阪崎肠杆菌显色培养基原理
副溶血性弧菌和阪崎肠杆菌的菌落形态(内容参考)
二.阪崎肠杆菌
1.在TSA平板上：黄色菌落,生长很旺盛。
2.阪崎肠杆菌显色培养基（海博）溶血性链球菌
1.在选择性培养基-TCBS上：菌落较大、呈圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落。特征：用接种环挑起有类此口香糖的质感。
2.在弧菌显色培养基上（海博生物公司）：呈绿色的较大菌落。该培养基上副溶血性弧菌的特异性很强，可以克服在TCBS上的假阴性结果。
3.在3%氯化钠胰蛋白大豆琼脂平板上：菌落较大，黄色菌落
婴幼儿健康的“敌人”食品中阪崎肠杆菌的检测方法
婴幼儿健康的“敌人”-食品中阪崎肠杆菌的检测方法阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌是广泛存在于环境中的一种微生物，可以感染婴幼儿并对他们的健康造成严重威胁，阪崎肠杆菌耐热、耐干燥、对渗透压有较强的忍耐力，可长时间生存在干燥的环境中。
阪崎肠杆菌最喜欢袭击1岁以下的婴儿，如果你在冲调、存放奶粉时操作不当，它就可以趁虚而入，婴儿的胃酸PH值比成人高，可以存活在他们的肠道中，并且婴儿血脑屏障未发育完全，阪崎肠杆菌可以轻易进入他们的脑部引发脑膜炎，由阪崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎、菌血症等严重疾病，死亡率高达20-50％。
世界卫生组织建议，您应当使用不低于70℃的热水冲调婴儿配方奶粉，并在2小时内尽快喂哺，如果需要预先冲调，冲调后应快速冷却并且存放在不超过5℃的冰箱内，还要在冲调后24小时内饮用，喂哺前必须重新加热，那些早产、体重低或免疫力低的高风险婴儿，可以使用商业无菌的液态婴儿配方奶，你记住了吗？食品中阪崎肠杆菌的检测方法1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃1.2 冰箱：2℃-5℃1.3恒温水浴箱：44℃±0.5℃1.4天平：感量0.1g1.5 均质器1.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）1.7 无菌锥形瓶：容量100mL、250mL、2 000mL1.8 无菌培养皿：直径90mm1.9 pH计或精密pH试纸2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水2.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素2.3 阪崎肠杆菌显色培养基2.4 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）2.5 API 20E生化鉴定试剂盒2.6 氧化酶试剂3 操作步骤3.1 前增菌和增菌取样前，应消毒检样包装的开启处。
以无菌操作，称取检样100g（mL）加至预热到44℃装有900mL灭菌缓冲蛋白胨水的2 000mL锥形瓶中，缓缓振摇使样品充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。
尽量选择不同品牌的显色培养基更准确地对阪崎肠杆菌进行检测
尽量选择不同品牌的显色培养基更准确地对阪崎肠杆菌进行检测作者：王哲明郭彦希来源：《中国食品》2020年第22期婴儿奶粉和相关辅食中很可能出现的阪崎肠杆菌是一种较为危险的致病菌，倘若含量过高，很可能会使婴儿的身体健康受到影响，甚至诱发十分严重的疾病。
因此，对婴幼儿食物中的阪崎肠杆菌进行质量监测是十分重要的。
为了使检测结果更加精准，相关研究人员会使用不同品牌的显色培养基。
本文以每个品牌的显色培养基测量10个样本为基准，依照科学合理的方法进行实验，并进行相应的测试结果分析。
一、试验材料首先，研究人员要采用统一的实验用菌株来充当实验最主要材料。
其次，还需要用到生化培养箱、电热恒温培养箱、相应的样品均质器系统和生化鉴定系统，以及阴性细菌鉴定卡。
最后，挑选出市场上最为常见的5个不同品牌的显色培养基，以及通过了国家质量安全标准审核的奶粉和菌株。
二、试验方法取出100克奶粉和一支菌株，预热至大约44度的合适温度后，装入均质袋中进行均质，使得样品充分溶解。
溶解完成后放置在恒温36℃的环境中，静置18个小时进行培养。
将1毫升的增菌液注射入相关实验样本中，以44℃的温度培养24个小时。
将其至于分离平板上，进行菌落形态的观察，然后选择不同品牌的分离培养基对相关待测样品进行分离培养，最后进行生化鉴定。
三、结果分析通过实验发现，来自不同品牌的5个显色培养基，最终呈现的阪崎肠杆菌培养监测数量各有不同。
为了方便区分，相关技术研究人员对5个来自不同品牌的显色培养基进行了字母编号。
a类显色培养基的待测样本数为10份，疑似样本数为2份，挑选出的疑似菌落数是10个，被证实阳性的菌落数也是10份，假阳性的概率是0%。
b类显色培养基同样以10份样本來进行检测，疑似样本数高达9份，挑选出的疑似菌落数有45个，被证实阳性的菌落数仅有6个，假阳性的菌落数达到了39个。
因此，b类品牌的显色培养基准确率只有13.33%。
c类显色培养基同样以10份样本来进行检测，疑似样本数为3份，挑选出的疑似菌落数有15个，被证实阳性的菌落数是10个，假阳性的菌落数是5个。
阪崎肠杆菌的测定.pptx
阪崎肠杆菌的分布
1.环境 原油、切削液、苍蝇、食品加工厂（奶制品、谷类、
巧克力、马铃薯粉），医院（空气、听诊器、临床 食品）、家庭、温泉、鼠、沉积物、沼泽地、土壤 2.食品及相关用品 啤酒杯、干酪、婴儿配方奶粉和豆粉、婴儿配方粉 冲调用品（搅拌器、勺子、甁刷），普通奶粉、碎 牛肉、肉类、香肠、发酵面包、豆腐、蔬菜、水 （管道、生物膜）、调味品
冷藏条件下可以生长 5、在TSA培养基上产生黄色色素 6、产生α-葡萄糖苷酶，其它肠杆菌均不产生； 7、较强的耐干燥性，耐高渗透压， “干燥逆境抗
性”比其他，大多数乳品中分离得到的肠杆菌更 加耐热，但标准的高温短时巴氏杀菌可消灭
5
易感人群
• 阪崎肠杆菌可引起各年龄段的感染，但从 报道病例的年龄分布来看，高危人群主要是 婴儿（即＜1岁的儿童），新生儿（≤28天）、 尤其是早产儿、低出生体重或免疫力下的婴 儿，发生严重感染的危险性最高。
• 母亲HIV阳性的婴儿
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主要感染渠道
虽然现在还不能确定阪 崎肠杆菌的宿主和传播 模型，但在多起新生儿 阪崎肠杆菌感染事件的 调查中发现婴幼儿配方 粉是主要的感染渠道
7
阪
崎
检
1前增菌 2选择性增菌
测 3平板分离
பைடு நூலகம்
步
4平板确认 5 生化鉴定
骤
8
阪崎肠杆菌检验——前增菌
操作：100g样品+900mL增菌液，培养18h±2h GB使用的增菌液为BPW 主要作用：营养丰富，更利于食品检验具有缓冲体系
10
阪崎肠杆菌检验——平板分离
操作：各取培养物一环，接种显色平板，培养24h±2h 培养基作用 显色培养基 •显色培养基利用阪崎特异性α-葡萄糖苷酶原理，分解底物
阪崎杆菌显色培养基
北京索莱宝科技有限公司
阪崎杆菌显色培养基
成分：蛋白胨，牛肉粉，氯化钠，琼脂，显色试剂。
操作：
1、称取瓶内干粉5g，溶于10ml去离子水中，可以根据需要按照50g/L的比例缩小或扩大。
2、将上述干粉缓慢倒入去离子水中，用玻璃棒充分搅拌。
3、按常规搅拌加热至100℃，直至琼脂完全溶解，用纸密封瓶口，微火保持溶液微沸2分钟。
4、表面接种法：将培养基冷却至50℃时，立即倾注于无菌平皿中，使其完全凝固、干燥后，划线接种，
36℃培养18-22h。
贮存：
1、干粉需密闭保存于15-30℃干燥、避光环境中、
2、制备好的培养基在室温可保存一天，2-8℃冰箱中避光可贮存一星期。
染色结果：
初筛微生物菌落颜色及外观
阪崎肠杆菌（蓝）绿色菌落
大肠埃希氏菌无色菌落
金黄色葡萄球菌抑制
注意事项：
1、搅拌加热溶解时，避免溶液溢出灼伤人员。
2、表面接种法中制备的培养基因表面干燥，未见明显湿润。
3、最后的鉴定必须做补充实验。
4、使用过的培养基需要在121℃灭菌30分钟，才可按照有关规定弃去。
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显色培养基
4
显色培养基缺点
非目标菌的竞争作用，常会造成目标菌漏检和检测结果假阴 性 ——降低了显色培养基的灵敏性；
非目标菌也存在特异性酶反应造成检测结果的假阳性——降 低了显色培养基的特异性； 某种细菌不同血清型可能存在特异性酶反应的差异，结果在 显色培养基上出现不同颜色的菌落，还需要辅助观察或传统生 化试验才能对菌株作鉴定；
显色培养基是利用微生物具有种属特异性酶的特点，在培养基 中加入相应的显色酶底物，经微生物生长代谢产生酶水解底物 释放色原物质使培养物着色，从而进行目标微生物筛选鉴别。
2
显色酶底物的类型
荧光的显色底物(fluorogenic substrates)， 酶水解相应荧光底物后释放的荧光色原在一定波 长的紫外光照射下，使目标微生物的培养物呈现 荧光；
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CHROMagar Listeria
单增李斯特菌- 蓝色菌落周围 有白色环 其它菌- 被抑制，或蓝色菌落 周围无白色环，或无色菌落
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CHROMagar Vibrio
Vibrio parahaemolyticus – Mauve(- Turquoise-Blue （蓝绿色）
Vibrio alginolyticus - Colourless
Other bacterial colonies – inhibited or colourless
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CHROMagar E.coli
E.coli - blue
CHROMagar ECC
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Rambach Agar for the detection of Salmonella
用于大肠杆菌和大肠菌群的同 时快速鉴别和计数，18-24h可 初步判定结果
大肠杆菌 大肠菌群
7-阪崎肠杆菌检验
链中由于食品消费引起致病菌感染的可能性;确定
食物链环节中可以采取的能够降低疾病风险的各 种 管理措施,并对各种措施的效果进行评估
风险评估
联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO) 于2006 年 公布了婴儿配方粉( PIF) 阪崎肠杆菌定量风险评估 模型。
我国对阪崎肠杆菌的风险性评估滞后于国标的执行， 目前还没有相关的风险评估标准模型出台。
简 介
美国食品和药品管理局(FDA)的检测方法是国际检 测阪崎肠杆菌的标准生化方法。此外，还有依据 该菌生理生化特征的鉴定方法和PCR法检测及荧 光PCR等分子检测方法。
2008年11月国家标准出台前，我国只有行业标准。
简 介
2005-5-20中国检验检疫科学研究院和天津出入境 检验检疫局牵头完成《奶粉中阪崎肠杆菌检测方 法》行业标准。 该标准建立了阪崎肠杆菌改进的传统检测方法(经 典方法)、普通PCR方法和荧光PCR方法(快速筛选 方法)，其中改进的传统方法与FDA方法比较，检 测结果一致，但效率大大提高，时间缩短1/3～ 1/2。
无菌锥形瓶100ml\200ml\2000ml
90mm直径无菌培养皿 PH计或精密PH试纸 VITEK全自动微生物鉴定系统（可选用其 他等效设备代替)
培养基和试剂
缓冲蛋白胨水BPW（略）
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素 mLST-Vm
成分和配制方法见附录A.2，加入万古霉 素目的是抑制革兰阳性细菌等杂菌的生长 注意：新鲜配制的mLST-Vm应该24h内使用， 万古霉素溶液可在4 ℃保存15d
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阪崎肠杆菌显色培养基说明
2. 取样品333克按MPN三管法分别取100克、10克和1克分装在各三个2000ml、250ml和100ml的三角瓶中，在三角瓶中已装有经45℃预热的9/10(样品为1/10)的无菌蒸馏水或缓冲蛋白胨水，摇匀，在36℃培养18-22小时(SN和FDA方法)。
3. 各取10ml上述悬浮液加到装有90mlEE肉汤(022160)/mLST-Vm(022212)的150mL的三角瓶中，在36℃/44℃增菌培养18-22小时。
中文名称：阪崎肠杆菌显色培养基
英文名称：Chromogenic Enterbacter Sakazakii Agar
用 途：
供婴儿奶粉以及其它食品中阪崎肠杆菌的鉴定和计数。(GB4789.40-2010和SN/T 1632-2005，ISO标准)
图鉴：
原 理：
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;胆盐抑制革兰氏阳性菌，氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生;显色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-ɑ-D 葡萄糖苷与阪崎肠杆菌中的α-葡萄糖苷酶发生反应，水解底物，释放出5-溴-4-氯-3-吲哚基显色基团，在淡黄色平板上产生绿-蓝绿色的菌落。
4. 用划线或涂布法把混匀的肉汤接种到阪崎肠杆菌显色琼脂平板上，35-37℃培养18-24小时。
5. 可使用MicrogenTMGN-ID或API20E或生化管试验，对疑似阪崎肠杆菌菌落进行生化鉴定。
质ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ控制：
本品倾注平皿后呈淡黄色，下列菌株接种后36±1℃培养18-24小时生长情况如下表：
质量控制
配方(每升)：
胰蛋白胨 15g
大豆蛋白胨 5g
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阪崎肠杆菌显色培养基原理
阪崎肠杆菌显色培养基是一种针对阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）的检测工具，通过显色原理，可快速、准确地检测食品中的阪崎肠杆菌。
其原理主要包括以下几个方面：
1.选择性生长：阪崎肠杆菌显色培养基中的成分专门针对阪崎肠杆菌的生长需求，为其提供适宜的营养环境。
同时，培养基中还含有抑制其他微生物生长的成分，从而确保只有阪崎肠杆菌能够在培养基上生长。
2.酶反应显色：阪崎肠杆菌在生长过程中，能产生特定酶，这些酶与培养基中的显色底物发生反应，使菌落呈现出特定的颜色。
阪崎肠杆菌显色培养基中的显色底物是由产色因子和微生物部分可代谢物质组成，在特异性酶作用下，游离出产色因子使菌落显示一定颜色。
3.菌落显色区分：在适宜的培养条件下，阪崎肠杆菌生长出的菌落呈现蓝-绿色，而其他微生物生长的菌落则为无色或黄色。
通过观察菌落颜色，可以快速区分目标菌和非目标菌。
4.生化试验验证：对于显色培养基上呈现典型蓝-绿色菌落的样品，还需进行生化试验以进一步确认阪崎肠杆菌的identity。
常见的生化试验包括氧化酶试验、气泡产生试验等。
5.质量控制：为了确保阪崎肠杆菌显色培养基的可靠性和准确性，需进行质量控制。
主要包括观察培养基的外观、菌落颜色以及生长情况等，确保培养基符合相关标准和要求。
总之，阪崎肠杆菌显色培养基通过选择性生长、酶反应显色、菌落显色区分、生化试验验证和质量控制等原理，实现了对食品中阪崎肠杆菌的快速、准确检测。
在实际应用中，实验室人员可以根据需求选择合适的显色培养基，并按照操作步骤进行检测，以保障食品的安全性。