实验二 食品中苯甲酸(或山梨酸)的高效液相色谱法分析
高效液相色谱法测定糕点中苯甲酸.山梨酸.糖精钠含量的研究
高效液相色谱法测定糕点中苯甲酸.山梨酸.糖精钠含量的研究摘要本文对国标法进行改进,建立了用HPLC测定糕点中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠的前处理方法。
结果表明,该方法平均回收率均达到92.8%以上,符合试验要求。
关键词HPLC;糕点;苯甲酸;山梨酸;糖精钠;前处理苯甲酸、山梨酸是有机化学防腐剂,可以防止食品腐败变质,延长食品保存期,抑制食品中微生物繁殖;糖精钠是一种人工合成甜味剂,其糖度为蔗糖的500倍,且价格低廉。
上述3种添加剂在食品加工过程中被广泛使用,但过量食用会对人体会产生一定影响,因此对食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量进行检测有重要意义。
目前,国标法(GB/T 5009-2003)[1]使用高效液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠只适用于汽水、果汁、配制酒等液体食品,但在实际工作中,经常遇到固体食品(如糕点)需要检测。
由于糕点类食品含有蛋白质、淀粉类大分子,以及油脂,直接进样会堵塞、损伤色谱柱;而采用有机溶剂提取,操作过程繁琐,对操作者健康的损害大。
为此,笔者对国标法进行改进,探讨出针对糕点样品的HPLC前处理方法,进行糕点样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量测定,获得了良好的效果。
1 试验原理糖精钠是易溶于水的盐类,样品中的苯甲酸、山梨酸经氢氧化钠溶液(1.0 mol/L)浸泡后,转化为易溶于水的苯甲酸钠、山梨酸钠,经沉淀蛋白质、过滤等处理后,3种被测组分滞留于水相中与杂质分离,经流动相带进色谱柱后进行分离,以保留时间定性,以峰面积定量。
2 材料与方法2.1 材料2.1.1 仪器1)高效液相色谱仪;2)快速扫描紫外分光检测器;3)超声波清洗器;4)0.45μm微孔滤膜过滤器;5)台式低速大容量离心机;6)样品粉碎机。
2.1.2 试剂1)甲醇,色谱纯;2)0.02 mol/L的乙酸铵溶液;3)1.0 mol/L氢氧化钠溶液;4)6 mol/L盐酸溶液;5)106 g/L的亚铁氰化钾溶液;6)220 g/L的乙酸锌溶液;7)50 g/L饱和硼砂溶液;8)纯水,2次重蒸水。
液相色谱测定苯甲酸和山梨酸钾的含量
液相色谱法测定苯甲酸和山梨酸钾的含量一、仪器液相色谱仪一台（配C18-BP反相色谱柱，紫外检测器，六通阀，化学工作站），超声波清洗器，流动相过滤装置二、试剂分析纯：甲醇，醋酸铵，高纯水，苯甲酸，山梨酸，NaHCO3三、准备工作1、1mg/ml 苯甲酸标准贮备液准确称取0.100g苯甲酸，用水适量，加5ml NaHCO3溶液，定容至100ml备用2、1mg/ml山梨酸贮备液准确称取0.100g山梨酸，用水适量，加5ml NaHCO3溶液，定容至100ml备用3、苯甲酸山梨酸混合标准液利用苯甲酸和山梨酸标准贮备液配置不少于2个不同浓度标准混合液10ml，取少量过滤后贮存于样品瓶中备用如：4、流动相称取02g醋酸铵固体，用纯水溶解稀释到1000ml 配成2g/L醋酸铵溶液，与甲醇混合成（体积比NH4Ac:CH3OH=95:5）流动相，经0.45um滤膜过滤，装于流动相贮液瓶中，用超声波脱气20min备用。
三、实验条件和方法进样量：10uL；流动相流量：1mL/min；检测器波长：230nm定性方法：保留时间定性；定量方法：外标峰面积定量。
四、实验步骤1.打开液相色谱仪开关和检测器开关，仪器自检。
2.打开液相色谱仪冲洗阀，铵冲洗键，冲洗约5~10毫升溶液直至流动相管路无气泡，再次按冲洗键，关闭冲洗，并关闭冲洗阀3.按色谱仪“运作/停止”键，启动高压泵系统。
4.打开工作站软件5.仪器控制→系统配置→验证系统配置→确定。
6.仪器控制→流量1ml/min最大压力25Mpa 检测器→波长230nm→确定。
7.启动基线监测→基线平稳后→停止基线监测。
8.启动数据菜单→屏幕出现绿色小瓶子→进样“LOAD”位置转到“INJECT”位置9.先进0.1的标样再进0.3/0.35的标样再进试样→保存数据。
10.定量→用标样计算→右击中间空白位置→打开标准样品→选择样1→添加→选标样2→添加→打开右击中间空白位置→设置标准样品→点第一个标准样→双击组分名→输入“组分名”和浓度→确定；点第二个标准样→双击组分名→输入“组分名”和浓度→确定。
防腐剂苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱分析
防腐剂苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱分析一、实验目的1、了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理，初步掌握其操作技能。
2、掌握高效液相色谱保留值定性方法和外标定量方法。
二、实验原理高效液相色谱法是重要的液相色谱法。
它选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。
根据使用的固定相及分离机制的不同，一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排阻色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K ；组分在流动相中的浓度组分在固定相中的浓度K显然，K 越大，组分在固定相上停留时间越长，固定相与流动相间的极性差值也越大，因此，相应出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相液相色谱法和以流动相为极性而固定相为非极性物质的反相液相色谱法。
目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定相。
若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离非极性或弱极性的化合物。
据此，采用反相液相色谱法可分离防腐剂苯甲酸和山梨酸。
本实验采用外标法测定样品中苯甲酸和山梨酸的浓度。
外标法又称定量进样-标准曲线法，指用欲测组分纯物质配制成不同浓度的标准溶液，取固定量标准溶液进行分析，从所得色谱图上测出响应信号（峰面积或峰高），然后绘制响应信号（纵坐标）对浓度（横坐标）的标准曲线。
分析样品时，取和制作标准曲线时同样量的试样（固定量进样），测得该样品的响应信号，由标准曲线即可查出其浓度。
三、仪器DIONEX UltiMate3000（USA ） 高效液相色谱仪（配有自动进样器，紫外检测器）。
四、试剂和溶液苯甲酸（分析纯）、山梨酸（分析纯）、甲醇（色谱纯)、高纯水、0. 02 mol/ L 乙酸铵溶液、标准储备液、标准使用液、标准混合使用液、未知溶液。
高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤.docx
高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤1材料与方法：1.1仪器：(1)高效液相色谱仪(2) 分析天平，(3 )酸度计，(4)离心机，(5 )振荡器，(6)超纯水仪；试剂：(1)苯甲酸，(2) 山梨酸，(3) 脱氢乙酸，(4) 甲醇；提取试剂：(1)0.3%盐酸乙醇溶液，(2) 0.02mol/L磷酸氢二钾溶液1.2标准溶液的配制精密称取苯甲酸，山梨酸，脱氢乙酸对照品各适量，加乙醇溶解，配制成1.0mg/ml 的标准储备溶液。
1.3色谱参数和条件(1)色谱柱：DIONEX Acclaim 120 C18(4.6*250mm,5 ^m)(2)流动相：甲醇一0.02mol/L磷酸氢二钾溶液(10:90)(3)流速：1.0ml/min(4)进样量：10丄(5)检测波长：230nm(苯甲酸，山梨酸)，293nm (脱氢乙酸)1.4样品处理1.4.1固体样品(如熟肉制品.豆制品及糕点类)(1)称取捣碎混匀的样品5g (精确至0.01g )于具塞三角瓶中，(2)精密加入25ml提取溶剂，振荡1h后，于4C放置24h，(3)离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 ym滤膜过滤,(4)进液相色谱仪分析。
1.4.2液体样品(如冷冻饮品)(1)将样品于室温下解冻后，称取10g (精确至0.001g )于25ml量瓶中，(2)用提取溶剂定容至刻度，混匀，于4C放置24h，(3)离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 ym滤膜过滤,(4)进液相色谱仪分析。
2数据处理2.1标准曲线与检出限精密量取标准储备溶液适量，用提取溶剂定量稀释制成每ml中含0.1旧,0.5血,1血,4旧,8旧,12旧,16旧,20旧的标准混合溶液，按前述色谱条件进行测定，且每个浓度做两组平行试验，以浓度C(g/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标制作标准曲线；以浓度C( pg/ml)对峰面积A进行线性回归，按信噪比3,计算检出限2.2精密度和方法回收率试验(1)精密度实验：取同一对照品溶液(各浓度均为10^/ml )，重复进样，测出各峰面积的RSD值。
高效液相色谱法测定果汁饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量
分析检测高效液相色谱法测定果汁饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量辛明彦（浮山县综合检验检测中心，山西临汾 042600）摘 要：目的：建立高效液相色谱-紫外检测器测定果汁饮料中苯甲酸、山梨酸及糖精钠3种食品添加剂的分析方法。
方法：果汁饮料试样用纯水提取，经Acclaim TM 120 C18色谱柱分离，用紫外检测器测定。
结果：苯甲酸、山梨酸及糖精钠在1.00～50.00 mg/L线性良好，相关系数均大于0.999，3种添加剂的检出限均为0.005 g/kg，定量限均为0.015 g/kg，加标回收率为91.7%～109.0%，RSD为1.29%～3.36%。
结论：该方法前处理简便、分析速度快、准确度高及精密度好，可用于上述3种添加剂的定性、定量检测。
关键词：高效液相色谱；果汁饮料；食品添加剂Determination of Benzoic Acid, Sorbic Acid and Saccharin Sodium in Fruit Juice Drinks by HPLCXIN Mingyan(Fushan County General Inspection and Testing Center, Linfen 042600, China) Abstract: Objective: The method for the determination of benzoic acid, sorbic acid and saccharin sodium in fruit juice drinks by HPLC with UV detector was established. Method: Pear juice beverage samples were extracted with pure water, separated by Acclaim TM120 C18 chromatographic column and determined by UV detector. Result: The linearity of benzoic acid, sorbic acid and saccharin sodium is good at 1.00～50.00 mg/L, the correlation coefficient is greater than 0.999, the detection limit of the three additives is 0.005 g/kg, the quantitative limit is 0.015 g/kg, the recovery is 91.7%～109.0%, and the RSD is 1.29%～3.36%. Conclusion: The method has the advantages of simple pretreatment, fast analysis speed, high accuracy and good precision. It can be used for the qualitative and quantitative detection of the above three additives.Keywords: high performance liquid chromatography; fruit juice beverage; food additives随着我国社会经济发展与食品工业水平的提升，人们对饮料类食品的消费需求日益增长，果汁类饮料以其口味佳、富含维生素与矿物质等优势深受广大消费者喜爱[1-3]。
高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸
卫生化学实验七高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法二、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂,能够引起人的再生障碍性贫血,粒状白细胞缺乏等;因此国家严格限制其使用量;在本实验中,样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇,然后过滤注入高效液相色谱仪,经反相C18液相色谱柱分离后,紫外检测器230 nm波长处检测;以色谱峰的保留时间定性,色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析;三、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪Waters,美国：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯1个； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜0.22 μm;2、试剂：1 甲醇色谱纯；醋酸铵溶液0.02 mol/L,色谱纯；流动相分别超声脱气10 min2 山梨酸储备溶液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g山梨酸,加超纯水定容至250 ml;3 苯甲酸储备液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g苯甲酸,加超纯水定容至250 ml;四、实验步骤1、样品处理碳酸饮料雪碧：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min,然后用微孔滤膜0.22 μm 过滤,滤液备用;吸取100 μl滤液于离心管中,并加入900 μl超纯水,混合均匀标记为样品;2、配制标准溶液1 取一定量的苯甲酸储备液,经滤膜过滤于离心管中;吸取滤液50 μl于另一离心管并加入950 μl超纯水,得到50 μg/ml的苯甲酸标准品,做好标记;2 同理得到50 μg/ml的山梨酸标准品,做好标记;3 混合标准品配制：分别吸取500 μl过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀,得到500 μg/ml的混合标准品;吸取50 μl混合标准品500 μg/ml于离心管中并加入950 μl超纯水,得到25 μg/ml的混合样,标记为混标;3、色谱条件：色谱柱：C18反相键合色谱柱流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5 : 95流速：1 ml/min 检测波长：230 nm 进样量10 μl4、标准品和样品测定1 分别进苯甲酸50 μg/ml、山梨酸50 μg/ml标准品,确定保留时间;2 记录混合标准品25 μg/ml的峰面积并按下式计算样品中苯甲酸和山梨酸含量：计算方法：Cx=F×Cs×Ax÷As式中：Cx—为样品中被测物的含量μg/ml；Cs—为苯甲酸或山梨酸标准品的含量μg/ml;F—为稀释倍数；Ax—样品的峰面积；As—标准品的峰面积;五、实验数据记录及结果计算1、苯甲酸、山梨酸标准品的保留时间物质苯甲酸山梨酸保留时间min 6.780 9.1522、混合标准品及样品的峰面积物质苯甲酸山梨酸样品苯甲酸山梨酸峰面积mAUmin 386576 2067181 234426 31073、实验结果计算根据公式：Cx=F×Cs×Ax÷As计算得：C苯甲酸=10×25×234426÷386576=151.6μg/mlC山梨酸=10×25×3107÷2067181=0.375μg/ml雪碧中含有151.6μg/ml的苯甲酸,0.375μg/ml的山梨酸;六、注意事项1、如果被测溶液含有气泡,对测定和仪器的使用均有影响,因此需要将被测溶液超声加热除去二氧化碳;2 、苯甲酸的灵敏波长为230 nm,山梨酸的灵敏波长为254 nm,在此波长测定时苯甲酸的灵敏度较低;因此波长选择230 nm;3、平衡前用甲醇：水5:95冲洗柱子15 min,再用甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5:95进行平衡;4、开机顺序：高压输液系统、进样系统、柱温箱、检测器、电脑软件;5 、使用盐做流动相的时候：水：甲醇=95: 5冲洗柱子20 min以上；然后用甲醇冲洗色谱柱20 min以上,保存色谱柱;6 、关机：清洗结束后,点击并将泵流量输入为0,等压力降为0时,关掉泵电源,退出Breeze工作站,再关闭仪器各部分电源及计算机;7、注意在移液枪加完一种试剂之后,一定要记得换枪头。
食品中苯甲酸、山梨酸及其钠盐的液相色谱法测定
食品中苯甲酸、山梨酸及其盐的测定
2020/11/12
6
我国食品苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）使用量标准
名称 苯甲酸、 苯甲酸钠
山梨酸、 山梨酸钾
2020/11/12
使用范围
最 大 使 用 量 备注 （g/kg)
酱油、醋、果汁（味）型饮料、果酱（不包含 1.0 罐头）
葡萄酒、果子酒、琼脂软糖
0.8
碳酸饮料
0.2
低盐酱菜、酱类、蜜饯
0.5
苯甲酸和苯甲酸钠同时 使用时，以苯甲酸计， 不得超过最大允许使用 量；以苯甲酸计，塑料 桶装浓缩果蔬汁不得超 过2g/kg
食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁
2.0
酱油、食醋、果酱、氢化植物油、软糖、鱼干 1.0 制品、即食豆制食品、糕点、馅、面包、蛋糕、 月饼、即食海蜇、乳酸菌饮料 低盐酱菜、酱类、蜜饯、果汁（味）型饮料、 0.5 果冻、胶原蛋白肠衣
提取、纯化后，也可利用其化学结构特性采用紫外吸收光谱法进行测定。
2020/11/12
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食品中苯甲酸、山梨酸及其盐的测定
❖ GB/T5009·29—2003 ❖ 第一法 气相色谱法 ❖ 第二法 高效液相色谱法 ❖ 第三法 薄层色谱法
❖ 本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中苯甲酸、山梨酸 含量的测定方法。
葡萄酒、果酒
0.6
以山梨酸计，食品工业 用塑料桶装浓缩果蔬汁 不得超过2g/kg；山梨酸 和山梨酸钾同时使用时， 以山梨酸计，不得超过 最大允许使用量
果、蔬保鲜、碳酸饮料
பைடு நூலகம்
0.2
肉、鱼、蛋、禽制品
0.075
食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁
2.0
7
食品中苯甲酸、山梨酸及其盐的测定
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的液相色谱法是一种常用的分析方法，由于其操作简便、分离效果好以及分析结果准确可靠而得到广泛应用。
下面将详细介绍该方法的原理、仪器设备、操作步骤以及常见问题及解决方法。
一、方法原理：该方法采用液相色谱法进行分析，根据待测样品中的目标化合物与色谱柱之间的相互作用来实现物质的分离和定量。
主要包括样品的预处理、色谱分离、定量检测和数据分析等步骤。
二、仪器设备：液相色谱仪是该方法的主要仪器设备，其中包括色谱柱、检测器和数据处理系统等，常用的色谱柱有C18反相色谱柱、正相色谱柱等。
常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器等。
三、操作步骤：1. 样品的预处理：将待测食品样品取适量加入提取溶剂中，超声或搅拌混合，静置一段时间使目标化合物溶解。
然后通过滤膜过滤，以获取纯净的样品溶液。
2. 色谱分离：将样品溶液注入色谱柱中，通过不同组分在色谱固定相和流动相之间的相互作用来实现分离。
可以调整流动相的组成和流速等条件来优化分离效果。
3. 定量检测：分离后的组分进入检测器，根据目标化合物的特性进行定量检测。
常用的方法是通过比较待测样品和已知浓度的标准溶液的峰面积或峰高来确定目标化合物的含量。
4. 数据处理：将检测到的信号转化为对应的色谱图，并通过计算机数据处理系统进行数据分析和结果计算。
四、常见问题及解决方法：1. 色谱柱选择：根据目标化合物的特性选择合适的色谱柱，如苯甲酸和山梨酸可以选择C18反相色谱柱，糖精钠可以选择离子交换色谱柱。
2. 流动相的选择：合理选择流动相的组成和流速，以实现目标化合物的高效分离。
这需要根据不同化合物的极性和溶解度等参数进行优化。
3. 检测器的选择：根据不同化合物的特性选择合适的检测器，如苯甲酸和山梨酸可以选择紫外检测器进行检测，糖精钠可以选择荧光检测器进行检测。
4. 样品的提取：提取过程要注意样品的充分溶解和提取溶剂的选择，以获得准确的分析结果。
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实验食品中苯甲酸(或山梨酸)的高效液相色谱法分析
(1) 实验目的
掌握液相色谱法测定食品中苯甲酸含量的原理、色谱分析的参考条件及各项操作。
(2) 原理
样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH值至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱柱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
(3) 试剂
①优级纯甲醇；稀氨水(1：1)；2 ％碳酸氢钠溶液；0.02 mol／L乙酸铵溶液：称取0.77 g 乙酸铵，加水至500 mL，溶解，经滤膜(0．45μm)过滤。
②苯甲酸标准储备溶液准确称取0.1000 g苯甲酸，加2 ％碳酸氢钠溶液5 mL，加热溶解，移人100 mL容量瓶中，加水定容至100 mL，摇匀。
此溶液每毫升含苯甲酸l mg。
③山梨酸标准储备溶液准确称取0.1000g山梨酸，加2 ％碳酸氢钠溶液5 mL，加热溶解，移人100 mL容量瓶中，加水定容至100 mL，摇匀。
此溶液每毫升含山梨酸为1 mg。
④苯甲酸、山梨酸混合标准溶液吸取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0 mL，置100 mL 容量瓶中加水至刻度。
此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1 mg/mL，经0.45μm滤膜过滤。
⑤苯甲酸、山梨酸混合标准曲线制作分别吸取苯甲酸、山梨酸标准溶液(含苯甲酸、山梨酸分别为0.1 mg/mL) 2 mL, 4 mL, 6 mL, 8 mL于10 mL容量瓶中,用纯净水定容, 经0.45μm 滤膜过滤。
(4) 仪器设备
高效液相色谱仪(带紫外检测器)。
(5) 操作方法
①样品处理
汽水：称取5.00—10.0g样品，置小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1：1)调pH 值约7。
加水定容至10-2 0mL，经0．45μm滤膜过滤。
果汁类：称取5.00—10.0g样品，用氨水(1 ：1)调pH值约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经0．45μm滤膜过滤。
配制酒类：称取10.0g样品，放人小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1：1)调pH值约7，加水定容至适当体积，经0．45μm滤膜过滤。
②高效液相色谱分析参考条件色谱柱：YWG—C18 4.6m mb×250mm，10μm不锈钢柱；流动相：甲醇—0.02 mol／L乙酸铵溶液(5：95)；流速：1 mL／min；进样量：l0μL；紫外检测器：230 nm；灵敏度：0.2AUFS。
根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
(6) 结果计算
样品中苯甲酸的含量按下式计算：
式中：X——样品中苯甲酸的含量，g/kg；
A——进样体积中苯甲酸的质量，mg；
V2——进样体积，mL；
V1——样品稀释液总体积，mL；
m——样品质量，g。
(7)方法分析及评价
①为了在短时间内提供快速的分离，可选用一种粒径比国家标准推荐方法更小的，5μm的填料的C18柱来分离苯甲酸、山梨酸和糖精钠3种物质。
在同样的甲醇比例下，3种物质可以很快地出峰。
②被测溶液pH值对测定和色谱柱使用寿命均有影响，pH>8或pH<2时影响被测组分的保留时间，对仪器有腐蚀作用，应以中性为宜。
③测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠也可以用Micro PAK CN—10 4m m×300mm柱，流动相可用甲醇-水。
④山梨酸的灵敏波长为254nm，在此波长测苯甲酸、糖精钠灵敏度较低，苯甲酸、糖精钠的灵敏波长为230nm，为照顾3种被测组分灵敏度，方法采用波长为230nm。
⑤甲醇和乙酸铵的比例对色谱分离和3种物质的保留时间有影响，甲醇含量越高，3种物质在色谱柱上的保留时间越短，分离时间也越短。
本方法甲醇含量为5％时有较好的分离度和合适的保留时间，甲醇与0.02mol／L乙酸铵的比例为5：95。
⑥如果柱子长时间未用，平衡时间不充分，会出现糖精钠和山梨酸的峰位置颠倒现象。
如果采用二极管阵列检测器的多个波长检测时就会很容易识别，因为山梨酸的灵敏度在254nm 比在230nm时明显要高得多，而在230nm时两者有相近的灵敏度，往往不容易发现。
⑦本法为GB／T 5009.29--2003测定苯甲酸含量的第二法。
可用于山梨酸和糖精钠的测定。
⑧在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 ％。
⑨本法所采用的直接稀释进样，回收率为98.8 ％—103.5 ％；若样品前处理采用乙醚提取，回收率为95.4 ％—98.4 ％，但两种方法相对偏差小于10 ％。
⑩本方法苯甲酸检出限为2.5 mg/kg。
⑧本方法推荐的色谱条件分离时间相对较长，不利于常规的实验室分析；同时，国标法中，测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠的高效液相色谱法中样品处理只是提到了汽水、果汁和配制酒类，而对于其他的样品处理方法没有提及。