神经生物学实验课细胞培养
神经信号传递实验报告(3篇)
第1篇实验目的：本研究旨在通过实验手段，观察和分析神经信号在神经元间的传递过程，探究神经递质的作用以及突触传递的机制。
实验材料：1. 神经元培养皿2. 生理盐水3. 神经递质（如乙酰胆碱）4. 电生理记录系统5. 显微镜6. 相关试剂和耗材实验方法：1. 神经元培养：将神经元在培养皿中培养至成熟，确保神经元之间的连接充分建立。
2. 神经递质处理：向培养皿中加入一定浓度的神经递质，观察神经元反应。
3. 电生理记录：利用电生理记录系统，记录神经元在神经递质作用下的电生理变化。
4. 显微镜观察：利用显微镜观察神经元形态和突触结构的变化。
实验步骤：1. 神经元培养：- 将神经元在含有适宜培养基的培养皿中培养，维持适宜的温度、pH和氧气浓度。
- 定期更换培养基，确保神经元生长良好。
2. 神经递质处理：- 向培养皿中加入一定浓度的神经递质（如乙酰胆碱），确保神经递质均匀分布在培养基中。
- 观察神经元在神经递质作用下的反应，如神经元兴奋、突触释放等。
3. 电生理记录：- 将电极插入神经元细胞内，记录神经元在神经递质作用下的电生理变化。
- 分析神经元在神经递质作用下的兴奋性、突触传递速度等参数。
4. 显微镜观察：- 利用显微镜观察神经元形态和突触结构的变化。
- 分析神经递质对神经元形态和突触结构的影响。
实验结果：1. 神经元兴奋性：- 在神经递质作用下，神经元兴奋性显著提高，表现为动作电位发放频率增加。
2. 突触传递速度：- 神经递质处理后，突触传递速度明显加快，说明神经递质在突触传递中起重要作用。
3. 神经元形态和突触结构：- 神经递质处理后，神经元形态和突触结构发生一定程度的改变，如突触间隙缩小、突触后膜皱褶增多等。
实验结论：1. 神经递质在神经元间的传递过程中起重要作用，能够提高神经元兴奋性和突触传递速度。
2. 神经递质对神经元形态和突触结构有一定影响，可能参与神经调节和神经元生长。
讨论：1. 本实验结果表明，神经递质在神经元间的传递过程中具有重要作用，为神经信号传递的研究提供了实验依据。
细胞培养方法
细胞培养方法
细胞培养是生物学实验中常用的一种技术手段，它可以提供大量的细胞用于实验研究。
正确的细胞培养方法对于细胞的生长、增殖和实验结果的准确性都至关重要。
下面将介绍一些常用的细胞培养方法及注意事项。
首先，准备培养基。
培养基是细胞生长所必需的营养物质和生长因子的混合物。
常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等，根据不同细胞类型的要求选择适当的培养基。
在制备培养基时，需要注意无菌操作，避免细菌和真菌的污染。
其次，处理细胞。
从细胞库中取出细胞后，需要进行细胞的处理和传代。
处理细胞时，要注意细胞的密度和活性，避免细胞凝集和死亡。
传代时，要根据细胞的生长状态和密度进行适当的稀释，以保证细胞的健康生长。
接着，进行细胞的接种和培养。
将处理好的细胞按照一定的比例接种到预先涂有培养基的培养皿中，然后将培养皿放入培养箱中进行培养。
在培养过程中，需要定期观察细胞的生长状态，及时更换培养基，避免细胞过度生长或死亡。
最后，进行实验。
当细胞达到所需的数量和状态后，就可以进行相关的实验。
在实验过程中，需要注意培养皿的无菌操作，避免细菌和真菌的污染。
同时，要注意细胞的处理和操作方法，避免对细胞造成损伤。
总之，正确的细胞培养方法对于细胞的生长和实验结果至关重要。
只有严格遵守操作规程，做好无菌操作，才能得到可靠的实验结果。
希望本文介绍的细胞培养方法能够对大家有所帮助。
神经生物学实验原理与技术
神经生物学实验原理与技术神经生物学实验是研究神经系统结构和功能的重要手段，通过实验原理与技术的应用，可以深入探索神经生物学的奥秘。
本文将从神经生物学实验的原理、常用技术和实验设计等方面进行介绍。
一、实验原理神经生物学实验的原理是基于神经系统的生理学和生物化学特性，通过对神经元的功能和相互作用进行观察和测量，揭示神经系统的工作原理。
实验原理包括以下几个方面：1.1 神经元电活动的记录与分析神经元产生的电活动是神经信号传递的基础，通过记录和分析神经元的电活动，可以研究神经元的兴奋性、抑制性和调控机制。
常用的技术包括细胞外多通道记录、膜片钳技术和全细胞钳技术等。
1.2 突触传递的观察与研究突触是神经元之间信息传递的关键结构，通过观察和研究突触的功能和调节机制，可以揭示神经元之间的相互作用和神经网络的形成与发展。
常用的实验技术包括双电极记录、电压脉冲刺激和光遗传学等。
1.3 神经递质的测定与分析神经递质是神经元之间信息传递的化学信号，通过测定和分析神经递质的含量和释放机制，可以揭示神经递质在神经系统中的作用和调控。
常用的技术包括高效液相色谱法、电化学检测和光学显微技术等。
二、常用技术神经生物学实验中常用的技术包括以下几个方面：2.1 细胞培养与维持细胞培养是神经生物学实验的基础，通过培养神经元和神经细胞系，可以进行细胞生物学和分子生物学研究。
常用的细胞培养技术包括原代细胞培养、细胞系培养和共培养等。
2.2 光遗传学技术光遗传学技术是近年来发展起来的一种新型实验技术，通过利用光敏蛋白质和光源的激发，可以实现对神经元的精确激活或抑制，从而研究神经回路和行为功能。
常用的光遗传学技术包括光遗传调控和光遗传成像等。
2.3 脑电图和脑成像技术脑电图和脑成像技术可以非侵入性地观察和记录大脑的电活动和代谢活动，通过研究脑电波形和脑区的活动模式，可以了解大脑的功能状态和神经网络的连接方式。
常用的脑电图和脑成像技术包括脑电图记录、功能磁共振成像和磁脑电图技术等。
神经胶质细胞培养步骤
神经胶质细胞培养步骤神经胶质细胞（neuroglial cells）是存在于中枢神经系统（中枢神经系统包括大脑和脊髓）的细胞类型之一、它们的主要功能是支持和维持神经元的正常功能，同时还参与神经元之间的相互作用。
在研究神经学和神经生物学领域，神经胶质细胞的培养是非常重要的工具和实验方法之一、下面将详细介绍神经胶质细胞的培养步骤。
材料和仪器准备：1.细胞培养培养器皿（如培养瓶、培养皿、多孔板等）2.神经胶质细胞培养基（含有适当的营养物质和生长因子）3.显微镜4.无菌操作台和器具（如无菌架、无菌套、培养器具等）5.离心机6.细胞计数器步骤：1.无菌操作准备：首先，在无菌操作室准备好所有的材料和仪器，并确保它们是无菌的。
洗手，戴好手套和口罩，使用紫外灯照射操作台和仪器，以确保无菌条件。
2.器皿涂层：在培养瓶、培养皿或多孔板中涂覆组织胶质或其他与神经胶质细胞黏附相容的涂层物质（如聚-L-赖氨酸或明胶涂层）。
涂层后，将器皿在37℃的培养箱中孵育至少2小时以促进涂层物质的固化。
3.细胞分离：将小鼠或大鼠的中枢神经系统取出，通常是大脑和脊髓。
将组织放入无菌PBS（磷酸缓冲盐溶液）中，用剪刀剪碎组织，然后离心收集组织碎片。
将组织碎片转移到含有消化酶（如胰酶）的消化液中，并在37℃下消化一段时间，以分离细胞。
4.筛选和培养胶质细胞：经过消化的组织混悬液通过筛网或过滤膜进行过滤，以去除大块组织碎片。
收集过滤液，将其离心以沉淀细胞。
将沉淀的细胞重悬于神经胶质细胞培养基中，并将其转移到事先涂层的器皿中。
将培养皿放入37℃的细胞培养箱中培养。
5.细胞培养：在细胞培养箱中维持恒温和湿度，并使用细胞培养基按照指定的时间间隔更换培养基，通常为2-3天一次。
根据实验要求和研究目的，可以添加适当的生长因子和抗生素到细胞培养基中。
6.细胞观察：使用倒置显微镜观察培养的细胞，注意观察细胞的形态、增殖情况和细胞表型。
同样，能够观察到细胞的汇集和神经胶质细胞的突触形成。
脑脊液培养细胞方法
脑脊液培养细胞方法摘要：一、脑脊液培养细胞的原理二、脑脊液培养细胞的操作步骤1.收集脑脊液2.分离细胞3.细胞培养4.观察与检测三、脑脊液培养细胞的注意事项四、应用与展望正文：脑脊液培养细胞是一种常见的生物学实验方法，主要用于研究神经系统疾病、神经生物学机制以及药物筛选等。
本文将介绍脑脊液培养细胞的原理、操作步骤及注意事项，以期为相关领域的研究者提供参考。
一、脑脊液培养细胞的原理脑脊液（CSF）是存在于脑和脊髓周围的液体，其中含有多种细胞因子、生长因子和营养物质，为神经系统细胞的生长和分化提供了良好的环境。
脑脊液培养细胞就是利用这种液体中的细胞因子和生长因子，在体外培养神经细胞，从而研究神经系统相关疾病的发生发展机制。
二、脑脊液培养细胞的操作步骤1.收集脑脊液：首先从患者或实验动物的脑脊液中收集一定量的样本。
脑脊液收集方法有多种，如腰椎穿刺、脊椎穿刺等。
2.分离细胞：将收集的脑脊液进行离心，将细胞沉淀下来。
通常采用离心速度为2000-3000转/分钟，离心时间为10-20分钟。
3.细胞培养：将分离出的细胞悬液进行细胞计数，然后接种到培养皿或培养板上。
培养条件通常为37℃、5% CO的恒温培养箱中。
4.观察与检测：在培养过程中，定期观察细胞的生长状态，并采用相关方法（如显微镜观察、细胞计数、细胞活力检测等）对细胞进行检测。
三、脑脊液培养细胞的注意事项1.脑脊液收集过程中要注意无菌操作，避免细胞污染。
2.细胞分离和培养过程中要充分注意细胞的活力和密度，以保证实验结果的准确性。
3.培养过程中要定期更换培养液，以提供细胞所需的营养物质和生长因子。
4.细胞检测时要注意观察细胞形态的变化，及时发现并处理可能存在的问题。
四、应用与展望脑脊液培养细胞技术在神经系统疾病研究、药物筛选和新药研发等方面具有广泛的应用前景。
随着神经生物学研究的不断发展，脑脊液培养细胞技术将不断完善，为我国神经系统疾病治疗和研究提供更多突破。
《神经生物学基础技术》实验教学大纲
《神经生物学基础技术》实验教学大纲课程代码：（暂空、不填）课程名称：神经生物学基础技术课程性质：必修课程类别：专业基础实验项目个数：15 面向专业：神经生物学研究生实验教材：《细胞培养》《分子生物学理论与技术》《神经生物学》一、课程学时学分课程学时：54 学分：（按教学计划的规定填写）2 实验学时：48二、实验目的、任务、教学基本要求及考核方式1、目的和任务：神经生物学基础技术是为了配合基础研究中需要操作细胞实验、分子生物学实验和形态学实验的研究生开设的一门实验基础课程。
本课程目的旨在培养学生初步掌握细胞学、分子生物学、形态学研究中所必需的基本实验操作技术。
本课程的任务是让学生牢固掌握神经生物学研究方法的基础技术，具备在细胞培养、分子生物学和形态学平台独立观察和操作的能力，学会发现问题和解决问题的基本技能，通过实验操作，培养学生观察、比较、分析、综合等科学思维能力，以及独立工作的能力和实事求是的科学作风，为从事与本专业有关的生物技术工作打下基础。
2、教学基本要求：1）学生在实验前对实验做好预习工作，了解实验目的。
2）在学生实验前指导教师集中学生进行演示与讲授，介绍实验目的、原理、步骤、操作要领及注意事项。
3）根据实验的内容进行实验分组，要求各实验小组在规定时间独立完成实验操作并考核。
4）实验中指导教师要随时检查学生实验情况，解答学生实验中的疑问，帮助学生分析问题，解决问题。
5）实验结束后，指导教师根据学生每次实验的操作情况及操作水平考核，评定学生的实验操作成绩。
3、考核方式：通过实验操作考核评定学生的实验成绩。
成绩构成为：实验操作（100％）三、实验项目一览表说明：在“实验要求”栏标明该实验项目是“必修”还是“选修”；在“实验类型”栏标明该实验项目是“演示性”、“验证性”、“设计性”还是“综合性”实验；在“备注”栏标明完成该实验项目所需的主要仪器设备名称。
本大纲主笔人：吴红审核人：神经科学系。
胎鼠DRG神经元细胞培养方法的建立
收稿日期262基金项目国家自然科学基金资助项目(366)作者简介杨瑞瑞(82),女,硕士生,专业方向神经及血管电生理。
通讯作者司军强(652),男,教授,从事神经及血管电生理研究。
第25卷 第5期2007年10月石河子大学学报(自然科学版)Journal of Shihezi University (Natural S cience )V ol.25 N o.5Oct.2007文章编号:100727383(2007)0520596203胎鼠DR G 神经元细胞培养方法的建立杨瑞瑞1,石文艳1,骆海舰1,赵 磊1,成洪聚1,司军强1,2(1新疆地方与民族高发病教育部重点实验室,新疆石河子832002;2武汉大学基础医学院生理学系,湖北武汉430071)摘要:目的建立胎鼠背根神经节(dorsal root g anglion ,DRG)神经元原代培养的方法。
方法无菌条件下取E 16天的胎鼠DRG 进行原代培养,观察神经元生长状态并用神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase ,NSE )免疫细胞化学染色鉴定细胞。
结果培养的DRG 神经元可存活1个月左右,并长出突起,形成密集的网络。
NSE 鉴定细胞阳性表达率高,神经元达到90%左右纯度。
结论本文建立了DRG 神经元细胞简洁、经济、高效的培养方法并成功鉴定了神经元。
为对神经元的深入研究提供了实验模型。
关键词:神经元;细胞培养;背根神经节;特异性烯醇化酶;免疫细胞化学中图分类号:R338.1 文献标识码:A 细胞培养是从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下,使其生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术。
该技术已经成为当今生物医学研究的主要方法之一。
其主要优点在于,体外细胞培养的条件减少了在体神经组织的复杂性以及对细胞环境的操纵性,有利于预测和研究单个细胞在在体的功能[1]。
此外,有大量证据表明,体外培养的神经细胞也能表达许多在体细胞的同样特征,更重要的是培养的细胞的膜特性不变,受体的所有组成成分不变[2]。
神经生物学实验原理与技术
神经生物学实验原理与技术引言：神经生物学是研究神经系统结构和功能的学科，而神经生物学实验是研究神经生物学的重要手段之一。
本文将介绍神经生物学实验的原理与技术，包括细胞培养、电生理记录、免疫组织化学染色、光遗传学等。
一、细胞培养细胞培养是神经生物学实验中常用的技术之一，通过体外培养的方式可以研究神经元的结构和功能。
细胞培养的步骤包括细胞分离、培养基准备、细胞培养条件的控制等。
细胞分离可以通过酶消化、机械分离等方法进行，然后将分离得到的细胞放入培养基中进行培养。
培养基是模拟体内环境的液体，其中包含细胞生长所需的营养物质、生长因子和抗生素等。
细胞培养条件的控制包括温度、湿度、CO2浓度和培养时间等，这些条件可以影响细胞的生长和分化。
二、电生理记录电生理记录是研究神经元电活动的重要手段，通过记录神经元产生的电信号可以了解其功能和特性。
主要包括膜电位记录和膜电流记录。
膜电位记录可以通过玻璃微电极插入神经元测量细胞膜内外的电位差，从而了解神经元的兴奋性和抑制性。
膜电流记录是通过电压钳技术记录神经元通道的离子电流，从而了解离子通道的特性和功能。
电生理记录可以帮助研究者研究神经元的电信号传导机制、突触传递等重要生理过程。
三、免疫组织化学染色免疫组织化学染色是研究神经元分子表达的重要方法，通过标记特定抗原的抗体，可以在组织切片中检测特定的蛋白质或其他分子的分布和表达水平。
免疫组织化学染色的步骤包括组织固定、抗体孵育、显色反应等。
组织固定可以使用乙酸洗涤、甲醛固定等方法，将组织切片固定在载片上，以保持其形态和分子结构。
抗体孵育是将特异性抗体与组织切片进行结合，通过特定的抗原-抗体反应来检测目标分子的存在。
显色反应是将染色剂与抗体结合的部位产生颜色反应，从而可视化目标分子的分布和表达水平。
四、光遗传学光遗传学是近年来发展起来的一种研究神经元功能的新技术，通过利用光敏蛋白质的特性来控制神经元的活动。
光遗传学的主要方法包括光遗传感受器的表达和光刺激。
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7. 加含10%FBS的DMEM10ml，吸管轻匀吹打， 尽量使组织分散。
8. 离心1500rpn，5分钟。 9. 弃上清，加10mlDMEM10%FBS，吸管轻匀吹
打，200目滤网过滤，取少量滤液镜下细胞计数。 10. 以105的接种于培养瓶中，标记后置37℃，含
5%CO2培养箱培养。 11. 12-24小时后，换液观察。
血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶 原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白 先吸附于底物上，悬浮细胞再与底物附着。
进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基 团）
潜伏期
此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细 胞株潜伏期一般为6～24小时。
对数生长期：
细胞数随时间变化成倍增长，活 力最佳，最适合进行实验研生长细胞传代
离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液
后再混匀传代。 直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／2
一2／3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。 2 半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接 吹打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。 3 贴壁生长细胞传代
采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。
贴壁生长细胞传代方法
1. 吸光培养瓶中的培养液。 2. 用无钙镁离子的PBS清洗细胞3遍. 3 . 加入1-2 ml 0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个
瓶底为准），静置1-2 min（显微镜下动态监测）。 4. 吸去胰蛋白酶液，加入培养液。 5. 用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细
胞悬液。 6. 吸取1/10—1/40细胞悬液，接种于新的培养瓶内。 7. 加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。 8. 将后者放入培养箱中培养。
细胞冻存与复苏
细胞冻存和复苏
细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。 细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少入力、
经费，减少污染，减少细胞生物学特性变化。
停止期（平台期）：
细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再 分裂
机制：接触抑制、密度依赖性
原代神经细胞培养操作步骤
1. 超净台紫外灯照射消毒，至少30分钟，开恒温水浴箱至 37℃
2. 取出高糖DMEM、FBS、胰蛋白酶复温。 3. 取新生鼠1只，0.5%的碘伏消毒，断头，取整脑于含5ml
的DMEM液培养皿中，分离大脑皮质于含1ml DMEM液 的另一培养皿（培养皿均置于冰盒上)。 4. 弯头剪刀尽可能剪碎组织。 5. 向剪碎的组织中另加DMEM4ml，全部吸入离心管，加 5ml胰蛋白酶。 6. 置37℃水浴中15分钟。
扫描电镜法显示支原体 附于细胞表面众多的圆形颗粒为支原体
细胞传代培养
培养细胞的生长过程
单
细
个
胞
细
系
胞
的
的
生
生
长
长
过
过
程
程
细胞周期
间期
G1期（ DNA合成前期） S期（ DNA合成期 ） G2期（ DNA合成后期）
M期（有丝分裂期）
细
原代培 养期
为新鲜组织自体内取出并在体外培养生长 至第一次传代的时期
原代神经细胞培养
原代培养细胞的生命归宿
原代培养期 传代期 衰退期
培养细胞的生长方式及类型
贴附生长型细胞
必须贴附于底物才能生长的细胞。从形态上大体分 为上皮细胞型及成纤维细胞型，还有一些难以确定其 稳定形态的细胞。见于各种实体瘤细胞
悬浮生长型细胞
不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长。见于各 种造血系统肿瘤细胞
培养细胞生长的条件
细胞的营养需要（培养基，血清，添加因子等） 细胞的生存环境
温度: 37 ℃ O2 CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3-
pH: 7.2-7.4 渗透压 无污染 无毒
无 毒：无毒是培养细胞的必需条件。凡与
细胞直接或间接接触的东西都必须 是无毒的。
细胞培养常用的培养瓶、 培养皿、6孔板、96孔板
贴附生长型细胞
悬浮生长型细胞
每代贴附生长细胞的生长过程
游离期 贴壁期 潜伏期 对数生长期 停止期（平台期）
游离期：
细胞接种后在培养液中呈悬浮 状 态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞 体呈圆球形。
10分钟一4小时
贴壁期：
细胞附着于底物上，游离期 结束。 底物：胶原、玻 璃、塑料、其它细胞等
细胞计数
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生 长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细 胞数表示。
血细胞计数器：手工计数细胞 Coulter计数仪：人工计数
计数原则：计上不计下，计左不计右。 细胞数（ml）＝4大格细胞总数/ 4×10000 注意：镜下由两个以上细胞组成的细胞团应按单个细胞计算
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总 细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离 细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有 损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏 的效果。
用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从 而可以区分死细胞与活细胞。
注意事项：
无菌操作原则
细菌
微生物的污染 霉菌
无污染
支原体等
不同细胞类型的交叉污染
细菌污染
能改变培养液的pH值，使培养液变混浊。 细菌生长迅速，能消耗营养液和产生毒素。 抑制细胞的生长，毒性大的细菌可很快导致 细胞崩解死亡。
细菌污染
霉菌污染
荧光染色法(33258)显示染色体，细胞周围亮点为支原体
Giemsa染色法，附于胞质上黑点为支原体
胞
系
的
传代期
生
原代培养的细胞生长一定时间之后，如贴附 型细胞即融合成片而逐渐铺满底物的表面， 此时应将原代细胞分开接种至2个或更多的 新的培养器皿中，即传代，此即成细胞系。
长
过
程
衰退期
一般有限细胞系在此期的细胞开始时虽仍 然存活，但增殖已很缓慢并逐渐完全停止，
进而细胞发生衰退死亡。
传代培养
当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则 需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个 容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器 中扩大培养，为传代培养。传代培养的累积次数 就是细胞的代数，一般细胞的代数为50代。