试验四尿肌酐的测定
尿液肌酐的2种测定方法及其在镉中毒诊断中的意义
尿液肌酐的2种测定方法及其在镉中毒诊断中的意义
庞新侠;刘庆;庞湘侠;韩玉芳
【期刊名称】《职业与健康》
【年(卷),期】2008(24)5
【总页数】1页(P415-415)
【关键词】尿液肌酐;测定方法;镉中毒;诊断
【作者】庞新侠;刘庆;庞湘侠;韩玉芳
【作者单位】河南省新乡市职业病防治研究所;新乡市中心医院;新乡市人民医院【正文语种】中文
【中图分类】R446.12
【相关文献】
1.尿液微量白蛋白肌酐比值（ACR）早期肾损害监测中的意义 [J], 袁开影;
2.糖尿病肾病早期诊断中尿液微量白蛋白于肌酐比值的临床价值分析 [J], 许云峰
3.尿液淀粉酶/肌酐比值在胰腺炎病程监测中的意义 [J], 张平华
4.尿液淀粉酶／肌酐比值在胰腺炎病程监测中的意义 [J], 张西凤; 张建敏
5.尿液低分子量蛋白测定在慢性职业性镉中毒诊断中的意义及方法评定 [J], 刘秋英;李森华;何康玟;谢国强;曾泽民
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肌酐的测定实验报告
一、实验目的1. 了解肌酐测定的原理和方法。
2. 掌握肌酐测定的操作步骤。
3. 学会使用肌酐测定试剂盒，并对其结果进行分析。
二、实验原理肌酐是人体肌肉代谢的终产物，主要由外源性和内源性两种组成。
外源性肌酐主要来源于食物中的肉类，内源性肌酐则是由人体肌肉代谢产生。
在正常情况下，肌酐主要通过肾脏滤过排出体外。
因此，通过测定血液或尿液中肌酐的浓度，可以评估肾脏的滤过功能。
本实验采用肌酐测定试剂盒，通过碱性苦味酸终点比色法测定血清肌酐浓度。
三、实验材料1. 肌酐测定试剂盒2. 血清样品3. 移液器4. 一次性吸管5. 比色皿6. 移液器吸头7. 混匀器8. 水浴锅9. 移液器吸头10. 洗耳球11. 计时器四、实验步骤1. 标准曲线的制备（1）取6个比色皿，分别加入不同浓度的肌酐标准溶液。
（2）在每个比色皿中加入适量的肌酐测定试剂A和B，混匀。
（3）将比色皿放入水浴锅中，加热至50℃恒温反应10分钟。
（4）取出比色皿，用洗耳球吹洗内壁，使其充分混合。
（5）用移液器取标准溶液和样品，分别加入比色皿中，混匀。
（6）用移液器将样品转移到比色皿中，立即放入比色仪中测定吸光度。
2. 样品测定（1）取3个比色皿，分别加入血清样品、试剂A和B，混匀。
（2）将比色皿放入水浴锅中，加热至50℃恒温反应10分钟。
（3）取出比色皿，用洗耳球吹洗内壁，使其充分混合。
（4）用移液器取样品，分别加入比色皿中，混匀。
（5）用移液器将样品转移到比色皿中，立即放入比色仪中测定吸光度。
3. 结果计算根据标准曲线，将样品的吸光度对应到肌酐浓度，即可得到样品的肌酐浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制备根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程：Y = 0.0162X - 0.0178（R² = 0.9989）2. 样品测定通过测定样品的吸光度，根据标准曲线计算得出样品的肌酐浓度为XX mg/dL。
六、实验结论本实验通过碱性苦味酸终点比色法测定血清肌酐浓度，操作简便，结果准确。
尿肌酐 干化学法
尿肌酐干化学法
尿肌酐是指尿液中的肌酐含量，通常是通过干化学法来测定。
干化学法是一种简单、快速、准确的尿液分析方法，它可以在不需要使用化学试剂和设备的情况下，通过对尿液中的化学成分进行检测，来确定尿液中肌酐的含量。
干化学法的原理是，尿液中的肌酐可以与某些化学试剂发生反应，生成一些颜色变化明显的化合物。
这些化合物的颜色变化可以通过肉眼观察或使用比色计来测定。
常用的干化学法试剂包括：
1. 二苯胺：将尿液与二苯胺混合，如果尿液中含有肌酐，则会生成深紫色的化合物。
2. 甲基红：将尿液与甲基红混合，如果尿液中含有肌酐，则会生成红色的化合物。
3. 溴酚蓝：将尿液与溴酚蓝混合，如果尿液中含有肌酐，则会生成蓝色的化合物。
干化学法的优点是简单易行，不需要使用昂贵的化学试剂和设备，同时可以快速得到结果。
但是，它的准确性和精度相对较低，容易受到环境因素和操作误差的影响。
因此，在进行尿液分析时，需要结合其他分析方法来确定结果的准确性。
生物材料检验 实验一 尿肌酐和尿比重的测定
4.尿样比重范围1.010~1.035，超出范围认为尿样不合格，
应弃去重新采样。
管号 标准溶液/ml 水 /ml 肌酐浓度/（g/L） 0 0 3.0 0 1 0.20 2.8 0.20 2 0.40 2.6 0.40 3 0.60 2.4 0.60 4 0.80 2.2 0.80 5 1.0 2.0 1.0
Байду номын сангаас
向各管中加入2.0ml碱性苦味酸溶液，混匀，于室温 下反应20~30分钟。加5ml水混匀后，以零管做参比， 波长490nm下测吸光值，在0.5小时内比色完毕。每个 浓度测定3次，求平均吸光值。 测定：求标准曲线。 ρ（肌酐）=ρ1×f ρ（肌酐）--尿中肌酐的浓度。 ρ1--标准曲线上计算的肌酐浓度。 f--尿样稀释倍数，30. 注意事项：1.注意非特异的色素原干扰。 2.温度在15~20℃显色稳定，反应温度控制在30℃.
仪器与试剂
尿比重计 胶头滴管 尿杯 纯水 实验步骤 1.样品采集和保存 2.尿样的测定 尿比重折射仪的调零：用纯水洗净棱镜表面并用软纸 吸干。用胶头滴管滴2~3滴纯水在棱镜表面，按调零按 钮调零。 尿样测定：洗净棱镜并吸干，滴2~3滴尿样。 测定数值即为尿样的比重值。
注意事项
1.尿液不可冷冻。会导致沉淀。
实验仪器与试剂
1.仪器 分光光度计，比色杯 2.试剂 饱和苦味酸溶液（15g/L） 氢氧化钠溶液（100g/L） 碱性饱和苦味酸溶液 盐酸 肌酐标准溶液
实验步骤
1.样品的采集和保存 按所接触毒物或其代谢产物所规 定的采样时间，用50ml聚乙烯塑料瓶收集尿样，冷藏运 输，于4摄氏度下可保存2周。 2.标准曲线绘制及样品的测定 样品处理：取0.1ml尿样至于10ml比色管中，加水至 3ml 试剂空白：取3ml水置于10ml比色管中。 标准曲线的绘制：取6支10ml比色管，按下表配置标 准溶液
肌酐测定标准操作程序 (肌氨酸氧化酶法)
肌酐测定标准操作程序1. 摘要肌酐试剂盒适用于体外临床检验，用于测定人血清或尿液中肌酐的含量。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清尿液中肌酐的浓度。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定CREA 浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的肌酐（CREA ）试剂盒采用的是肌氨酸氧化酶法。
5. 原理上海科华生物工程股份有限公司的肌酐 (肌氨酸氧化酶法)试剂盒的测定原理如下：O H N N O H O H HCHO O O H O H O H 2222222224---42+−−−→−-+-+++−−−−→−+++−−−−→−+−−−−→−+醌亚胺间甲苯胺磺丙基乙基氨基安替比林甘氨酸肌氨酸尿素肌氨酸肌酸肌酸肌酐过氧化物酶肌氨酸氧化酶肌酸脒基水解酶肌酐氨基水解酶 肌酐在肌酐氨基水解酶的作用下水解成肌酸，肌酸在肌酸脒基水解酶的作用下生成肌氨酸和尿素，其中产物肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生成甘氨酸、过氧化氢和甲醛。
最后过氧化氢在过氧化物酶的催化下与色原底物4-氨基安替比林和N-乙基-N-磺丙基-间甲苯胺反应生成红色化合物醌亚胺.由于醌亚胺在波长546nm 处有最大吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 546nm 处吸光度的变化值与样本中肌酐的含量成正比.6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、ESPMT 、肌酐胺基水解酶、4-氨基安替比林7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
肌酐的测定
丙酮酸 + ATP
乳酸脱氢酶
丙酮酸 + NADH +H+
乳酸 + NAD+
340nm比色
• 2.肌酐亚氨水解酶法：
肌酐酶水解
肌酐
N-甲基内酰 + NH3
溴酚蓝电极
或离子电极
测NH3
酶法优点：特异性高、准确性好
缺点：酶试剂昂贵、来源困难、不易保存
（三）高效液相色谱法：
准确性、特异性好，一般作为参考方法
• 3.速率法（动力学法）： 根据肌酐和碱性苦味酸形成复合物
的速度与非肌酐干扰物的不同，且肌酐 的反应速度与浓度成正比的原理。
干扰物质：
a.快反应物质 最初30s内反应 b.慢反应物质 120s以后反应 肌酐反应：31~60s 该法有助于解决反应的特异性，可消除 某些非化学反应的干扰且简单、快速
• 4.双pH法（二次读数法）：
肌酐的测定
• 血清非蛋白含氮化合物的一种，肌肉组 织中肌酸或磷酸肌酸代谢的最终产物。
• 肌酐的排出量相当恒定，不受食物蛋白 质含量及尿量的影响而与肌肉发达程度、 性别及年龄有关。
• 肌酐的测定是临床诊断的重要指标。
• 分类： （一）化学法：碱性苦味酸法
1.漂白土碱性苦味酸法 2.阳离子交换树脂法 3.速率法 4.双PH法（二次读数法） （二）酶法： 1.肌酐酰胺水解酶法 2.肌酐亚氨水解酶法 （三）高效液相色谱法
• 3. 0.75 mol/L 氢氧化钠溶液 • 提供碱性环境
• [操作步骤] 见书
• [注意事项] • 1.制备去蛋白血滤液时，钨酸溶液应缓慢
的滴入血清中，边加边摇，将试剂与血 清充分混匀以利蛋白质沉淀。
• 2.呈色后应在30分钟内比色为宜。过久会 使测定管吸光度增加，可能与标本中存 在的非特异性物质有关。
尿肌酐测定方法
尿肌酐测定方法
尿肌酐是一种常用的尿液指标，用于评估肾脏功能。
以下是常用的尿肌酐测定方法：
1. Jaffe法：这是目前最常用的尿肌酐测定方法。
该方法利用
酚与尿液中的肌酐在碱性条件下发生黄色酚酞反应，测量反应产生的黄色产物的吸光度。
由于该方法受到其他物质（如尿酸、葡萄糖等）的干扰，因此必须进行相应的校正。
2. 酶法：这种方法利用肌酸酐氨酸酶（creatinine amidohydrolase）催化反应，将尿液中的肌酐转化为肌酸和氨，通过测量反应中产生的氨量来确定肌酐浓度。
该方法对于尿液中的其他物质干扰较少，但在实验室条件下操作较为复杂。
3. 离子选择电极法：这是一种较为现代化的测定方法，利用离子选择电极对尿中的肌酐进行检测。
该方法操作简便，结果准确可靠。
以上是几种常用的尿肌酐测定方法，每种方法都有其特点和适用范围。
选择合适的方法需根据实验室的设备和研究需求来确定。
在进行尿肌酐测定前，建议咨询专业医生或实验室技术人员的意见。
液相色谱法测定尿中肌酐含量
液相色谱法测定尿中肌酐含量标签：液相色谱；尿肌酐测定肌酐(C4H7N3O）是肌肉在人体内代谢的产物,主要从尿液中排出。
职业卫生对生物材料尿液的监测中，生物限值大都使用肌酐较正，因此，肌酐含量测定的准确性直接影响生物监测指标的准确性。
肌酐的检测方法多为临床检验方法，在职业卫生监测中，尿中肌酐的测定有两种方法，一种是分光光度法，一种是液相色谱法。
分光光度法要用到苦味酸，属易爆物品。
本实验室选用液相色谱法对尿中肌酐进行测定，操作简单，灵敏度高，影响因素少，结果准确。
1材料与方法1.1仪器美国DIONEX高效液相色谱仪（P680高效液相泵，UVD 170U紫外检测器，ASI-100自动进样器，TCC-100柱温箱）；变色龙色谱工作站；超声波清洗仪；旋涡混合器等。
1.2试剂肌酐纯度＞99.0%；甲醇（进口液相色谱纯）；乙酸钠（分析纯），配制成0.05 mol/L的溶液；0.45 μm滤膜等。
1.3色谱条件色谱柱：Agilent Zorbax Extend-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)柱；流动相：甲醇-0.05 mol/L乙酸钠，比例（5+95），流速0.9 ml/min；柱温：30 ℃；检测器：紫外检测器，波长254 nm；进样量：10 μl。
1.4分析步骤1.4.1试样测定取0.05 ml尿样，用流动相稀释至10 ml，即200倍稀释，旋涡混合器上混合1 min，经0.45 μm滤膜过滤后进样10 μl，以峰面积从标准曲线中定量。
1.4.2标准曲线称取250 mg经110 ℃干燥2 h的肌酐，溶于甲醇并稀释至25 ml，配制成每毫升含10 mg肌酐的标准贮备液。
取标准贮备液，经逐步稀释成每毫升含0，2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μg肌酐的标准系列，进样10 μl，以峰面积为纵坐标，以肌酐含量为横坐标，绘制标准曲线。
2结果2.1样品处理方法的选择取不同样品0.05 ml各三份，分別以200倍、300倍、500倍进行稀释，大部分样品200倍稀释均在标准曲线线性范围内，而且有较高的灵敏度，300倍和500倍稀释的灵敏度比200倍稀释低，故一般选用200倍稀释，当样品肌酐含量较高时，可适当增加稀释倍数。
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在运动员机能评定中，尿肌酐系数可作为力量素质与速度素质的评定、 选材、训练效果的检测指标，尿肌酐系数高是肌肉机能好的反映，反 之，可能是肌肉机能下降的表现。 陕西师范大学体育学院实验教学示范中心
计算公式：
OD测 尿肌酐（mg%）== ------------------- × 200
OD标（0.12） 24小时尿肌酐量（mg） 尿肌酐系数== ----------------------------------------
体重（Kg）
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肌酐 + 碱性苦味酸
Jaffe氏反应
苦味酸肌酐（红色复合物） （520nm处有一吸收峰）
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三、试剂
饱和苦味酸溶液：称取苦味酸15g置于大烧杯中，加蒸馏水至1000ml，加热助溶， 冷却至室温，瓶底若有结晶析出，表示已饱和，取上层清夜备用，储存在棕色瓶 中。
10%氢氧化钠溶液 碱性苦味酸试剂：将饱和苦味酸和10%氢氧化钠溶液按5:1体积比混合，临用时
配制。 肌酐标准贮存液（1ml=1mg）：称取纯肌酐0.1g置于100ml容量瓶中，加10%盐
酸溶解稀释至刻度。此溶液在4℃冰箱内可以长期保存。 肌酐标准应用液（1ml=0.1mg）：准确量取贮存液10ml于100ml的容量瓶中，加
入10%盐酸10ml，再加蒸馏水至刻度。 此溶液可以在4℃冰箱内保存1周。
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四、实验操作
1、制备稀释尿液（1:100）
收集受试者24h尿液，混匀后取0.1ml置大试管中，加 9.9ml蒸馏水，摇匀。
2、尿肌酐浓度的测定
取3只大试管，编号，按表1操作：
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表1 尿肌酐的测定
空白管
标准管
测定管
肌酐标准应用液（ml）
—
0.5
—
—
—
5
0.2
0.2
0.2
5.0
4.5
—
1
1
ห้องสมุดไป่ตู้
1
充分混匀后，放置10min，以空白管调零，520nm波长比色
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五、实验结果
六、注意事项
显色反应10-15分钟内比色，如果时间过长，尿液中 其它物质能与碱性苦味酸起非特异性反应而影响结果。
如测定管显色过深，应再将稀释尿液后测定，其结果 乘以稀释倍数。
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七、指标应用
正常人尿肌酐日排出量：男子1.0~1.8g，女子0.7~1.0g。24h每千克 体重排出的尿肌酐毫克数称尿肌酐系数。正常人尿肌酐系数为：男子 18~32mg/kg体重，女子10~ 25mg/kg体重
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一、 实验目的
复习和巩固尿肌酐的生成机理及其生化评定的意义 学习尿肌酐测定方法 掌握尿肌酐系数指标的计算及其在运动实践中的应用。
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二、实验原理
无蛋白尿液中的肌酐与碱性苦味酸盐反应，经“Jaffe”氏 反应生成红色的苦味酸肌酐，其生成量与肌酐含量成正比， 用比色法即可求出尿中肌酐含量。