核酸分子杂交技术
核酸分子杂交名词解释
核酸分子杂交名词解释核酸分子杂交是一种重要的分子生物学技术，用于研究核酸的结构、功能和相互作用，并在基因克隆、基因表达调控等领域具有广泛的应用。
以下是与核酸分子杂交相关的重要名词的解释：1. 核酸分子杂交（Nucleic Acid Hybridization）：指将两个不同的核酸分子（DNA或RNA）通过互补的碱基配对形成双链结构的过程。
核酸分子杂交可用于分析DNA或RNA的序列、测定基因表达水平以及检测特定的核酸序列。
2. 探针（Probe）：一条含有特定序列的标记化核酸分子，用于与目标序列进行杂交。
探针通常由放射性核素、荧光染料或酶等标记物标记，以便于在实验中检测其位置和数量。
3. 靶标（Target）：指待被杂交的目标核酸分子，它可以是DNA或RNA，含有待检测或待分析的特定序列。
靶标可以来自于生物样品，如组织、细胞或血清等。
4. 互补序列（Complementary Sequence）：两条核酸分子间相互配对的碱基序列。
在DNA分子中，腺嘌呤（A）与鸟嘌呤（G）通过双氢键相互配对，胸腺嘧啶（T）与胞嘧啶（C）相互配对；在RNA分子中，腺嘌呤（A）与尿嘧啶（U）相互配对，胸腺嘧啶（T）与胞嘧啶（C）相互配对。
5. 杂交化（Hybridization）：指探针与靶标间通过互补序列形成双链结构的过程。
杂交化通常需要一定的时间和温度条件，以保证探针和靶标的互补碱基序列能够正确配对。
6. 杂交化条件（Hybridization Conditions）：影响探针和靶标杂交的因素，包括温度、盐浓度、引物浓度、溶液pH值等。
不同的杂交化条件可选择性地控制互补序列的结合和分离，从而改变杂交的特异性和灵敏度。
7. 杂交化信号（Hybridization Signal）：当探针与靶标杂交时，由于探针上的标记物，如放射性同位素或荧光染料的发光、发射或放射活性，而产生的信号。
通过检测杂交化信号的强度和位置，可以确定探针与靶标的结合情况，以及目标序列的存在与数量。
核酸分子杂交技术基本原理
核酸分子杂交技术基本原理宝子，今天咱们来唠唠核酸分子杂交技术这个超酷的东西哦。
你知道吗，核酸分子杂交技术就像是一场超级精准的“分子相亲”呢。
核酸嘛，有DNA和RNA这两大主角。
DNA就像一个超级精密的双螺旋结构的蓝图，而RNA呢，在很多时候就像是这个蓝图的“小助手”，负责把蓝图上的信息传递出去，然后去指导各种生命活动。
那核酸分子杂交技术是怎么回事呢？简单来说，就是利用核酸的碱基互补配对原则。
碱基就像是核酸分子上的小密码，A（腺嘌呤）和T（胸腺嘧啶）或者U（尿嘧啶，在RNA里代替T）是一对，G（鸟嘌呤）和C（胞嘧啶）是一对。
就像钥匙和锁一样，它们是专门匹配的。
想象一下，我们有两条不同来源的核酸链，一条是我们已经知道一些信息的，就叫它“已知链”吧，另一条是我们想要去探究的，叫“未知链”。
当我们把它们放在合适的条件下，就像是给它们创造了一个“相亲大会”的环境。
如果未知链上有和已知链互补的序列，那些碱基就会像小磁铁一样，A去找T或者U，G去找C，然后两条链就会部分或者完全地结合在一起。
这一结合，就像是它们互相“认亲”了，我们就可以通过这个结合的情况来获取关于未知链的很多信息呢。
比如说在基因检测里，我们想要知道某个人是不是携带了某种遗传病的基因。
我们就可以用一个已知的正常基因或者突变基因的核酸片段当作“诱饵”，去和这个人的基因样本（也就是那些未知链）进行杂交。
如果能够完美结合，那就说明可能存在某种情况啦。
再说说在研究不同物种的基因关系的时候。
就像探索动物和植物之间那些神秘的基因联系。
我们可以把一个物种的基因核酸链拿出来，去和另一个物种的基因核酸链做杂交。
如果它们之间有杂交的现象，那就表示在漫长的进化过程中，它们可能有着共同的祖先或者有着基因交流的情况。
这个技术在研究病毒方面也超级厉害呢。
病毒的核酸很特别，当我们怀疑某个生物感染了某种病毒的时候，我们就可以用针对这个病毒核酸的已知链去和生物样本里的核酸进行杂交。
核酸分子杂交的几种类型 -回复
核酸分子杂交的几种类型-回复核酸分子杂交是一种用于研究DNA和RNA相互作用的常见实验技术。
该技术可以用于研究基因表达、蛋白质相互作用、突变分析等。
在核酸分子杂交中，两条核酸链通过互补配对形成杂交（或杂交化合物）。
下面将介绍几种常见的核酸分子杂交类型。
1. 片段杂交（Dot blot）片段杂交是一种最简单的核酸杂交技术。
在这种方法中，目标DNA片段（或RNA）以单链形式固定在固相载体上，如膜片或微孔板。
然后，配对探针标记有放射性同位素或荧光染料，与目标DNA一起进行杂交。
通过检测标记的探针，可以确定是否与目标DNA片段杂交。
2. 南方杂交（Southern blot）南方杂交是一种用于检测和定量目标DNA片段的杂交技术。
在这种方法中，DNA经电泳分离后，转移到膜片上。
然后，膜片上的DNA与互补的探针分子杂交，并通过标记的探针检测杂交的目标DNA。
3. 北方杂交（Northern blot）北方杂交是一种用于检测和定量RNA的杂交技术。
在这种方法中，RNA经电泳分离后，转移到膜片上。
然后，膜片上的RNA与互补的探针分子杂交，并通过标记的探针检测杂交的目标RNA。
4. 原位杂交（In situ hybridization）原位杂交是一种用于检测细胞和组织中RNA或DNA的特定序列的杂交技术。
在这种方法中，标记的探针与固定的细胞或组织中的目标核酸序列杂交。
然后，通过显微镜观察标记的探针和目标核酸的共定位，从而确定目标序列的存在。
5. 竞争性杂交（Competitive hybridization）竞争性杂交是一种用于研究不同核酸序列之间互相竞争结合的杂交技术。
在这种方法中，标记的探针与非标记的探针或样品中的DNA或RNA 竞争杂交。
通过比较标记的探针与不同浓度的非标记探针或样品杂交的强度，可以确定不同序列之间的亲和力或结合特性。
总之，核酸分子杂交是一种重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
核酸分子杂交技术定义
核酸分子杂交技术定义
核酸分子杂交技术是一种重要的生物学技术，它可以用来检测和分离DNA或RNA序列。
该技术基于两个互补的核酸序列之间的结合，通过杂交反应来检测目标序列的存在。
核酸分子杂交技术的原理是利用两个互补的核酸序列之间的结合来检测目标序列的存在。
这种结合是通过氢键和范德华力来实现的。
在杂交反应中，两个互补的核酸序列会结合在一起形成一个双链结构。
这个双链结构可以通过不同的方法来检测，例如放射性标记、荧光标记或酶标记等。
核酸分子杂交技术可以用来检测DNA或RNA序列。
在DNA杂交反应中，DNA序列会与互补的DNA序列结合。
在RNA杂交反应中，RNA序列会与互补的RNA序列结合。
这种技术可以用来检测DNA或RNA序列的存在，也可以用来分离DNA或RNA序列。
核酸分子杂交技术在生物学研究中有广泛的应用。
它可以用来检测病毒、细菌和真菌等微生物的存在，也可以用来检测基因突变和基因表达等生物学过程。
此外，核酸分子杂交技术还可以用来研究DNA或RNA序列的结构和功能。
核酸分子杂交技术是一种重要的生物学技术，它可以用来检测和分离DNA或RNA序列。
该技术的原理是利用两个互补的核酸序列之间的结合来检测目标序列的存在。
核酸分子杂交技术在生物学研究
中有广泛的应用，可以用来检测微生物的存在、研究基因突变和基因表达等生物学过程。
核酸分子杂交技术定义
核酸分子杂交技术定义核酸分子杂交技术是一种广泛应用于生物学和医学领域的技术手段。
它利用互补配对的原理，将两个核酸链在一定条件下结合成一个双链分子。
该技术可用于分析、检测、鉴定、筛选和修饰核酸分子等方面，具有重要的实验和临床应用价值。
一、技术原理核酸分子杂交技术的原理是基于核酸互补配对的规律。
核酸是由四种碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和鳞状细胞素）组成的双链分子，两条链通过氢键相互配对形成双螺旋结构。
在核酸分子杂交技术中，将两个互补的核酸链置于一定条件下（如适当的温度、pH值和离子浓度等），使它们形成双链分子。
这个过程中，两个链之间的氢键会断裂，然后重新组合成新的氢键，形成一个更稳定的双链分子。
这个过程被称为“杂交”。
二、应用领域1. 分析基因序列核酸分子杂交技术可用于分析基因序列。
通过与已知序列相比较，可确定未知序列的位置和组成。
这种技术被广泛应用于基因组学和生物技术领域，包括基因定位、基因诊断、基因克隆和基因表达研究等方面。
2. 检测病原体核酸分子杂交技术可用于检测病原体。
该技术可以检测细菌、病毒、真菌和寄生虫等微生物的存在和数量。
与传统的细菌培养方法相比，核酸分子杂交技术具有更高的灵敏度和特异性，可以更快速和准确地诊断疾病。
3. 鉴定基因型核酸分子杂交技术可用于鉴定基因型。
通过检测DNA序列的变异，可以确定不同基因型之间的差异。
这种技术被广泛应用于疾病的遗传咨询、人类学研究和法医学等领域。
4. 筛选基因库核酸分子杂交技术可用于筛选基因库。
该技术可以通过与探针的杂交来筛选目标基因，从而快速地鉴定和克隆感兴趣的基因。
这种技术被广泛应用于基因工程、药物研发和生物产业等领域。
5. 修饰核酸分子核酸分子杂交技术可用于修饰核酸分子。
通过与修饰剂的杂交，可以将不同的化合物引入到核酸分子中，从而实现对分子结构和性质的调控。
这种技术被广泛应用于药物研发、生物材料和生物传感器等领域。
三、实验步骤核酸分子杂交技术的实验步骤包括样品处理、杂交反应、检测和数据分析等环节。
核酸杂交技术的原理和应用
核酸杂交技术的原理和应用介绍核酸杂交技术是一种利用互补配对原理来检测和分析核酸序列的重要技术。
它广泛应用于基因组学、遗传学、分子生物学和生物医学等领域。
本文将介绍核酸杂交技术的原理和应用，并通过列点方式详细解释。
核酸杂交技术的原理1.互补配对原理：核酸分子由碱基组成，DNA分子中的腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）以及鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）之间可以形成互补配对，RNA 分子中的腺嘌呤（A）和尿嘧啶（U）以及鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）之间也可以形成互补配对。
核酸杂交技术利用这种互补配对原理，根据核酸序列的互补性进行分析。
2.杂交反应：核酸杂交反应是指两条互补的核酸序列在合适的条件下发生结合。
在适当的盐浓度和温度下，核酸链会解开，使碱基的互补配对能够进行。
通过控制反应条件，可以选择性地使核酸链发生杂交反应，从而检测特定的核酸序列。
3.标记物的应用：核酸杂交技术通常需要使用标记物来检测杂交反应的结果。
常用的标记物包括放射性同位素、荧光染料和酶等。
这些标记物可以与杂交的核酸序列结合，通过测量标记物产生的放射性、荧光或酶活性变化来分析核酸杂交反应的结果。
核酸杂交技术的应用1.基因组学研究：核酸杂交技术在基因组学研究中发挥了重要作用。
通过杂交探针，可以检测到不同组织和生物体中的特定基因表达情况，从而深入研究基因调控网络和功能。
此外，核酸杂交技术还可以用于研究基因组的结构和变异。
2.遗传学分析：核酸杂交技术是遗传学分析的重要工具之一。
通过对不同个体的核酸序列进行杂交反应，可以检测到基因型差异和基因变异等关键信息。
这对于遗传性疾病的诊断和研究具有重要意义。
3.分子生物学研究：核酸杂交技术在分子生物学研究中也得到了广泛应用。
它可以用于检测、定位和分析特定核酸序列，从而揭示细胞和分子水平上的生物学过程。
例如，在研究基因表达调控、蛋白质合成和RNA修饰等方面，核酸杂交技术发挥了重要作用。
4.生物医学应用：核酸杂交技术在生物医学领域也有广泛的应用。
分子杂交技术
分子杂交技术引言分子杂交技术是一种重要的实验手段，在生物学和生物化学领域被广泛应用。
它通过将两个不同源的核酸序列（DNA或RNA）进行杂交，从而得到具有特定性质和功能的新分子。
在本文中，我们将介绍分子杂交技术的原理、应用和未来发展方向。
原理分子杂交技术主要基于核酸的互补配对原理。
DNA和RNA 分子中的碱基有互补配对性质，即腺嘌呤（A）与胸腺嘧啶（T）或尿嘧啶（U）互补配对，鸟嘌呤（G）与胞嘧啶（C）互补配对。
在杂交过程中，两个互补的核酸序列会通过碱基间的氢键相互结合，形成一个稳定的双链结构。
应用分子克隆分子杂交技术在分子克隆中起到至关重要的作用。
通过将目标基因的DNA序列与载体DNA进行杂交，可以实现基因的定向克隆。
例如，使用限制性内切酶将目标基因和载体DNA切割开后，通过杂交技术将两者粘合在一起，形成重组DNA，然后可以通过转化、转染等手段将重组DNA导入到宿主细胞中，实现基因的表达。
基因探针分子杂交技术也被广泛应用于基因探针的设计和制备。
基因探针是一种用于检测目标基因在细胞或组织中表达情况的分子工具。
通过将特异性的探针与目标基因进行杂交，可以实现对目标基因的检测和定位。
分子杂交技术可以用于制备放射性或非放射性的探针，例如荧光探针或生物素标记的探针，从而实现对目标基因的高灵敏度和高特异性的检测。
基因组分析分子杂交技术还可以用于基因组分析。
例如，通过杂交技术可以将特异性的探针与目标基因组中的特定区域进行杂交，从而实现对基因组的定位和映射。
此外，分子杂交技术还可以用于研究基因组中的DNA重复序列、非编码RNA等。
DNA鉴定分子杂交技术在DNA鉴定领域也有广泛的应用。
例如，通过杂交技术可以将可疑犯罪嫌疑人的DNA样本与现场留下的DNA样本进行比对，以确定是否属于同一人。
此外，分子杂交技术还可以用于亲子鉴定、物种鉴定等。
未来发展方向随着科技的不断发展，分子杂交技术也在不断更新和发展。
未来，我们可以预见以下几个方面的发展：1.高通量分子杂交技术的发展：随着高通量测序技术的发展，分子杂交技术可以与测序技术结合，实现对大规模样本的高效分析，从而推动基因组学、转录组学等领域的研究进展。
核酸分子杂交技术
热变性
解链曲线:如果在连续加热DNA DNA的过程中以温 解链曲线:如果在连续加热DNA的过程中以温
度对A260值作图,所得的曲线称为解链曲线 度对A260值作图,所得的曲线称为解链曲线. 值作图
目录
Tm:变性是在一个相当窄的温度范围内完成,在这 :变性是在一个相当窄的温度范围内完成, 一范围内,双链DNA变性一半所需要的温度称为DNA的 一范围内,双链DNA变性一半所需要的温度称为DNA的 DNA变性一半所需要的温度称为DNA 解链温度,又称熔解温度(melting temperature, Tm). 解链温度,又称熔解温度 . 其大小与G+C含量成正比. 含量成正比. 其大小与 含量成正比
Tm=(G+C)%×0.41+69.3 ( ) ×
DNA的复性 三,DNA的复性
DNA复性(renaturation)的定义 DNA复性(renaturation)的定义 复性(renaturation) 在适当条件下,变性DNA的两条互补链可 在适当条件下,变性DNA的两条互补链可 DNA 恢复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性. 恢复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性. 复性 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性, 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性, DNA经缓慢冷却后即可复性 这一过程称为退火(annealing) 这一过程称为退火(annealing) . 退火 减色效应 DNA复性时,其溶液OD260降低. DNA复性时,其溶液OD260降低. 复性时 OD260降低
DNA指纹(DNA finger-print)分析的基 指纹( 指纹 分析的基 本流程如下: 本流程如下: DNA的提纯与纯化→限制性内切酶消化→ DNA的提纯与纯化→限制性内切酶消化→电 的提纯与纯化 泳分离→分子杂交→ 泳分离→分子杂交→指纹图的显示
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目录 核酸分子杂交的基本理论 核酸探针及其标记 核酸探针的标记方法 核酸分子杂交方法
DNA芯片技术
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目 录
part 1
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核酸分子杂交的基本理论
核酸分子杂交
具有互补序列的两条单链核酸 (DNA或RNA)分子在适宜的温度及离 子强度等条件下, 可按碱基互补配对原则退火形成双链杂合体的过程称 为核酸分子杂交。 核酸分子杂交技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的 技术之一，也是临床分子检验的重要技术。 核酸分子杂交技术是 20 世纪 70 年代发展起来的一种崭新的分子生物 学技术。它是基于 DNA分子碱基互补配对原理，用特异性的核酸探针 与待测样品的DNA/RNA形成杂交分子的过程。分子杂交实验依据其形 式的不同可以分为液相杂交和固相杂交，各类型杂交的基本原理和步骤 是基本相同的，只是选用的杂交原材料、点样方法有所不同。
3、影响复性的因素 1） DNA浓度 DNA浓度越大复性速度越快 单链探针，浓度增加，杂交效率增加 双链探针，浓度控制在0.1-0.5μ g，浓度过高影响杂交效率 2）DNA的分子质量 大分子质量的DNA扩散速度慢，复性速度慢
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核酸分子杂交的基本理论
3）温度 温度过高，有利于DNA变性而不利于复性
4
核酸分子杂交的基本理论
关键步骤：
变性—杂交（复性）—检测信号—结论
变性
复性
DNA-DNA 杂交双链分子
信号的采集与处理
结论
5
核酸分子杂交的基本理论
DNA变性
1、定义：在某些理化因素作用下，两条DNA链间的氢键断裂，变为单 链的过程称DNA变性。 2、变性的方法： 1 ）热变性：温度升高到 90~100℃时，双链核酸分子链间的氢键完全 断裂。 2）酸碱变性：pH值低于3或高于10时，双链核酸分子链间的氢键断裂。 3）化学试剂变性：如尿素、甲酰胺、甲醛等使双链核酸分子链间的氢 键断裂
更适于核酸样品的定量检测 原理与Southern杂交相同
将RNA或DNA变性后直接点样于NC膜或尼龙膜上
在实验过程中，使用特殊设计的加样装置，使众多的待检测样品能够一 次同步转移到杂交滤膜上，并有规律地排列成点阵或线阵
6
核酸分子杂交的基本理论
3、影响变性的因素 1）碱基组成 ：DNA分子中G＋C含量越高Tm越高。 2）溶液的离子强度 ：DNA链骨架上的磷酸基团带有较多的负电荷，它们
之间的静电相斥作用是其双链的不稳定因素之一。在无盐的水中，DNA在
室温下就会变性，加入盐后，正离子可以封闭磷酸基团的负电荷，使DNA 稳定性增加，Tm值升高。 3）pH值 ：pH值在5～9范围内，Tm值变化不明显。在高pH值下，可使 碱基失去形成氢键的能力。当pH大于11.3时所有氢键均被破坏，DNA完 全变性。 4）变性剂：可以干扰碱基堆积力和氢键的形成，因此可以降低Tm值。常 用的变性剂是甲酰胺和脲，通常用50％的甲酰胺以使Tm值降低30 ℃。
4）离子强度 通常盐浓度较高时，复性速度较快。 5）甲酰胺 甲酰胺能降低核酸杂交的Tm值，能降低杂交液的温度，低温时探针与待 测核酸杂交更稳定 当待测核酸与探针同源性不高时，加50%甲酰胺溶液在35~42 ℃杂交； 如待测核酸序列与探针同源性高时，则用水溶液在68℃杂交
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核酸分子杂交的基本理论
6）核酸分子的复杂性 同样条件下， DNA 序列简单的分子复性快，序列较复杂的 DNA 分子 复性则较慢。 7）非特异性杂交反应： 杂交前封闭非特异性杂交位点，减少其对探针的非特异性吸附 常用的封闭物有两类：即非特异性 DNA 和高分子化合物。如鲑精 DNA或小牛胸腺DNA，Denharts溶液或脱脂奶粉
具有互补序列的两条单链核酸都可互补形成双链：
DNA/DNA、RNA/DNA、RNA/RNA、寡核苷酸/DNA 和 寡核苷酸/RNA。 2、复性过程
1）单链分子间碰撞形成局部双链
2）局部双链周围的碱基如不配对时，双链重新解离 局部双链周围的碱基如配对，则形成中心序列
3）形成完整的双链分子
9
核酸分子杂交的基本理论
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（ a）
基因组DNA
DNA限制片段
（b） Southern blot 操作流程 （ c）
（d）
硝酸纤维素滤膜
（ e）
同探针同源杂交的基因 DNA片段 X光底片
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核酸分子杂交方法
Southern杂交 的主要应用 1.遗传病诊断 2.DNA图谱分析
3.PCR产物分析
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核酸分子杂交方法
Northern印迹杂交
不影响碱基配对的特异性
不影响探针分子的主要理化性质 对酶促反应活性无影响或影响不大
检测方法具有高度灵敏性和高度特异性
核酸分子杂交技术的广泛应用，在很大程度上取决于高敏感性检测的各种标记 物。根据标记物本身的性质及检测特点，可分为放射性核素及非放射性物质的
标记物。
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核酸探针及其标记
DNA/DNA杂交，适宜温度较Tm值低20-25℃ RNA/DNA 或 RNA/RNA杂交，加甲酰胺降低Tm值 （原位杂交时， 杂交液中加入适量的甲酰胺，可避免因杂交温度过高而引起的组织形态 结构的破坏以及标本的脱落） 用寡核苷酸探针杂交，适宜温度较Tm值低5℃
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核酸分子杂交的基本理论
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核酸探针的标记方法
PCR标记法
将标记的核苷酸作为PCR反应的底物，以待标记的DNA为模板，经
PCR反应，标记的核苷酸掺入到新合成的DNA分子中 非放射性物质标记 目前用得最多的是生物素和地高辛精
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目 录
part4
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核酸分子杂交方法
Southern 印迹杂交（Southern blot） Northern 印记杂交（Nouthern blot ） 斑点印迹杂交（dot blotting）
Edwin Mellor Southern
E.M. Southern首先设计出来的，故又称Southern blot。
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核酸分子杂交方法
Southern杂交的主要步骤： 1）待测核酸样品的制备 2）待测DNA样品的电泳分离 3）凝胶中DNA的变性：碱变性（NaOH溶液） 4）Southern转膜： 硝酸纤维素(NC)膜、尼龙膜 毛细管虹吸印迹法、电转印法、真空转移法 5）Southern杂交 6）杂交结果的检测
次将dNTP连接到切口的3末端-OH上，合成新的DNA链，同时将标记的
核苷酸掺入到新的DNA链中
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核酸探针的标记方法
随机引物法
其原理是随机引物能与各种单链 DNA 模板结合，作为合成新链的引物，在 DNA聚合酶的催化下，按53方向合成一新的DNA链，其核苷酸序列与模 板DNA完全互补。另一单链DNA模板同样合成一条新的完全互补的 DNA链。 合成时，带放射性核素标记的核苷酸掺入到新合成的DNA分子中。 随机引物法所具有的优点： 1、能进行双链DNA、单链DNA或RNA探针的标记 2、操作简单方便，避免因DNaseI处理浓度掌握不当所带来的一系列问题 3、标记活性高 4、可直接在低熔点琼脂糖溶液中进行标记
3 ） RNA探针：可以是标记分离的 RNA，也可以是重组质粒在 RNA 聚
合酶作用下的转录产物。复杂性低，杂交效率高，但易降解，标记方法 复杂。
4）人工合成的寡核苷酸探针： 检测点突变和小段碱基的缺失或插入
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核酸探针及其标记
核酸探针的标记
为确定探针是否与相应基因组DNA杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合 部位获得可识别的信号。理想标记物应具备的特性： 高度灵敏性
1979年，J.C.Alwine等人发展而来，是将RNA分子从电泳凝胶转移到 硝酸纤维素滤膜或其他化学修饰的活性滤纸上，进行核酸杂交的一种实验方 法 因 这 种 方 法 与 Southern blot 杂 交 技 术 十 分 类 似 ， 与 DNA 的 杂 交 （Southern 杂交）相对应，被称为Northern杂交。 基本原理和基本过程与Southern blot基本相同 鉴别RNA 探针可用DNA或RNA片段 待测样品为总RNA或mRNA
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核酸分子杂交方法
Northern印迹与Southern 印迹的不同点 1、变性：RNA电泳前加热变性、电泳时加变性剂保持RNA处于变性 状态，避免单链RNA自身形成高级结构和自身降解（变性凝胶电泳(甲 醛、尿素、甲酰胺等) RNase抑制环境 ），DNA电泳前和电泳中不变 性
2 、转膜： RNA 转膜前不需变性和中和处理， Southern 印迹时，
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目 录
part 3
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核酸探针的标记方法
切口平移法（nick translation labeling)
是目前实验室最常用的一种脱氧核糖核酸探针标记法 。利用大肠杆菌 DNA聚合酶 I 的多种酶促活性将标记的dNTP掺入新合成DNA链中使探 针被标记。 带缺口(nick)的线状、超螺旋及环状双链DNA均可作为切口平移法的模板。 1）利用DNase I在DNA双链上造成单链切口 2）利用大肠杆菌DNA聚合酶I的53核酸外切酶活性在切口处将旧链从 5末端逐步切除 3 ）在 DNA 聚合酶 I 的53 聚合酶催化下，以互补的 DNA单链为模板依
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目 录
Part 2
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核酸探针及其标记
探针的概念
核酸探针 (probe)是指用放射性核素或其它标记物标记的已知序列的核 酸片段。 长度一般以50~300bp为宜。制备方法： (1) DNA重组技术
(2) PCR扩增
(3) 化学合成
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核酸探针及针：有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞 DNA探针，多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。 2 ） cDNA 探针 ： 以 mRNA 为 模 板 经 过 逆转 录 酶 催 化 产生 的 互 补 于 mRNA的DNA链。