最新-第二学期基因工程原理课程考试试卷(A)参考答案

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2020-2021某大学《基因工程》期末课程考试试卷A(含答案)

2020-2021某大学《基因工程》期末课程考试试卷A(含答案)

2020-2021《基因工程》课程考试试卷A一、名词解释 (共5题,每题4分,共20分)1、克隆(clone)2、质粒3、基因工程4、基因(gene)5、回文结构二、简答题(共4题,每题10分,共40分)1、基因工程研究的基本步骤2、载体的功能3、重组DNA技术4、T4-DNA酶的基本特性三、论述题(每题20分,共40分)1、论述PCR原理及引物设计的基本原则2、大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化操作过程2020-2021《基因工程》课程考试试卷A答案一.名词解释(共5题,每题4分,共20分)1、克隆(clone): 作名词时指含有某目的DNA片段的重组DNA分子或含有该重组分子的无性繁殖系,作动词时是指基因的分离与重组过程。

2、质粒——质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。

现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。

在基因工程中质粒常被用做基因的载体。

3、基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用,包括上游技术和下游技术两大组成部分。

上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建(即重组DNA 技术);而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。

4.基因(gene)—产生一条多肽链或功能RNA所必须的全部核苷酸序列。

5、回文结构限制性内切酶识别双链DNA分子中4 - 8对碱基的特定序列大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧识别切割序列呈典型的旋转对称型二.简答题(共4题,每题10分,共40分)1、基因工程研究的基本步骤1、从生物体中分离得到目的基因(或DNA片段)2、在体外,将目的基因插入能自我复制的载体中得到重组DNA分子。

3、将重组DNA分子导入受体细胞中,并进行繁殖。

4、选择得到含有重组DNA分子的细胞克隆,并进行大量繁殖,从而使得目的基因得到扩增。

5、进一步对获得的目的基因进行研究和利用。

高二生物下学期第三章《基因工程》综合测试卷-人教版(含答案)

高二生物下学期第三章《基因工程》综合测试卷-人教版(含答案)

高二生物下学期第三章《基因工程》综合测试卷-人教版(含答案)一、选择题(本题共16小题,每小题3分,共48分。

每小题给出的四个选项中,只有一个选项是最符合题目要求的)1.下列有关基因工程的叙述,正确的是( )A.基因工程是细胞水平上的生物工程B.基因工程的产物对人类都是有益的C.基因工程育种的优点之一是目的性强D.基因工程产生的变异属于人工诱变2.下列有关E.coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶作用的叙述,正确的是( )A.T4 DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来B.E.coli DNA连接酶只能将双链DNA片段平末端之间进行连接C.T4 DNA连接酶既可以“缝合”黏性末端,又可以“缝合”平末端D.E.coli DNA连接酶连接平末端的效率比较低3.下列过程中没有涉及碱基互补配对原则的是( )A.提取目的基因B.目的基因与载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的表达和检测4.下列关于PCR扩增DNA片段和电泳检测扩增产物实验的叙述,错误的是( )A.PCR过程需要耐高温的DNA聚合酶B.PCR过程需要DNA连接酶C.PCR扩增区域由2个引物来决定D.不同大小的DNA在电场中迁移速率不同5.下列实例不涉及基因工程的是( )A.将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组中,以降低乳汁中乳糖的含量B.将正常的基因导入病人体内并使其表达,以达到治疗疾病的目的C.用航空飞船将种子载到太空中环游,以获得高产的植株D.将胰岛素基因导入动物的受精卵中,并在动物乳汁中获得胰岛素6.下列关于基因工程的成果及应用的说法,正确的是( )A.用基因工程方法培育的抗虫植物也能抗病毒B.利用基因工程菌只能生产药物C.基因工程使人们更容易培育出优良性状的动植物品种,获得很多过去难以得到的生物制品D.利用基因工程生产乙肝疫苗时,目的基因存在于人体B淋巴细胞的DNA中7.合成自然界中不存在的蛋白质应首先设计( )A.基因的结构B.蛋白质的结构C.氨基酸序列D.mRNA的结构8.下列有关蛋白质工程的说法,正确的是( )A.必须从预期蛋白质的功能出发B.在分子水平上直接改造蛋白质C.可以不涉及转录和翻译过程D.不需要借助基因工程的相关技术9.下列叙述符合基因工程概念的是( )A.在细胞内直接将目的基因与宿主细胞的遗传物质进行重组,赋予生物新的遗传特性B.将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌,获得能产生人干扰素的大肠杆菌菌株C.用紫外线照射青霉菌,使其DNA发生改变,通过筛选获得青霉素高产菌株D.自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上10.下列有关基因工程诞生的说法,不正确的是( )A.基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的B.工具酶和载体的发现使基因工程的实施成为可能C.遗传密码的破译为基因的分离和合成提供了理论依据D.基因工程必须在同物种间进行11.下列属于PCR技术的条件的是( )①单链的脱氧核苷酸序列引物②目的基因所在的DNA片段③脱氧核苷酸④核糖核苷酸⑤DNA连接酶⑥DNA聚合酶⑦限制性内切核酸酶A.①②③⑤B.①②③⑥C.①②③⑤⑦D.①②④⑤⑦12.下列选项中不是表达载体必要的组成成分的是( )A.目的基因B.启动子C.终止子D.抗青霉素基因13.下列关于基因工程在农牧业上的应用,说法正确的是( )A.用基因工程方法培育的抗虫植物也能抗病毒B.基因工程在畜牧业上应用的主要目的是培养体形巨大、品质优良的动物C.基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物D.噬菌体作为载体可以将重组 DNA 导入动物细胞获得转基因动物14.目前市场上最主要的胰岛素产品是第二代胰岛素,相比第一代的动物源胰岛素,第二代胰岛素采用基因工程技术生产,其结构与人体内自身的胰岛素结构一致,最为安全有效。

基因工程试题及答案

基因工程试题及答案

《基因工程》一、选择题(每小题1.5分,共15分)1.基因工程的创始人是( )。

A A. KornbergB W. GilbertC P. BergD S. Cohen2.关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有( )不太恰当。

A 由作用于同一DNA序列的两种酶构成B 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶C 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰D 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统3.在DNA的3’-5’链上,基因的起始密码子是( )A ATG(或GTG)B AGTC TAGD TGA4.II限制性内切核酸酶可以特异性地识别( )。

A 双链DNA的特定碱基对B 双链DNA的特定碱基序列C 特定的三联密码D 以上都正确5.末端转移酶是合成酶类,具有( )活性。

A 3’5’DNA聚合酶B 5’3’DNA聚合酶C 5’3’DNA内切酶D 5’3’DNA外切酶6.下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中,( )是不正确的。

A 质粒的复制只受本身的遗传结构的控制,因而有较多的拷贝数。

B 可以在氯霉素作用下进行扩增。

C 通常带有抗药性标记。

D 同严紧型质粒融合后,杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子。

7.关于cDNA的最正确的说法是( )。

A 同mRNA互补的单链DNAB 同mRNA互补的双链DNAC 以mRNA为模板合成的双链DNAD 以上都正确8.关于T4 DNA Ligase,下列说法中哪一项不正确? ( )A 是最常用的DNA连接酶。

B 不但能连接粘性末端,还能连接齐平末端。

C 不但能连接粘性末端。

D 最适温度37 ℃。

9.下列关于建立cDNA文库的叙述中,( )是错误的?A 从特定组织或细胞中提取DNA或RNAB 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNAC 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNAD 新合成的双链DNA克隆到载体上,并导入受体细胞10.用下列方法进行重组体的筛选,只有( )说明外源基因进行了表达。

基因工程复习题答案版

基因工程复习题答案版

基因工程复习题答案版一、选择题1、以下哪个选项不是基因工程的优点?A.提高作物的产量B.改进作物的品质C.缩短育种周期D.提高作物的抗病虫害能力正确答案:C.缩短育种周期。

基因工程虽然能够加速作物育种进程,但并不是缩短育种周期。

2、下列哪种技术不属于基因工程技术?A.重组DNA技术B.基因枪法C.细胞融合技术D.基因定点诱变技术正确答案:C.细胞融合技术。

细胞融合技术是一种细胞工程技术,不属于基因工程技术。

3、下列哪个基因不属于基因工程中的常用标记基因?A. lacZ基因B. gus基因C. gfp基因D. ery基因正确答案:D. ery基因。

ery基因不属于基因工程中的常用标记基因。

4、下列哪个选项不是转基因作物的优点?A.提高作物抗病虫害的能力B.提高作物的产量和品质C.缩短作物育种周期D.提高作物的营养价值正确答案:C.缩短作物育种周期。

虽然基因工程可以加速作物育种进程,但并不能缩短作物育种周期。

5、下列哪个选项不是基因工程的安全性问题?A.产生抗生素抵抗性细菌B.产生新的病毒或病原体C.产生致癌的基因突变D.对非目标生物产生负面影响正确答案:C.产生致癌的基因突变。

目前没有证据表明基因工程会产生致癌的基因突变。

软件工程复习题及答案一、选择题1、在软件工程中,以下哪个选项最接近于“用户故事”的定义?A.一种用于描述用户需求的文档B.一种用于描述软件功能的文档C.一种用于描述软件架构的文档D.一种用于描述软件测试的文档答案:A.一种用于描述用户需求的文档。

用户故事是软件开发中的一种重要工具,它用于收集、整理和描述用户需求,以便更好地理解和满足用户的需求。

2、以下哪个选项是面向对象编程(OOP)中的基本概念?A.函数B.类C.变量D.控制流答案:B.类。

在面向对象编程中,类是一种抽象数据类型,它定义了一个对象的结构,包括属性(状态)和方法(行为)。

3、在软件开发中,以下哪个阶段最可能涉及到代码重构?A.需求分析阶段B.设计阶段C.编码阶段答案:C.编码阶段。

基因工程试题及答案解析

基因工程试题及答案解析

基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是:A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案:D2. 基因工程中,用于将目的基因导入植物细胞的方法是:A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案:C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案:C二、填空题1. 基因工程中,常用的运载体有____、____和____。

答案:质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中,常用的筛选标记基因有____、____和____。

答案:抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。

答案:基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。

在农业中,基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物;在医学领域,基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等;在工业上,基因工程可以用于生产酶、疫苗等;在环境保护方面,基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。

2. 基因工程中,如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达?答案:确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面:首先,目的基因需要有合适的启动子和终止子,以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止;其次,需要考虑目的基因的密码子偏好性,以确保其在宿主细胞中能被高效翻译;再次,需要考虑目的基因的稳定性,避免其在宿主细胞中被降解;最后,还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。

四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。

答案:基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。

重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病;基因治疗可以用于治疗遗传性疾病;疾病诊断可以通过基因检测来实现;基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。

然而,基因工程的应用也带来了伦理问题,如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。

基因工程原理练习测试题及其参考答案

基因工程原理练习测试题及其参考答案

精心整理基因工程原理练习题及其答案一、填空题1.基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。

*2.基因工程的两个基本特点是:(1)____________,(2)___________。

3.基因克隆中三个基本要点是:___________;_________和__________。

*4.通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段,可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。

*5.限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自_______,第二、三两个字母取自_________,第四个字母则用___________表示。

*67.是8*9.76kDa *10*11.12 *13的作用。

14.或*15RNA *16。

*17.、1819.20.YAC *21.pSCl01是一种复制的质粒。

*22.pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。

pUC 系列的载体是通过和两种质粒改造而来。

它的复制子来自,Amp抗性基因则是来自。

23.噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因:一是;二是。

24.野生型的M13不适合用作基因工程载体,主要原因是和。

*25.黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自、COS 位点序列来自,最大的克隆片段达到kb 。

26.野生型的 噬菌体DNA 不宜作为基因工程载体,原因是:(1)(2)(3)。

27.噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的,其中来自质粒的主要结构是,而来自噬菌体的主要结构是。

*28. 噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外源DNA片段后,总的长度应在噬菌体基因组的的范围内。

29.在分离DNA时要使用金属离子螯合剂,如EDTA和柠檬酸钠等,其目的是。

30.用乙醇沉淀DNA时,通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子,如NaCl和NaAc,其目的是。

高中基因工程试题及答案

高中基因工程试题及答案

高中基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然选择B. 基因的人工选择C. 基因的人工重组D. 基因的自然重组答案:C2. 基因工程中常用的载体是:A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体答案:A3. 基因枪法属于哪种基因转移技术?A. 化学法B. 物理法C. 生物法D. 机械法答案:B4. 以下哪个不是基因工程的步骤?A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的自然选择答案:D5. 基因工程在医学领域的应用不包括:A. 基因治疗B. 基因检测C. 基因编辑D. 基因克隆答案:D二、填空题6. 基因工程的核心技术是________。

答案:重组DNA技术7. 基因工程中常用的受体细胞有________和________。

答案:大肠杆菌、酵母菌8. 基因工程在农业上的应用包括________和________。

答案:转基因作物、基因改良9. 基因工程在环境保护中的应用包括________和________。

答案:生物修复、污染物降解10. 基因工程在工业生产中的应用包括________和________。

答案:生物催化剂、生物制药三、简答题11. 简述基因工程的基本原理。

答案:基因工程的基本原理是利用分子生物学技术,将目的基因从一种生物体中提取出来,然后通过重组DNA技术将其插入到另一种生物体的基因组中,使其在新的宿主细胞中表达,从而获得具有特定性状的生物体或生产特定的生物产品。

12. 基因工程在医学领域有哪些应用?答案:基因工程在医学领域的应用包括基因治疗,通过将正常基因导入患者体内以治疗遗传性疾病;基因检测,用于疾病诊断和风险评估;基因编辑,通过修改基因序列来治疗疾病;以及生产生物药物,如胰岛素、干扰素等。

四、论述题13. 论述基因工程的伦理问题及其解决途径。

答案:基因工程的伦理问题主要包括对人类基因组的修改可能带来的未知风险、基因歧视、生物多样性的减少等。

基因工程原理习题参考答案资料

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基因工程原理习题参考答案资料基因工程原理习题集参考答案一、名词解释 1 、 DNA 分子克隆技术:克隆,指含有单一的组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程。

外将DNA 分子片段与载体DNA 片段连接,括:制备目的基因7将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接,制成 DNA 重组7导入宿主细胞7筛选、鉴定7扩增和表达。

载体在细胞内自我复制,并带动重组的分子片段共同增殖,从而产生大量的 DNA 分子片段。

主要目的是获得某一基因或 DNA 片段的大量拷贝,有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆,就可以深入分析基因的结构与功能,随着引入的 DNA 片段不同,有两种 DNA 库,一种是基因组文库,另一种是 DNA 重组体的无性繁殖系,或指将DNA 重 DNA 分子克隆技术也称基因克隆技术,是在体转入细胞获得大量拷贝的过程。

其基本步骤包cDNA 库。

2、分子杂交:两条不同来源的 DNA (或RNA )链或DNA 与RNA 之间存在互补顺序时, 在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子,过程称为分子杂交。

这种分子称为杂交分子。

形成杂交分子的DNA ,使用同一种限制性内切酶酶切,切得通常是3、限制性片段长度多态性:从不同个体制备的的片段长度各不相同。

酶切片段的长度可以作为物理图谱或者连接图谱中的标记子。

在酶切位点处发生突变而引发的。

4、报告基因:一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个表达产物非常容易被鉴定的基因、5、多聚酶链式反应(PCR ): 一种体外扩增DNA 的方法。

PCR 使用一种耐热的多聚酶,以及两个单链引物。

以过高温变性将模板 DNA 分离成两条链。

低温退火使得引物和一条模板单链结合,然后是中温延伸,反应液的游离核苷酸紧接着引物从 5/端到 3/端合成一条互补的新链。

而新合成的DNA 又可以继续进行上述循环,因此 DNA 的数目不断倍增。

6、核酸的凝胶电泳:将某种分子放到特定的电场中,它就会以一定的速度向适当的电极移动。

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2008─2009学年 第 2学期
《基因工程原理》课程考试试卷(A 卷)参考答案
专业: 生物技术
年级:2006 考试方式:闭卷 学分:4 考试时间:120分钟
一、名词解释(每小题2.5分,共15分)
1、 基因工程:是指在分子水平上进行的遗传操作,指将一种或多种生物提(供体)的基因
或基因组提取出来,或者人工合成基因,按照人们的愿望,进行严密的设计,经过体外加工重组,转移到另一种生物体(受体)的细胞内,使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。

2、 星活性:高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH 值等,会使一些核酸内切酶
的识别和切割序列发生低特异性,即Star activity 现象。

3、 插入型载体:只具有一个可供外源DNA 插入的克隆位点。

4、 反转录PCR :在逆转录酶的作用下、以mRNA 为模板合成互补的cDNA ,再以cDNA 为
模板进行PCR 反应。

5、 感受态:受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,RuCl 等化学试剂法)的处理后,细
胞膜的通透性发生变化,成为能容许多有外源DNA 的载体分子通过的感受态细胞。

6、 考斯质粒:考斯质粒是一类人工构建的含有l-DNA cos 序列和质粒复制子的特殊类型的载
体 二、填空题(每小题1分,共10分)
1、用酚—氯仿抽提DNA 时,通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇,这是因为异戊醇可以 防止气泡 ;分离DNA 时要使用金属离子螯合剂,如EDTA 和柠檬酸钠等,其目的是 抑制了DNase 。

2、按照质粒拷贝数的多少,质粒可以分为 严谨型质粒 。

和 松弛型质粒 。

3、λ 噬菌体在感染大肠杆菌以后,可以进入 Lytic growth 也可以进入 Lysogenic state 。

如果其基因组 DNA 通过专一性重组整合到宿主染色体中,则其进入 融源状态。

;它也可以选择进入 融菌状态 ,大量复制并组装子代噬菌体颗粒。

4、ddNTP 与普通的 dNTP 的不同之处在于 ddNTP 2’和3’双脱氧 ,它们可以在 DNA 聚合酶的作用下,通过其 5’ 掺入到正在增长的 DNA 链中,导致链延伸反应终止。

5、Klenow DNA 聚合酶是 DNA 聚合酶Ⅰ 经蛋白酶裂解而从全酶中除去 5’—3’外切酶 活性的多肽大片断,而其他活性保持不变。

三、选择题(每小题1.5分,共15分)
1、限制性内切核酸酶可以特异性地识别( C )。

A 、特定的三联密码;
B 、双链 DNA 的特定碱基对;
C 、双链 DNA 的特定碱基序列;
D 、单链 DNA 的特定碱基序列。

2、在切口平移方法标记 DNA 探针时只能使用( B )。

A 、Klenow 酶;
B 、DNA 聚合酶 Ⅰ;
C 、DNA 聚合酶 Ⅱ;
D 、DNA 聚合酶 Ⅲ。

3、在下列进行 DNA 部分酶切的条件中,控制哪一项最好( C )。

A 、反应体积;
B 、酶反应温度;
C 、反应时间;
D 、酶量。

4、PCR 扩增有时会出现弥散的条带,以下原因阐述不正确的是( B )。

A 、退火温度过低;
B 、退火温度过高;
C 、dNTP 浓度过高;
D 、循环次数过多。

5、以下不属于 PCR 的应用的为( D )。

A 、随机扩增多态性 DNA (RAPD );
B 、扩增片段长度多态性(AFLP );
C 、RACE ;
D 、S1 酶作图。

6、pUC18 与 pUC19 的区别在于( B )。

A 、二者的选择标记不同;
B 、二者的多克隆位点方向相反;
C 、pUC18 无 lacZ 基因;
D 、pUC19 无 lacZ 基因。

7、有关 DNA 序列自动化测定的不正确叙述是( D )。

A 、用荧光代替了同位素标记;
B 、激光扫描分析代替人工读序 基;
C 、本原理与手工测序相同;
D 、不再需要引物。

8、下列哪一项不是质粒载体必备的基本特征( D )。

A、可以独立复制;
B、有选择标记;
C、有多克隆位点;
D、含lacZ。

9、在分离DNA 过程造成DNA 分子断裂的因素很多,下列说法中哪一项是不正确的(C )。

A、核酸酶的降解;
B、化学降解;
C、保存液中未加一滴氯仿;
D、物理剪切。

10、氨苄青霉素的工作原理为(A )。

A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成;
B、可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成;
C、可以抑制核糖体的转位;
D、可以与核糖50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。

四、简答题(每小题5分,共25分)
标记的原理及基本步骤。

答:RAPD应用了PCR反应的原理,以不同的基因组DNA为模板,以单一的随机寡聚核苷酸(长度多为10个核苷酸)为引物而获得的一定扩增产物。

由于不同基因组DNA序列存在着差异,其不同区段上可与引物同源互补的位点不同,扩增产物的数量、大小也不同,因而表现出多态性。

1)基本步骤:
2)DNA的提取
3)模板DNA浓度和质量的检测
4)PCR扩增
5)电泳检测:PCR结束后每个样品加4ul凝胶上样缓冲液,每个泳道点样20ul。

6)将凝胶浸于1ug/ml的EB中30min~60min,用水清洗约10min,观察、拍照。

7)统计分析:记录条带清晰的RAPD条带,计算带纹相似率;计算带频率、群内遗传纯度;
计算DNA片段大小。

2、一个理想的载体应具备那些特点?
答:
a)较小的分子和较高的拷贝数;
b)多个单一的限制性内切酶位点;
c)两种以上的选择标记;
d)易导入宿主细胞并复制和表达。

3、试回答影响限制性内切核酸酶(Restriction endonuclease)切割效率的因素?
答:
1)DNA样品的纯度;
2)DNA甲基化程度;
3)反应条件;
4)酶的纯度;
5)酶切反应的温度和时间。

4、经典RACE 克隆的原理是什么?
答:
反向PCR;
瞄定PCR;
末端转移酶法。

5、采用同聚物加尾的方法进行dscDNA 克隆,一般采用dC/dG 而不采用dA/dT ,简述其
原因?
答:
(1)dA/dT退火温度低;
(2)
(3)反转录用的dT引物。

五、问答题(每小题10分,共20分)
1、一个携带有氨苄青霉素和卡那霉素抗性基因的质粒仅在卡那霉素基因中有EcoRⅠ识别位点。

消化后与目的DNA连接后转化对两种抗生素都敏感的E. coli菌株,试问:
(1)利用什么方法筛选接受了质粒的宿主细胞和没有接受质粒的宿主细胞?
(2)如何区分接受了含有目的DNA的重组质粒和空质粒的克隆?
答:
(1):用氨苄青霉素筛选,抗氨苄青霉素的为带有质粒的宿主细胞。

(2):用卡那霉素筛选,不抗卡那霉素但抗苄青霉素的为含有目的DNA的重组质粒的宿主细胞。

2、已知拟南芥、水稻ADH、甘蓝型油菜、矮牵牛等物种的ADH基因序列,如何得到棉花的ADH基因(利用高保真酶),请谈谈它的基本步骤?

1)从Genbangk下载拟南芥、水稻ADH、甘蓝型油菜、矮牵牛等物种的ADH基因序列;
2)将各序列多重比对,设计保守区引物;
3)提取棉花RNA;
4)将RNA逆转录为cDNA;
5)PCR扩增;
6)胶回收、连接、转化、检测;
7)测序,得到保守区序列;
8)根据保守区序列设计RACE引物;9)RACE扩增,并测序;
10)得到全长基因序列。

六、综合题(15分)
当前,甲型H1N1流感疫情迅速从墨西哥和美国蔓延至包括中国在内的几十个国家,全球已报道病例达到44287人。

快速有效的诊断是有效的防治该疾病的重要措施之一,请根据基因工程的相关知识,设计一种高效、快速的检测H1N1的方法?
答:
1)从病人体内分离H1N1病毒;
2)测序;
3)设计特异引物;
4)在群体中鉴定引物特异型;
5)取疑似样本;
6)PCR扩增。

7)电泳。

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