基因组学
生物的基因组学与生物信息学
生物的基因组学与生物信息学基因组学和生物信息学是现代生物学领域两个重要的分支。
基因组学研究基因组的组成、结构和功能，而生物信息学则利用计算机、数学和统计学等工具来处理和分析大规模的生物学数据。
1. 基因组学的概念与发展基因组学是研究生物体遗传信息的总和，包括DNA的组成、基因的组织和调控以及基因与基因之间的相互作用。
人类基因组计划的启动标志着基因组学的发展进入了一个新的阶段。
通过对不同生物基因组的研究，基因组学科学家们揭示了生命起源、进化以及生物体的复杂性。
2. 生物信息学的概念与应用生物信息学是一门研究如何存储、检索、分析和应用生物学数据的学科。
随着DNA测序技术的迅速发展，生物学领域产生了大量的数据，如基因序列、蛋白质序列等。
生物信息学通过运用计算机科学和统计学的方法，帮助科学家们更好地理解生物学现象，预测基因的功能和蛋白质的结构，以及挖掘新的生物学知识。
3. 基因组学与生物信息学的关系基因组学和生物信息学密切相关，相互促进，共同推动了生物学领域的发展。
基因组学提供了大量的数据资源，为生物信息学的研究和应用提供了基础。
而生物信息学则通过开发算法和软件工具，对基因组学数据进行处理、分析和解读，从而揭示基因组的结构、功能和演化等重要信息。
4. 基因组学与生物信息学在研究中的应用基因组学和生物信息学在许多领域都有广泛的应用。
例如，通过基因组学和生物信息学的研究，科学家们可以识别与疾病相关的基因，为疾病的早期诊断和治疗提供基础。
同时，基因组学和生物信息学的技术也被应用于农业、畜牧业和环境保护等方面，为提高农作物产量、改良畜禽品种以及保护生物多样性提供了新的途径。
5. 基因组学与生物信息学的挑战与未来发展尽管基因组学和生物信息学在生物学领域的应用取得了巨大的进展，但仍面临许多挑战。
其中包括如何处理和分析大规模的生物学数据、如何挖掘数据中隐藏的信息以及如何整合不同的数据源等。
未来，基因组学和生物信息学的发展方向将更加注重技术的改进和算法的优化，以应对日益增长的数据量和研究需求。
基因组学概念
基因组学概念
基因组学（Genomics）是一门研究基因组结构和功能的学科，它涵盖了生命科学、生物信息学、计算机科学等多个领域。
基因组学通过研究基因组的结构、组成、表达和调控，深入理解生命的本质、生物多样性和疾病发生机制，为新药研发、医学诊断和治疗提供基础支持和解决方案。
基因组学的主要研究对象是基因组，即生物体内部所有基因的集合体。
基因组由DNA序列组成，其中包括编码蛋白质和调节基因表达的基因，以及非编码DNA序列和重复DNA序列等。
基因组学的研究内容包括以下几个方面：
1. 基因组测序：通过高通量测序技术，对基因组进行大规模的测序分析，以获取基因组的详细序列和变异信息。
2. 基因组组装：通过对测序数据进行组装和分析，构建基因组的物理图谱和遗传图谱，以确定基因组的结构和组成。
3. 基因组注释：通过对基因组序列进行注释和分析，确定基因的编码区、调控序列和重复序列等信息，以揭示基因的功能和表达模式。
4. 基因组变异分析：通过分析基因组序列中的变异，包括单核苷酸变异（SNV）、插入和缺失（INDEL）、结构变异（SV）等，揭示基因组的遗传多样性和疾病发生机制。
5. 基因组学应用：将基因组学应用于医学、农业、环境科学等领域，包括新药研发、疾病诊断和治疗、生物多样性保护等。
基因组学的发展得益于现代科技的不断进步和创新，如高通量测序技术、生物信息学方法和计算机科学算法等。
随着技术的不断革新和完善，基因组学将在生命科学、医学和农业等领域发挥越来越重要的作用，为人类提供更加全面、深入和精准的知识和解决方案。
各种组学的基本概念
各种组学的基本概念组学是一门交叉学科，它综合了生物学、统计学和计算机科学等多个领域的知识，旨在揭示基因组、转录组、蛋白质组以及其他组学层面上的生物学特征和机制。
在过去的几十年中，随着高通量测序和其他技术的不断发展，组学研究在生命科学领域中发挥着越来越重要的作用。
在组学领域中，有许多基本概念是我们需要了解和掌握的。
下面，我将介绍一些最基础的组学概念，帮助你对这个领域有更全面、深刻和灵活的理解。
1. 基因组学 (Genomics)基因组学是组学研究中最基础的一个领域。
它研究的是整个生物体的基因组，即一套完整的遗传物质。
基因组学的目标是揭示基因组的结构、功能和演化。
2. 转录组学 (Transcriptomics)转录组学研究的是生物体在特定时期或特定环境下所产生的所有RNA 分子的总和，即转录组。
转录组学可以帮助我们了解基因的表达模式和调控机制。
3. 蛋白质组学 (Proteomics)蛋白质组学研究的是生物体在特定时期或特定环境下所产生的所有蛋白质的总和，即蛋白质组。
蛋白质组学的研究可以帮助我们理解蛋白质的功能、互作网络以及与疾病相关的异常表达。
4. 代谢组学 (Metabolomics)代谢组学研究的是生物体在特定时期或特定环境下所产生的所有代谢产物的总和，即代谢组。
代谢组学可以帮助我们了解生物体的代谢状态、代谢网络以及与疾病相关的代谢异常。
5. 聚宽组学 (Phenomics)聚宽组学是对生物体在特定时期或特定环境下所表现出的所有性状和表型的研究。
它可以帮助我们理解基因与表型之间的关系，以及基因对表型的调控机制。
以上是组学领域中一些基本的概念。
值得一提的是，随着技术的不断进步，组学领域也在不断发展和创新，新的概念和技术层出不穷。
对这些概念和技术的理解与掌握，对于我们深入探索生命本质、揭示生物学特征和机制具有重要意义。
在我看来，组学作为一门纵横交错的学科，不仅仅局限于生物研究领域，而且在医学、农业、环境科学等多个领域都有着广泛的应用价值。
基因组学
基因组：生物所具有的携带遗传信息的遗传物质的总和,是指生物细胞中所有的DNA，包括所有的基因和基因间区域。
基因组学：研究基因组结构和功能的科学。
指以分子生物学技术、计算机技术和信息网络技术为研究手段，以生物体内全部基因为研究对象，在全基因背景下和整体水平上探索生命活动的内在规律及其内外环境影响机制的科学。
C值：指一个单倍体基因组中DNA的总量，以基因组的碱基对来表示。
每个细胞中以皮克(pg，10-12g)水平表示。
C 值矛盾：在结构、功能很相似的同一类生物中，甚至在亲缘关系十分接近的物种之间，它们的C值可以相差数10倍乃至上百倍。
序列复杂性：不同序列的DNA总长称为复杂性，复杂性代表了一个物种基因组的基本特征。
隔裂基因：指基因内部被一个或更多不翻译的编码顺序即内含子所隔裂。
假基因：来源于功能基因但已失去活性的DNA序列。
微卫星序列：或称简单串联重复，重复单位较短。
重复序列只有1-6个核苷酸，分布在整个基因组，10-50个重复单位.重叠群：通过末端的重叠序列相互连接形成连续的DNA长片段的一组克隆称为重叠群。
指纹：指确定DNA样品所具有的特定DNA片段组成。
STS作图：根据STS序列设计引物，扩增文库当中的克隆，能扩出条带的克隆都含有序列重叠的插入子。
荧光原位杂交：指在染色体上进行DNA杂交，以便识别荧光标记探针在染色体上位置的方法。
辐射杂种群：通过放射杂交产生的融合细胞群称为辐射杂种群。
覆盖面（或深度）：每个核苷酸在完成顺序中平均出现的次数，或者说完成顺序的长度与组装顺序长度之比。
支架：一组已锚定在染色体上的重叠群, 内部含间隙或不含间隙.同源性：基因系指起源于同一祖先但序列已经发生变异的基因成员。
一致性：指同源DNA顺序的同一碱基位置的相同的碱基成员, 或者蛋白质的同一氨基酸位置的相同的氨基酸成员, 可用百分比表示.相似性：指同源蛋白质的氨基酸序列中一致性氨基酸和可取代氨基酸所占的比例。
转座子：一段DNA顺序可以从原位上单独复制或断裂下来，插入另一位点，并对其后的基因起调控作用，此过程称转座，这段序列称跳跃基因或转座子。
基因组学
基因表达调控的研究
蛋白质组学（proteomics） • 鉴定蛋白质的产生过程、结构、功能和 相互作用方式
2 基因组图谱的构建
基因组计划的主 要任务是获得全 基因组序列 但是，现在的测 序方法每次只能 测800～1000bp 小基因组物种常 用鸟枪射击法
（restriction fragment length polymorphism，RFLP）
如有两个 DNA 分子（一对染色体），一 个具有某一种酶的酶切位点，而另一个 没有这个位点，酶切后形成的DNA片段长 度就有差异，即多态性。
• 利用限制性内切酶消化基因组DNA，形成大小 不等、数量不同的分子片段， • 经电泳分离， • 通过Southern印迹将DNA片段转移至支持膜 (尼 龙膜或硝酸纤维素膜)上， • 然后用放射性同位素(32P)或非同位素 (如地高 辛，荧光素)标记的探针与支持膜上的DNA片 段进行杂交。 • 不同基因组DNA酶切位点的改变，会使得 RFLP谱带表现出不同程度的多态性.
中英联合实验室
双脱氧终止法测序反应体系包括：
DNA polymerase
Template:(单链DNA模板)
Primer:（带有3-OH末端的单链寡核苷酸引物)
Mg2+ dNTP(dATP,dGTP,dCTP和dTTP) ddNTP(ddATP,ddGTP,ddCTP和ddTTP)
DNA自动测序
形态标记
能够用肉眼识别和观察、明确显示遗传多样性 的外观性状。 形态性状：株高、颜色、白化症等 又称表型标记 简单直观 数量少 很多突变是致死的 受环境、生育期等因素的影响
基因组学
基因组：生物所具有的携带遗传信息的遗传物质的总和,是指生物细胞中所有的DNA，包括所有的基因和基因间区域。
基因组学：指以分子生物学技术、计算机技术和信息网络技术为研究手段，以生物体内全部基因为研究对象，在全基因背景下和整体水平上探索生命活动的内在规律及其内外环境影响机制的科学。
基因组学包括3个不同的亚领域1结构基因组学：以全基因组测序为目标2功能基因组学：以基因功能鉴定为目标3比较基因组学C值是指一个单倍体基因组中DNA的总量，以基因组的碱基对来表示。
C值悖理（矛盾）：在结构、功能很相似的同一类生物中，甚至在亲缘关系十分接近的物种之间，它们的C值可以相差数10倍乃至上百倍。
C值不随生物的进化程度和复杂性而增加；关系密切的生物C值相差甚大；真核生物的DNA的量远大于编码蛋白质所需的量。
C值反映了总体趋势上，随着生物结构和功能的复杂性的增加，各分类单元中最小基因组的大小随分类地位的提高而递增。
单一顺序：基因组中单拷贝的DNA序列重复顺序：基因组中多拷贝的基因序列真核生物基因组DNA组分为非均一性，可分为3种类型：快速复性组分、居间复性组分、缓慢复兴组分基因家族：是真核基因组的共同特征，他们来自一个共同的祖先，因基因加倍和趋异，产生了许多在DNA序列上基本一致而略有不同的成员。
包括编码RNA的基因和编码蛋白质的基因隔裂基因（split gene）：指基因内部被一个或更多不翻译的编码顺序即内含子所隔裂。
3、异常结构基因分类重叠基因：编码序列彼此重叠的基因，含有不同蛋白质的编码序列。
基因内基因:一个基因的内含子中包含其他基因。
反义基因:与已知基因编码序列互补的的负链编码基因，参与基因的表达调控，可以干扰靶基因mRNA转录与翻译。
假基因：来源于功能基因但已失去活性或者改变原来活性功能的DNA序列.四、基因组特征比较真核生物基因组的特征：复杂性较高的生物基因组结构松弛，在整个基因组范围内分布大量重复顺序（小基因组重复序列较少，大基因组重复序列急剧扩增）；含有大量数目不等的线性DNA分子，并且，每个长链DNA都与蛋白质组成染色体结构；含有细胞器基因组（所有真核生物都具有环状的线粒体DNA，植物细胞还含有环状的叶绿体DNA。
基因组学
名词解释：第一章基因组遗传图（连锁图）：指基因或DNA标记在染色体上的相对位置与遗传距离。
单位是厘摩cM （基因或DNA片段在染色体交换过程中分离的频率）。
物理图：以已知核苷酸序列的DNA片段（序列标签位点，sequence-tagged site, STS）为“路标”，以碱基对作为基本测量单位（图距）的基因组图。
转录图：以EST（expressed sequence tag ，表达序列标签）为标记，根据转录顺序的位置和距离绘制的图谱。
EST：通过从cDNA文库中随机挑选的克隆进行测序所获得的部分cDNA的5'或3'端序列称为表达序列标签（EST），一般长300-500 bp左右。
序列图（分子水平的物理图）：序列图是指整个人类基因组的核苷酸序列图，也是最详尽的物理图。
既包括可转录序列，也包括非转录序列，是转录序列、调节序列和功能未知序列的总和。
基因：合成有功能的蛋白质或RNA所必需的全部DNA序列，即一个基因不仅包括编码蛋白质或RNA的核酸序列，还应包括为保证转录所必需的调控序列。
基因组（genome）：生物所具有的携带遗传信息的遗传物质的总和。
基因组学（genomics）：涉及基因组作图、测序和整个基因组功能分析的一门学科。
C值：单倍体基因组的DNA总量，一个特定种属具有特征C值C值矛盾（C value paradox）：指一个有机体的C值和其编码能力缺乏相关性。
单一序列：基因组中单拷贝的DNA序列。
重复序列：基因组中多拷贝的DNA序列。
复杂性（complexity）：基因组中不同序列的DNA总长。
高度重复序列（highly repetitive sequence）：重复片段的长度单位在几个到几百个碱基对（base pair，bp）之间（一般不超过200 bp），串联重复频率很高（可达106以上），高度重复后形成的这类重复顺序称为高度重复顺序。
中度重复序列（intermediate repetitive sequence ）：重复长度300～7000 bp不等，重复次数在102～105左右。
基因组学与转录组学的比较研究
基因组学与转录组学的比较研究随着科技的不断发展，人们对于生物学的研究也越来越深入。
基因组学和转录组学是生物学中相对较新的概念，二者都涉及到基因的研究，但研究方向却有所不同。
本文将为大家介绍基因组学与转录组学的比较研究。
1. 基因组学基因组学是指对生物体某一物种全部基因组的研究，包括基因组的序列分析、结构、功能及进化等方面。
基因组学的研究旨在了解基因组的组成、结构和功能等基本特征，为研究生物体的形态、生理、生态、进化及其它方面提供基础。
基因组学的重要性在于它为对生物体全面系统性的研究开设了一个新的分析维度。
2. 转录组学转录组学是指研究物种基因组中所有转录产物的学科。
转录组学的主要研究对象是mRNA，研究方向是与mRNA相关的转录调控，即从转录起始点到终止点上的基因表达调控的过程。
转录组学研究可以深入地探究基因的表达模式和调控机制，对于理解生物体的发育、个体差异、环境响应以及疾病的发生等方面都有重要作用。
3. 基因组学和转录组学的研究领域不尽相同，但二者又有很大的交叉和互相支持的关系。
基因组学主要研究基因组序列，可揭示物种遗传变异、进化和表达差异等信息；而转录组学则通过研究RNA序列、芯片和RNA测序等方案来分析某一生物在不同生理状态下基因表达的变化，以及对其环境的适应能力和差异性等问题。
具体来说，基因组学对于全面了解基因的组成和结构有着重要作用，而转录组学则为基因组学提供了探究基因功能的途径。
基因组学可以发现基因的表达差异性、基因变异等信息，而转录组学则可以将这些信息与不同生物学过程相应的基因表达水平相关联。
虽然两种方法不同，但通过二者的综合分析可以更为深入地理解生物体的生命过程。
4. 结论基因组学和转录组学是现代生物学发展的重要研究领域。
二者互为补充，在生物学研究中起到了不可替代的作用。
基因组学的深入研究为我们提供了全面系统的生物信息，而转录组学则探究了基因组的内部活动规律，使人们对于基因组的功能和作用有了更为清晰的认识。
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课程名称基因组学硕士课程论文题目:基因枪技术在植物学研究中的应用学科专业: 植物学年级: 2012 学号: 2012210632 研究生:侯敏指导教师:查笑君论文提交时间: 2012 年 12 月 11 日基因枪技术在植物学研究中的应用摘要基因枪是当今研究中一种重要的基因转移方法,在各个应用领域都显示出了其独特的优越性,因而广受重视;与此同时,基因枪技术本身也在实践中不断发展和完善。
本文在回顾和总结基因枪技术使用原理的基础上,综述了基因枪在植物学研究中的应用。
关键词基因枪;植物学;基因转移;应用Appl ication of Particle Bombardment in the Research of Botany AbstractAs an important means of gene delivery , gene gun technology has showed its superiority in many application fields of gene engineering , and so has gained wide attention. At the same time , gene gun technology is also evolving in practice. Upon the retrospection and of the gene gun principles , the application of the gene gun in the Botanical Research was summaried.Key words Gene gun ; botany ; gene delivery ;application1 基因枪技术的转化原理与发展近年来转基因技术以前所未有的速度进步人们已经不再满足于单个基因成功插入原有生物的基因组中而是把目光放在插入基因的成功表达和产。
然而自然界的生物体是十分复杂的有机整体许多的功能性状并不是单个基因可简单调控的即使像海藻一样简单的双糖在酵母中的代谢途径也需要个基因产物的直接参与。
目前进行多基因转化研究的主要技术手段有两种一种是单质粒载体的转化即几个目的基因和标记基因在同一载体质粒上另一种是目的基因和标记基因位于不同的载体上的共转化研究后者的主要优点在于能在分离的世代中把在生产中没有意义的基因分离同时也可以转入更多的外源基因基因枪转化方法则是实现其转化的主要途径。
基因枪技术( Particle gun) ,又称生物弹或生物发射法(Biolistic process) 、粒子轰击技术( Particle bombardment) 和高速微粒子发射技术( High - velocity microprojectile) 。
其原理是利用高速飞行的微米或亚微米级惰性粒子(钨或金粉) ,将包被其外的目的基因直接导入受体细胞,并释放出外源DNA ,使DNA 在受体细胞中整合表达,从而实现对受体细胞的转化。
根据动力来源不同,基因枪可大体分为火药式( Gunpowder )、放电式( Elect ric discharge) 和气动式（Pneumatic) 3 种类型。
1987 年美国康乃尔大学的J . C. Santord 等设计制造的火药式基因枪是最初的基因枪。
到目前为止还有以化学推进剂为动力(弹药枪) 和以放电为动力(电子枪) 用于粒子轰击细胞的新工具,特点是能转化有细胞壁的植物细胞,并能直接向细胞器中输入DNA ,或用来转化花粉以避开组织培养的操作。
在全面推广粒子枪之前还要进行开发和改良,更有效的电子枪会取代弹药枪。
2 基因枪法在禾谷类作物遗传转化中的应用2．1 转化目的基因改良作物性状在用基因枪法转化禾谷类作物的研究中,转化的目的基因主要有抗除草剂基因、抗虫基因、抗病基因、雄性不育基因等。
2.1.1 转化抗除草剂基因抗除草剂基因既可用作选择标记基因建立遗传转化系统,又能作为目的基因,使转基因作物在生长期间可使用除草剂除草,从而免去人工除草工作,节省了大量劳力。
常用的抗除草剂基因是PPT 乙酰转移酶基因(又称bar 基因) ,抗除草剂bialaphos。
用基因枪法将bar 基因转化小麦[、水稻、玉米、高粱,均获得了抗除草剂植株。
2.1.2 转化抗虫基因在禾谷类作物中,用基因枪法转化的抗虫基因主要是苏云金芽孢杆菌的晶体蛋白基因(Bt 基因) ,而且在玉米中报道得较多,王国英等用基因枪法将Bt 基因转化玉米胚性愈伤组织,获得了转Bt 基因的植株,对一个转Bt 基因植株的杂交后代进行了玉米螟抗性的田间鉴定,抗虫和感虫植株的比例接近1∶1 ,符合孟德尔单显性基因的遗传规律。
在水稻中,用改良的苏云金杆菌δ—内毒素[cryIA(b) ]基因经基因枪法转化,获得了能育的抗黄茎钻蛀虫转基因粳稻植株。
2.1.3 转化抗病基因简玉瑜等用基因枪法将抗菌肽B(cecropin B) 基因导入水稻得到了转基因植株,对T3 代抗白叶枯病株系进行Nouthern 印迹分析,证明cecropin B 基因在RNA 水平有表达。
另外, 王慧中、华志华等报道,用基因枪转化法将cecropin B 基因导入水稻均获得抗白叶枯病的转基因植株。
2.1.4 转化雄性不育基因中科院遗传所傅荣昭等用基因枪法将人工雄性不育基因( TA29 - Barnase 基因) 导入小麦豫麦18号,获得了经Southern 杂交证实的转基因小麦植株。
中科院华南植物研究所凌定厚等用基因枪法将psl - barnase 基因转化水稻,获得了psl - barnase 阳性转基因的水稻雄性不育3 转化中轰击的影响因素的研究刘伟华等对小麦的研究表明，对小麦愈伤化的幼胚进行轰击, 采用200～250 Lg 金粉/枪, 金粉与DNA 重量比为400～500, 较为适宜。
不同轰击参数影响金粉分布的范围和密度。
轰击距离为6 cm 或9 cm 时, 内部金粉密度大而外围金粉密度小, 差异极大。
轰击距离为12 cm 时, 内部和外围金粉密度差异小, 均匀度好。
J arl比较了不同入射条件认为, 氦气压力为5 löm in、射程为70mm、真空度在0. 8kg/ cm 2, 释放时间为60m s 是对大麦胚较合适的轰击参数, 此时GU S 瞬间表达的频率高。
但瞬间表达的条件在应用到稳定转化时往往被过分强调, 要获得稳定的转化子还要考虑轰击条件对植株再生的影响。
A lfon soRub i 等, 在1100p si 压力下用3 种不同的射程(6cm、9cm、12cm ) 轰击水稻种子的愈伤, 结果6cm 的射程虽然得到最多的GU S 表达, 但使具有再生能力愈伤的比例及每个愈伤得到的再生植株数, 较其它处理下降1. 5 倍～ 2 倍左右。
为使DNA 较好地附着在微弹上, 制弹时需添加一定浓度的DNA 沉淀剂, 如CaCl2、亚精胺(sperm idine)、聚乙二醇(PEG) 等。
Duchesne在转化云杉的愈伤时发现, CaCl2 的效果较PEG 好, 可得到更多的GU S 表达。
而对Ca2+ 的来源, Perl (1992 年)在转化小麦时, 使用Ca (NO 3 ) 2 优于CaCl2, 但王鸿鹤等在转化香蕉时的结果却相反, 看来不同的外植体对Ca2+ 源的要求并不相同。
不同型号的基因枪对沉淀剂的选择也不相同,PDS21000öH e 需要PEG的参与,ACCELL TM 则不需要[。
一般CaCl2 的最适浓度在1. 9M～ 2. 4M 之间, 亚精胺浓度介于7. 69mM～76. 9mM , 聚乙二醇则选用5%PEG4000。
亚精胺对植物细胞有毒害作用, 因此在许多实验中都采取降低亚精胺浓度, 而适当加入PEG。
4 对报告基因效应的鉴定一般在转化体选择和筛选中, 常把报告基因(report gene) 插入到转化体中。
在转化系统中, 检测这些报告基因的瞬时表达, 确定转化是否成功。
Schweizer 等用基因枪把报告基因GUS(βglucuronidase gene ,葡糖苷酸酶基因) 和抗病基因转入小麦叶盘中, 转化后与麦类白粉霉菌(powdermildew fungus , Erysi phe graminis ) 共培养。
由于轰击造成伤口,使霉菌侵染的往往是有GUS 表达的细胞,其共发生频率达35 % ,因此以GUS 作为瞬间检测系统是合适的。
此外, 他们还比较了GUS 、GFP ( green2fluorescent protein gene ,绿色荧光蛋白基因) 、OXOX (oxalate oxidase gene ,草酸氧化酶基因) 和GOX (glucose oxidase gene ,葡萄糖氧化酶基因) 等报告基因,结果表明, GUS 染色后的小麦叶切片可保存数周; GUS 染色不会被用于检测霉菌的考马斯亮蓝破坏, 不影响对转基因的检测;且GUS 为胞内蛋白,不与内陷于宿主原生质膜内的霉菌( Erysi phe graminis f . sp. t ritici ) 菌根接触,从而减少GUS 对菌体的直接影响。
因此认,GUS 较其他报告基因更方便、有效。
但Baruah Wolff 等[14 ]却认为, GUS 组织染色法会破坏转化的组织, 导致其不能再生。
用基因枪将l uc ( luciferase gene ,荧光酶基因) 转入水稻幼胚,由于荧光检测法不会对转化体造成伤害,因而得以再生。
应用荧光定量法还可以对转化体的后代进行早期纯合体鉴定。
但Elliott 等[15 ]认为, l uc 会使转化体回复到停止生长的状态;而GFP 检测对活体则是一种非侵犯性的,不用添加外源物质,若改用低能量的荧光显微镜观察,则不但减少检测细胞的损伤,还能降低植物本身荧光的干扰。
5基因的表达调控研究基因的表达调控特性,常需将克隆得到的基因片段先转入植物一定的外植体中,再进行探讨。
在众多的转化方法中,基因枪法对受体无特殊要求,而得到广泛应用。
如Lehr 等[克隆得到了VATP 酶( VATPase ) 的两个亚基BVA/ 70 和BVA/ 1621 ,并用基因枪法将其转入甜菜的悬浮细胞,发现BVA/ 70 和BVA/ 1621 转录水平的高低因植物发育阶段的不同而异, BVA/ 70 和BVA/1621上游启动子的活性受盐胁迫的诱导。
这两种的协同效应, 显示了VATPase 基因的持家功能( house2keeping function ) 和与胁迫有关的功能(st ress related function) 。
Malcuit 等[27 ]则把马铃薯抗病毒基因Nb 中一段大小为25 kb 的片段,连同GUS 报告基因,用基因枪转入马铃薯中,发现Nb的抗病毒特性主要决定于25 kb片段所编码的分子量为25 kD 的蛋白。