总多酚的测定
总多酚标准
总多酚标准
总多酚是植物中一类重要的生物活性物质，具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性。
在食品、医药、保健品等领域中，总多酚的含量是一个重要的质量指标。
因此，测定总多酚的含量对于保障产品质量和消费者健康都具有重要意义。
总多酚的测定方法有多种，其中较为常用的是Folin-Denis法和紫外-可见分光光度法。
这些方法的基本原理是利用酚类物质在特定条件下能够与某些试剂发生化学反应，生成具有颜色的化合物，通过测定该化合物的吸光度值，即可推算出样品中总多酚的含量。
在测定总多酚时，需要注意以下几点：
1. 样品处理：样品需要经过适当的处理，如破碎、提取、浓缩等，以便能够获得准确的测定结果。
2. 试剂选择：不同的测定方法需要使用不同的试剂，选择合适的试剂对于保证测定结果的准确性至关重要。
3. 操作规范：操作过程中需要严格遵守实验规程，确保每一步操作的规范性和准确性。
4. 结果解释：根据测定结果，需要对实验数据进行合理的解释和统计分析，以便能够得出正确的结论。
总之，总多酚的测定需要选择合适的测定方法、严格遵守操作规程、对实验数据进行合理的解释和统计分析，才能得出准确的测定结果。
这对于保障产品质量和消费者健康都具有重要意义。
多酚含量测定法-总酚含量测定法-Folin酚法-Folin-Ciocalteu试剂法-操作图解
多（总）酚含量测定法（Folin-Ciocalteu试剂法）李熙灿/Xican Li（广州中医药大学）[文献] Xican Li, Jing Lin, Yaoxiang Gao, Weijuang Han, Dongfeng Chen. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicifugae. Chemistry Central Journal. 2012; 6(1):140.操作图解[溶液配制]1Folin-Ciocalteu试剂(0.25mol/L)的配制取2mol/L Folin-Ciocalteu试剂1mL，加蒸馏水7mL，充分混合，得0.25mol/L的Folin-Ciocalteu试剂,共8mL。
2 15%Na2CO3溶液（W/V）的配制取Na2CO3•10H2O溶3.0g，溶于20mL水中，混匀即得。
3 标准溶液的配制（以连苯三酚为例）精确称取连苯三酚标准品10mg．用水溶解并定容到50mL，得0.2mg/mL的对照品标准溶液。
4 连苯三酚标准曲线的绘制APyrogallol Concentration mg/mLA = 32.16733*C + 0.06012, R=0.998线性范围：连苯三酚0.00-0.06mg/mL ，A 值在0.039-1.928之间。
5 样品溶液的配制 样品母液（1mg/mL ）：精确称取样品2mg ，用95乙醇溶解并定容到2mL ，得1mg/mL 样品母液。
试剂+即可，注意观察A 值大小。
6 多酚含量的计算依上述公式A = 32.16733*C + 0.06012, 由A值即可求得浓度C值。
7 说明7.1 不同的分光光度计所测得的A值可能不一样，所以，同一次实验要用同一台分光光度计；7.2 Folin-Ciocalteu试剂：可向试剂公司购买，一般其浓度为2 M，使用前最好稀释。
也可以自配方法如下：将100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O), 25g钼酸钠( Na2MoO4·2H2O) ,700 mL蒸馏水，50 mL 85%磷酸及100 mL浓盐酸装入带回流装置的2000mL圆底烧瓶中，充分混合，文火缓慢回流10h,在加入150g硫酸锂(Li2SO4),50 mL蒸馏水及数滴液溴，然后将烧瓶内溶液开口煮15min，以驱除过量的溴，冷至室温后用容量瓶定容至1000mL，过滤。
总酚的测定方法
总酚的测定方法总酚是一种常用的化学指标，用于测定样品中酚类化合物的含量。
酚类化合物广泛存在于自然界和工业生产中，其测定方法的准确性和可靠性对于环境保护、药品研发和工业生产具有重要意义。
总酚的测定方法有多种，下面将介绍其中几种常用的方法。
一、分光光度法分光光度法是一种常用的总酚测定方法。
通过测量样品在特定波长下的吸光度，可以计算出其中酚类化合物的浓度。
该方法简便、快速，并且对于不同种类的酚类化合物具有较好的选择性。
二、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的总酚测定方法。
该方法利用样品中酚类化合物在固定相上的分离特性，通过检测其在流动相中的峰面积或峰高，可以计算出总酚的含量。
高效液相色谱法具有分离效果好、分析速度快的特点，广泛应用于食品、环境和药品等领域。
三、电化学法电化学法是一种常用的总酚测定方法。
该方法利用电极与样品中的酚类化合物发生氧化还原反应，通过测量电流或电势变化，可以计算出总酚的含量。
电化学法具有灵敏度高、选择性好的特点，广泛应用于环境监测和药品分析等领域。
四、发光法发光法是一种常用的总酚测定方法。
该方法利用特定荧光染料与酚类化合物发生反应产生发光信号，通过测量发光强度，可以计算出总酚的含量。
发光法具有灵敏度高、特异性好的特点，广泛应用于生物医学和环境监测等领域。
总酚的测定方法在实际应用中需要考虑多个因素，如样品的性质、测定的目的和要求等。
在选择合适的测定方法时，需要综合考虑这些因素，以确保测定结果的准确性和可靠性。
总酚的测定方法在环境保护、药品研发和工业生产中具有重要意义。
通过准确测定总酚的含量，可以评估样品的污染程度、药品的质量和工业生产的效果，为相关领域的研究和应用提供科学依据。
总酚的测定方法是化学分析领域的重要内容之一，随着科学技术的不断发展和创新，新的测定方法也在不断涌现。
这些方法的应用将进一步推动总酚分析技术的发展，为环境保护、药品研发和工业生产等领域提供更加精确和可靠的数据支持。
提取物中多酚类化合物的鉴定
提取物中多酚类化合物的鉴定一、前言多酚类化合物是一类广泛存在于植物中的天然化合物，具有抗氧化、抗炎症、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，对于提取物中多酚类化合物的鉴定具有重要意义。
本文将从样品制备、实验方法和数据分析三个方面介绍提取物中多酚类化合物的鉴定方法。
二、样品制备1. 样品来源样品可以来源于植物组织、食品或者药材等。
在选择样品时需要考虑样品的质量和含量，以及是否符合实验要求。
2. 样品制备（1）植物组织：将新鲜或干燥的植物组织粉碎成粉末，过筛筛选出适当大小的颗粒。
（2）食品：将食品切碎或者磨成粉末，过筛筛选出适当大小的颗粒。
（3）药材：将药材切碎或者磨成粉末，过筛筛选出适当大小的颗粒。
3. 样品储存为了保证实验结果的准确性，在制备好样品后需要储存好样品。
对于植物组织和食品，可以将其放置在密闭的塑料袋中，避免受潮、氧化和污染。
对于药材，可以将其放置在干燥、阴凉、通风的地方。
三、实验方法1. 总多酚含量测定总多酚含量是指样品中所有多酚类化合物的总量。
常用的测定方法有菲林-苏丹法和Folin-Ciocalteu法。
（1）菲林-苏丹法：该方法基于菲林试剂与多酚类化合物反应产生的蓝色色素和苏丹红试剂与蛋白质反应产生的红色色素之间的差异。
步骤如下：① 取适量样品加入盛有5ml水的离心管中。
② 加入2ml 95%乙醇，振荡混匀。
③ 离心10分钟，取上清液加入新离心管中。
④ 加入1ml 0.5%菲林试剂和1ml 10%Na2CO3溶液，振荡混匀后放置30分钟。
⑤ 加入2ml 1%苏丹红试剂，振荡混匀后放置5分钟。
⑥ 用紫外可见分光光度计在760nm处测定吸光度。
（2）Folin-Ciocalteu法：该方法基于Folin-Ciocalteu试剂和多酚类化合物反应产生的蓝色色素之间的关系。
步骤如下：① 取适量样品加入盛有5ml水的离心管中。
② 加入2ml Folin-Ciocalteu试剂，振荡混匀后放置5分钟。
植物总多酚含量测定方法
植物总多酚含量测定方法福林酚试剂氧化多酚中-OH基团并使其显蓝色，蓝色的深浅与多酚的含量成正相关，没食子酸一般在该方法中被默认为标准物质，采用没食子酸溶液制作标准曲线，然后将多酚含量表示为等价没食子酸的量，即可求得待测样品中总多酚含量。
二．实验仪器：分光光度计三．实验试剂试剂一：酚试剂25mL×1瓶试剂二：显色液200mL ×1瓶试剂三：1.0mg/mL没食子酸标准溶液20mL×1瓶四．溶液配制试剂一使用液：将试剂用双蒸水10×稀释，制备成酚应用液，每次测试需使用2.5mL，根据样品数量计算好，用多少配制多少。
例：需要进行38次测试，则可配制40次使用量：40×2.5mL=100mL，量取10mL试剂一加入90mL双蒸水，充分混匀即可。
试剂三使用液：分别采用移液管移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL试剂三于100mL容量瓶中，采用双蒸水定容至刻度，摇匀，制成浓度分别为10，20，30，40，50μg/mL的没食子酸应用液。
习惯用使用移液器的老师也可先在15mL离心管中分别加入9.9，9.8，9.7，9.6，9.5mL双蒸水，再采用移液器分别移取100，200，300，400，500 μL 试剂三于相应的离心管中，充分颠倒混匀，制成浓度分别为10，20，30，40，50μg/mL的没食子酸应用液。
五．实验步骤（1）分别取2.5ml试剂一使用液于标准管和测定管中，在测定管中加入0.5ml样品溶液，再取0.5ml试剂三使用液于标准管中，分别将标准管和测定管中的溶液混合均匀，室温静置5分钟，使两个管中的溶液充分反应。
（2）分别在静置后的标准管和测定管中加入2ml试剂二，充分混匀，室温静置60min，使用1cm光径比色皿，765nm处采用分光光度计测定吸光度。
1．必须做标准管，以绘制标准曲线；2．步骤（1）中室温静置3-8分钟均可，但标准管和所有测定管反应时间应保持一致；3．步骤（2）中若加入试剂二后样品颜色较深，可做对照管，对照管将试剂二改为双蒸水；4．步骤（2）中室温静置最短40min，建议60min以保证反应充分。
葡萄皮中多酚物质的提取及总酚含量的测定——实验方案
实验方案1材料和方法1.1原料与试剂葡萄皮、甲醇、乙醇、KH2 PO4 、Na2HPO4 、FeSO4 、酒石酸钾钠、没食子酸等均为国产分析纯试剂。
1.2主要仪器722型分光光度计,电子天平，恒温水浴锅、粉碎机、减压抽滤机1.3 试验方法1.3.1 提取工艺原料预处理→溶剂浸泡→回流浸提→精密滤纸过滤→分离过滤液→旋转蒸发脱除溶剂→烘干1.3.2 操作要点(1) 原料的预处理:将葡萄皮自然晾干,粉碎过40目筛,避光保存。
(2) 浸提溶剂的选择: 称取葡萄皮粉末1g(准确至01000 1g) ,分别加入蒸馏水、体积分数60%乙醇、体积分数60%甲醇、体积分数95%乙醇、体积分数95%甲醇,在30℃水浴浸提1h ,趁热减压抽滤，定容至25 mL。
吸取1 mL 显色测定吸光度,平行测定3次,计算总酚含量。
(3) 浸提单因素试验:对可能影响葡萄皮多酚得率的几个因素(浸提剂浓度、料液比、浸提时间、浸提温度)分别作单因素试验,测定提取液的吸光度,平行测定3次,计算总酚含量。
(4) 最佳浸提条件的选择: 以浸提剂浓度、料液比、浸提时间、浸提温度为因素, 选择L9 (34) 正交表进行四因素三水平试验,各处理重复3 次,并进行方差分析。
1.3.3 总酚含量的测定1.3.3.1 样品吸光度的测定准确吸取1mL 试液,转移至25mL 容量瓶中,加蒸馏水4mL 和酒石酸亚铁溶液5mL ,充分混合,再加pH715 的缓冲溶液至刻度,用10mm 比色杯,在波长540nm 处,以试剂空白溶液作参比,测吸光度A 。
1.3.3.2 标准曲线的制作准确称取没食子酸标准样品0.15 g ,加蒸馏水溶解并移入100mL 容量瓶中定容,在6只100 mL 容量瓶中分别加入510 g/ L 没食子酸标准样品0、1、2、3、5、10 mL ,加入蒸馏水定容至100 mL ,各吸取1mL ,同1.3.3.1方法测定,绘制标准曲线。
1.3.3.3 结果计算葡萄皮总酚含量： w = CV/m式中:w ：多酚含量(mg/ g);C：,葡萄皮多酚质量浓度(mg/mL);V ：提取液的体积(mL);m：,葡萄皮质量(g)。
总多酚的测定
一、实验原理多酚类物质包括花青苷、黄酮苷、单宁等，具体又可分为若干种。
多酚类物质含有酚羟基，有的还含有羧基，属于极性有机化合物，常用极性溶剂提取，如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水以及由这些溶剂按比例组成的复合溶剂。
由以上溶剂直接提取的多酚物质，实质为各种多酚的混合物（总多酚提取液），不同的原料中所含酚类物质的种类不同，需要进一步的分离鉴定。
常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有:酒石酸亚铁比色法、FD 法、FC 法、普鲁士蓝法等。
其中酒石酸亚铁分光光度比色法应用较多。
酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。
测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。
二、实验材料、试剂与仪器材料：茶叶；仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取1.00g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和5.00g酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O）混合后加蒸馏水溶解定容到1000mL（2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取60.20g Na2HPO4·12H2O和5.00g NaH2PO4·12H2O混合后加蒸馏水溶解定容到1000ml。
三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。
为简化操作，可用在一定操作条件下吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。
1.福林试液的配制：取钨酸钠10g与钼酸钠2.5g，加水70ml、85％磷酸5ml 与盐酸10ml,置200ml烧瓶中,缓缓加热回流10小时，放冷，再加硫酸锂15g、水5ml与溴滴定液1滴煮沸约15分钟，至溴除尽，放冷至室温，加水使成100ml。
总酚含量测定-多酚含量测定-操作流程图-实验图解-李熙灿-Xican Li
多酚含量测定-总酚含量测定(操作流程图) 2017.10【测定方法与操作流程图】【溶液配制】(1)0.25mol/L Folin酚(福林酚)试剂的配制：取2mol/L Folin-Ciocalteu试剂1mL，加蒸馏水7mL，充分混合，得0.25mol/L的Folin-Ciocalteu试剂,共8mL。
(2)15%Na2CO3溶液的配制：取Na2CO3•10H2O溶3.0g，溶于20mL水中，混匀即得。
(3)连苯三酚1标准液的配制：精确称取连苯三酚标准品10mg．用甲醇溶解并定容到50mL，得0.2mg/mL的连苯三酚标准液。
(4)样品液的的配制：精确称取待测样品10mg．用甲醇2溶解并定容到10mL，得1mg/mL的样品液。
【连苯三酚标准曲线的绘制】1本文使连苯三酚作为标准品.当然,也可以使用咖啡酸、槲皮素、儿茶素、芦丁等作为标准品，绘制标准曲线。
2也可以用无水乙醇、95乙醇、水，视样品的溶解性而度。
1.9276670.15 0.35 1.917图Folin酚法测定多酚含量的标准曲线（以连苯三酚为例,平行测三次）（以连苯三酚为例，A = 32.16733*C + 0.06012, R=0.998，线性范围：连苯三酚0.00-0.06mg/mL，A值在0.039-1.928之间）。
【多酚含量的计算】依上述公式A = 32.16733*C + 0.06012, 由A值即可求得浓度C值。
【说明】(1)不同的分光光度计所测得的A值可能不一样，所以，同一次实验要用同一台分光光度计；(2)Folin-Ciocalteu试剂：可向试剂公司购买，一般其浓度为2 mol/L。
也可以自配方法如下：将100g钨酸钠(Na2WO4 ·2H2O), 25g钼酸钠( Na2MoO4·2H2O) ,700 mL蒸馏水，50 mL 85%磷酸及100 mL浓盐酸装入带回流装置的2000mL圆底烧瓶中，充分混合，文火缓慢回流10h,在加入150g硫酸锂(Li2SO4),50 mL蒸馏水及数滴液溴，然后将烧瓶内溶液开口煮15min，以驱除过量的溴，冷至室温后用容量瓶定容至1000mL，过滤。
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一、实验原理
多酚类物质包括花青苷、黄酮苷、单宁等，具体又可分为若干种。
多酚类物
质含有酚羟基，有的还含有羧基，属于极性有机化合物，常用极性溶剂提取，如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水以及由这些溶剂按比例组成的复合溶剂。
由以上溶剂直接提取的多酚物质，实质为各种多酚的混合物（总多酚提取液），
不同的原料中所含酚类物质的种类不同，需要进一步的分离鉴定。
常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有:酒石酸亚铁比色法、FD 法、FC 法、普鲁士蓝法等。
其中酒石酸亚铁分光光度比色法应用较多。
酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应
生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。
测定总多酚
时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。
二、实验材料、试剂与仪器
材料：茶叶；
仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；
试剂：
（1）酒石酸亚铁溶液：称取1.00g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和5.00g酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O）混合后加蒸馏水溶解定容到1000mL
（2）pH 磷酸盐缓冲液：称取60.20g Na2HPO4·12H2O和5.00g NaH2PO4·12H2O 混合后加蒸馏水溶解定容到1000ml。
三、操作步骤
（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用
标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。
为简化操作，可用在一定操作条件下吸光度值为时，供试液中茶多酚的浓度为 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。
1.福林试液的配制：取钨酸钠10g与钼酸钠
2.5g，加水70ml、85％磷酸5ml 与盐酸10ml,置200ml烧瓶中,缓缓加热回流10小时，放冷，再加硫酸锂15g、水5ml与溴滴定液1滴煮沸约15分钟，至溴除尽，放冷至室温，加水使成100ml。
滤过,滤液作为贮备液。
置棕色瓶中,于冰箱中保存。
临用前，取贮备液，加水稀释至10ml，摇匀，即得。
用10mL乙醇溶液溶解0.5000g没食子酸，定容至100mL，分别移取到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容。
加入福林－薛卡多（Folin-Ciocalteu）试剂显色，在765nm波长下测定吸光度。
每个浓度做三个平行试验，取平均值，根据标准曲线。
取样品溶液1mL，按照上述的制作方法，测定其吸光度，每个样品做三个平行试验，取平均值，计算样品中的多酚含量。
反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关，在波长760 nm左右有最大吸收。
2. 酒石酸亚铁比色法。
其测定原理是茶多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。
用分光光度法测定其含量。
茶多酚标准溶液的配制称取提取纯品0.2500g,加水溶解定容至250mL,混匀,即为每毫升含1mg提取纯品的标准溶液(mg/mL) 。
茶多酚的含量。
茶多酚标准曲线的绘制。
分别吸取茶多酚标准溶液1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL 于4 个50mL 容量瓶中,各加水至10mL,再加酒石酸亚铁溶液10mL,加入pH为7. 5的磷
酸缓冲液至刻度,混匀后用1㎝比色皿,以空白试剂作参比,于波长540nm处测定吸光度(A) ,绘制出标准曲线。