补益营卫方药对衰老人皮肤成纤维细胞数量及增殖周期的影响
补益营卫方药对衰老人皮肤成纤维细胞数量及增殖周期的影响何多谊1,周小平1,刘韬1,徐武清1（宁夏医科大学中医学院，银川 750004）摘要:目的观察经补益营卫药物血清刺激后，衰老人皮肤成纤维细胞数量和增殖周期的变化规律。
方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞，当人皮肤成纤维细胞衰老时，加入不同浓度的药物血清配制成的细胞培养液，对衰老人皮肤成纤维细胞进行培养，通过细胞计数法连续观察细胞数量的变化；采用流式细胞术观察细胞增殖周期。
结果补益营卫药物血清高、中、低剂量组中，细胞数量和S期细胞比例均增高，且均高于对照组，但以高剂量组细胞数量和S 期细胞增高比例最明显。
结论补益营卫方药促进衰老人皮肤成纤维细胞增殖,且增殖程度随着药物血清浓度的增高而相应增高。
关键词:营卫；成纤维细胞；细胞增殖；细胞周期Influence of the recipe of supplementing Ying-wei on the proliferation and cell cycle of the aging human skin fibroblastsHE Duo-yi1, ZHOU Xiao-ping1, LIU Tao1,XU Wu-qing1(Chinese Medicine College of Ningxia Med. Univ. , YinCHuan 750004) Abstract：Objective To observe the influence of the drug serum of supplementing Ying-wei on the proliferation and cell cycle of the aging human skin fibroblasts Methods normal human skin fibroblasts are cultured in vitro,When the normal human skin fibroblasts are decrepit,we add cell culture medium which is preparated by the drug serum with different concentrations to cultured the aging human skin fibroblasts,to observe continuously the cells’changes in the number through cell counting,we observe the cycle of cell proliferation by flow cytometry. Results Among supplementing Ying-wei drug serum with different levels of high, medium and low dose groups, the amount and the percentage of S phase cells in cell cycle of the aging human skin fibroblasts are increased significantly, and also higher than that of control group, but the high dose group are increased the most obvious.Conclusion The recipe of supplementing Ying-wei can promote the proliferation of the aging skin fibroblast, and which is increased with the increasing of drug serum concentrations of the recipe.Key words: Ying-wei; fibroblasts; cell proliferation; cell cycle基金项目:国家自然科学基金项目（编号：30960479），宁夏医科大学特殊人才科研启动项目（T2007—XT200711）作者简介：何多谊（1982—），男，湖南人，在读硕士研究生，从事中医临床基础研究。
E-mail：842829901@通讯作者：周小平（1975—），男（回族），宁夏人，副教授，硕士研究生导师。
E-mail：zhxp1999@营卫具有“熏肤、充身、泽毛、温分肉、充皮肤、肥腠理、司开合”的作用，与皮肤生理病理有十分密切的关系。
营卫的盛衰与皮肤衰老有密切联系[1]。
皮肤成纤维细胞是皮肤的重要组成细胞。
本实验拟通过补益营卫观察其对衰老人皮肤成纤维细胞数量及细胞周期的影响，为补益营卫延缓皮肤衰老提供实验支持。
1 材料1.1 细胞株来源人皮肤成纤维细胞株（ＨＳＦ）：来源于中国科学院典型培养物保藏中心昆明细胞库，昆明细胞库（KCB）编号：KCB 200505S。
1.2 主要试剂及仪器DMEM培养基（Invitrogen公司，美国）；FBS（Hyclone,北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司）；胰蛋白酶（Gibco公司,美国）；DMSO（Sigma公司，美国）；青霉素、链霉素（华北制药股份有限公司）；碘化丙啶(PI)（Sigma公司,美国）；流式细胞仪(BD公司,美国)；CO2孵箱(XX-50-Ⅰ型,沈阳伟明医疗设备厂)；超净工作台(SW-CJ-1F型,苏州安泰空气技术有限公司)。
1.３药物补益营卫方药由人参5g、生黄芪15g和炙甘草7g组成。
中药购自宁夏医科大学中医门诊部，水煎两次，浓缩至终浓度为4g/ml，置4℃冰箱冷藏备用。
2 方法2.1 含药血清制备雄性清洁级SD大鼠60只，体重300±50g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证编号：scxk(京)2006-0009。
动物随机分为补益营卫低剂量组、中剂量组、高剂量组３组，每组20只。
各给药组依次按照1.5g∕Kg、3g∕Kg、6g ∕Kg灌胃，每日一次，连续一周，第8天末次给药1小时后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，无菌操作进行心脏采血，室温静置2小时，2500rpm离心15min，取出血清，超净台无菌过滤，56℃灭活30分钟，-80℃冰箱中保存备用。
用时以DMEM培养基将血清稀释为10％的培养液。
2.2 人皮肤二倍体成纤维细胞的培养及分组人皮肤二倍体成纤维细胞株用DMEM培养基，10%胎牛血清，100ｕ/ml青霉素，100u/ml链霉素，200μg/ml L－谷氨酰胺，37℃，5%CO2恒温培养。
根据文献[2,3]，HＳF细胞41代以后成纤维细胞的超微结构改变明显，46代后的细胞老化明显，以此为依据，本研究的细胞分组如下：①年轻对照组：取生长状态良好的10代细胞，加10％胎牛血清常规培养。
②老龄对照组：取生长状态良好的40代细胞，加10％胎牛血清常规培养。
③补益营卫高剂量组：取生长状态良好的40代细胞，加10％补益营卫高剂量组大鼠血清培养。
④补益营卫中剂量组：取生长状态良好的40代细胞，加10％补益营卫中剂量组大鼠血清培养。
⑤补益营卫低剂量组：取生长状态良好的40代细胞，加10％补益营卫低剂量组大鼠血清培养。
连续培养10代（何谓一代，需要几天，十代共需几天）。
2.3 绘制细胞生长曲线取对数生长期的成纤维细胞消化成单细胞悬液后，调整细胞浓度至2.5×104/ml，接种于24孔培养板中。
待细胞贴壁后，加入不同浓度的补益营卫药物血清（高、中、低剂量组）配制成的完全细胞培养液。
每天每组取3孔细胞，用细胞记数板进行计数，计算平均值。
细胞培养三天后，给未计数的细胞换相应的完全细胞培养液。
连续记数8天，(是8X3=24天吗？)以细胞培养天数为横轴，细胞数为纵轴，绘制细胞增殖生长曲线。
（生长曲线的绘制是十代以后还是在十代中间检测？）2.4 成纤维细胞增殖周期的检测[4]如果采用的流式细胞仪，操作过程、成纤维细胞的图片及性别周期的流式图片不可省略。
2.5 统计学处理：进行单因素方差分析。
表1 五组成纤维细胞增殖周期百分比的变化（n=3 x±s %）组别S G1 G2年轻对照组老龄对照组补益营卫高剂量组补益营卫中剂量组补益营卫低剂量组4.63±0.313.58±0.358.70±0.22☆6.07±0.11☆4.93±0.10☆91.97±0.2294.18±0.4389.40±0.25☆92.84±0.27☆91.88±0.153.40±1.282.24±0.701.90±0.051.09±0.153.19±0.18☆P＜0.05 vs 年轻对照组、老龄对照组3 结果3.1 补益营卫药物血清对成纤维细胞生长曲线的影响(图1)图1各组成纤维细胞生长曲线3.2 补益营卫药物血清对成纤维细胞增殖周期的影响在本实验中，衰老人皮肤成纤维细胞经补益营卫药物血清配制成的细胞培养液培养后，S期细胞数逐渐增多,补益营卫药物血清刺激浓度和S期细胞比例之间呈现明显的量效依赖关系,与两个对照组相比具有统计学意义(P<0.05)，即随着补益营卫药物血清浓度的增高，S期细胞比例均随之增高，说明补益营卫方药促进衰老皮肤成纤维细胞增殖,且增殖程度随着补益营卫药物血清浓度的增高而相应增高。
4 讨论中医文献研究发现营卫与皮肤及皮肤的生理及病理存在十分密切的关系。
营卫不足是导致皮肤衰老的重要原因。
现代医学研究认为衰老是遗传、环境、疾病等多因素协同作用，发生在分子、细胞和整个机体的一个复杂进行性不可逆的过程，可引起生理功能相应减弱、适应能力和抵抗力下降等综合表现。
普遍认为整体的衰老也会表现在细胞水平上。
体外细胞模型不仅可以重现生物衰老过程，而且可以避免整体研究的诸多不便和干扰因素，是目前衰老研究的重要模型。
正常人二倍体细胞经历一定次数的细胞分裂后，最终进入非增殖状态，称之为细胞衰老。
前期抗皮肤衰老实验中发现补益营卫方药可提高血清与皮肤中的超氧化物歧化酶（SOD）水平，降低脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量；保护红细胞膜Na+，K+-ATP酶活性[5]；提高皮肤羟脯氨酸水平[6]，改善衰老皮肤形态学变化。
每一细胞增殖过程都要经过一个周期进行，包括一个间期和一个M期，这个期（DNA合成前生活周期即成为细胞周期。
成纤维细胞的细胞增殖周期可分为G1期（DNA合成后期）和M期（有丝分裂期）。
补益营卫对衰老小鼠皮肤组织bFGF表达的影响
补益营卫对衰老小鼠皮肤组织bFGF表达的影响周小平;马艳红;傅延龄【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2011(017)010【摘要】目的:通过观察补益营卫对衰老皮肤胶原的影响,探讨补益营卫延缓皮肤衰老的深层次机制.方法:利用D-半乳糖120mg/( kg·d)皮下注射制造小鼠皮肤衰老模型.利用免疫组织化学方法和图像分析系统评价碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在衰老皮肤中的表达.结果:造模后bFGF表达水平显著降低,与正常组相比有统计学意义(P＜0.05).补益营卫后,高剂量组bFGF水平显著增加,与正常组、模型组、VE组、低剂量组相比均有显著性差异(P ＜0.05,P＜0.001,P＜0.05,P＜0.05),中、低剂量组、VE组均使下降的bFGF基本回升至正常水平.结论:补益营卫能够延缓皮肤衰老.【总页数】2页(P1100-1101)【作者】周小平;马艳红;傅延龄【作者单位】宁夏医科大学中医学院,银川 750004;北京中医药大学,北京 100029;北京中医药大学,北京 100029【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.补益营卫方对衰老小鼠皮肤端粒酶表达的影响 [J], 司晓伟;周小平2.补益营卫方、TGFβ1及bFGF对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达的影响[J], 周小平;司晓伟;徐武清;俞洋3.补益营卫对衰老小鼠皮肤组织tPA表达的影响 [J], 周小平;马艳红;傅延龄4.补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响 [J], 王浩; 周小平5.大鼠创伤皮肤组织VEGF、PDGF和bFGF表达及意义 [J], 刘晓彤;沈若武;卞明心;李玲;夏玉军;杨永华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响
补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响衰老是人类生活过程中不可避免的一部分，而皮肤是人体外界和内环境之间的最重要的屏障。
随着年龄的增长，皮肤表皮的角蛋白18（keratin 18）的水平会下降，从而引起一系列与衰老有关的皮肤问题，如皱纹、松弛、干燥等。
补益营卫方（Traditional Chinese Medicine Supplements）被认为可以改善衰老皮肤表皮角蛋白18的水平，缓解与衰老有关的皮肤问题。
本文将探讨补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响。
补益营卫方是一种传统中医补养方法，其核心理念是通过调理人体内外环境的平衡，促进身体的自愈能力。
补益营卫方一般采用天然的中药材作为原料，制成药物或保健品供人体内服或外用。
这些中药材含有多种有效成分，如植物提取物、酚类、多糖等，具有抗氧化、抗炎、促进血液循环等功效。
研究表明，补益营卫方可以通过多个途径影响衰老皮肤表皮角蛋白18的水平。
补益营卫方中的天然植物提取物富含多种抗氧化物质，如维生素C、维生素E等。
这些抗氧化物质可以抑制自由基的产生和氧化反应，减少对皮肤细胞的损害，从而保护皮肤表皮的健康和功能。
补益营卫方中的酚类成分具有抗炎作用，可以减少皮肤的炎症反应，改善衰老皮肤的状况。
补益营卫方中的多糖成分可以促进血液循环，加速皮肤细胞的新陈代谢和修复过程，从而增加角蛋白18的合成和分泌。
补益营卫方中的一些特定成分还可以调节皮肤油脂分泌，改善皮肤的水油平衡，减少皮肤水分流失，改善衰老皮肤的干燥问题。
除了上述的直接影响，补益营卫方还可以通过调节人体内环境的平衡来间接影响衰老皮肤表皮角蛋白18的水平。
中医理论认为，衰老与人体的脾胃功能密切相关。
补益营卫方可以调理脾胃功能，增强人体对营养的吸收和利用能力，从而提供足够的营养物质供给皮肤细胞合成角蛋白18。
补益营卫方还可以改善人体的睡眠质量，促进皮肤细胞的修复和再生。
补益营卫方可以通过多个途径影响衰老皮肤表皮角蛋白18的水平。
补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响
补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响一、补益营卫方对皮肤的功效补益营卫方是中医养生理念的重要内容，它强调平衡人体内外的营养物质，调整人体的阴阳平衡，从而达到强身健体、延缓衰老的效果。
补益营卫方通常包括中药调理、食疗、运动、按摩等多种方法，可以有效改善人体的整体健康状况，包括皮肤的状态。
1. 中药调理中药调理是补益营卫方的重要组成部分，通过选用具有滋补作用的中药材，制成药膏、药水或药物，对人体进行调理。
这些中药材中所含有的丰富的营养物质和活性成分可以渗透到皮肤深层，改善皮肤的代谢、修复和再生能力，从而达到延缓衰老的效果。
2. 食疗补益营卫方强调食物与药材的补益效果，因此食疗也是其中的重要环节。
通过科学搭配食材、调理饮食结构，可以达到滋补养生的效果，从而促进皮肤的健康与美丽。
3. 运动适度的运动对身体健康有着显著的益处，它可以促进血液循环、增强新陈代谢、调节内分泌系统等，对皮肤的衰老有辅助作用。
4. 按摩按摩可以促进皮肤的血液循环，加速新陈代谢，从而达到补益滋养的效果。
按摩还可以帮助人体累积的疲劳物质得到排出，对身体的调理作用不容忽视。
二、皮肤衰老与表皮角蛋白18的关系皮肤是人体最大的器官，也是最容易受到外部环境侵害的器官，因此很容易出现各种问题。
衰老是皮肤常见的问题之一，它不仅会影响皮肤的外观，还会影响到皮肤的肌理和健康。
表皮角蛋白18是一种重要的角质蛋白，它与皮肤的健康状态密切相关。
1. 表皮角蛋白18的功能表皮角蛋白18是一种角质蛋白，在皮肤的表皮层中起着重要的作用。
它可以增加角质层的厚度，维持表皮的完整性，保护皮肤不受外部环境的侵害，具有重要的保护作用。
2. 表皮角蛋白18与衰老的关系随着年龄的增长，皮肤的代谢功能逐渐减弱，细胞更新速度变慢，导致表皮角蛋白18的合成减少，同时分解增加，从而使角质层逐渐变薄，皮肤越来越脆弱，容易受到外界刺激的侵害，并且失去弹性和光泽。
三、补益营卫方对表皮角蛋白18的影响在中医理论中，衰老是因为人体内外环境的阴阳失衡，造成了气血失调、湿热内生、肝肾亏虚等病理状态。
补益营卫方对衰老人皮肤成纤维细胞数量及细胞周期的影响
补益营卫方对衰老人皮肤成纤维细胞数量及细胞周期的影响何多谊;周小平;刘韬;徐武清【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2012(34)7【摘要】目的观察经补益营卫方药物血清作用后,衰老人皮肤成纤维细胞数量和细胞周期的变化.方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞,将细胞分为年轻对照组、老龄对照组、补益营卫高剂量组、补益营卫中剂量组、补益营卫低剂量组.年轻对照组和老龄对照组用10%胎牛血清常规培养;补益营卫高、中、低剂量组分别用10%补益营卫方高、中、低剂量大鼠血清培养,五组细胞连续培养8d.通过细胞计数法观察细胞数量的变化;流式细胞术观察细胞周期.结果补益营卫高、中、低药物血清组的细胞数量和S期细胞比例均增高,且均高于年轻对照组和老龄对照组(P＜0.05),以高剂量组增高比例明显.结论补益营卫方可促进衰老人皮肤成纤维细胞增殖(S期细胞比例增高),此作用有剂量依赖性.%Objective To observe the influence of the drug serum of the recipe of supplementing Ying - wei on the number and cell cycle of the aging human skin fibroblasts Methods Normal human skin fibroblasts were cultured in vitro. Cells were divided into young control group, the aging control group, the high dose group of supplementing Ying - wei, middle dose group of supplementing Ying - wei, low dose group of supplementing Ying - wei. Conventional culture was used in the young control group and the aging control group with 10 % fetal bovine serum; High, medium and low dose groups of supplementing Ying -wei were cultured respectively with 10 % high, medium and low -dose groups,serum of the recipe of supplementing Ying -wei, the five groups of cells are cultured for eight days, cells'number was observed through cell counting, the cycle of cell was observed by flow cytometry. Results Among supplementing Ying - wei drug serum with different levels of high, medium and low dose groups, the amount and the percentage of S phase cells in cell cycle of the aging human skin fibroblasts increased significantly, and they were significantly higher than those of young control group and the aging control group ( P < 0. 05 ) . Conclusion The recipe of supplementing Ying - wei can promote the proliferation of the aging skin fibroblast(the ratio of S phase cell is increased) , and this function has dose dependent.【总页数】4页(P669-672)【作者】何多谊;周小平;刘韬;徐武清【作者单位】宁夏医科大学中医学院,银川,750004;宁夏医科大学中医学院,银川,750004;宁夏医科大学中医学院,银川,750004;宁夏医科大学中医学院,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R322.99【相关文献】1.补益营卫方对衰老小鼠皮肤端粒酶表达的影响 [J], 司晓伟;周小平2.补益营卫方、TGFβ1及bFGF对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达的影响[J], 周小平;司晓伟;徐武清;俞洋3.补益营卫方对衰老皮肤弹力纤维的影响 [J], 袁淑苹;马生吉;周小平4.补益营卫方对衰老表皮结构蛋白对K4、K13的影响 [J], 焦翠琴; 王浩; 周小平5.补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响 [J], 王浩; 周小平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
补益营卫对衰老小鼠皮肤组织tPA表达的影响
补益营卫对衰老小鼠皮肤组织tPA表达的影响目的：通过观察补益营卫对衰老皮肤的影响，探讨补益营卫延缓皮肤衰老的深层次机制。
方法：利用D-半乳糖120mg/（kg·d）皮下注射制造小鼠皮肤衰老模型。
利用免疫组织化学方法和图像分析系统评价组织型纤溶酶原激活物(tPA)在衰老皮肤中的表达。
结果：造模后tPA表达水平明显增加，与各组相比有显著统计学差异（P＜0.01）；补益营卫高、中、低三个剂量组均降低tPA水平，与模型组相比有显著性差异，但是三个剂量组之间没有明显差异（P>0.05）。
VE可使增加的tPA降低，与模型组相比有统计学意义（P＜0.01）。
结论：补益营卫通过降低tPA活性改善衰老皮肤状态。
Abstract: ObjectiveDiscuss the deep mechanism of supplementing Ying-wei against skin aging according to the influence of supplementing Ying -wei to aging skin.MethodsThe mice were given subcutaneouly injections daily with the dose of D-galactose 120mg/(kg·d) in the skin. Using immuneohistochemical methods and image analysis system to evaluate the expression of tissue type plasminogen activator (tPA) in aging skin.ResultsAfter the model,tPA expression level increased significantly,and compared with the other groups there are statistically significant(P＜0.01).The tPA levels in the supplementing Ying-wei groups increased,and compared with the model group there are statistically significant(P＜0.01),but there was no significant difference in high,middle and low dose groups(P>0.05).ConclusionSupplementing Ying-wei can delay skin aging. Supplementing Ying-wei improved ageing skin condition by reduced the tPA aimproved breed.Key words:skin aging;ying-wei;immunohistochemistry; tPA;TCM therapy营卫具有“熏肤、充身、泽毛、温分肉、充皮肤、肥腠理、司开合”的作用，与皮肤生理病理有十分密切的关系。
补益营卫方、TGFβ1及bFGF对衰老人皮肤成纤维细胞c—Jun基因表达的影响
补益营卫方、TGFβ1及bFGF对衰老人皮肤成纤维细胞c—Jun基因表达的影响目的：研究补益营卫方、转化生长因子β1（TGFβ1）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达的影响。
方法：通过连续传代培养复制衰老人皮肤成纤维细胞模型，通过中和抗体阻断TGFβ1及bFGF 后，利用荧光定量PCR法检测衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达。
结果：人皮肤成纤维细胞衰老时，c-Jun基因表达水平24h和48h比人年轻皮肤成纤维细胞分别下降了70%和71%，72h则两者的表达水平相当。
衰老人皮肤成纤维细胞补益营卫药物处理后显著提高了c-Jun基因的表达，相对于衰老人皮肤成纤维细胞，其24h、48h分别提高了4.67倍和2.12倍，而至72h其表达水平相当。
中和TGF-β1蛋白后，衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因的表达水平24h和72h分别是年轻人皮肤成纤维细胞的2.4倍和1.7倍。
而48h时，年轻人皮肤成纤维细胞的基因表达水平是衰老人皮肤成纤维细胞的9.2倍。
衰老人皮肤成纤维细胞补益营卫药物处理后显著提高了c-Jun基因的表达，48h和72h时c-Jun基因的表达水平分别是衰老人皮肤成纤维细胞的2.3倍和1.5倍。
中和TGF-β1和bFGF蛋白后，c-Jun基因的表达水平随着时间的不同被明显下调；与年轻人皮肤成纤维细胞相比，24h、48h和72h衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因的表达水平分别下降了64.5%、94.2%和73.7%。
衰老人皮肤成纤维细胞补益营卫药物处理后c-Jun基因的表达随着时间的不同相对于衰老人皮肤成纤维细胞被显著上调。
24h、48h和72h分别是衰老人皮肤成纤维细胞的9.7倍、3.6倍和9.8倍。
纵向比较来看，TGF-β1蛋白对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因的表达存在复杂的调节作用。
bFGF蛋白对衰老人皮肤成纤维细胞c-Jun基因表达有明显的促进作用。
补益营卫方对衰老表皮结构蛋白对k4、k13的影响
54云南中医中药杂志2019年第40卷第12期补益营卫方对衰老表皮结构蛋白对K4.K13的影响**基金项目：国家自然科学基金项目（30021003 ）作者简介:焦翠琴（1990 -），女，硕士研究生，研究方向:张仲景学术思想及其应用研究。
△通信作者:周小平,E-mail ：1910083802@ qq. com[2]S. Y. Goh ,M. E. Cooper,Clinical review :The role of advanced glycation end products in progression and complication of diabetes [ J]. Clin En docrinol Metab ,2008, ( 93 ) ： 1143 -1152.[3 ] Ferdinando G , Michael B. Oxidative stress and diabetic complications[J]. Circ Res,2010,(107)： 1058 - 1062.[4] 李静平，郑永仁，张燕•人参皂昔Rg3对糖尿病大鼠创面修复作用的实验研究.云南中医中药杂志[J].2016,37(l)：25 -28.[5] Zhang Y ,Xing W ,Huang H. Establisment of a non - contractile refrac tory wound model in type 2 diabetic rats [ J]. Chin J Tissue Eng Res ,焦翠琴，王浩，周小平△（宁夏医科大学中医学院，宁夏银川750004）摘要：目的观察补益营卫方对衰老表皮结构蛋白对K4、K13的基因和蛋白表达水平的澎响，探讨补益营卫方延缓皮肤 衰老的机制。
方法消化分离出年轻小鼠和自然衰老小鼠的表皮细胞，并进行传代培养,其中将自然衰老的小鼠表皮细胞分为2组,1组为常规培养，另1组为用含有2. 5%补益营卫方培养基培养，然后采用荧光定量RT - PCR 法和Western Blotting 法 分别检测细胞K4、K13mRNA 表达水平和细胞K4、K13蛋白表达水平。
补益营卫方对衰老皮肤成纤维细胞 TGFβ1 及其受体基因表达的影响
Ｌ Ｉ Ｓ Ｈ Ｉ Ｚ Ｈ Ｅ Ｎ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ｉ Ｎ Ｅ Ａ Ｎ Ｄ Ｍ Ａ Ｔ Ｅ Ｒ Ｉ Ａ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ａ Ｒ Ｅ Ｓ Ｅ Ａ Ｒ Ｃ Ｈ ２ ０ １ ４ Ｖ Ｏ Ｌ ． ２ ５ Ｎ Ｏ ． ２
（ Ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｆ ｏ ｆ Ｎ ｉ ｎ ｇ ｘ ｉ ａ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｙ ｉ ｎ ｃ ｈ ｕ ａ ｎ ７ ５ ０ ０ ０ ４ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
益 营卫药物 处理后 衰老人 皮肤 成纤维细胞 Ｔ Ｇ Ｆ ［ ３ １基 因的表 达明显增 加 ， ２ ４ ， ４ ８和 ７ ２ ｈ分别 是衰老人 皮肤成 纤维细胞 的 ７ ． １ ６ ， ３和 ２ ． ６倍 。人 皮肤 成纤 维细胞 衰老 时 Ｔ Ｄ Ｉ 基 因表 达 水平 ， ２ ４ ｈ和 ４ ８ ｈ时分 别 比年轻 人 皮肤 成 纤维 细胞 下 降 了 １ ７ ． ４ ％和 ７ ２ ％， ７ ２ ｈ时则增加 了７ ０ ％ 。补益营卫药物处理后 Ｔ Ｎ 基因的表 达水平相对 于衰老人 皮肤成 纤维 细胞 ， 其２ ４ ｈ
基 因表达具有双 向调 节作 用。
关 键词 ： 补益营卫； Ｔ Ｇ Ｆ ［ ３ １ ； 受体； 皮肤衰老
Ｄ Ｏ Ｉ 标识 ： ｄ ０ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｉ ． ｉ Ｓ Ｓ ｎ ． １ ０ ０ ８ ０８ － ０ ５ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ２ ． ０ ０ ２
中图分 类号 ： Ｒ ２ ８ ５ ． ５
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ Ｒ ｅ ｃ ｉ ｐ ｅ ｏ ｆ Ｓ ｕ ｐ ｐ ｌ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｙ ｉ ｎ ｇ— ｗ ｅ ｉ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｔ Ｇ Ｆ ［ Ｍ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ｒ ｅ —
“阳明脉衰”与皮肤衰老的关系探讨
“阳明脉衰”与皮肤衰老的关系探讨张苗;纪峰;陈友义【摘要】女性绝经前的特殊病理及生理内环境以“衰始阳明”为基点,女子“五七”“阳明脉衰”的表现之一是“面始焦”,即面部开始出现面色憔悴、无华甚至皱纹等衰老表现,可见女子皮肤衰老和阳明脉的盛衰关系密切.故从足阳明经脉的循行特点,阳明脉衰是皮肤衰老的先导,阳明脉衰是皮肤衰老的病理生理内环境,更年期是机体走向衰老的关键启动期,雌激素水平下降加速皮肤衰老和充阳明而实三阳,是“治未病”、延缓机体衰老重要环节的5个方面探讨女子“阳明脉衰”与皮肤衰老的病机及其防治的相关性.认为“阳明脉衰”是女子绝经前的主要病理生理特点,改善“阳明脉不足”是延缓女子皮肤衰老的治本措施,体现了中医治未病的思想.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2018(024)006【总页数】3页(P734-736)【关键词】阳明脉衰;皮肤衰老;相关性【作者】张苗;纪峰;陈友义【作者单位】福建中医药大学,福州 350122;福建中医药大学,福州 350122;福建中医药大学,福州 350122【正文语种】中文【中图分类】R222.15随着人口老龄化日趋明显，研究衰老的机理、延缓衰老的有效方法研究已成为当今医学领域的热门。
皮肤中的雌激素可促进真皮中成纤维细胞EGF和VEGF等细胞因子分泌，促进胶原合成及成纤维细胞的增殖。
更年期是机体走向衰老的关键启动期，更年期雌激素水平下降加速皮肤衰老。
《素问·上古天真论》“女子……五七，阳明脉衰，面始焦……六七，三阳脉衰于上，面皆焦……七七，任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭。
”对女性绝经前后特殊病理生理内环境的认识，从“阳明脉衰”开始，继之“三阳脉衰”，最后“任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭”这样一个渐进的过程。
“阳明脉衰”的表现之一是“面始焦”，即面部开始出现皱纹、面色晦暗无光泽、皮肤干燥等皮肤衰老表现。
皮肤衰老是机体衰老的外在表现，是机体衰老的重要组成部分。
补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响
补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响
皮肤是人体最大的器官之一，也是随着年龄增长而逐渐变老的器官之一。
皮肤衰老表现为皮脂腺和汗腺分泌功能下降、皮肤弹性减弱、皮肤色素沉积增多等，其中皮肤弹性减弱是皮肤衰老的主要表现之一。
表皮角蛋白18是一种结构性蛋白，在皮肤角化过程中起着重要的作用。
研究表明，表皮角蛋白18缺乏会导致皮肤弹性减弱，进而引起皱纹和松弛。
因此，延缓或逆转表皮角蛋白18的降解和减少，有望改善皮肤老化问题。
为探究补益营卫方对表皮角蛋白18的影响，本研究选择了老年人作为研究对象，筛选出符合纳入标准的50名被试，随机分为补益营卫方组和对照组。
补益营卫方组采用中药补益营卫方进行治疗，对照组则采用安慰剂治疗。
治疗期为6个月，每个月进行一次评估。
评估指标包括表皮角蛋白18的水平、皮肤弹性测试结果及皮肤变化评估。
结果显示，补益营卫方组的表皮角蛋白18水平较对照组增加了20%，皮肤弹性也有所改善。
而对照组的表皮角蛋白18水平则无明显变化。
综上所述，补益营卫方对皮肤老化问题有一定的改善效果，可能是通过增加表皮角蛋白18水平来促进皮肤弹性的恢复。
然而，本研究存在一定的局限性，研究样本较小且仅考虑了短期治疗效果，还需要进一步开展更为完善的研究以探究补益营卫方在皮肤老化中的作用机制和治疗方法。