细菌的耐药性及检测
第章细菌药敏试验及其耐药表型检测
第章细菌药敏试验及其耐药表型检测细菌药敏试验是临床细菌感染治疗中非常重要的检测手段，通过该技术可以检测不同抗生素对细菌的敏感性，进而为合理使用抗生素提供科学的依据。
然而，在临床应用过程中，随着抗生素不合理使用的增加，细菌耐药性也随之快速发展。
因此，针对不同耐药表型的检测越来越受到关注。
一、细菌药敏试验细菌药敏试验是一种用于判断细菌对不同抗生素敏感性的方法。
常见的细菌药敏试验方法包括纸片扩散法、E测试、革兰氏染色法、微量稀释法等。
其中纸片扩散法是最常用的一种方法，其原理是将待检细菌涂在琼脂平板上，然后在板上放置一些含有不同抗菌药物的试纸，细菌耐药性差的部分会被试纸上的抗生素杀灭，出现纯净孔（抑菌圈），通过抑菌圈的直径可以初步判断细菌对抗生素的敏感性或耐药性。
细菌药敏试验有很多应用价值，如能够帮助医生选择合适的抗生素治疗细菌感染，避免了不必要的抗生素使用，同时也可作为科研人员研究细菌抗药机制的工具，为抗菌药物的开发提供依据。
二、耐药表型检测随着细菌抗药性问题的不断加重，对不同耐药表型检测的需求也越来越迫切。
耐药表型是指细菌对特定抗生素的耐药情况。
由于不同的细菌及其不同的菌株对抗生素的敏感程度有所不同，因此抗菌药物在应用过程中会出现不同菌株对不同药物的耐药表型。
目前，针对不同耐药表型检测的方法主要有两种：基于分子生物学技术的方法和基于药敏试验的方法。
1. 基于分子生物学技术的方法基于分子生物学技术的方法是检测细菌耐药性最常用的方法之一。
该方法通过检测细菌中特定的基因或者基因片段，以此确定细菌耐药性的表型。
常见的基于分子生物学技术的方法包括PCR检测、基因芯片技术、实时荧光定量PCR等。
2. 基于药敏试验的方法基于药敏试验的方法是已经成熟的检测方法之一，其通过将药敏试验的结果与临床药物疗效相结合，进而确定细菌耐药性表型。
通过检测不同抗生素对不同菌株的敏感性，可以初步反映出细菌的耐药性状态。
当然，这种方法不仅涉及到耗时、耗材、人力等成本的问题，而且还受到试验条件、条件操作等方面的影响。
检验科微生物室多重耐药的检测及分析
检验科微生物室多重耐药的检测及分析微生物室是医院中一个非常重要的部门，它负责对临床样本进行微生物学检验，为医生提供临床诊断和治疗方案的参考。
在微生物室工作的人员需要对微生物有着深入的了解，并且需要具备丰富的实验技能和经验。
而在微生物室工作中，多重耐药菌的检测和分析是一项重要的工作，下面我们就来详细介绍一下检验科微生物室多重耐药的检测及分析。
一、多重耐药菌的定义多重耐药菌是指对多种抗生素产生耐药性的细菌，也被称为多药耐药菌或超级细菌。
它们通常是由于长期大量使用抗生素、抗菌药物或不合理使用抗生素等原因导致的，对人类健康构成了严重的威胁。
二、多重耐药菌的检测方法1. 细菌培养及鉴定在微生物室中，通过对临床样本进行细菌培养和鉴定，可以确定患者体内的细菌种类及其数量，为后续的药敏试验提供了基础数据。
常用的培养基有大肠杆菌菌落计数培养基、金黄色葡萄球菌培养基等。
2. 药敏试验药敏试验是指将分离出的细菌接种在含有不同抗生素的琼脂板上，观察菌落的生长情况以及对抗生素的敏感性。
通过药敏试验可以确定细菌对各种抗生素的耐药性，为临床治疗提供参考依据。
3. PCR技术PCR技术是一种常用的分子生物学技术，可以对细菌进行基因检测，包括耐药基因的检测。
通过PCR技术可以快速准确地检测出细菌是否携带耐药基因，为临床用药提供了有力的支持。
4. 质谱技术质谱技术是一种高灵敏度、高分辨率的分析技术，在微生物室中常用于对微生物的鉴定和分析。
通过质谱技术可以直接对细菌中的代谢产物进行分析，从而判断细菌的耐药情况。
5. 流式细胞术流式细胞术是一种高通量的细胞分析技术，可以对样本中的细胞进行快速、精确地检测和分析。
在微生物室中，流式细胞术可以用于细菌的数量统计以及对耐药菌的筛选。
三、多重耐药菌的分析方法1. 耐药基因分析通过PCR技术和质谱技术可以对细菌进行耐药基因的分析，从而确定细菌对抗生素的耐药性。
通过对耐药基因的分析可以了解细菌的耐药机制，为临床治疗提供了重要的参考依据。
细菌耐药性检测方法
细菌耐药性检测方法传统检测方法主要包括药敏试验和漏斗法。
药敏试验通过将不同的抗生素与待检细菌进行共培养，观察细菌的生长情况，可以确定细菌对不同抗生素的敏感性。
漏斗法又称为浓度梯度法，将一系列不同浓度的抗生素加入含有细菌的琼脂平板培养基中，观察细菌生长的情况，通过最小抑菌浓度（MIC）来确定细菌的耐药性。
然而，传统的检测方法有一些不足之处，包括需要较长的检测时间、操作复杂、耗时耗力、存在人为误差等。
因此，近年来，分子检测方法逐渐应用于细菌耐药性的检测。
分子检测方法主要包括PCR技术、基因芯片技术和下一代测序技术。
PCR技术（聚合酶链式反应）是一种快速、高效、敏感的检测技术，通过扩增特定基因片段来判定细菌的耐药性。
该技术可以快速检测出是否存在耐药基因，并可通过测序等方法进一步确定具体基因型。
基因芯片技术则可以同时检测多个耐药相关基因，具有高通量、快速、精确度高的优点。
而下一代测序技术则可以对细菌的基因组进行全面分析，包括基因序列、变异信息等，对于耐药性的研究提供了更多的信息。
传统检测方法和分子检测方法在细菌耐药性检测中都具有一定的适用性，可以根据具体的实验要求和资源情况选择合适的方法。
对于临床应用而言，传统检测方法的优势在于成熟、经济、稳定，但无法提供细菌的详细基因型信息；而分子检测方法则具有高通量、高灵敏度、高特异性的优势，但需要较复杂的实验设备和操作技术。
细菌耐药性的检测方法在临床、食品安全、环境监测等领域具有重要的应用价值。
通过检测细菌的耐药性，可以指导临床合理使用抗生素，减少抗生素滥用，避免耐药细菌的产生和传播；在食品安全领域，可以掌握食品中耐药细菌的情况，保障食品的质量安全；在环境监测领域，可以及时发现环境中的耐药菌，为环境卫生管理提供参考依据。
综上所述，细菌耐药性的检测方法既有传统的药敏试验和漏斗法，也有分子检测的PCR技术、基因芯片技术和下一代测序技术。
各种方法各有优缺点，可以根据具体实验需求和资源条件选择合适的方法。
检验科微生物室多重耐药的检测及分析
检验科微生物室多重耐药的检测及分析多重耐药是指微生物对多种抗生素产生耐药性的情况。
在临床上，多重耐药致使临床用药受限，难以有效治疗感染性疾病，给患者带来严重的健康风险。
对多重耐药的检测及分析具有重要的临床意义。
目前，多重耐药的检测及分析方法主要包括传统培养方法、分子生物学方法和基因测序方法。
下面将对这些方法进行详细介绍。
1.传统培养方法：传统培养方法主要是通过培养细菌样本来进行细菌的分离和鉴定，并通过有效浓度抗生素的敏感试验来检测细菌的耐药性。
这种方法的优点是简单易行，成本低廉。
由于某些细菌的生长速度慢，以及存在一些细菌难以培养或形成菌落的情况，导致该方法的检测结果可能存在偏差。
2.分子生物学方法：分子生物学方法主要包括聚合酶链式反应（PCR）和核酸杂交等。
PCR方法通过扩增目标基因片段，然后通过DNA测序或比色法来检测细菌的耐药性基因。
该方法的优点是灵敏度高，特异性强，能够快速检测细菌耐药性基因。
该方法的缺点是不能获取整个细菌基因组的信息。
3.基因测序方法：基因测序方法通过对细菌基因组的全面测序，来获得细菌的整个基因组信息，从而判断细菌的耐药性。
该方法利用高通量测序技术，能够快速、准确地获得细菌基因组序列，并通过比对数据库来鉴定细菌的耐药性基因和耐药基因突变。
该方法的优点是能够获得全面的基因组信息，对细菌的耐药性分析更加准确和全面。
该方法的缺点是成本较高，对技术要求较高。
在多重耐药的检测及分析中，综合以上三种方法可以更准确地判断细菌的耐药性。
通过传统培养方法进行细菌分离和鉴定，同时进行有效浓度抗生素的敏感试验。
然后，通过PCR或核酸杂交等分子生物学方法对细菌的耐药性基因进行检测。
通过基因测序方法对细菌的整个基因组进行测序和分析，以获得更准确和全面的耐药性信息。
多重耐药的检测及分析是一项重要的临床工作，能够指导合理用药、减少抗生素滥用、提高临床治疗效果。
多种方法的综合应用可以更准确地判断细菌的耐药性。
(整理)呼吸道感染细菌分布、耐药性及耐药基因检测
呼吸道感染细菌分布、耐药性及耐药基因检测一．细菌分布1. 2008年中国耐药细菌检测（CHINET）发布细菌分布:细菌来源分布表明感染性疾病仍然以呼吸道感染为主。
按细菌菌株数将革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌进行排列如下: 大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、克雷伯氏菌属、不动杆菌属、金黄色葡萄球菌、肠球菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、肠杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、溶血链球菌、变形杆菌。
2. 2006-2007年度卫生部全国细菌耐药监测(Mohnarin)结果全国细菌分布:3．2006-2007细菌来源分布表明感染性疾病仍然以呼吸道感染为主；按细菌菌株数将革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌进行排列如下: 大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌属、鲍曼不动杆菌、表皮葡萄球菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、链球菌属、溶血葡萄球菌、流感嗜血杆菌、奇异变形杆菌、肺炎链球菌。
Mohnarin年度报告之华北地区细菌分布: 总分离28763株, 革兰氏阳性菌9628株, 占33%；革兰氏阴性菌19135株, 占67%。
细菌来源分布表明感染性疾病仍然以呼吸道感染为主；细菌分布排列如下: 大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、鲍曼不动杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、屎肠球菌、奇异变形菌、黏质沙雷菌、肺炎链球菌。
和全国相比较有部分区别。
4. 个人总结的北方地区下呼吸道细菌分布如下: （细菌分布数据来源）下呼吸道细菌感染主要细菌分布前11位依次是: 下呼吸道细菌感染主要细菌分布前10位依次是: 铜绿假单胞菌（15.16%）, 金黄色葡萄球菌（10.97%）, 肺炎克雷伯氏菌（9.37%）, 大肠埃希氏菌（9.21%）, 鲍曼不动杆菌（7.71%）, 肺炎链球菌（4.41%）, 阴沟肠杆菌（3.52%）, 屎肠球菌（2.34%）, 嗜麦芽假单胞菌（2.25%）, 粪肠球菌（1.92%）, 表皮葡萄球菌（0.87%）。
实验七++细菌的药敏试验与耐药性检测
实验七细菌的药敏试验及耐药性检测【目的和要求】1.掌握纸片扩散法（K-B法）、液体稀释法两种药敏试验的原理和方法。
2.熟悉上述两种药敏试验方法的应用。
3.了解几种细菌耐药表型检测的原理、方法及意义。
【试剂与器材】1．培养基：一般需氧和兼性厌氧菌采用水解酪蛋白（M-H）琼脂或M-H液体培养基（pH7.2~7.4）。
对于营养要求高的细菌，则需在M-H培养基中加入其它营养成分。
2．抗菌药物纸片：直径为6.0~6.35mm的滤纸片上，含有一定量的某种抗菌药物。
市场有售，但生产厂家须获得国家食品药品监督管理局（SFDA）批准。
不同种类的待测菌药敏试验选择不同的抗菌药物，药敏纸片的选择见表7-1。
3．待测细菌接种普通营养琼脂经35℃16~18h的纯培养物。
4. 0.5%麦氏比浊管配制方法如下：0.048mol BaCl2 (1.17% W/V BaCl2 . 2H2O) 0.5ml0.18mol H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml将二液置冰水浴中冷却后混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。
用前混匀。
有效期为6个月。
5.其它：无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、酒精灯、镊子、生物安全柜、培养箱等。
【实验容】一、纸片扩散法（K-B法）药敏试验1．原理将含有定量的抗菌药物纸片贴在已接种待测细菌的琼脂平板表面，纸片上的药物随即溶于琼脂中，并沿纸片周围由高浓度向低浓度扩散，形成逐渐减少的梯度浓度。
在纸片周围，一定浓度的药物抑制了细菌的生长从而形成了透明的抑菌环，抑菌环的大小则反映了待测菌对该种药物的敏感程度。
K-B法是由Kirby - Bauer 建立，美国NCCLS推荐，目前为世界所公认的标准纸片扩散法（定性法）。
2．方法（1）培养基的准备：将无菌M-H琼脂加热融化，趁热倾注入无菌的直径90mm平皿中。
琼脂厚为4mm（约23~25ml培养基），琼脂凝固后塑料包装放4℃保存，在5日用完，使用前应在37℃培养箱放置30min使表面干燥。
检验科细菌耐药性监测标准操作程序SOP文件
检验科细菌耐药性监测SOP文件一、耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococci,MRS）MRS是引起临床感染的常见病原菌，同时也是引起医院感染的重要病原菌之一，其耐药特点是耐受甲氧西林的同时，还对临床广泛应用的多种抗生素呈现多重耐药，因而该菌所致感染已成为临床治疗的一大难题。
（一）MRS测定方法1、纸片扩散法接种物：直接悬液法从非选择琼脂平皿上挑取少许单个菌落至无菌生理盐水调至浓度0.5 McFarland,具体操作同常规纸片法药敏试验。
苯唑西林纸片，1R g/片，检测MRS平板应置于35℃ （而不是37℃）孵育24h （而不是16〜18h）。
结果判断：金黄色葡萄球菌：S：三13mm；I：11〜12mm；R:W10mm。
凝固酶阴性葡萄球菌：S：三18mm；R W17mm。
对于苯唑西林纸片周围的抑菌圈内有任何小菌落或稀薄“菌膜”生长都应列为MRS。
2、琼脂筛选法：如果纸片试验结果中介时，可做琼脂筛选法，培养基为MH琼脂+6R g/ml苯唑西林+4%NaCl,调整菌液浓度0.5McFarland,于35℃孵育24h,凡有任何生长即使一个菌落均报MRS。
（二）MRS监测意义对于MRS,应报告对所有头抱菌素类和其他B -内酰胺酶类耐药，喹喏酮类药物，除氟哌酸外，环丙氟哌酸，氟嗪酸有较好抗菌活性（耐药率10〜23%之间），利福平敏感率在90%以上，未见耐万古霉素菌株，但已有万古霉素中介金黄色葡萄球菌。
二、高水平耐药的肠球菌（HLAR）及耐万古霉素的肠球菌（VRE）（一）药敏测定方法1、常规测定方法：采用K-B纸片扩散法，头抱菌素不用做（均为耐药），氨苄，庆大霉素，替考拉宁，万古霉素一定要做。
2、高水平氨基糖甙类耐药性测定：⑴高含量纸片扩散法：通常测定庆大霉素和链霉素的高度耐药性，具体操作如常规纸片法药敏试验。
药敏纸片：庆大霉素：120R g/片；链霉素300p g/片结果判断：R：W6mm；I：7~9mm；S：三10mm⑵含单一高浓度抗生素琼脂平皿法：稀释法：庆大霉素：R：三500R g/ml；链霉素：R：2000p g/ml3、万古霉素耐药性测定：纸片扩散法，具体操作如常规纸片法药敏试验，万古霉素纸片为：30p g/片，检测平皿置35℃24h （而不是16〜18h）,并注意抑菌圈内有无小菌落或薄膜生长。
细菌耐药性监测和防控管理制度
细菌耐药性监测和防控管理制度第一章总则第一条目的和依据1.为了保障医院医疗质量，有效监测和防控细菌耐药性的传播和扩散，订立本规章制度。
2.本制度依据《中华人民共和国传染病防治法》《中华人民共和国医疗机构条例》等相关法律法规。
第二条适用范围1.本制度适用于医院内全部科室、各级医务人员、护理人员等相关人员。
2.各科室依据本制度的要求，订立符合本科室特点的相关管理方法和操作规程。
第三条定义1.细菌耐药性：指细菌对抗生素或其他药物产生的抗药物性。
2.监测：指对细菌耐药性进行系统、长期的监测和评估。
3.防控：指对细菌耐药性的传播和扩散采取各种措施，包含防备、监测、隔离、教育、培训等。
第二章细菌耐药性监测和评估第四条细菌耐药性监测和评估的目的1.确定医院细菌耐药性的流行情况和趋势。
2.发现和监测细菌的变异和新显现的耐药性。
3.评估细菌耐药性对患者治疗和医院感染掌控的影响。
第五条细菌耐药性监测和评估的内容1.对呼吸系统、消化系统、泌尿系统、血液系统、皮肤和软组织等科室常见感染细菌的耐药性进行监测。
2.对每一批次进货的抗生素进行抽样检测。
3.对医院内患者的细菌耐药性进行监测，并将监测结果报送给医疗质量管理部门和临床科室。
第六条细菌耐药性监测和评估的方法1.手记标本：依据不同感染部位和病情，选择合适的标本进行手记。
2.分别培养：对手记的标本进行细菌分别和培养，并进行鉴定。
3.药敏试验：对培养的细菌进行药敏试验，确定其对不同抗生素的敏感性和耐药性。
4.数据统计和分析：对检测结果进行统计和分析，形成监测报告。
第三章细菌耐药性防控第七条医院细菌耐药性防控的原则1.提高医务人员的感染掌控和手卫生意识。
2.合理使用抗生素，避开滥用和过度使用。
3.定期培训和教育医务人员，提高细菌耐药性防控知识和技能。
第八条感染防备与掌控1.严格执行无菌操作规范，避开交叉感染。
2.加强医疗废物管理，确保废物的正确处理，防止感染扩散。
第九条手卫生1.医务人员在接触患者前后必需进行手卫生。
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细菌的耐药性及检测：体外抗生素敏感试验方法近年来，由于细菌耐药性不断增加，新的耐药机制和耐药菌株不断被发现，如MRSA、耐万古霉素肠球菌(VRE)、耐青霉素肺炎链球菌(PRP)以及β内酰胺酶中的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)、去阻遏持续高产AmpC酶和金属β内酰胺酶等。
临床抗生素的选择使用非常困难。
因此必须开展体外抗生素敏感试验，了解细菌耐药谱，对抗菌药物的临床使用效果进行预测，对患者选择个体化的治疗方案；同时通过耐药检测及流行病学调查，为医院感染控制方案制订提供依据；也有助于新药的抗菌特性研究。
临床细菌学实验室应选择合适的抗菌药物用于体外药敏试验，为临床抗感染治疗提供依据。
(一)药敏试验中抗菌药物的选择原则抗菌药物药敏试验中测试药物种类的选择，应依据各医院院内感染控制委员会、临床医师、药剂人员及微生物学检验医师等相互协商按本单位的实际情况制订，但必须满足以下条件：1.选用的抗菌药物应具备一组或一群代表性及预示性，如具有共同的耐药机制，或对某类菌株具有特定的意义等。
2.有助于指导临床抗感染治疗与流行病学的调查。
3.应充分考虑分离菌株的来源部位，如从脑脊液分离的菌株，应选用能通过血脑屏障的抗菌药物进行体外药敏试验等。
4.根据细菌种类或来源，通常选择6～16种不同抗菌药物。
(二)选择方案在遵循上述原则基础上，可以参照美国CLSI推荐的各菌种抗菌药物的分组选择。
结合本院实际情况制定选用方案。
1.肠杆菌科细菌抗菌药物药敏试验抗菌药物选择方案(1)首选试验和报告的抗菌药物：氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦或阿奠西林／克拉维酸或哌拉西林／他唑巴坦或替卡西林／克拉维酸中任一种；头孢唑林或头孢噻吩、头孢呋辛或头孢孟多、头孢西丁或头孢替坦、头孢噻肟或头孢他啶或头孢曲松或头孢哌酮中任选二种；头孢吡肟或头孢匹罗；庆大霉素；环丙沙星或左氧氟沙星或培氟沙星任选1～2种；亚胺培南，复方新诺明。
(2)次选试验和报告的抗菌药物：呋喃妥因、氯霉素、妥布霉素、卡那霉素、阿米卡星、氨曲南、奈替米星、四环素、诺氟沙星或氧氟沙星。
(3)从肠道标本中分离的沙门菌属与志贺菌属细菌常规只应试验和报告氨苄西林、复方新诺明及一种喹诺酮类抗菌药物；分离自肠道以外的沙门菌属菌株应试验和报告多种抗菌药物的药敏试验与报告，包括氯霉素和三代头孢菌素。
(4)分离自脑脊液的肠杆菌科细菌，只需报告氨苄西林、头孢噻吩、头孢唑啉、庆大霉素的药敏结果。
(5)采用合适的方法如双纸片法等检测ESBLs；对产ES-BLs细菌，不管实际药敏检测结果如何，所有青霉素类、头孢菌素类和氨曲南的试验结果报告耐药。
2.铜绿假单胞菌和不动杆菌属等药敏试验抗菌药物选择方案(1)首选试验和报告的抗菌药物：替卡西林或哌拉西林或美洛西林中的一种，头孢他啶、头孢哌酮、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南或美洛培南；庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素；环丙沙星等。
(2)次选试验和报告的抗菌药物：羧苄西林、头孢噻肟或头孢曲松、奈替米星、氯霉素、四环素、左氧氟沙星或诺氟沙星或氧氟沙星、复方新诺明等。
(3)除铜绿假单胞菌和不动杆菌可用纸片扩散法进行药敏试验，对其他非发酵菌应使用稀释法进行药敏试验。
3.葡萄球菌属菌种药敏试验抗菌药物选择方案(1)首选试验和报告的抗菌药物：青霉素G、苯唑西林、头孢噻吩或头孢唑啉；红霉素或克拉霉素或阿齐霉素、克林霉素；万古霉素；复方新诺明。
(2)次选试验和报告的抗菌药物：氯霉素、环丙沙星或左氧氟沙星或氧氟沙星、庆大霉素、四环素、利福平、呋哺妥因等。
(3)青霉素G敏感的葡萄球菌对其他青霉素类、头孢菌素药物敏感；青霉素G耐药，苯唑西林敏感菌株，对β内酰胺酶不稳定的青霉素类耐药，对β内酰胺酶稳定的青霉素类、β内酰胺酶抑制剂复合制剂及头孢菌素类抗菌药物敏感；苯唑西林耐药的葡萄球菌对所有β内酰胺类抗菌药物耐药。
因此只要从青霉素G及苯唑西林药敏试验结果，即可推断β内酰胺类抗菌药物的敏感性，不必对这类抗菌药物进行常规药敏试验。
(4)腐生葡萄球菌对苯唑西林的耐药表现不稳定，不能进行以上推导，应以每种抗菌药物稀释法实际检测结果判定。
4.肠球菌属药敏试验抗菌药物选择方案(1)首选试验和报告的抗菌药物：青霉素G或氨苄西林、万古霉素。
(2)次选试验和报告的抗菌药物：庆大霉素500、链霉素2000、氯霉素、红霉素、四环素、利福平、环丙沙星、左氧氟沙星、呋喃妥因等。
由于肠球菌天然对氨基糖苷类存在低度耐药，因此在测定时必须使用高浓度药物测定，测定结果仅预示能否用常规剂量进行治疗。
(3)在体外检测肠球菌对头孢菌素娄、氨基糖苷类(除高水平耐药筛选外)、克林霉素、复方新诺明可出现敏感，但临床治疗无效，应报告耐药。
(4)不产β内酰胺酶、青霉素G敏感的肠球菌，可预示氨苄西林、阿莫西林、氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／克拉维酸、哌拉西林／他唑巴坦敏感。
来自血液、脑脊液的菌株应检测β内酰胺酶。
对严重肠球菌感染，如心内膜炎患者通常用青霉素或氨苄西林或用万古霉素加一种氨基糖苷类药物联合治疗。
(5)耐万古霉素肠球菌(VRE)可选用氯霉素、红霉素、四环素、利福平等抗菌药物作药敏试验，或与感染科医师、临床药学帅等共同商定，并将检测结果报告临床。
5.除肺炎链球菌外其他链球菌属菌药敏试验抗菌药物选择方案(1)首选试验和报告的抗菌药物：青霉素G或氨苄西林、红霉素、氯霉素、林可霉素、万古霉素等。
(2)次选试验和报告的抗菌药物：头孢噻肟或头孢曲松、头孢吡肟、左氧氟沙星、氧氟沙星等。
(3)血液和正常无菌部位的体液分离到草绿色链球菌，应检测青霉素G的最低抑菌浓度(Minimalinhibitoryconcentration，MIC)。
(4)从尿道分离到的此类细菌，不做红霉素、氯霉素和克林霉素的常规药敏报告。
(5)不需常规进行对用于治疗A群、B群链球菌的青霉素及其他β内酰胺类抗菌药物的敏感试验。
发现万古霉素耐药或中介的A群、β群链球菌菌株，应送参考实验室予以确认。
(三)体外抗菌药物敏感试验常用的检测方法目前可用于细菌药敏检测的方法较多，常用的有纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂稀释法、E-test法和自动化仪器法等。
根据实验室条件和需要选用不同方法。
1.稀释法有肉汤稀释法和琼脂稀释法。
适用于需氧及兼性厌氧的快速生长型细菌，如肠杆菌科、非发酵菌、葡萄球菌属和肠球菌属；嗜血杆菌属、奈瑟菌属、肺炎链球菌及其他链球菌等菌株，还适用于厌氧菌、酵母样真菌及支原体等。
操作步骤如下：(1)抗菌药物的稀释：根据每种药物、细菌种类和感染部位的不同，选择不同的抗生素浓度稀释范围，用阳离子调节的M-H肉汤以2n进行倍比稀释抗菌药物(如256、128、64、～0.125……)。
将稀释后的药物加人试验管，或加入冷却至45～55℃M-H琼脂培养基中，立即按无菌要求倾注至无菌平皿。
(2)菌液配制：用无菌生理盐水或M-H肉汤配制成0.5麦氏单位浊度的菌悬液。
(3)接种：在配制好的含药浓度梯度肉汤管中加入上述菌悬液，使其终浓度为105cfu／ml；如果用琼脂稀释法则调节菌悬液为浊度104cfu／ml，采用点种方式接种。
(4)结果观察：1)最低抑菌浓度(Minimalinhibitoryconcentration.MIC)的判读：①肉汤稀释法：抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
按受试菌的生长条件，将上述接种好的试验管或平板置35℃及适当的环境中培养16～24小时后观察结果。
肉眼观察无细菌生长试验管的最低药物浓度，为该抗菌药物的MIC。
②琼脂稀释法：无菌生长的含药平板的最低药物浓度为MIC。
一般比肉汤稀释法高1个稀释度。
2)最低杀菌浓度(Minimalbactericidalconcentration.MBC)的判读：MBC表示抗菌药物杀灭99.9％或以上受试菌所需的最低浓度。
将高于MIC1～3个稀释度的培养液转种于相应的平板上，在合适条件下35℃培养18～24小时，杀灭99.9％或以上受试菌所需的最低浓度为最低杀菌浓度(MBC)。
(5)结果报告：根据测定的MlC值，与相应抗生素的平均血药浓度或组织浓度比较。
如MIC值：血药浓度≤23，则报告敏感；MIC值≥血药浓度则报告耐药；两者之间为中介。
2.纸片扩散法(K-B法)适用于需氧及兼性厌氧的快速生长型细菌，如肠杆菌科细菌、非发酵菌、葡萄球菌和肠球菌；进行改良后可用于苛养菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌及其他链球菌等的检测。
操作步骤如下：(1)培养基：M-H琼脂培养基。
厚度为4mm，pH7.2～7.4。
(2)培养物制备：①直接菌悬液法：取纯培养物直接悬浮于无菌盐水或M-H肉汤培养基，调节悬液浊度至0.5麦氏单位(1.5×108cfu／mL)；②肉汤增菌法：取纯培养物接种M-H肉汤，35℃培养4～6小时，使浊度达到0.5麦氏单位，可用无菌生理盐水或M-H肉汤调节。
(3)接种：用无菌棉签浸入上述菌悬液中，取出时将多余的菌悬液在管壁上挤出，均匀涂布整个平板表面，置室温3～5分钟。
(4)贴药敏纸片：用无菌镊子或分配器将根据要求选定的含药纸片贴于平板表面，使纸片完全与培养基表面接触，每两个纸片间的中心距离不少于24mm。
通常直径为90mm的平板可贴4～7张纸片。
置35℃孵育16～24小时。
(5)抑菌环直径测量：以肉眼观察没有明显菌苔生长的边缘为界，用最小量度为mm的卡尺量取抑菌环直径。
变形杆菌在抑菌环内生长的薄菌苔可忽略不计。
复方新诺明抑菌环内会有轻微细菌生长，小于20％左右可忽略不计。
(6)结果报告：根据每种细菌和每种药物之间的MIC和抑菌环直径之间的相关关系，抑菌环直径的大小可以反应MIC值的高低。
因此根据抑菌环直径的大小可以参照稀释法MIC 值的判断标准报告敏感、耐药和中介。
每种细菌和每种药物之间判断标准范围可以参考美国CLSI解释标准。
3.体外抗菌药物联合敏感试验通常单种细菌的感染用一种抗生素可以控制。
但在以下一些情况需要联合使用抗生素：严重感染(如急性心内膜炎、败血症、腹腔脓肿及脑脓肿等)；病原菌不明确或单一药物疗效不佳；由多重耐药菌株引起的全身感染；中枢神经系统等感染部位药物不易渗八；长期用药可能产生耐药性的感染疾病，如结核病和慢性骨髓炎等；混合感染。
此时需要进行抗菌药物的联合敏感试验。
抗菌药物联合试验的结果将出现以下的结果：①协同作用：表示两种药物药效可大干单个药物使用的总和；②累加作用：表示两种药物联合应用后药效等于两个药物各自单独使用时的总和；③无关作用：表示两种药物联合应用的药效等于活性最大的药物的药效；④拮抗作用：表示两种药物联合应用的药效小于奠中活性最大的药物的药效。
根据抗菌药物作用机制可分为杀菌剂和抑菌剂，按其作用的速度又可分为快效和慢效，将不同作用机制的药物联合使用会产生不同的抗菌效果。