几种常用特殊染色操作过程中的要点
特殊染色和组织化学
⒉粘蛋白
在同一种上皮和腺体内常可同时分泌2种 粘液物质，而在同部位的分泌物中两者 的比例和含量都有所不同。
⒉粘蛋白
粘液物质一般具有下列性质： ①对异染性染料具有异染性； ②对碱性染料具有很强的亲和力； ③除胃粘蛋白外，其他粘液遇醋酸时 都会发生沉淀； ④可溶于弱碱性溶液。
2．在心肌病变及其他心血管疾病的研究 用显示糖原的特殊染色，可以观察到由缺 血缺氧所致急性早期心肌坏死病灶内的糖 原明显减少甚至消失，呈均质的浓染状态， 而病灶周围则出现反应性异常糖原增多； 已愈合的心肌梗死灶周围的心肌纤维内可 有糖原颗粒浸润；心肌的横纹肌瘤也有大 量糖原存在。
3．糖原累积病的诊断及研究 用显示糖原的 特染方法可观察到由先天性遗传缺陷引起的 糖原累积病时，心、肝、肾、骨骼肌、单核 吞噬系统等器官内均有大量的糖原堆积。
1、有学者认为从物理学角度看，染色剂和组织 细胞的结合是“溶解”或“吸收”。例如苏丹类染 色剂使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶解 度大于在酒精等溶剂中的溶解度这一特性。有些染 色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被吸 收或沉淀到组织、细胞的小孔中去而着色的‘这种 机制的染色是很少的。
2、另有学者认为染色是染色剂与组织、细胞之间 的化学性结合。如显示含铁血黄素的普鲁士反 应是最典型的例子。
5)蒸馏水洗涤数次。
6)用Schiff试剂浸染5一 10min，如温度低时 可延长浸染时间。
7)倾去Schiff试剂，直 接流水冲洗10min。
8)用明砚苏木素染液浅 染胞核2—3min，过 染时可用o5％盐酸乙 醇液稍分化。
9)流水冲洗5一l0min。
10)乙醇脱水，二甲苯运 明，中性树胶封固。
注意事项
2、类化学方法 有少数方法的染色反应有特 殊性，但机制不明。
工笔画的特殊技法
工笔画的特殊技法、基本染色技法十八法1冲染法。
冲染法也称撞染法，积水积色法。
积水法是先把墨或者颜色平涂，在六七成干的时候，点入清水。
积色法是先把墨或者颜色平涂，在六七成干的时候，点入颜色，一般是点入石色。
这两种办法最好先把画纸裱在画板上再进行。
2撒盐：特技的一种。
铺好底色后，趁湿在上面撒上食盐，任其自然渗化，形成雪花状的肌理效果。
3涂蜡：特技的一种。
在未画或画到中间过程时，在画面上不规则地涂抹上一些石蜡，使画面产生局部不挂色的班驳效果。
此法也可表现下雨时的效果。
4皱纸：勾好白描稿后，用喷壶把画稿稍微打湿，水不要太多，然后把画稿慢慢攥在一起轻轻揉搓，再展开扶平，用大白云笔蘸事先准备好的颜色（颜色略重），在画稿的背面皴擦点染，使颜色渗透，画稿正面产生碎瓷般斑驳的效果。
7水洗：是画面的一种处理方法，可使画面更加统一、协调，同时也可以把表面浮色洗掉，使画面更加沉稳。
水洗时，先用清水把画稿打湿，用白云笔轻轻洗刷，可整体洗，也可局部洗，用力不要太大，否则会把画稿弄破。
也可以在画面颜料的水分全部都干了以后再洗。
当然还是其它特技的。
关于用具绘制工笔牡丹之前，我们首先要准备好作画工具。
下面列出了绘制过程中会用到的各种画具。
因为考虑到初学者的因素，所以列出的都是市面上常见的画具，在各地美术用品商店里都可以很方便的购买到。
1、笔：主要分底色笔、染色笔、勾线笔三部分。
笔者常用的底色笔有五寸、二寸、寸半底纹笔，底纹笔要求全为羊毫所制，笔锋柔软蓄水能力强，主要用来平涂底色。
染色笔方面我一般都是采用大白云，其中填色的大白云要求狼毫成分略少一些（纯羊毫也可），色易填润。
染色的大白云则选择稍硬一些的，色易拖开。
在勾线笔的选择上，勾勒花头和叶子我一般采用定制的长锋兔尖美工描笔，勾线时既可婉转自如又不失轻盈灵动。
勾花用新笔，勾叶可用稍旧一点的笔，因笔中含胶渐多，笔锋较之新笔硬朗不少，很适合表现叶子的质感。
绘制牡丹还要准备一根小号的狼毫笔，主要用来勾勒山石、枝干，局部填色之用。
纺织品染色方法及注意事项
纺织品染色方法及注意事项纺织品染色是一项重要的工艺，它可以赋予纺织品丰富的颜色和多样的效果，从而满足人们对服装和家纺品等产品的需求。
本文将介绍纺织品染色的方法和需要注意的事项，以帮助读者更好地了解和运用这一技术。
一、染色方法1. 污染法染色污染法染色是最常用的纺织品染色方法之一。
它通过将纺织品放入染色液中，利用染料和纤维之间的亲和力，使染料分子渗透到纤维内部。
该方法适用于天然纤维和合成纤维，并且可以实现多种颜色和效果的染色。
2. 印花染色印花染色是一种以图案染色为特点的方法。
它通过在纺织品表面印刷出所需的图案，然后使用染料对图案进行染色。
印花染色可以实现色彩丰富、图案多样的效果，广泛用于纺织品设计和装饰。
3. 溶液染色溶液染色是一种将染料溶解在溶剂中，然后将纺织品浸泡在染料溶液中进行染色的方法。
这种方法适用于纺织品纤维密度较小、渗透性较好的情况，可以实现均匀染色和高强度的染色效果。
二、注意事项1. 选择适合的染料在进行染色之前，需要根据纺织品的材质和需求选择适合的染料。
染料的选择应考虑其染色效果、色牢度、环境友好性等因素，以确保染色后的纺织品具有色彩鲜艳、稳定耐用的特点。
2. 控制染色的时间和温度染色的时间和温度是影响染色效果的重要因素。
不同的染料和纺织品材质需要不同的染色时间和温度，应根据产品说明书或专业建议进行操作。
同时，要确保染色过程中的温度和时间的稳定性，避免出现不均匀染色或染色效果差的情况。
3. 注意洗涤和后处理染色后，纺织品需要进行洗涤和后处理，以去除多余染料和处理染色过程中产生的残留物。
洗涤和后处理的方法和步骤应根据染料和纺织品的特性来确定，以避免对纺织品质量的影响。
4. 确保安全和环保在进行染色过程中，应注意安全和环保。
染料和染色液可能对人体产生刺激或有害作用，应佩戴个人防护用品，并确保室内通风良好。
同时，减少染料和染液的浪费，避免对环境造成污染。
5. 定期维护设备染色设备的定期维护对保证染色质量和延长设备寿命非常重要。
病理学技术—特殊染色最最全总结
病理学技术—特殊染色最最全总结病理学技术是医学研究领域中的一个重要分支，它利用各种不同的方法和技术，对组织和细胞进行分析和研究。
其中，特殊染色技术是病理学技术中的一个重要组成部分，通过使用不同的染色剂，有助于观察并区分不同的细胞和组织结构，以辅助诊断和研究。
以下是对特殊染色技术的最全总结。
1. PAS染色（Periodic Acid-Schiff染色）：PAS染色可以用于检测细胞和组织中的多糖物质，如糖原、粘多糖和黏多糖等。
PAS染色通过一系列的化学反应，将含有醛基的物质氧化，然后与PAS染料反应生成染色物质。
2. 铁染色：铁染色可用于检测细胞和组织中的铁含量，它可以帮助鉴别铁负荷过多或过少的情况。
常用的铁染色方法包括Perls染色和Prussian blue染色。
3.去脂酸和酶染色：去脂酸和酶染色用于检测细胞和组织中的脂质和酶活性。
去脂酸染色通过将组织切片浸泡在油酸中，然后用溴化黄染色，观察脂质的分布情况。
酶染色通过使用特定的染色剂来观察细胞中的酶活性，如碘化物染色用于检测过氧化物酶活性。
4.免疫组织化学染色：免疫组织化学染色是通过使用特异性抗体来检测细胞和组织中的蛋白质和其他分子。
常见的免疫组织化学染色方法包括免疫荧光染色和酶联免疫组化染色。
这些染色技术可以用于确定特定抗原的存在和定位，从而帮助确定疾病的诊断和预后。
5.组织切片染色：组织切片染色是一种常见的特殊染色技术，它可以用于检测细胞和组织中的结构和细胞器。
常用的组织切片染色方法包括伊红染色、苏木素-伊红染色和单色染色等。
6.核酸染色：核酸染色用于检测细胞和组织中的核酸结构和功能，其中最常用的核酸染色方法是荧光原位杂交（FISH）和DAPI染色。
荧光原位杂交可以用来检测染色体异常和基因重排等。
7.肉眼可见染色：肉眼可见染色是一种用于检测显微镜下不易观察到的细胞和组织结构的染色技术。
常见的肉眼可见染色方法包括钙化染色和淀粉样变染色等。
总结以上所述，特殊染色技术在病理学领域中具有重要的应用意义，通过使用不同的染色剂，可以对细胞和组织进行全面和准确的分析和研究。
病理学技术——特殊染色最全总结
病理学技术——特殊染色最全总结特殊染色是病理学中常用的一种技术手段，用于染色并可视化细胞、组织或病理标本中特定的结构、细胞成分或病理损伤，从而帮助诊断人员更准确地判断疾病类型和病理变化程度。
特殊染色的种类繁多，下面将对一些常见的特殊染色进行全面总结。
一、银染色法银染色法是通过化学反应使待染物质与银盐结合，生成黑色或褐色沉淀，并在显微镜下观察变化。
常见的银染色方法有：Reticulin（網狀纖維）染色、Gomori银染色、Grocott-Methenamine银染色。
二、PAS染色PAS染色（Periodic Acid-Schiff染色）是一种常见的特殊染色技术，用于检测糖原以及其他多糖类物质。
通常使用的PAS染色是将待染物标本与过氧化铬酸溶液（Periodic Acid）处理后再使用Schiff试剂进行染色的方法。
PAS染色为酸性物质染成红色，大多为胞浆染色。
常见的应用包括鉴别肝细胞变性、神经纤维、肾小管等结构。
三、 Masson三色染色法Masson三色染色法是一种多彩染色方法，通过染色剂的组合可染出细胞核、胶原纤维和细胞质等不同组织成分。
Masson三色染色方法包括酸性区域以绿色染色显示胶原纤维，细胞核以黑色或暗蓝色染色显示，胞质以红色染色显示。
该染色法在组织纤维化、炎症反应等病变的检测中应用广泛。
四、Mallory三色染色法Mallory三色染色法和Masson三色染色法类似，可以用于显示胶原纤维、细胞核和胞质等组织成分。
其区别在于Mallory三色染色法标本在染色前需用盐酸处理，使染色剂更易于沉积在纤维上，能更清晰地显示组织纤维结构。
五、Giemsa染色Giemsa染色通常用于血液和骨髓涂片的染色，并可以显示细胞核、染色质和胞质等成分。
Giemsa染色法有多种方法，如Giemsa-Eosin染色法、Giemsa-Wright染色法等，可根据需要选用。
六、von Kossa染色法von Kossa染色法用于检测组织中的钙盐沉积，如血管壁的钙化、尿路结石等。
特殊染色实验室操作规范和技术规程
特殊染色实验室操作规范和技术规程1.胶原纤维染色（1）Van Gieson（V.G）染色法I.试剂的配制：（1）weigert氏苏木素A液：苏木素 1g （haematoxylin）无水酒精 100mlB液： 30%三氯化铁 4ml （ferric chloride）蒸馏水 95ml盐酸 1ml（2） Van Gieson氏液A液：酸性品红 1g（acid fuchsin）蒸馏水 100mlB液：苦味酸饱和水溶液，（1.2%）（picric acid）注意事项：①Weigert氏苏木素临用前取A液和B液等份混合，几个小时内用完，最长不得超过一天。
②苏木素配后经二十多天才能成熟，必须提前配制。
③该液能抵抗弱酸性染液，对已着染的细胞核在酸性染液的作用，不易被脱去颜色，如果不特别深染，则无须分化。
④Van Gieson氏液取B液9ml，加入A液1ml，即可使用。
染色程序：①切片脱蜡至水，②用Weigert氏苏木素染5-10min，③流水冲洗10min，④用1%盐酸酒精快速分化，⑤流水冲洗5-10min，⑥染Van Gieson氏液1-2min，⑦倾去染色，直接用95%乙醇分化脱水，⑧无水酒精脱水，二甲苯透明，封固。
结果：胶原纤维呈鲜红色，肌纤维、细胞质和红细胞呈黄色，细胞核呈蓝褐色。
注意事项：a)该法染完的切片，较易褪色如需照相，应尽早完成。
b)苏木素染液如为棕色或沉淀，应将其抛弃。
c)分化用的酒精，应使用95%以上的酒精，低浓度的酒精褪色能力强，容易将着染的红色脱去。
d)切片也可以用天青兰苏木素替代Weigert氏苏木素，染核效果基本一样。
（2）Masson氏三色染色法：天青石蓝液的配制：天青石蓝（Celestin blue B） 1.25g硫酸铁铵（ferric ammonium sulfate）1.25g蒸馏水 200ml甘油（glycerin） 30ml将前两者溶于蒸馏水中，然后煮沸，冷却后过滤，再加入甘油和麝香草酚。
病理制片技术――常用特殊染色
病理制片技术――常用特殊染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。
2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5 min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。
3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。
4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入50％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。
2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。
3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。
特殊染色
PTAH
染色步骤: 1. 切片脱蜡至蒸馏水。 2. 放入 0.25%高锰酸钾水溶液 5 分钟。 3. 蒸馏水洗。 4. 2.5%草酸漂白 5 分钟。 5. 蒸馏水洗多次。 6. 置于磷钨酸苏木素溶液 12-24 小时。 7. 95%酒精快速分化，滤纸吸去剩余酒精。 8. 60℃温箱中烘干,二甲苯透明，封固。
网状纤维染色的应用：
1. 区别癌（尤其是未分化癌）和肉瘤。 2. 鉴别原位癌或原位癌早期浸润，有一定参 考价值。 3. 对鉴别淋巴组织增生和淋巴瘤有一定的参 考价值，正常淋巴结网状纤维有疏密不一的 特有结构，而淋巴瘤上述结构消失。 4. 胶质肉瘤有较多的网状纤维，而胶质细胞 瘤则少见。
脂肪染色
染色步骤:
1. 切片脱蜡至水 2. 甲醇刚果红染液染 10-20 分钟 3. 用碱性乙醇分化液分化数秒 4. 水洗 5. 苏木素复染 2 分钟 6. 水洗 7. 脱水,透明,封固 结果：淀粉样物呈桔红色。
类淀粉染色的应用： 确定淀粉样变性及玻璃样变性 的胶原组织，后者在刚果红法染色 后呈淡桔色，常用于诊断甲状腺髓 样癌和胰岛细胞瘤等。
Gomori法
染色步骤:
1．切片脱蜡至蒸馏水。 2．放入 0.25%高锰酸钾水溶液 5 分钟。 3．蒸馏水洗。 4．2%草酸 2-5 分钟。 （切片变白就可以） 5．蒸馏水洗 2 次。 6．放入 2%铁明矾水溶液 10 分钟。 7．蒸馏水洗多次。 （要洗干净） 8．氨银液浸染 3-5 分钟。 （根据室温）
应用：
明确含铁血黄素的存在。如长期的肺郁 血、出血；陈旧性出血灶；肝硬化时慢性脾 郁血的含铁结节；硬化性血管瘤；动脉瘤性 骨囊肿；绒毛色素性滑膜炎等。
胆色素
三氯醋酸三氯化铁（Hall）法：
试剂配制： ㈠Fouchet 液： 甲液：三氯醋酸 25 克 蒸馏水 100 毫升， 乙液：三氯化铁 1克 蒸馏水 10 毫升 两者均宜少量新鲜配制，棕色瓶贮存。 临用时取甲液 30ml 乙液 3ml 等份混合。
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一、网状纤维染色 ——氢氧化银氨法（Gomori法）
5
（一）网状纤维的形态结构
较细的纤维组织、短、分支多，交织成网状
（与胶原纤维共同为细胞丰富的器官起到支撑作用）
HE呈淡红色，银氨液浸染、甲醛还原后呈黑色
（嗜银性/嗜银纤维：黑色）
主要由Ⅲ型胶原蛋白构成，表面被覆糖蛋白
（PAS染色：淡紫红色）
6
＋蒸馏水，洗涤沉淀（50-100ml蒸馏水） <反复/3次，沉淀不浑浊>
留下沉淀及少许上清液（4ml）
<保留沉淀物质>
逐滴＋氢氧化铵（一次1-2滴加入）
<边加摇晃>
至沉淀逐渐完全溶解
<无色溶液>
逐滴＋10%硝酸银，至刚出现浑浊 加氢氧化铵一至数滴，使沉淀消失
＋蒸馏水至40ml，2-8°C冰箱
<浑浊状态>
2
四、淀粉样物 刚果红法（甲醇刚果红、碱性刚果红）、甲基紫法 五、色素 含铁血黄素（Perls）、黑色素（Masson-Fontana）铜（罗 丹明、红氨酸） 六、糖类物质 糖原（PAS）、黏液物质（AB-PAS、AB） 七、脂内物质 中性脂肪（苏丹Ⅲ、Ⅳ、油红O）
3
八、神经组织 尼氏体（硫瑾、甲苯胺蓝）、神经髓鞘（变色酸2R、砂罗 铬花青） 九、肝脏穿刺 Masson、网状纤维、含铁血黄素、PAS、铜等。 十、肾脏穿刺组织 Masson、六胺银、PAS、刚果红等
1.氧化（KMnO4）：使网状纤维内羟基转变为醛基。<选择性> 2.漂白（H2C2O4）：棕色变为无色。 3.媒染（铁明矾）：增加网状纤维对银氨液的选择性。 4.浸银（氢氧化银氨）：银氨液中Ag（NH3）2+被组织吸附后与醛基结合。 5.还原（甲醛）：与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成黑色的金属 银。
31
抗酸菌
结核杆菌
麻风杆菌
结核杆菌：细长、稍弯曲，长短粗细不一，常单条散在分布， 多见于结核性干酪样坏死灶，在陈旧的病灶中，可 呈颗粒状、短棒状等，在病理组织中有多形性变化。
麻风杆菌：较粗短、笔直，常呈束状排列或聚集成堆 抗酸杆菌在退行性改变时可呈颗粒状，随后染色减弱甚至完全不着色。
32
（七）小结——做好抗酸染色要素
（二）网状纤维染色方法的选择
染色方法有十余种：
（Gomori、Gordon-Sweet、James、Foot、改良Lillie）
不同点：
1.所用氧化剂/浓度（KMnO4/高碘酸；0.25%、0.5%）不同。 2.所用银氨液（氢氧化银氨、硝酸银氨、碳酸银氨等）不同。每
种
银
氨
液
都
处
于
离
子
状
态
，
离
解
成
带
28
5.苯酚碱性品红有时易出现沉淀，染色时注意吸取上清液进行滴 染。 6.陈旧病变中的结核杆菌，染色时着色减弱，有时甚至不能显示， 染色前先用高碘酸加以氧化可以恢复这些菌的着色性。
29
（六）染色结果
抗酸杆菌（结核杆菌和麻风杆菌）—红色 胞核—淡蓝色
结核杆菌
麻风杆菌
30
结合组织学形态特征以及阳性对照情况来判别。
13
5.配制银氨液需使用蒸馏水/去离子水，以防出现银盐沉淀。 6.配制银氨液时，所滴加氢氧化铵的量很关键，边加边摇动至沉 淀刚好溶解。 7.配好的银氨液对光及空气较为敏感（长时间暴露在光/空气作用后 均易离解而析出银盐沉淀），应用棕色试剂瓶盛装并密封避光后置 于冰箱（2-8°C）保存。（理论上保存使用几周更换，实际工作中有
8
（四）染色化学试剂选择
1.高锰酸钾：强氧化剂，具腐蚀、刺激性。在酸性溶液（氧化力最强） 易分解（光有催化作用），在实验室用棕色瓶存放。 2.草酸：有毒性、腐蚀、刺激性及很强的还原性。（还原剂和漂白剂） 3.硫酸铁铵/铁明矾：易吸湿。对光敏感。在水中溶解缓慢。（媒染剂） 4.Gomori银氨/氢氧化银氨：硝酸银、氢氧化钾、氢氧化铵。（密封保存） ①硝酸银：氧化性较强。遇有机物（沾上皮肤）变灰黑色。常因纯度不 高被保存于棕色瓶。与部分有机物或硫、磷混合研磨、撞击可引起爆炸。 ②氢氧化钾：呈强碱性及具有腐蚀性。极易吸收空气中水分而潮解。 ③氢氧化铵：不稳定，易分解而生成氨和水。具有挥发性，应密封保存 在棕色瓶中。
16
3.高锰酸钾氧化时间不可过长，过长容易影响组织细胞形态的观 察。 4.原法中甲醛还原后用0.2%氯化金调色、5%硫代硫酸钠固定及VG 液复染，实际工作中可省略。（不进行复染结果对比同样清晰） 5.根据诊断的需要，可进行与其他（如+Masson）染色套染。
17
（七）染色结果
网状纤维—黑色 胶原纤维—黄色至棕黄色 胞核—褐色
所致感染多为慢性感染过程，长期迁延，并有破 坏性的组织病变。
22
（二）抗酸杆菌染色原理
抗酸杆菌菌体胞壁上含有不等量的类脂质（磷脂、脂肪酸、 蜡质D），并由糖脂形成一个蜡质的外壳，它能与苯酚碱性 品红结合形成复合物，用盐酸酒精脱色能够抵抗酸的漂洗。 因而抗酸杆菌呈红色。
23
（三）染色化学试剂选择
①苯酚/石碳酸：无色结晶，特殊气味，呈弱酸性，时间过 久/长期暴露在空气受到氧化而变成粉红色。有毒、腐蚀性， 常温下微溶于水（熔点43°C），温度达60°C时，能与水以 任何比例互溶。 ②碱性品红：黄绿色闪光结晶块状/暗红色粉末，微溶于水
18
套染-Masosn+Gomori
对照：可采用组织较小的肝脏穿刺组织 与其他染色共同应用
19
（八）小结——做好网状纤维的要素
1.优质化学试剂的选择： 硝酸银、氢氧化钾/钠、氢氧化铵 2.合格的银氨液配制（染色的关键）： 氨水的量 3.甲醛还原后的镜下控制： 深浅适宜 4.染液的保存期和配制的量： 2-8°C冰箱保存、不宜多配、滴染。 1-6月（出现沉淀）更换
<无色溶液>
<棕色瓶、密封保存>
11
Gomori银氨液-2
甲液：硝酸银(10.2g)+蒸馏水100ml 乙液：氢氧化钠（3.1g）+蒸馏水100ml
甲液（5ml）+乙液（5ml） 逐滴＋氢氧化铵（一次1-2滴加入）
至沉淀逐渐完全溶解
补加＋氢氧化铵（4滴）
＋蒸馏水至50ml，2-8°C冰箱
<出现棕黑色颗粒沉淀> <边加摇晃> <无色溶液>
<棕色瓶、密封保存>
12
染液配制中的注意事项
1.配制染液玻璃容器必须清洁干净，最好采用重铬酸钾清洁液浸 泡过夜，沥干洗液后再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2-3次。 2.高锰酸钾浓度不宜超过1%（氧化速度过快后自身易被氧化）。如 用酸性高锰酸钾（加强氧化、增强染色力）氧化，会减弱银氨液对 细胞核的着染，需复染胞核。若采用无色的氧化剂（高碘酸）则 无需漂白的过程。 3.切片厚度在3-4um（过厚易造成脱片）。 4.配制氢氧化银氨液：硝酸银采用较高纯度级（GR/AR），密封、 棕色瓶存储;氢氧化钾干燥密封保存，切勿使其潮解；氢氧化铵 使用后密封，保持浓度，定期及时更换。
27
染色过程中的注意事项
1.传统染色法采用酒精灯加热以缩短时间（15-20min），其染色 结果相对不稳定。室温中染色30-60min能达到较好效果，冬天 可在立式染缸进行加热（60°C）染色（20min）。 2.盐酸酒精分化要适度，切片经水洗后应为淡红/无色为宜。 3.亚甲蓝复染时间为30s-2min，避免过染。复染后迅速乙醇脱 水，防止脱色过度（过浅对于坏死组织对比不鲜明）。复染过深或 过浅都会造成对比不清晰。 4.在苯酚碱性品红染色时和盐酸酒精分化步骤之间尽量不要使 得切片干燥。
20
二、抗酸染色
——苯酚碱性品红法（ Ziehl-Neelsen法）
21
（一）抗酸杆菌的形态结构
抗酸染色是针对抗酸杆菌而言，属分枝杆菌属。
是一类细长略弯曲的杆菌
其种类较多，有致病性和非致病性两类。
引起人类疾病：结核杆菌、麻风杆菌、牛分枝杆菌
因其本身的特殊性（菌壁中含不等量脂质）
一般不易着色，但一经着色后可抵抗酸类脱色（抗酸杆菌）
（溶解度0.4%），溶于酒精（溶解度7.6%）。
24
（四）染液的配制及保存
①5%苯酚水溶液：（临时配制）
先在恒温箱中加热溶解，吸取5ml与95ml蒸馏水混合配制。
②苯酚碱性品红液：（保存期1年）
碱性品红 无水乙醇 5%苯酚水溶液
0.5-1g 溶解
（水浴加热）
10ml
充分混合 过滤
2-8°C冰箱保存
时可使用更长时间）
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（六）染色流程
1、切片常规脱蜡至水。 2、0.25%高锰酸钾液氧化5min。自来水稍洗。 3、2%草酸液漂白1-2min。自来水充分洗，蒸馏水洗。 4、2%硫酸铁铵液媒染5min。自来水数秒，蒸馏水稍洗。 5、Gomori银氨液作用30s-5min。蒸馏水稍洗。 6、4%甲醛液还原几秒-3min。自来水洗。 7、常规脱水透明，中性树胶封固。
90ml
苯酚作为媒染剂，可提高染液的染色性能，使碱性品红与抗酸杆菌牢固结合。
③0.1%亚甲蓝液：（保存期1年）
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染液配制中的注意事项 1.苯酚如呈红色（受到氧化），应及时更换。 2.碱性品红须选择纯度较高的试剂配制时较难溶解，应注意 其溶解程度。 3.因抗酸杆菌菌体特殊性，可在苯酚碱性品红液内加入适当 的5%-10%的Triton X-100或5%-10%的Tween-20表面活性剂 （碱性品红酒精液10ml+5%苯酚水溶液85ml+活性剂5ml，用前过滤）， 来增加染液的渗透力（易产生沉淀）。 4.对于脱钙组织，强酸脱钙可能会破坏抗酸性，最好使用弱 酸（甲酸）脱钙。
1.化学试剂的选择： 苯酚：无色；碱性品红：质量优质。 2.染液的配制（染色成功的一半）： 染液的配制是关键因素 3.对照的设立： 阳性对照设立、保证结果的准确可靠 3.镜下的仔细观察： 尤为关键（有时常常存在几条杆菌）