溶血程度与补体含量和活性相关
临床免疫学检验技术考试题(含答案)-2
临床免疫学检验技术复习练习试题及答案301.检测SmIg，下列说法正确的是( )A.常采用间接荧光免疫法或酶免疫组化法B.间接荧光免疫法时，应选用高效价、高特异性和高亲和力的荧光C.采用酶免疫组化法时，可选用酶标记的多价抗人Ig抗体D.间接荧光免疫法检测时，B细胞膜表面呈现的荧光有多种荧光着色形式E.间接荧光免疫法检测时，B细胞膜表面荧光着色的观察时间应不超过1小时答案：ABCD302.关于溶血空斑试验，下列说法正确的是( )A.经典溶血空斑形成试验是用来检测动物抗体形成细胞的功能B.经典溶血空斑形成试验中，每一个空斑中央含一个抗体形成细胞，其大小表示抗体形成细胞产生抗体的多少C.经典溶血空斑形成试验直接法所测到的细胞为IgM类抗体形成细胞，而其它类抗体形成细胞需用间接法检测D.被动溶血空斑试验是非红细胞抗体性溶血空斑试验，可检测SRBC上抗原相应的抗体形成细胞E.反向间接溶血空斑实验可用于检测人类IgG形成细胞，与抗体的特异性无关答案：ABCDE303.选择素分子膜外区组成部分包括( )A.补体调控蛋白(CCP)结构域B.C型凝集素(CL)结构域C.IgV样结构域D.表皮生长因子(EGF)样结构域E.IgC样结构域答案：ABD304.在淋巴细胞转化实验中，属于非特异性刺激物的是( )A.PHAB.ConAC.PWMD.PPDE.LPS答案：ABCE305.与RZ值有关的是( )A.酶含量B.酶活性C.酶的组成D.酶的理化性质E.酶的底物答案：ACDE306.理想的分离技术应具备的条件( )A.简便易行，适于大批量样品分析B.分离完全，快速，非特异结合低C.试剂来源容易，价格低廉，稳定性好，可长期保存D.不受外界因素和样品中其他组分的干扰，对标准品和待测抗原分离效果相同E.适合自动化分析的要求答案：ABCDE307.以下关于整合素分子的叙述，哪些是正确的( )A.由α、β两条肽链组成B.多数分布广泛C.表达水平可随细胞分化和生长状态发生改变D.其配体主要是细胞外基质E.主要介导同型粘附作用答案：ABCD308.下列关于双参数直方图的描述，正确的是( )A.双参数直方图是一种细胞数与双测量参数的图型AB.通常采用对数信号C.通常采用设置十字门来区分细胞信号D.纵、横坐标分别代表被测细胞的两个测量参数E.在图示中每一个点代表一个细胞答案：ABCDE309.下列关于IgG的特性，正确的有( )A.惟一能通过胎盘的抗体B.可分三个亚类C.再次免疫应答产生的主要抗体D.可引起Ⅱ、Ⅲ型超敏反应E.介导ADCC作用答案：ACDE310.免疫学检验的室内质量控制包括的环节有( )A.标本采集和保存B.标本的接收C.确定系统的有效性D.结果的审核、发出和解释E.治疗方案的确定答案：ABCD311.Ig血清型的抗原标志有( )A.同种型B.同种异型C.独特型D.异嗜型E.自身抗原型答案：ABC312.关于制备单向免疫扩散法的标准曲线的描述，正确是( )A.将已知含量标准抗原稀释成不同浓度，分别置于琼脂板上扩散B.量取沉淀环的直径，要求准确度达0.1mmC.以纵轴代表抗原浓度D.以横轴代表沉淀环直径E.用半对数纸绘制标准曲线答案：ABCDE313.下列属于HLA复合体的非经典Ⅱ类基因的是( )A.HLA-DMB.HLA-DNC.HLA-DOD.HLA-DRE.HLA-DP答案：ABC314.RF常见的类型有( )A.IgGB.IgAC.IgMD.IgDE.IgE答案：ABCDE315.单向免疫扩散法测量Ig，出现误差的原因有( )A.抗原或标准液溢出加样孔B.加样量不足或有气泡C.抗体或抗原过量而致沉淀环过小或过大D.扩散时湿盒不平E.加样量过多答案：ABCDE316.下列关于单向MLC的描述，正确的是( )A.单向MLC以刺激指数作为判断淋巴细胞反应强度的指标B.阴性分型法的SI=标准分型细胞对待测细胞刺激的cpm/待测细胞自身刺激的cpmC.阳性分型法的SI=待测细胞对预致敏淋巴细胞刺激的cpm/预致敏淋巴细胞自身刺激的cpmD.HLA-D抗原可用阴性和阳性分型法检测E.HLA-DP抗原只可用阳性分型法检测答案：ABCDE317.下列关于IgD的特性的描述，正确的包括( )A.性质不稳定，易被蛋白酶降解B.为成熟B细胞的主要标志C.可以通过胎盘D.血清IgD的功能尚不清楚E.以单体形式存在答案：ABDE318.质控血清盘评价的内容是( )A.特异性B.敏感性C.符合率D.对非特异干扰物的拮抗能力E.准确定值答案：ABCD319.独特型存在于( )A.BCRV区B.TCRV区C.AbV区D.AbC区E.TCRC区答案：ABC320.激活补体活化的MBL途径中必不可少的补体成分是( )A.C1B.C2C.C3D.C4E.C6答案：ABCD321.对单一抗原成分进行区别检测时，较常用的检测方法是( )A.ELISAB.WestenBlotC.对流免疫电泳D.免疫双向扩散法E.RIA答案：AB322.激活补体活化的经典途径中必不可少的补体成分是( )A.C1B.C2C.C3D.C4E.C6答案：ABCD323.流式细胞仪分析技术涉及了下列哪些技术( )A.激光技术B.计算机技术C.显微荧光光度测定技术D.流体喷射技术E.分子生物学技术答案：ABCDE324.激活补体活化的旁路途径中必不可少的补体成分是( )A.B因子B.D因子C.P因子D.C3E.C6答案：ABCD325.SIgA的结构包括( )A.α链B.κ或λ链C.J链D.SCE.糖基答案：ABCDE326.关于CFT的方法学评价，正确的是( )A.敏感度高B.特异性强C.反应结果明显D.适用于不同物理状态的抗原E.参与反应的五种成分须逐个滴定，操作麻烦答案：ABCDE327.CH50降低可见于下列哪些疾病( )A.肝坏死B.SLE活动期C.恶性肿瘤D.RAE.急性肾小球肾炎答案：ABDE328.在补体活化的旁路途径中不参与的补体成分是( )A.C1B.C2C.C3D.C4E.C5答案：ABD329.免疫球蛋白定量检测的方法有( )A.免疫比浊法B.单向琼脂扩散法C.ELISAD.放射免疫法E.免疫电泳及免疫固定电泳答案：ABCDE330.参与补体结合试验(CFT)的成分有( )A.抗原B.抗体C.补体D.红细胞E.溶血素答案：ABCDE331.下列哪些补体调节因子具有使机体正常组织细胞免受补体介导的损伤作用的功能( )A.B因子B.MCPC.CR1D.C8bpE.CD59答案：BCDE332.为保证分选细胞的活性和纯度，应考虑分选技术的下列哪些要求( )A.分选速度B.分选细胞数C.分选纯度D.分选得率E.分选收获率答案：ACDE333.目前用间接免疫荧光法检测抗核抗体，多选用Hep-2细胞作为抗原底物片，其优点主要是( )A.细胞核抗原丰富B.核大，结构清晰，易于观察结果C.根据结果的荧光染色模型，可初步判断抗体性质范围和特异性D.降低结果的阳性率E.细胞来源稳定可靠，容易标准化答案：ABCE334.HLA抗血清的来源主要有( )A.经产妇外周血的分离B.器官移植者的外周血的分离C.有受血史者的外周血的分离D.用淋巴细胞、血小板作人工免疫者的外周血的分离E.胎盘血的分离答案：ABCDE335.CH50试验中的缓冲液的特点，下列说法正确的是( )A.可以是磷酸缓冲液或巴比妥缓冲液B.pH在7.2～7.4之间C.含适量的钙、镁离子D.加适量NaCl以保持等渗E.以上均不是答案：ABCD336.下列属于高Ig血症的是( )A.慢性支气管炎B.原发性胆汁性肝硬化C.自身免疫病D.肝脏疾病E.剥脱性皮炎答案：ABCD337.流式细胞术所具有的分析和分选功能主要涉及的原理有( )A.光学原理B.光电转换原理C.测试原理D.蛋白芯片原理E.时间分辨荧光免疫技术原理答案：ABC338.下列关于散射比浊分析的描述，正确的是( )A.散射光的强度与复合物的含量成正比B.测定的散射信号值是在散射信号响应值曲线的上升臂部分C.散射比浊法分析与透射比浊分析的原理完全不同D.一定要保持抗体过量以维持抗原抗体复合物的相对不溶解性E.抗体量恒定时，形成免疫复合物的反应速率与散射信号响应值的上升呈正比答案：ABCDE339.APH50测定结果与下列哪些成分有关( )A.C3B.B因子C.P因子D.D因子E.C5～9答案：ABCDE340.激活补体活化的经典途径中所属离子是( )A.B.C.D.E.答案：AB341.补体活化的旁路途径的激活物包括( )A.革兰氏阴性细菌的内毒素B.酵母多糖C.葡聚糖D.凝聚的IgAE.IgG4答案：ABCDE342.流式细胞仪的基本组成部分包括( )A.液流系统B.光学系统C.信号检测系统D.数据处理系统E.信号转换系统答案：ABD343.关于IgGFc段的功能，正确的是( )A.激活补体B.调理吞噬作用C.抗体依赖的细胞毒作用D.介导胞饮抗原E.特异性结合抗原答案：ABCD344.下列哪些属非抗原特异性循环免疫复合物的补体参与检测技术( )A.PEG比浊法B.C1q固相法C.mRF凝胶扩散试验D.Raji细胞法E.抗补体试验答案：BE345.目前临床检测抗ENA抗体较常用的方法有( )A.双向免疫扩散B.对流免疫电泳C.免疫印迹技术D.dot-ELISAE.间接荧光免疫法答案：CD346.补体结合试验分为二个阶段，下列说法正确的是( )A.第一阶段是反应系统与补体结合阶段B.第二阶段是反应系统与补体结合阶段C.第一阶段是指示系统与补体结合阶段D.第二阶段是指示系统与补体结合阶段E.以上均不对答案：AD347.补体活化的MBL途径的主要激活物是( )A.MBLB.CRPC.CERD.免疫复合物E.凝聚的IgA答案：ABC348.关于Ig功能区的描述，正确的有( )A.Ig功能区是H链与L链分别折叠形成的球形结构B.L链有两个功能区，H链有4个或5个功能区C.Ig的多肽链属于β-折叠结构D.各个功能区氨基酸序列有同源性E.各功能区具有不同的功能答案：ABCDE349.关于IgM的生物学作用描述，正确的有( )A.能活化补体B.是B细胞识别抗原的受体C.在机体早期免疫防御中起重要作用D.初次免疫接种后首先产生的抗体E.大多数抗菌、抗病毒、抗毒素抗体都属于IgM答案：ABCD350.APH50试验主要反映补体活化的哪条途径的溶血功能( )A.MBL途径B.替代途径C.经典途径D.旁路途径E.C3途径答案：BDE351.分选纯度与下列哪些因素相关( )A.被分选细胞的性质B.仪器的精密度C.被分选细胞的数量D.其他细胞的数量相关E.分选细胞与其他细胞有无相互重叠的生物学特性答案：BE352.下列哪些因素决定Ig同种型抗原性的差异( )A.CH氨基酸组成不同B.CL氨基酸排列顺序不同C.CH氨基酸排列顺序不同D.CL氨基酸组成不同E.VH含糖种类和数量不同答案：ABCD353.下列属于HLA-Ⅲ类分子的是( )A.C4B.C2C.B因子D.热休克蛋白70E.HLA-DP分子答案：ABCD354.下列哪些疾病可检测到单克隆蛋白M蛋白增高( )A.多发性骨髓瘤B.重链病C.巨球蛋白血症D.轻链病E.良性单株丙球血症答案：ABCDE355.下列关于免疫复合物的描述，正确的是( )A.免疫复合物是指由抗原与相应抗体结合而成复合物B.血液中存在的IC为循环免疫复合物C.游离于体液中的则为可溶性免疫复合物D.沉积于机体的某一局部的为局部免疫复合物E.IC形成是机体清除有害抗原和终止反应的生理过程答案：ABCDE356.侧向散射光(SS)信号的强弱与下列哪些因素有关的哪项成正比( )A.细胞或其他颗粒的大小B.细胞或其他颗粒的粒度C.细胞或其他颗粒的形状D.与位移速度E.与荧光强弱答案：ABC解析：激光束照射细胞时，光以90°角散射的讯号。
兽医免疫学作业题(有答案的)
兽医免疫学作业题(有答案的)一、选择题1.免疫的概念是（D ）A．机体排除病原微生物的的功能B．机体清除自身衰老、死亡细胞的功能C．机体抗感染的防御功能D．机体免疫系统识别和排除抗原性异物的功能E．机体清除自身突变细胞的功能2.免疫防御功能低下的机体易发生（ D ）A．肿瘤B．超敏反应C．移植排斥反应D．反复感染E．免疫增生病 3.免疫原性较好的物质其分子量一般大于（ B ）A.5Ku B. 10Ku C. 20Ku D. 50Ku 4.下列哪种物质免疫原性最强（B ）A．蛋白质B.多糖C．染色质D．DNA5.决定抗原特异性的分子基础是（A ）A.抗原决定基B.抗原的大小C.抗原的电荷性质D.载体的性质E.抗原的物理性状 6.动物来源的破伤风抗毒素对人而言是（C）A.半抗原B.抗体C.抗原D.既是抗原又是抗体E.超抗原7.IgG的重链类型是（B ）A.α B.γ C.δ D.ε E.μ 8.抗体与抗原结合的部位（E ）A.VHB. VLC. CHD.CLE. VH 和VL9.能与肥大细胞表面FcR结合，并介导I型超敏反应的Ig是（E ）A.IgA B. IgM C. IgG D.IgD E. IgE 10.血清中含量最高的Ig 是（C ）A.IgAB. IgMC. IgGD.IgDE. IgE11.在免疫应答过程中最早合成的Ig是（B ）A.IgA B. IgMC. IgGD.IgDE. IgE 12.下面哪一类Ig参与粘膜局部抗感染（A ）A.IgA B. IgM C. IgG D.IgD E. IgE 13.SIgA为（D ）A．由二个IgA单体与J链组成B. 由一个IgA单体与J链组成C. 由二个IgA单体与J链和分泌片组成D. 由一个IgA单体与J链和分泌片组成E. 由五个IgA单体与J链组成14.介导NK 细胞、巨噬细胞、中性粒细胞发挥ADCC效应的Ig主要是（C ）A.IgAB. IgMC. IgGD.IgDE. IgE15.补体经典激活途径中，补体成分激活顺序是（D ）A.C__-__9B. C__-__9C. C__-__9D.C__-__9E. C__-__9 16.不参与C5转化酶形成的补体成分是（ B ）A. C4 B. C5 C. C3 D．C2 E．B因子17.能抵抗病毒的感染、干扰病毒复制的细胞因子称为（C ）；能刺激不同的造血干细胞，并在半固体培养基中形成细胞集落的细胞因子称为（B ）；能直接造成肿瘤细胞死亡的细胞因子称为（D ）；能介导白细胞间相互作用的细胞因子称为（ A ）；由单核/巨噬细胞产生的细胞因子统称为（ E ）。
兔抗绵羊红细胞溶血素
兔抗绵羊红细胞溶血素在补体实验中的应用产品名称：兔抗绵羊红细胞溶血素规格：0.5ml*10支/盒免疫动物：家兔性状：冻干粉储存：4～-20℃原免疫血清效价1：4000用途:仅供科研实验原理利用绵羊细胞与相应抗体（溶血素）结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和溶血素量一定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关。
在接近50%溶血（CH50）时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为最敏感的判断终点。
以引起50%溶血所需的最小补体量为一个CH50U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50U/ml表示。
本试验主要反映补体经典活化途径的溶血功能，其结果与补体C1～C9各组成分的量及活性均有关。
1．试剂及配制(1)缓冲生理盐水：①贮存液：●Na2HPO4·12H2O 2.85g●KH2PO4 0.27g（加蒸馏水至100毫升，4℃保存）●NaCl 17.00g②应用液（缓冲液）：5毫升贮存液加95毫升蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1毫升。
当日配制。
12小时内使用。
（2）2%绵羊红细胞（From：南京森贝伽生物公司）：无菌采取绵羊血液，于等量Alsever 液中可保存3周。
用前以缓冲液洗3次，并配成2%细胞悬液。
必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。
(3)冻干绵羊红细胞溶血素（From：南京森贝伽生物公司）（规格：0.5ml/瓶，0.5ml蒸馏水复溶）：将本品（效价1：4000），用缓冲液作1：2000倍稀释（即0.5ml溶血素加999.5毫升缓冲液）。
(4)待测血清：新鲜血液室温放置30分钟，再4℃放置60分钟，使血块收缩。
4℃离心（3000r/min）10分钟，取上清，-20℃保存。
2.试管法操作步骤（改良Mayer法）（1）致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（1：2000），混匀，置37℃水浴30分钟。
（2）稀释血清：待测血清0.2ml，加缓冲液3.8ml，稀释度为1：20。
第十九章补体检测及应用
经典途径
2、补体激活的替代途径
替代途径的激活剂：某些细菌、革兰氏阴 性菌的内毒素、细菌的脂多糖、肽聚糖、 葡聚糖、酵母多糖、凝聚的IgG4和IgA聚 合物等。
激活过程：C3是启动替代途径并参与其 后级联反应的关键分子。 经典途径产生或自发产生的C3b与B因子 结合，血清D因子的作用，形成C3转化 酶（ C3bBb ）， 不稳定，与血 清 P 因 子 结 合 则 形 成 稳 定 的 C3 转 化 酶 （ C3bBbP ）； C3转化酶水解C3，形 成C5转化酶（ C3bnBb 或 C3bnBbP ）；
免疫调节作用 C3可参与捕捉并固定抗原，通过与抗原提呈细 胞上的CR1及CR2受体结合，使抗原易被APC处 理和提呈 作用于多种免疫细胞，调节细胞的增殖分化： C3b与B细胞表面CR1结合，促进B细胞增殖分 化 参与调节多种免疫细胞效应功能：NK结合C3b 增强ADCC作用
第二节 补体总活性测定
激活的特点： 可以识别自己与非己：C3b的中止与 激活 替代途径是补全权系统重要的放大机 制：替代途径C3转化酶对经典途径补 体的活化是一种放大机制。
3、MBL途径
激活物：病原微生物感染所诱导产生的急性期蛋白 ，如 MBL、CRP等。
激活过程：MBL与细菌的甘露糖残基结合；再与丝氨酸蛋 白 酶 结 合 ， 形 成 MBL 相 关 的 丝 氨 酸 蛋 白 酶 （ MASP-1 、 MASP-2），MASP具有与活化的C1q同样的生物学活性，可 水解C4和C2，形成C3转化酶；其后过程与经典途径相同。
甘 露 聚 糖 结 合 凝 集 素 （ mannan binding tectin，MBL） 途 径 ， 简 称 MBL途径：MBL结合至细菌而启动激 活的途径，此途径不依赖于抗原抗体 复合物的形成，在感染的早期就能发 挥免疫防御效应，为急性期蛋白途径。
医学免疫学：第5 第6 第19 章 补体、补体检测及细胞因子 (2)
C4bp的抑制作用（C4 Binding Protein)
结合C4b，抑制C4b与C2的结合，防止C3转化酶的组装。 促进I因子对C4b的蛋白水解
四. 补体的生物学作用
在细胞表面激活并形成 MAC，介导溶细胞效应； 激活过程中产生的水解片段，介导各种生物学效应
1. 溶菌、溶解病毒和细胞的细胞毒作用
CH50(U/ml)=1/血清用量*稀释倍数
取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂
试管号 BBS 1：20稀释血清 2％SRBC 2U溶血素
补体溶血活性
1 1.40
0.10
0.5
0.5
200
2 1.35
0.15
0.5
0.5
133
置
3 1.30
0.20
0.5
0.5
100
37℃
4 1.25
0.25
2. 调理作用 C3b、C4b
3. 免疫粘附 C3b
4. 炎症介质作用 过敏毒素 C3a、C5a 趋化因子 C5a
第十九章 补体检测及应用
补体总活性测定
• 补体最主要的活性是溶细胞作用 • 特异性抗体+红细胞→激活补体→溶血 • 在适当的、稳定的反应体系中，溶血反应
对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线
阳性
阴性
阴性
阳性
二、方法评价
➢优 点
灵敏度高、所测定的抗体水平可达0.05μg/ml ， 出现交叉反应的机率较小， 可检测的抗原或抗体范围广泛， 无需特殊设备、结果容易观察、试验条件要求不高
➢现 状
影响的因素多、各种制剂需要繁琐的稀释和滴定等， 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐 渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对 新型免疫方法的建立有着启迪和指导作用
免疫检验考试辅导：补体总活性测定
（一）补体总活性测定实验原理补体最主要的活性是溶细胞作用。
特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细胞肿胀而发生溶血。
补体溶血程度与补体的活性相关，但非直线关系。
在一个适当的、稳定的反应系统中，溶血反应对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线。
如以溶血百分率为纵坐标，相应血清量为横坐标，可见在轻微溶血和接近完全溶血处，对补体量的变化不敏感。
S形曲线在30%～70%之间最陡，几乎呈直线，补体量的少许变动，也会造成溶血程度的较大改变，即曲线此阶段对补体量的变化非常敏感。
因此，实验常以50%溶血作为终点指标，它比100%溶血更为敏感，这一方法称为补体50%溶血实验即CH50。
考试用书（二）检测试剂绵羊红细胞；溶血素；稀释缓冲液。
（三）方法评价CH50试验是测定经典途径总补体溶血活性，所反映的是补体9种成分的综合水平。
方法简便、快速，但敏感性较低。
补体的溶血活性除与试验中反应体积成反比外，还与反应所用缓冲液的pH、离子强度、钙镁浓度、绵羊红细胞数量和反应温度有一定关系。
缓冲液pH和离子强度增高，补体活性下降，虽可稳定溶血系统，但过量则反而抑制溶血反应，故实验时对反应的各个环节应严加控制，统一步骤。
（四）临床意义CH50法检测是补体经典途径的溶血活性，所反映的主要是补体9种成分的综合水平。
如果测定值过低或者完全无活性，首先考虑补体缺陷，可分别检测C4、C2、C3和C5等成分的含量；严重肝病时血浆蛋白合成能力受损。
营养不良时蛋白合成原料不足，也可以不同程度地引起血清补体水平下降。
在患系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎等自身免疫病时，血清补体水平随病情发生变化。
疾病活动期补体活化过度，血清补体水平下降；病情稳定后补体水平又反应性增高。
因此补体检测常可作为自身免疫病诊断或是否有疾病活动的参考指标。
细菌感染特别是革兰阴性细菌感染时，常因补体旁路途径的活化过度引起血清补体水平降低。
溶血素结合形成抗原-抗体复合物经经典途径活化补体系统使绵羊
补体量
溶血程度与补体含量的关系
（二）CH50测定方法
实验材料 1．仪器：水浴箱、离心机。 2．材料：试管架、小试管、1毫升刻度吸 管、待测血清、2%绵羊红细胞悬液、溶血
素（2个单位）、pH7.4巴比妥缓冲液、
50%溶血标准管、记号笔等。
1．取洁净小试管10支，依次编号，置于试管架上。 2．取1ml刻度吸管4支，按下表加入各成分，摇匀。
0.50
2%SRBC (ml)
0.50
0.50
0.50
0.50
0.50
0.50
0.50
0.50
置37°水浴箱中水浴30min
根据肉眼观察选定所要离心的管号，2500r/min，离心5min
实验结果计算: 将离心后各管与50%溶血标准管比较，判 定50%溶血终点管。
1 × 血清稀释度 50%溶血终点管的血清用量
检血清作不同稀释后，加入反应体系，测定溶血程度，以
50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，可测知补体总 溶血活性。
在适当、稳定的反应 系统中，溶血反应与补 体的剂量依赖关系呈现 “S”形曲线 在轻微溶血和接近完 全溶血时，补体量的变
化对溶血程度的影响不 大。但在30％～70%溶血 时，补体量只要出现较 小的变动，溶血程度就 会发生较大的改变
补体活性(U/ml)=
注意事项
1．待检血清必须新鲜； 2．实验器材必须洁净；
3．加液务必准确，吸管不能混用；
4．加绵羊红细胞时应摇匀； 5. 用过的吸管等放到指定位置。
（三）方法评价与临床意义
方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体 积成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反 应温度有关 血清总补体活性的参考范围为50～100U/ml 血清总补体活性增高见于： 急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等 血清总补体活性降低见于： ①消耗增多:免疫复合物导致的补体活化和消耗增多 ,如SLE.
补体活性检测、补体参与的溶血试验
补体活性检测、补体参与的溶血试验理解：1.补体的概念和性质2.补体的三条活化途径基本原理掌握：1.血清补体总活性测定的实验原理、实验方法2.补体结合实验的实验原理、实验方法3.各种补体检测方法的临床应用一、补体性质与活化途径（一）二、补体的概念补体（Complement，C）：是一组存在于血液和组织液中，具有级联酶促反应特征、不耐热的糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充成分（二）补体系统的组成补体固有成分：如C1(q、r、s)、C2、C3……C9补体调节蛋白：如B因子、D因子、P因子、H因子补体受体：C3R，CR1，CR2等（三）补体的激活途径经典激活途径、旁路活化途径（四）补体的生物学功能1.细胞毒溶菌作用2.调理作用：C3b、iC3b、C4b3.炎症介质作用：C3a、C5a、C567生物学检测：总补体活性检测、单个补体活性检测免疫学检测：单个补体成分检测、补体受体成分检测二、血清补体总活性测定1.补体总活性测定原理反应系统的组成：抗原+Antibody->活化补体↓↓↓绵羊红细胞+溶血素+待检测补体↓溶血反应(1)溶血反应：通过经典途径或旁路途径激活的补体，作用于致敏红细胞，使红细胞表面形成若干孔，水分等进入红细胞，引起红细胞的肿胀破裂而溶血(2)CH50检测原理在溶血反应中，补体溶血程度与补体的活性相关，但非直线关系以溶血百分率为纵坐标，相应补体含量为横坐标，溶血程度对补体含量依赖呈特殊的S型曲线以50％溶血作为终点指标，比100％溶血更为敏感，这一方法称为补体50％溶血试验（CH50）(3)CH50（50% complement hemolysis）：补体总活性测定方法，以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点，故称补体50％溶血试验（CH50）2.实验材料(1)绵羊红细胞①使用等量或两倍的阿氏保存液混合，便于抗凝和储存②临用前生理盐水洗涤红细胞③使用浓度一般为2~5％(2)配制50％溶血标准管①2％SRBC悬液0.5ml+2.0ml蒸馏水使其溶解②加入2.0ml1.8％NaCl溶液校正为等渗溶液③加入2％SRBC溶液0.5ml，即为50％溶血状态(3)溶血素（抗SRBC Ab）①用SRBC免疫家兔得到兔抗SRBC血清②试验前应预先加热（56℃，30min），灭活补体③滴定溶血素的效价：产生完全溶血的最高稀释度为溶血素的效价(4)缓冲液①磷酸盐缓冲液或巴比妥缓冲液②pH应调至7.2-7.4之间③适量氯化钠保持等渗④并适量加入一些Ca2+和Mg2+(5)补体①作为待检对象：标本必须新鲜②作为主要试剂（单个补体检测）：多采用豚鼠血清，必须新鲜-70℃可保存数月，避免反复冻融存在个体差异, 三只以上血清混合使用3.CH50检测方法判定标准与计算标准：选择溶血程度与50％溶血的标准管相近的两管，以溶血程度最接近标准管的那一管定为终点管计算：CH50(U/ml）＝(1/血清用量）×稀释倍数参考范围：50-100 U/ml4.临床意义CH50主要检测的是经典途径的补体溶血活性，所反映的主要是补体9种成分的综合水平测定值过低或完全无活性，首先考虑补体缺陷，可分别检测血清中C4、C2、C3、C5等单个成份的含量三、单个补体成分的测定1.单个补体成分的检测对象主要包括：C3、C4、 C1q、B因子等2.测定方法：溶血法（检测单个补体的溶血活性）免疫化学法（测定补体含量）3.试验方法致敏SRBC+反应系统补体（缺待检成分）→不溶血致敏SRBC+反应系统补体（缺待检成分）+待检血清→溶血4.溶血法(1)原理：抗原与其特异性抗体（IgG、IgM型）结合后，可激活补体导致细胞溶解(2)组成：①试剂指示系统（致敏SRBC）②试剂补体系统（待检补体缺失）③待检血清（是否含待检补体？）(3)试剂补体系统选用先天或人为导致的缺乏某单一补体成分的动物或人血清作为试剂，如人缺C2血清、豚鼠缺C4血清、小鼠缺C5血清、兔缺C6血清等(4)应用与评价①诊断补体某单个成分缺失或其含量正常但无溶血活性的先天性补体缺陷②定性方法，检测单个补体成分③无需特殊仪器，快速，但灵敏度低，影响因素多四、补体结合试验（complement fixation test，CFT）1.反应系统的组成：抗原+Antibody->活化补体→溶血反应2.概念补体结合试验（complement fixation test，CFT）：将免疫溶血作为指示系统，用以检测另一反应系统中抗原或抗体的传统方法3.原理(1)三个系统（包括5个成分）：①反应系统：已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）②补体系统：C1-9及其缓冲液③指示系统：SRBC与相应溶血素（SRBC抗体）常预先混合形成致敏红细胞(2)补体作用无特异性，既可与反应体系中的抗原抗体复合物结合，也能与SRBCs结合(3)两个阶段：第一步：反应系统与补体系统作用第二步：指示系统（SRBCs）与剩余补体反应4.试验方法结果判定：(1)补体对照管 2U全溶，1U为全溶或略带少许RBC，0.5U应不溶(2)若0.5U补体对照管出现明显溶血，表示补体用量过多；如2U不出现溶血，表示补体用量不够(3)受检血清不溶血为阳性，溶血为阴性5.试验试剂(1)抗原和抗体的效价方法：方阵法进行滴定选择抗原与抗体二者都呈强阳性反应的最高稀释度作为抗原和抗体的效价（1单位）在正式试验中，抗原一般采用2－4单位，抗体为4个单位(2)补体效价的滴定①一般用豚鼠补体②每次试验前均应滴定③温育后，能产生完全溶血的补体最少用量确定为1个单位，正式试验中使用2个单位(3)血清标本的处理①采集血液标本后应及时分离血清，及时检验，或将血清保存在-20℃②血清在试验前应先加热56℃ 30min以破坏补体6.应用和评价(1)优点：①补体活化过程有放大效应，灵敏度较高②可用于定性或半定量检测未知抗原或抗体③试验条件要求低易于普及、结果易判断(2)缺点：①影响因素复杂，操作步骤繁琐②抗体必须为IgM或IgG五、补体测定的临床意义1.检测补体的单个成分及补体的活性测定对于机体免疫系统的功能评价，疾病的诊断与治疗等有重要意义(1)免疫性疾病①C1、C2、C3和Hf等缺陷②Ⅲ型超敏反应中C3aC5a等过敏毒素检测(2)遗传性疾病①C3缺陷导致的感染②C1抑制物缺陷与遗传性血管性水肿③I因子、H因子缺陷与肾小球肾炎等2.补体含量继发性降低的疾病(1)补体消耗增多：SLE、自身免疫性溶血性贫血、类风湿性关节炎、移植排斥反应等(2)细菌性感染，激活补体替代途径导致补体水平降低(3)大面积烧伤、大出血和肾病综合征等导致体液大量丧失(4)补体合成不足：急慢性肝炎、肝硬化、肝癌及营养不良等小结1.CH50试验的原理及方法学评价2.补体结合试验的原理及结果解释复习思考题：1.名词概念：Complement、CH50 test、CFT（Complement Fixation Test）2.思考题：请例举其他有补体参与的免疫学检测技术或方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
C1q
390
γ2
70
C9
79
α
240
C1r
C1s C2
95
85 117
β
α β1
35
35 20~30
B
D P
C1INH
95
25 220
β
α γ2
210~240
2 25
C3
C4 C5 C6 C7 C8
替代激活途径
肽聚糖、酵母多糖、脂多糖 C3
C3、C5-C9、B因子、D因子
MBL途径
MBL相关的丝氨酸蛋白酶
C2、C4 C2-C9、 MASP Ca2+ C4b2b C4b2b3b 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用
Mg2+ C3bBb C3bnBb 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用
参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为参照
结果判度:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺 乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分的量呈正比，仍以50 ％溶血为终点
参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除 某种补体成分之意。已能筛选到的血清有人 C2缺乏、 豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清 免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体 成分的检测。其中以C3、C4两成分的检测更为常见
补体理化性质
由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生 均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球蛋白 含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、D因 子含量最低 固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因子最 小。 对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10 °C条件下 活性只能保持3～4d。 多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加 剂等均可破坏补体
补体：
具酶样活性、不耐热的糖蛋白 其存在与抗原性异物的刺激无关 在正常人血清中含量相对稳定 某些疾病时，含量及其活性可发生改变
一、 补体成将其分为： 补 体固有成分、补体调节蛋白、补体受体 (complement receptor, CR)三大部分。
第十九章 补体检测及应用
第一节 概述 一、补体成分的含量与理化特性 二、补体的活化途径
第二节 补体总活性测定
第三节 单个补体成分的测定 一、免疫溶血法 二、免疫化学法
第四节 补体结合试验 一、试验原理 二、试验方法 三、方法评价 第五节 补体受体的测定 第六节 补体测定的应用 思考题 小结
第一节 概 述
2.溶血素滴定
溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化
试验前需先行加热56℃ 30min或60℃ 3min以灭活补体 溶血素有商品销售，可按标识效价稀释使用 自行制备的溶血素需进行滴定，确定使用浓度，在补体活 性测定中，大多使用2个单位。 溶血素效价稳定，一般使用3个月后再作重新滴定
第三节 单个补体成分的测定
常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和 C1酯酶抑制物等
测定方法： 免疫溶血法 （检测单个补体成分的活性） 免疫化学法（检测单个补体成分的含量） 自动化免疫散射比浊法
一、免疫溶血法
定义:是根据补体参与抗体介导溶细胞作用的级联效应特征
建立的单一补体成分检测法 指示系统:以SRBC-抗SRBC为激活物和指示系统
可测知补体总溶血活性
在适当、稳定的反应系
统中，溶血反应与补体的 剂量依赖关系呈现“S”形 曲线 在轻微溶血和接近完全 溶血时，补体量的变化对 溶血程度的影响不大，即 溶血对补体量的依赖不敏 感。但在30％～70%溶血 时，补体含量仅出现较小 的变动，溶血程度也会发 生较大的改变
溶血程度与补体含量的关系
（一）CH50测定法的原理
应用绵羊红细胞（sheep red blood cell, SRBC）和其相应
的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径的指示物
和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊红细胞溶解， 当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和 活性相关。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系， 测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，
3.稀释缓冲液 4. 50%溶血标准管 5. 50%溶血总补体值的计算
（三）方法评价与临床意义
方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积 成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温 度有关 总补体活性的参考范围为50～100U/ml CH50增高见于： 急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等 CH50降低见于： 系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎 、 急性肾小球肾炎等
（二）CH50测定方法
1.红细胞浓度的调整
绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或 用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使 用前，调制成2%～5% SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化，
可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm 波长处测定吸光值以调整红细胞浓度。
190
180 190 128 120 163
β1
β2 β2 β2 β2 γ1
1300
430~600 75 60 55 200
150
1100 93 159 88
α
180
250
C4bp I因子 H因子 S因子
β β α
50 400~480 500
二、补体的活化途径
经典途径
经典激活途径
激活物质 起始分子 参与补体成分 所需离子 C3转化酶 C5转化酶 生物学作用 抗原抗体复合物 C1q C1、C4、C2、C3、C5C9 Ca2+、Mg2+ C4b2b C4b2b3b 参与特异性免疫的 效应阶段,感染后期 发挥作用
第二节 补体总活性测定
补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示，以50%溶血 为判断终点，称为CH50 补体活化途径不同，应用不同的激活物可活化不同的补体 途径 基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目） 应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验常规） MBL途径活性测定的可靠方法暂未建立