多糖的分子量测定
多糖含量的测定
多糖含量的测定1.原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2.适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5mol/LNaOH溶液：100gNaOH加蒸馏水稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50ml，加水50ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50ml，加入10ml铜应用溶液，10ml2.5mol/LNaOH溶液，混匀。
（6）1.8mol/LH2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
5.操作方法5.1样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml（V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml（V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
高效凝胶渗透色谱测定多糖分子量
高效凝胶渗透色谱测定多糖分子量
高效凝胶渗透色谱是一种常用于测定多糖分子量的分析方法。
该方法通过将样品溶解在适当的溶剂中，并进行筛选和过滤，得到分子量较小的物质进入固定相凝胶的孔隙中，分子量较大的物质则较难进入孔隙。
在外加压力下，溶质会通过凝胶孔隙向前移动，移动速度与其分子量成反比。
具体操作步骤如下：
1. 准备样品：将多糖样品溶解在适当的溶剂中，并进行筛选和过滤以去除杂质。
2. 准备载流相：选择适当的溶剂作为载流相，并调整pH值和离子强度等条件以提高分离效果。
3. 准备色谱柱：选择合适的色谱柱，如凝胶过滤柱或凝胶渗透柱等，并进行适当的条件调节和均匀填充。
4. 注入样品：将准备好的样品注入色谱柱，并施加适当的压力或重力，使样品通过色谱柱。
5. 分离和检测：通过凝胶孔隙的大小，分子量较小的多糖能够快速通过孔隙而分离出来，分子量较大的多糖则需要花费更长的时间。
通过检测样品在不同时间点处的浓度变化，可以得到多糖的分子量分布曲线。
6. 数据分析：根据分子量分布曲线，可以计算得到多糖的平均
分子量和分子量分布范围等参数。
需要注意的是，高效凝胶渗透色谱在测定多糖分子量时对样品的前处理工作要求较高，尤其是去除杂质和筛选合适的载流相条件。
此外，在进行数据分析时，还需要结合多糖的特性和实验条件进行综合考虑，以获得准确的分子量结果。
多糖的评价指标
多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物，具有多种生物活性和药理作用。
多糖的评价指标主要包括以下几个方面：
1.分子量：多糖分子量是评价多糖分子大小的重要指标，通常用凝胶渗透法、分子量测定仪等方法进行测定。
分子量越大，多糖的稳定性和生物活性通常越好。
2.糖组成：多糖的糖组成是指多糖分子中不同单糖分子的比例，不同的多糖具有不同的糖组成。
糖组成对多糖的生物活性和药理作用具有重要影响，因此是评价多糖的重要指标之一。
3.分子结构：多糖的分子结构包括链长、分支结构、空间构型等方面。
多糖的分子结构对其生物活性和药理作用具有重要影响，因此是评价多糖的重要指标之一。
4.生物活性：多糖的生物活性是评价多糖药效的重要指标，包括免疫调节、抗炎、抗肿瘤、降血糖、保护肝脏等方面。
多糖的生物活性通常通过体外和体内实验进行评价。
5.纯度：多糖的纯度是评价多糖质量的重要指标，通常通过高效液相色谱、气相色谱等方法进行测定。
多糖的纯度越高，其生物活性和药理作用通常越好。
综上所述，多糖的评价指标包括分子量、糖组成、分子结构、生物活性和纯度等方面，这些指标对多糖的研究和应用具有重要意义。
多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程
多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程目的：建立多糖的分子量与分子量分布测定的标准操作规程。
2. 依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
3. 范围：适用于药品中多糖的分子量与分子量分布的测定。
4. 职责：QC检验员对本标准的实施负责。
5. 程序：5.1. 对仪器的一般要求：色谱柱为测多糖专用凝胶柱（按所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱）。
检测器为示差折光检测器。
5.2. 系统适用性试验：按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数（n）和供试品在该分析状态下的分配系数（K d）应达到规定的要求。
K d =t R—t0t T—t0式中t R为供试品峰的保留时间；t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保留时间。
t T为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。
5.3. 测定法：5.3.1. 系统校正：根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品（常用的为葡聚糖）分别用流动相制成每1ml中约含10mg的标准溶液，分别取上述标准溶液25μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
由GPC专用软件绘制标准曲线，得线性回归方程：1gM W=a+bt R式中M W为标样的已知重均分子量；t R 为标样的保留时间。
5.3.2. 样品测量：取供试品溶液25µl注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算分子量：M n=ΣRI i/Σ（RI i/M i）M w=Σ（RI i M i）/ΣRI iD =M w/M n式中M n为数均分子量；RI i为为样品i级分的物质量，即供试品在保留时间i的峰高；M i为样品i级分的分子量，即供试品在保留时间i的分子量。
5.4. 结果处理：采用GPC专用软件，可获得供试品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图，各时间点的分子量（片段数据）和各种平均分子量。
根据供试品需要选择各项测定结果。
多糖 分子量
多糖分子量
多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键缩合而成的复杂糖类物质，具有高分子化合物的特征。
多糖的分子量因种类和结构的不同而有很大差异，可以从几千到数百万Da（道尔顿）不等。
多糖的分子量测定方法有以下几种：
1. 凝胶滤过法：常用的方法之一，通过将多糖样品加入凝胶柱，利用分子筛效应分离不同分子量的多糖。
常用的凝胶柱有Sephadex G-200、G-150或G-75。
通过测定洗脱体积与分子量的关系，可以计算出多糖的分子量。
2. 黏度法：适用于测定黏度较大的多糖样品。
通过测量多糖溶液的黏度，结合溶液的浓度和温度，计算多糖的分子量。
3. 蒸汽压渗透法（VPO）：基于理想溶液的拉乌尔定律，适用于分析高分子量多糖。
通过测量多糖溶液的蒸汽压，结合溶液的浓度和温度，计算多糖的分子量。
4. 超速离心法：通过测量多糖溶液的超速离心沉降速度，结合溶液的浓度和温度，计算多糖的分子量。
5. 光散射法：基于高分子溶液的瑞利散射原理，通过测量多糖溶液的光散射强度，计算多糖的分子量。
需要注意的是，不同的测定方法各有优缺点，选择合适的测定方法取决于多糖的性质和实验条件。
在实际应用中，通常会根据多糖的来源、结构和性质，选择最合适的分子量测定方法。
多糖结构测定的一般流程
多糖结构测定的一般流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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在进行多糖结构测定之前，需要做好充分的准备。
多糖含量测定的方法综述
多糖含量测定的方法综述多糖是一类具有多个单糖分子组成的生物大分子，包括淀粉、葡萄糖、纤维素等。
多糖具有一定的营养和生理功能，在食品工业、医药工业等领域具有广泛的应用。
准确测定多糖含量对于保证产品质量和判断其功能性十分重要。
随着科学技术的进步，研究人员不断探索和改进多糖含量测定的方法，以满足不同领域对多糖含量测定的需求。
一、多糖含量的意义及常见方法1.多糖含量的意义多糖是人体所必需的能量来源之一，具有维持机体生理活动和保护细胞功能等作用。
在食品加工中，多糖也有着重要的作用，如增加产品的口感、增加产品的营养价值等。
在药物制剂中，多糖也有着重要的应用，例如用作药物的载体、吸附剂等。
准确测定多糖含量对于保证产品质量和判断其功能性十分重要。
2.常见方法目前，常见的多糖含量测定方法主要包括显微测定法、中分子量测定法、溶解度测定法、极限滤提法等。
二、多糖含量测定的方法综述1.显微测定法显微测定法是通过显微镜观察样品的形态和结构，根据细胞壁的薄膜形态、纤维素等物质的分布情况等来判断多糖的含量。
这种方法简单直观，但无法准确测定多糖的含量，只能用来初步判断。
2.中分子量测定法中分子量测定法是根据多糖的分子量大小来测定多糖含量的方法，常见的方法有凝胶渗透色谱法、高效液相色谱法等。
这种方法可以准确地测定多糖的分子量，但需要设备较为复杂，操作较为繁琐。
3.溶解度测定法溶解度测定法是通过测定多糖在水中的溶解度来间接测定多糖含量的方法。
这种方法简单易行，但无法准确地测定多糖的含量和种类。
4.极限滤提法极限滤提法是通过将多糖样品溶解于适当的溶剂中，再在高温下滤提，最后通过烘干样品，称取得到的残渣质量来计算多糖的含量。
这种方法操作简单，但需要注意样品预处理和滤提条件的控制，同时也需要考虑对多糖的热稳定性。
多糖含量测定的方法有很多种，各有其特点和适用范围。
在实际应用中，需要根据需要选择合适的方法进行测定。
也需要不断深入研究和改进，以提高多糖含量测定的准确性和稳定性，为多糖在不同领域的应用提供更好的支持。
高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量
高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量一、本文概述多糖作为一种重要的生物大分子，广泛存在于自然界中，具有多种生物活性，如免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等。
因此，对多糖的纯度及分子量的准确测定对于其研究和应用具有重要意义。
高效凝胶渗透色谱法（High Performance Gel Permeation Chromatography，HPGPC）是一种常用的多糖纯度及分子量测定方法，具有操作简便、分辨率高、重现性好等优点。
本文旨在介绍HPGPC法测定多糖纯度及分子量的原理、实验步骤、数据处理及注意事项，以期为多糖的研究和应用提供参考。
二、实验材料与方法1 多糖样品：选择待测定的多糖样品，确保其来源清晰，无杂质污染。
2 高效凝胶渗透色谱（HPGPC）柱：选择适当型号的HPGPC柱，以适用于待测多糖样品的分子量范围。
3 流动相：通常选用适当的溶剂或缓冲液作为流动相，以保证多糖样品在色谱柱上的良好分离。
4 检测器：使用示差折光检测器（RI）或紫外检测器（UV）等，以监测多糖样品在色谱柱上的分离情况。
5 其他试剂与仪器：包括样品制备所需的试剂、色谱仪、注射器、进样针等。
1 样品制备：将多糖样品溶解在适当的溶剂中，制备成一定浓度的溶液，以便进行后续分析。
2 色谱条件优化：通过预实验，优化色谱条件，包括流动相的选择、流速、柱温等，以获得最佳的分离效果。
3 进样与分离：将制备好的多糖样品溶液通过注射器注入HPGPC 仪中，通过色谱柱进行分离。
在分离过程中，利用检测器监测多糖样品的分离情况。
4 数据收集与处理：收集分离过程中的数据，利用相应软件对数据进行处理和分析，包括分子量计算、纯度分析等。
5 结果评价：根据分析结果，评价多糖样品的纯度及分子量分布情况，为后续研究提供依据。
通过以上实验材料与方法，可以高效地进行多糖纯度及分子量的测定，为后续多糖的结构研究、质量控制等提供重要支持。
三、实验结果与讨论在本研究中，我们采用了高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）对多糖样品的纯度和分子量进行了测定。
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多糖的分子量测定
常用的是凝胶滤过法。
将充分膨胀好的SephadexG-200、G-150或G-75湿法装柱，用一定离子强度的氯化钠水溶液进行平衡，然后将各种不同的已知分子量的多糖分别相继上柱，同一离子强度的氯化钠水溶液洗脱，分步收集，苯酚-硫酸法监测，分别求得洗脱体积Ve，然后再将兰葡聚糖（M V>200万）上同一条柱，求出柱的空体积V o，根据V e/V o与logM之间存在着线性关系，可绘制标准曲线。
最后，将待测样品按上述不变的条件上柱，求得待测多糖的V e。
通过标准曲线上的V e/V o，查得待测多糖的分子量对数，便可求出M。
对于黏度大的多糖，可采用黏度法求得。
亦有用蒸汽压渗透法（VPO，基本原理是根据理想溶液的拉乌尔定律，参考文献：崔锡红, 等. 蒸汽压渗透法分析异丁烯的数均分子量. 河南化工. 2001, 1: 32. 骆传环. 蒸气压渗透计测定多糖分子量. 现代科学仪器, 1994, 4:11.）、超速离心法（骆传环, 等. 香姑多糖的分子量测定. 科学技术与工程. 2006, 6(8): 1058~1060）、光散射法（LS，光散射法测定高分子量基于高分子溶液的瑞利散射，垂直偏振光通过溶液产生的不同角度散射光的强度与溶质分子的大小即分子量成正比。
参考文献：魏立平, 姜雄平. 光散射法在医学分子生物学中的应用. 国外医学分子生物学分册. 2000, 22(2): 123.）、玻璃纤维纸电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：lgM W=k-bX，式中：M W为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
应用如，将标准相对分子量蛋白质与样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，以标准蛋白质的迁移率为纵坐标，lgM为横坐标，绘制相对分子质量曲线。
根据样品迁移率得出相对分子质量。
）测分子量，黏度法及超滤法估计分子量。
利用不同方法测定多糖分子量可以从不同角度对多糖分子量进行确证，同时也是对多糖纯度的考察。
在测定过程中要注意标准品的选择，尽量使用与被测多糖结构相似的标准品，因为不同结构的标准品虽然其绝对分子量相同而在一定条件下所表现的分子量会有所不同。
多糖分子量的测定没有一种绝对的方法，其分子量只代表相似链长的平均配比而不是确切的分子大小。
往往用不同的方法会得到不同的分子量。