【CN109943539A】一种高亮表达红色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法和应
蛋白质的曙红Y-中性红逆向能量转移荧光法测定
蛋白质的曙红Y-中性红逆向能量转移荧光法测定刘保生;薛春丽;王晶;吕云开【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2009(28)3【摘要】在pH 2.35的B-R缓冲溶液中,酸性染料曙红Y(EY)与碱性染料中性红(NR)之间由于静电吸引能够发生有效的能量转移,使能量受体NR荧光增强,能量给体EY的荧光猝灭.在该体系中加入人血清白蛋白(HSA),由于竞争作用使得HSA的加入破坏了EY-NR间的能量转移,产生了明显的逆向反应,并且生成HSA-EY络合物,利用该络合物的荧光增加强度与HSA含量间的线性关系建立了一种测定微量血清蛋白的新方法.结果表明,血清蛋白工作曲线线性范围为0.6～12.0 mg/L;方法检出限为0.25 mg/L;6次平行测定相对标准偏差为1.94%～4.58%;回收率为96%～105%.该方法的稳定性好、选择性高,直接用于人血清试样中总蛋白含量的测定,实验结果与常用的双缩脲法基本一致.【总页数】4页(P345-348)【作者】刘保生;薛春丽;王晶;吕云开【作者单位】河北大学,理化分析中心,药物化学与分子诊断教育部省部共建重点实验室,河北,保定,071002;河北大学,理化分析中心,药物化学与分子诊断教育部省部共建重点实验室,河北,保定,071002;河北大学,理化分析中心,药物化学与分子诊断教育部省部共建重点实验室,河北,保定,071002;河北大学,理化分析中心,药物化学与分子诊断教育部省部共建重点实验室,河北,保定,071002【正文语种】中文【中图分类】O657.3;Q51【相关文献】1.基于对曙红Y和罗丹明B之间的能量转移反应的荧光光谱法测定痕量锰 [J], 崔英;张楠2.曙红Y-藏红T能量转移荧光猝灭法测定痕量锰 [J], 崔英;周庆生3.水中痕量铜的中性红－曙红Y同步荧光猝灭法检测 [J], 肖锡林;薛金花;廖力夫;贺冬秀;王芳;袁金斌;何博4.水中痕量镉的曙红Y-中性红能量转移荧光猝灭法测定 [J], 肖锡林;薛金花;廖力夫;肖明春;杜可杰;何博;邓昌爱5.曙红Y-藏红T能量转移荧光猝灭法测定亚硝酸盐 [J], 崔英;谢国红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种用于Red同源重组的正反筛选表达盒的构建及其反向筛选性能分析
一种用于Red同源重组的正反筛选表达盒的构建及其反向筛选性能分析刘金泽;刘云惠;余子豪;李永霞;王明晓;张远星;李统战;李倩文;余旭平【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2018(040)010【摘要】为建立能够应用于大肠杆菌基因无痕敲除的方法,本研究分别从大肠杆菌TG1基因组和pKD13质粒中扩增出链霉素敏感基因(strs,即rpsL基因)和卡那抗性基因(kanR),采用重叠延伸PCR方法将strs基因和kanR基因拼接,并将拼接片段分别克隆于pMD 18-T和pBAD33载体中,再以重组载体为模板,以带有flgK基因同源臂的引物扩增获得PlacsgS-kanR打靶片段和ParastrS-kanR打靶片段,然后结合Red重组技术构建了相应的flgK基因敲除菌株placSK-△flgK/TOP10和paraSK-△flgK/TOP10,并通过链霉素最小抑菌浓度(MIC)试验检测两种筛选系统的反向筛选性能.结果显示,野生型TOP10菌株、placSK-△flgK/TOP10菌株和paraSK-△flgK/TOP10菌株的链霉素MIC值分别为8 000 μg/mL、2 000 μg/mL 和500 μg/mL.表明采用两种筛选系统构建的敲除菌株均有一定的链霉素敏感表型,具有反向筛选的能力,但含Para启动子的筛选系统反向筛选性能更好.本研究建立了可用于大肠杆菌Red重组技术的反向筛选系统,为获得更有效的Red重组筛选工具提供了依据.【总页数】6页(P902-907)【作者】刘金泽;刘云惠;余子豪;李永霞;王明晓;张远星;李统战;李倩文;余旭平【作者单位】浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058【正文语种】中文【中图分类】S852.61【相关文献】1.一种用于上调内源性人SOD1表达多肽筛选的随机文库及细胞系的构建 [J], 宋方丽;史晓兰;黄劭;刘亚伟;姜勇2.一种酿酒酵母同源重组载体的筛选 [J], 郑文岭;江晓曦;崔东;赵慧;马文丽3.小鼠LRP16基因打靶载体的构建和同源重组型胚胎干细胞筛选 [J], 伍志强;韩为东;赵亚力;司艺玲;母义明;孟元光;Masatoshi Nomura4.中国流行株HIV-1B/C重组亚型包膜蛋白真核表达载体的构建及稳定表达细胞株的筛选 [J], 马红霞;于湘晖;姜春来;吴永革;孔维5.一种用于穿透多肽筛选的随机文库的构建及筛选 [J], 刘瑜;刘亚伟;李海玉;刘靖华;邓鹏;姜勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
【国家自然科学基金】_red重组系统_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801
科研热词 推荐指数 辅助噬菌体 1 蛋白质表达 1 缺失突变体 1 福氏2a志贺氏菌2457t株 1 核定位信号 1 感染特性 1 定点突变 1 大肠杆菌o157:h7 1 大肠杆菌 1 噬菌体 1 同源重组系统 1 包装菌株 1 φ min27(△stx::cat) 1 stx2噬菌体 1 rrna 操纵元 1 red重组系统 1 red蛋白 1 red同源重组 1 dna,重组 1 argt蛋白 1 16s rrna基因 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
科研热词 报告系统 基因敲除 位点特异性重组 nih3t3细胞系 除虫φ c31整合酶 σ -32 λ -red setd sefa sef14茵毛 rpoh
科研热词 推荐指数 基因敲除 3 红色荧光蛋白 2 琥珀酸 2 慢病毒载体 2 大肠杆菌 2 red重组系统 2 重组蛋白 1 遗传载体 1 载体构建 1 转座重组 1 血管内皮细胞生长因子 1 腺病毒科 1 肠出血性大肠杆菌o157 1 翻译后修饰基因 1 细胞筛选 1 细胞分化 1 突变株 1 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 1 磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶 1 瘦素 1 甲状腺相关眼病 1 淋巴瘤 1 次黄嘌吟-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 1 无痕敲除 1 抗血清 1 志贺菌 1 弗氏 1 大鼠 1 大肠杆菌dh5α 1 基因表达调控 1 基因表达 1 同源重组 1 受体菌 1 单交换和双交换 1 前脂肪细胞 1 兔成纤维体细胞 1 丙酮酸羧化酶 1 λ red重组系统 1 λ -red重组系统 1 srna 1 red重组 1 pink1 1 h7 1 g蛋白偶联受体 1 el4细胞 1 dsred 1 asd基因 1 apelin受体 1 293t细胞 1
对氧化还原敏感的蛋白及其制备方法和应用
专利名称：对氧化还原敏感的蛋白及其制备方法和应用专利类型：发明专利
发明人：杨弋,赵玉政,张长程,沈士玉,李写
申请号：CN202010772427.9
申请日：20200804
公开号：CN114057856A
公开日：
20220218
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一组对氧化还原敏感的荧光蛋白探针及其制备方法和应用。
本发明提供了一组遗传编码的荧光蛋白探针，所述的荧光蛋白探针为含有半胱氨酸突变的深红色荧光蛋白mKate及其环形重排荧光蛋白变体cpmKate。
本发明提供的荧光蛋白探针能够实现对氧化还原变化的高灵敏度、实时动态检测。
申请人：华东理工大学
地址：200237 上海市徐汇区梅陇路130号
国籍：CN
代理机构：上海专利商标事务所有限公司
代理人：陶启长
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绿色荧光蛋白标记重组人偏肺病毒的制备
绿色荧光蛋白标记重组人偏肺病毒的制备陈昕;葛金英;步志高;赵晓东【期刊名称】《中华微生物学和免疫学杂志》【年(卷),期】2009(029)005【摘要】Objective To construct the recombinant human metapneumovirus(hMPV) (defined as rhMPV NL/1/00 GFP) in vitro by reverse genetics technique. Methods BSR-T7 cells were transfected using LipofectAMINE 2000 with the full-length cDNA plasmid, and four major protein expressing plasmids, pCITE-N, pCITE-P, pCITE-M2.1 and pCITE-L. After 3 d, cells were subjected to one -80℃ freeze-thaw cycle to prepare lysates. The supernatant of lysate was used to inoculate Vero-E6 cells. After 1-4 d, cells were found for the obvious development of cytopathic effects under light microscope and green fluoroscopic signals under fluorescence microscope, and were observed up to 10 d. The supernatant were collected to de-tect virus titer. Viral RNA was extracted from the supernatant and reverse transcriptase polymerase chain re-action (RT-PCR) was used to amplify N, F and G genes of rescued virus. Results Cytopathic effects and green fluoroscopic signals was readily and obviously observed after 1-4 d post-inoculation in Vero-E6 cells, then cytopathic effects got worse and green fluoroscopic signals became stronger gradually up to 10 d. The ti-ters of the 1st, 5th, 10th,15th and 20th generation virus ranged from 105.0 to 106.5 TCID50/ml. Amplicons with size of 910 bp (N), 450 bp(F) and 980 bp (G) by RT-PCR were accordant with expectant. Nucleotide sequence analysis of above cDNA fragments showed 100% similarity with reported sequence of hMPV NI/1/00 strain. The recombinant virus was genetically constant and GFP-labeled after 20 passages in Vero-E6 cells. Conclusion Recombined hMPV was successfully rescued by reverse genetics technique. This study lays ground for exploring pathogenesis of hMPV infection and development of hMPV attenuated vac-cines.%目的人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)可致人上、下呼吸道感染.研究利用反向遗传学技术,以带绿色荧光蛋白(GFP)标记的hMPV NL/1/00全长cDNA质粒及4种辅助质粒pCITE-N、pCITE-P、pCITE-M2.1和pClTE-L为基础,在体外制备GFP标记的重组hMPV病毒(命名为rhMPV NL/1/00 GFP).方法采用LipofectAMINE 2000将带GFP标记的hMPV NL/1/00全长cDNA质粒以及蛋白表达质粒pcITE-N、pCITE-P、pCITE-M2.1和pcITE-L共转染BSR-T7细胞,3 d后取BSR-T7细胞上清液感染Vero-E6细胞,1-4 d后观察Veto-E6细胞出现明显细胞病变(CPE)和绿色荧光,持续观察至第10天.收集病毒上清用于病毒滴度检测.提取培养上清的病毒RNA并通过RT-PCR方法扩增病毒N基因、F基因和G基因验证所获重组病毒.结果 Vero-E6细胞接种1～4 d后观察到明显CPE和绿色荧光,随后CPE加重,荧光信号加强,持续至感染后10 d;第1、5、10、15和20代病毒的滴度波动于105.0～106.5TCID50/ml;RT-PCR检测出符合预期大小的910 bp(N)、450 bp(F)和980 bp(G)条带,经卜述片段cDNA序列测定和比对表明获得的重组病毒与hMPV NL/1/00原型病毒序列一致.rhMPV NL/1/00 GFP重组病毒在体外传代20代后,遗传信号和荧光信号均稳定.结论采用反向遗传学技术成功拯救了具有感染性的重组hMPV病毒,为hMPV感染发病机制及疫苗研究奠定了基础.【总页数】6页(P443-448)【作者】陈昕;葛金英;步志高;赵晓东【作者单位】400014,重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所生物安全二级实验室;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所人兽共患病实验室;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所人兽共患病实验室;400014,重庆医科大学附属儿童医院肾脏免疫科【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.细菌内同源重组高效制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-XL的重组腺病毒载体2.经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究3.绿色荧光蛋白标记的大鼠胶质细胞源性神经营养因子重组腺病毒载体的构建及其表达4.表达绿色荧光蛋白的重组人偏肺病毒的构建及其中和抗体检测方法的应用5.细菌内同源重组法高效制备携带增强型绿色荧光蛋白与人内皮型一氧化氮合酶cDNA的重组腺病毒载体因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
携带红色荧光蛋白的RU486可诱导真核表达载体的构建及其表达
携带红色荧光蛋白的RU486可诱导真核表达载体的构建及其表达陈坚;薛绪潮;方国恩;苏长青;钱其军【期刊名称】《生物工程学报》【年(卷),期】2008(24)8【摘要】在基因治疗中,实现目的基因的调控表达是非常重要的.然而,传统基因载体的无调控地持续或不适当的表达会影响治疗效果,甚至可能带来致命的副作用.在本研究中,我们构建了一种带有DsRed红色荧光蛋白报告基因并可经RU486诱导的真核表达载体,并在体外评估了其调拉表达作用.利用分子生物学技术,将DsRed 基因和启动子,以及RU486系统构建成单一的质粒载体PDC-RURED,为减少RU486调控元件和基因表达元件之间的相互干扰,在两者之间加入1.6 kb的绝缘子.经PCR检测和限制性酶切分析及序列测定均证实了载体的正确性.在转染HEK293细胞后,运用荧光显微镜和流式细胞技术证实了该载体的调控能力.没有RU486时,几乎没有红色荧光蛋白的表达,而加入诱导剂RU486后,最高可以实现红色荧光蛋白的40余倍的表达.实验结果表明构建的可经RU486诱导的新型真核表达载体可以实现对目的基因的表达时间和表达水平的调控,为进一步的基因调控研究和和基因治疗提供了良好的工具.【总页数】6页(P1458-1463)【作者】陈坚;薛绪潮;方国恩;苏长青;钱其军【作者单位】解放军第81医院肿瘤外科,南京,210002;上海第二军医大学附属长海医院,上海,200433;上海第二军医大学附属长海医院,上海,200433;东方肝胆医院病毒基因治疗实验室,上海,200438;东方肝胆医院病毒基因治疗实验室,上海,200438【正文语种】中文【中图分类】Q5【相关文献】1.携带绿色荧光蛋白的可诱导性真核表达载体的构建及其表达 [J], 郑建勇;李开宗;王为忠2.携带FLAG标签的人BTG2真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达 [J], 赵金匣;王志平;陶燕;贺振华;郭琦;洪梅3.RU486调控的红色荧光蛋白真核载体的构建及表达 [J], 陈坚;薛绪潮;方国恩;苏长青;钱其军4.人3突变型低氧诱导因子1 α真核表达载体和腺病毒表达载体的构建及鉴定 [J], 赖艳娴;刘城;王月刚;谢宜军;童锴;胡英芳;韦莉莉;吴平生5.携带低氧诱导因子1αmu 和人源化海肾绿色荧光蛋白双基因真核表达载体构建及其在HEK293A细胞中的表达 [J], 张正;李谌;胡亮;刘丹平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种用于白血病早期诊断的circRNA标志物及其应用[发明专利]
![一种用于白血病早期诊断的circRNA标志物及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/000567511a37f111f0855b54.png)
专利名称：一种用于白血病早期诊断的circRNA标志物及其应用
专利类型：发明专利
发明人：何金花,黎毓光,韩泽平
申请号：CN201910098703.5
申请日：20190131
公开号：CN109593859A
公开日：
20190409
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开一种用于白血病早期诊断的circRNA标志物及其应用，属于生物技术领域。
所述circRNA标志物包话SEQ ID NO:1所示的hsa_circ_0012152和/或SEQ ID No:2所示的
hsa_circRNA_405124。
本发明提供的circRNA标志物对于白血病具有很高的灵敏度和特异性，可以作为新型的生物标志物用于白血病的检测。
本方法采用实时荧光定量RT‑PCR对一组circRNA的检测，对白血病的早期诊断提供参考价值。
本方法特性强，敏感性强，结果稳定，具有广泛的临床应用前景。
申请人：广州市番禺区中心医院
地址：511400 广东省广州市番禺区桥南街福愉东路8号
国籍：CN
代理机构：广州市华学知识产权代理有限公司
代理人：崔红丽
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转基因小鼠荧光神经元结构与功能之间关联的建立——膜片钳记录结合激光共聚焦三维重建
转基因小鼠荧光神经元结构与功能之间关联的建立——膜片钳记录结合激光共聚焦三维重建赵波;何家候;朱俊玲;王举磊;李柱一;王文挺【期刊名称】《中国神经免疫学和神经病学杂志》【年(卷),期】2016(0)2【摘要】目的在细胞水平建立神经元结构和功能之间的关联.方法利用D1多巴胺受体表达红色荧光蛋白的细菌人工染色体(bacterial artifical chromosome,BAC)转基因小鼠制备脑片,对D1多巴胺受体荧光阳性纹状体中等多棘神经元(medial spiny neurons,MSNs)进行膜片钳电生理记录和细胞标记,再经激光共聚焦系统对该神经元进行结构的三维重建,观察MSN树突分支密度以及树突棘形态学特点.结果 (1)电生理结果提示所标记的细胞具有偏超级化的静息膜电位(-87 mV)、较小的输入电阻(16.4 MΩ)及较长的动作电位潜伏期(172ms)等典型的MSN电生理学特征.(2)三维重建结果可见细胞胞体略成圆锥体,树突呈放射状向四周发散.(3)进行树突棘重塑后发现MSNs平均树突棘长度(2.37±0.14)μm,平均宽度为(1.39±0.14)μm.结论描述神经元功能的膜片钳数据与三维重建的细胞形态学数据相结合的方法可建立神经元结构和功能之间的关联.【总页数】5页(P100-103,112)【作者】赵波;何家候;朱俊玲;王举磊;李柱一;王文挺【作者单位】730070 兰州军区兰州总院安宁分院神经内科;710038 第四军医大学唐都医院神经内科;710032 第四军医大学学员旅;710038 第四军医大学唐都医院神经外科;710038 第四军医大学唐都医院神经外科;710038 第四军医大学唐都医院神经内科;710032 第四军医大学基础部神经生物学教研室暨脑科学协同创新中心【正文语种】中文【中图分类】Q421【相关文献】1.荧光染色结合激光共聚焦活细胞成像快速评价人移植胰岛 [J], 刘东斌;M.Hermann;D.Pirkebner;A.Draxl;R.Margreiter;P.Hengster2.癫痫发作1h后延髓内脏带区域内反应神经元与星形胶质细胞功能单位的分布特征:激光共聚焦显微镜研究 [J], 杨志军;杜谋选;徐如祥;饶志仁;魏玲;王颖;段丽;陈良为;姜晓丹;蔡颖谦3.大鼠脊髓后角内神经降压素能神经元对C纤维进行突触前抑制的形态学证据——荧光双标激光共聚焦显微镜及免疫电镜研究 [J], 李和;张敏海;杨世明4.快反应电压敏感染料脑片功能性成像结合全细胞膜片钳记录的体外研究 [J], 邵金平;杨卓5.荧光逆行追踪结合离体固定脑片细胞内Lucifer Yellow染色和荧光免疫组化──共聚焦激光扫描显微镜观察 [J], 李岩;高文军;郑则慧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910244928.7
(22)申请日 2019.03.28
(71)申请人 中国科学院武汉物理与数学研究所
地址 430071 湖北省武汉市武昌区小洪山
西30号
(72)发明人 贾凡 徐富强 李莉 缪欢 吕培
施祥玮
(74)专利代理机构 武汉宇晨专利事务所 42001
代理人 王敏锋
(51)Int.Cl.
C12N 7/01(2006.01)
C12N 15/85(2006.01)
A61K 49/00(2006.01)
A61K 35/76(2015.01)
C12R 1/93(2006.01)
(54)发明名称
一种高亮表达红色荧光蛋白的逆向神经环
路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法和应用
(57)摘要
本发明公开了一种高亮表达红色荧光蛋白
的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备
方法和应用，包括（1）制备表达红色荧光蛋白的
重组伪狂犬病毒；（2）在标记神经环路中的应用，
该平台成功制备高亮表达红色荧光蛋白的重组
伪狂犬病毒。
本发明成功获得高亮表达红色荧光
蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒，在
神经环路标记、药物筛选平台的建立、药物抑制
病毒作用机制、病毒疫苗和诊断试剂的研发、动
物模型的建立、病毒复制和致病机制的分析等方
面具有广泛的应用价值。
权利要求书1页 说明书5页序列表8页 附图2页CN 109943539 A 2019.06.28
C N 109943539
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109943539 A
1.一种高亮表达红色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法，包括下述步骤：
1)具备高亮表达红色荧光蛋白能力的克隆：以pCDNA3.1(+)为载体，采用同源重组的方式将SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5顺次插入到载体，获得克隆命名为pCDNA3.1(+)-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA；
2)构建高亮表达红色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒：将SEQ ID NO.16插入到经过MluI和ClaI双切的pCDNA3.1(+)-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA，从而获得质粒pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA；将SEQ ID NO.19插入到经过AscI单切的pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA，从而获得质粒pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA-right arm；将所得的质粒转染BHK21细胞后感染伪狂犬病毒Bartha株，收集细胞培养基上清；纯化后即获得高亮表达红色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒。
2.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在建立伪狂犬病毒的药物筛选平台中的应用。
3.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在研究药物抑制伪狂犬病毒作用机制中的应用。
4.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒感染的动物模型的建立中的应用。
5.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒病毒复制和致病机制的分析中的应用。
6.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在对哺乳动物的脑神经环路进行示踪中的应用。
2。