱导ESC分化出肝细胞,但HGF的单一作用能力有限,提示肝细胞的诱导分化可能需要多种因素共同作用.【总页数】3页(P898-900)【作者】傅玉如;陈玥;方天翎;闵军【作者单位】510120,广州,中山大学第二附属医院医学研究中心;解放军第161医院儿科;中山大学第三附属医院肝移植科;510120,广州,中山大学第二附属医院肝胆外科【正文语种】中文【中图分类】R329.21【相关文献】1.丁酸钠体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞 [J], 商昌珍;闵军;张磊;刘璐;邓小耿;陈亚进;陈积圣2.肝细胞生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化的实验研究 [J], 傅玉如;陈玥;方天翎;闵军3.肝细胞生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化肝细胞的功能鉴定 [J], 黄丽云;陈梅;傅玉如;林艳华4.人参皂甙与肝细胞生长因子诱导骨髓间质干细胞分化为肝细胞的实验研究 [J], 邓小耿;闵军;蔡云锋;杨勇志;方天翎;陈积圣5.曲古菌素A联合细胞因子体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞 [J], 朱小波;李正欣;顾欣欣;雷卓;张洁;李海涛;周鸣鸣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠骨髓间充质干细胞体外培养及CM-DiI标记的实验研究
Ｒ ４ ５ ７ ． ７ 中图分类号
化 原位 杂交 中理想 的 细胞 荧 光 标 记 ； 将标 记 的细 胞 注 入体 内 ， 可 以有 效 地 显示 移 植 细 胞 在 活体 组 织 中
的迁移 和分 化 。笔 者应 用全 骨髓 贴壁 培养 法获得 纯 度较 高 的 ＭＳ Ｃ ｓ ， 观 察其 生物 学特 性 ， 并对 Ｃ Ｍ－ Ｄ ｉ Ｉ 体 外标 记 ＭＳ Ｃ ｓ 进 行 动态 观 察 ， 为 后 期 体 内移 植 示 踪 研究 提供 依 据 。
别经油红 ０和茜 素红染色均呈 阳性 。Ｃ Ｍ— Ｄ ｉ Ｉ 标记后 荧光显 微镜下细胞呈红色荧 光 ， 体外培 养 ２周荧 光未 见 明显 减弱 ； 流式细胞术检测显 示标 记率 达 ９ ５ ％ 以上 ， 标记 后细 胞生 长 增殖不受影响 。结论 通 过全 骨髓贴 壁法及 其扩增 后 可获 得大量纯度较高 的问充质 干细胞 ， Ｃ Ｍ — Ｄ ｉ Ｉ 标 记是一 种简单 、 稳定 、 无毒 的细胞标 记方法 。
生 长 增 殖 的影 响 。结 果 Ｍ Ｓ Ｃ ｓ 接种 ２ ４～ ４ ８ ｈ后 ， 贴 壁 细 胞
是 否归 巢 于靶器 官仍 然是 一个研 究重 点 和难点 。氯
甲基苯 甲酰 氨荧 光染 料 （ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ — ｂ ｅ ｎ ｚ ａ ｍｉ ｄ ｏ ｄ ｉ ａ ｌ — ｋ ｙ ｌ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｎ ｅ ， Ｃ Ｍ— Ｄ ｉ Ｉ ） 作 为 一 种 细 胞 膜 荧 光 染 料， 标记 时 间长 ， 性 质稳 定 ， 易操 作 ， 对 细胞无 毒 害作 用， 且不 受 固定 和包 埋 等 影 响 ， 是 免疫 荧 光 、 免 疫 组